一种近视眼动物模型的构建方法及其应用

本发明属于动物模型构建领域，具体涉及一种近视眼动物模型的构建方法及其应用。

背景技术：

1、近年来，随着社会环境和生活方式的发展，近视的患病率不断上升，在世界范围内，特别是在亚洲引起了广泛关注。高度近视可引起视网膜和脉络膜萎缩、脉络膜下新生血管和视网膜脱离等严重并发症，可导致视力损害甚至失明。

2、斑马鱼具有完整的器官系统和与哺乳动物相似的基因，具有药物代谢的相关酶系如i相代谢细胞色素p450酶和ii相代谢的葡萄糖醛酸转移酶及硫酸转移酶等，此外尚含肠菌代谢的肠道菌群，为其用于药物整体代谢研究提供了有力依据。

3、目前比较缺乏近视的斑马鱼动物模型，给近视发病机制的研究和相关药物研发带来了困难。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种近视眼动物模型的构建方法及其应用。

2、本发明所采取的技术方案如下：一种近视眼动物模型的构建方法，包括以下步骤：

3、（1）将正常发育的斑马鱼雌雄配对置于孵化器中进行交配，得到胚胎；

4、（2）制备暴露液，所述暴露液中包含0.025 ~ 1.2 mg/l的6ppd；

5、（3）将步骤（1）得到的胚胎置于暴露液中持续暴露得到幼鱼。

6、优选的，步骤（2）中，所述暴露液中包含0.4 ~ 1.2 mg/l的6ppd。

7、优选的，步骤（2）中，所述暴露液的制备过程如下：将6ppd溶解于二甲基亚砜中制备原液，使用培养培养基对原液进行稀释使二甲基亚砜终浓度为0.1%。

8、优选的，步骤（3）中，步骤（1）得到的胚胎置于暴露液中持续暴露至120 hpf。

9、如上所述的近视眼动物模型的构建方法构建得到的近视眼动物模型应用，将该动物模型用于筛选或鉴定能够预防、缓解或者治疗近视眼的药物。

10、一种筛选或鉴定能够预防、缓解或者治疗近视眼的药物的方法，包括以下方法：

11、（1）将正常发育的斑马鱼雌雄配对置于孵化器中进行交配，得到胚胎；

12、（2）制备暴露液，所述暴露液中包含0.025 ~ 1.2 mg/l的6ppd；

13、（3）将步骤（1）得到的胚胎置于暴露液中持续暴露得到幼鱼，在持续暴露过程中加入待检测药物。

14、优选的，步骤（2）中，所述暴露液中包含0.025 ~ 1.2 mg/l的6ppd。

15、优选的，步骤（2）中，所述暴露液的制备过程如下：将6ppd溶解于二甲基亚砜中制备原液，使用培养培养基对原液进行稀释使二甲基亚砜终浓度为0.1%。

16、优选的，步骤（3）中，步骤（1）得到的胚胎置于暴露液中持续暴露至120 hpf，于48-96 hpf在暴露液中加入待检测药物。

17、本发明的有益效果如下：本发明发现化学品n-(1,3-二甲基丁基)-n'-苯基对苯二胺（6ppd）在胚胎发育期急性暴露可引起斑马鱼幼体期眼球凸出和融合血管的近视样表型，这一模型可以为近视的研究提供模型支持。

技术特征：

1.一种近视眼动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2. 根据权利要求1所述的近视眼动物模型的构建方法，其特征在于：步骤（2）中，所述暴露液中包含0.4 ~ 1.2 mg/l的6ppd。

3.根据权利要求2所述的近视眼动物模型的构建方法，其特征在于：步骤（2）中，所述暴露液的制备过程如下：将6ppd溶解于二甲基亚砜中制备原液，使用培养培养基对原液进行稀释使二甲基亚砜终浓度为0.1%。

4. 据权利要求1所述的近视眼动物模型的构建方法，其特征在于：步骤（3）中，步骤（1）得到的胚胎置于暴露液中持续暴露至120 hpf。

5.如权利要求1-4任一项所述的近视眼动物模型的构建方法构建得到的近视眼动物模型应用，其特征在于：将该动物模型用于筛选或鉴定能够预防、缓解或者治疗近视眼的药物。

6.一种筛选或鉴定能够预防、缓解或者治疗近视眼的药物的方法，其特征在于包括以下方法：

7. 根据权利要求6所述的筛选或鉴定能够预防、缓解或者治疗近视眼的药物的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述暴露液中包含0.025 ~ 1.2 mg/l的6ppd。

8.根据权利要求6所述的筛选或鉴定能够预防、缓解或者治疗近视眼的药物的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述暴露液的制备过程如下：将6ppd溶解于二甲基亚砜中制备原液，使用培养培养基对原液进行稀释使二甲基亚砜终浓度为0.1%。

9. 根据权利要求6所述的筛选或鉴定能够预防、缓解或者治疗近视眼的药物的方法，其特征在于：步骤（3）中，步骤（1）得到的胚胎置于暴露液中持续暴露至120 hpf，于48-96hpf在暴露液中加入待检测药物。

技术总结
本发明属于动物模型构建领域，具体涉及一种近视眼动物模型的构建方法及其应用。本发明发现化学品N‑(1,3‑二甲基丁基)‑N'‑苯基对苯二胺（6PPD）在胚胎发育期急性暴露可引起斑马鱼幼体期眼球凸出和融合血管的近视样表型，这一模型可以为近视的研究提供模型支持。

技术研发人员：陈将飞,姜俭,甘秀凤,吴文灿,沈宝国
受保护的技术使用者：温州医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13