一种蜂糖李组培苗培养基及其组培苗培养方法与流程

本发明属于农业种植，更具体地说，特别涉及一种蜂糖李组培苗培养基及其组培苗培养方法。

背景技术：

1、蜂糖李是我国近年选育出的优良地方李子品种，由于期品质好，果实售价高，深受种植者喜欢迎，而这些苗木均为普通繁育，没有通过脱毒处理，特别是核果坏死环斑病毒(pnrsv)、核果矮缩病毒(pdv)等，其危害损失不仅限于矮化减产，因病毒株系不同，表现出褪绿、坏死、叶变畸形、流胶等多种症状，严重影响果农增收。

2、目前培育植物的方法中一般采用b5培养基进行培育，如申请号为cn113046296a的发明专利所提到的b5培养基，但对于蜂糖李来说，该培养基所得到的出芽率不足，且现有的脱毒处理培育，一般用10％的次氯酸钠进行消毒，然后剥取茎尖，在培养基中进行培养，然后再对培养的新梢进行生根，从而获得脱毒母苗。该方法的缺点是：污染率高，出苗慢，特别是在南方多雨地区，病虫害多，消毒难以彻底，茎尖苗易中途死亡。

3、于是，有鉴于此，针对现有的结构及缺失予以研究改良，提供一种蜂糖李组培苗培养基及其组培苗培养方法，以期达到更具有更加实用价值性的目的。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供一种蜂糖李组培苗培养基及其组培苗培养方法。

2、本发明一种蜂糖李组培苗培养基及其组培苗培养方法的目的与功效，由以下具体技术手段所达成：

3、一种蜂糖李组培苗培养基，由母液a、母液b、铁盐、有机物质a组成；

4、母液a：硝酸钾(kn03)960mg/l、硝酸铵(nh4no3)800mg/l、硫酸镁(mgso4·7h2o)370mg/l、磷酸二氢钾(kh2po4)170mg/l、硝酸钙(ca(no3)2·4h2o)410mg/l、硫酸钾(k2so4)300mg/l、硫酸铵((nh4)2so4)50mg/l；

5、母液b：硫酸锰(mnso4·4h2o)22.3mg/l、硫酸锌(znso4·7h2o)8.6mg/l、硼酸(h3bo3)6.2mg/l、碘化钾(ki)0.83mg/l、钼酸钠(namoo4·2h2o)0.25mg/l、硫酸铜(cuso4·5h2o)0.025mg/l、氯化钴0.025mg/l；

6、铁盐：乙二胺四乙酸二钠(na2-edta·2h2o)37.25mg/l、硫酸铁(feso4·7h2o)27.85mg/l；

7、有机物质a：甘氨酸2mg/l、盐酸硫胺素(vb1)0.4mg/l、盐酸吡哆醇(vb6)0.5mg/l、烟酸0.5mg/l、肌酸100mg/l、蔗糖30g/l、琼脂6g/l、细胞分裂素6-ba 0.8mg/l、细胞生长素iba 0.2mg/l、赤霉素ga3 0.5mg/l。

8、基于该培养基用于蜂糖李组培苗培养方法，包括以下步骤：

9、1)取材；在植株落叶进入休眠期后，从中选取表面无露水、无病虫害的带叶芽的木质化枝条，从顶端往下30cm处剪取，得到外植体；

10、2)冷藏；将外植体清洗、消毒后冷藏，冷藏温度6℃，冷藏时间600小时；

11、3)预处理；将冷藏后的外植体用酒精喷雾除去表面污染物；

12、4)消毒；在灭菌室用紫外灯照射外植体，再将照射后产生的臭氧吸出，再用酒精擦拭表面，剪成固定长度放入无菌瓶中；

13、5)二次消毒；在无菌瓶中倒入酒精振荡30s，振荡后将酒精倒出，再利用升汞倒入无菌瓶中振荡8mi n～15mi n，再用水清洗无菌瓶中的外植体；

14、6)茎尖剥离；清洗完毕后，用镊子夹取枝条，去除枝条芽外的鳞片，再一层层去除幼叶，直到看到茎尖内部的分生组织后，切离得到0.2mm～0.3mm的带叶原基的茎尖；

15、7)接种；将剥好的茎尖接种到培养基中；

16、8)初代培养；将培养基放入培养室，培养室温度25℃，每天光照时间14～16h；

17、9)继代培养；将初代培养分化后的芽接种到继代培养基上，温度25℃，每天光照时间14～16h。

18、进一步的，步骤2中，通过75％酒精擦拭干净后，均匀喷洒200ppm的赤霉素溶液消毒，消毒后用保湿类薄膜包裹冷藏。

19、进一步的，在步骤5中，升汞倒入无菌瓶中振荡10mi n。

20、进一步的，在步骤7中，接种时需要随剥随接，每一个培养瓶中只放一个茎尖。

21、进一步的，在步骤8和步骤9中，光照选用白色led灯，湿度小于40％。

22、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

23、1、利用酒精杀菌，搭配hgc l2相结合的方法，对外植体进行消毒处理，然后剥取茎尖再培养，得到的污染率更低，存活率更高的母苗，且消毒时间的把控，满足发芽率与存活率的达到最理想值。

24、2、通过培养基的成分配比，得到更高的出芽率和更好出芽质量。

25、3、通过冷藏的方式打破植物休眠，使得枝条能够正常发芽。

26、4、在休眠期采集外殖体，病菌更少，更利于消毒杀菌。

技术特征：

1.一种蜂糖李组培苗培养基，其特征在于：由母液a、母液b、铁盐、有机物质a组成；

2.如权利要求1所述的蜂糖李脱毒组培果苗方法，其特征在于：步骤2中，通过75％酒精擦拭干净后，均匀喷洒200ppm的赤霉素溶液消毒，消毒后用保湿类薄膜包裹冷藏。

3.如权利要求1所述的蜂糖李脱毒组培果苗方法，其特征在于：在步骤5中，升汞倒入无菌瓶中振荡10min。

4.如权利要求1所述的蜂糖李脱毒组培果苗方法，其特征在于：在步骤7中，接种时需要随剥随接，每一个培养瓶中只放一个茎尖。

5.如权利要求1所述的蜂糖李脱毒组培果苗方法，其特征在于：在步骤8和步骤9中，光照选用白色led灯，湿度小于40％。

技术总结
本发明提供一种蜂糖李组培苗培养基及其组培苗培养方法，属于农业种植技术领域，以解决一般用10％的次氯酸钠进行消毒，然后剥取茎尖，在培养基中进行培养，然后再对培养的新梢进行生根，从而获得脱毒母苗，导致污染率高，出苗慢的问题，包括取材、冷藏、预处理、消毒、二次消毒、茎尖剥离、初代培养、继代培养，利用酒精杀菌，搭配Hgcl<subgt;2</subgt;相结合的方法，以及最合理的消毒时常，满足发芽率与存活率的达到最理想值，同时培养基的特殊配比增加了出芽率和出芽质量。

技术研发人员：陈贵虎,王友文,黄平,蒋万选,王坤刚
受保护的技术使用者：重庆市铜梁区果之王园艺研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12