基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法

本发明属于兰花繁殖，涉及兰花种子萌发，具体涉及一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法。

背景技术：

1、兰花是中国传统名花，我国栽培兰花约有两千多年的历史。兰花常采取分株、播种及组织培养繁殖。虽然一个兰花蒴果中有几万到上百万粒种子，但兰花种子非常小，仅有发育不完全的胚细胞，又无胚乳，萌发力极低，加之种皮不易吸收水分，用常规方法播种不易萌发。在自然界中兰花种子的萌发一般都需要依靠菌根真菌为其提供养分，且萌发时间非常长。目前兰花繁殖方式仍是传统的分株繁殖，数量少，时间长，萌发率低，无法达到规模化生产。随着兰花市场需求的不断增长，兰花传统的繁殖方式已不能满足规模化产业发展的需求。

技术实现思路

1、本发明提供一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法，可以方便、高效地促进兰花种子萌发。

2、本发明的技术方案是，一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法，其特征在于，包括以下步骤：

3、s1、对兰花的蒴果进行表面清洗及消毒，晾干备用；配制酶液备用；

4、s2、在蒴果茎节一端依次连接第一针头、第一针头过滤器和第一注射器，第一注射器内吸取有s1配制的酶液；蒴果另一端蕊柱处依次连接第二针头和第二针头过滤器，通过第一注射器将酶液推入蒴果内，至第二针头过滤器有液体流出时停止；将蒴果及其连接的结构置于45℃-55℃环境中酶解反应4~6小时；

5、s3、用第二注射器吸取液体ms培养基20-30ml，在第一针头处替换下第一注射器，将第二注射器中的ms培养基注入兰花蒴果内，直至ms培养基从第二针头滤器流出10-12ml为止；将将蒴果及其连接的结构置于25℃-28℃环境中暗培养5-7天；

6、s4、去除蒴果两端的连接的结构，后取出蒴果内的种子接种涂布在培养基上进行萌发培养，使得兰花种子萌发。

7、进一步地，s1中兰花蒴果表面清洗时采用无菌水摇洗后捞出，消毒时采用75%的酒精擦洗蒴果表皮多次。

8、进一步地，s1中的酶液为木质素过氧化物酶、纤维素酶、中性蛋白酶、糖化酶中的一种或几种；加水配成溶液，质量浓度为0.05%-0.08%。

9、进一步地，所述酶液中木质素过氧化物酶、纤维素酶、蛋白酶和糖化酶的质量比为1~2:1~2:1:1。

10、进一步地，s2中第一针头过滤器和第二针头过滤器的孔径为0.25μm。

11、进一步地，s2中酶解反应时，蒴果及其连接的结构放入培养皿，培养皿放入培养箱中进行酶解；每隔30分钟将第一注射器中的酶液推出0.5~1ml。

12、进一步地，s3中暗培养时，每隔1天将第二注射器中的ms培养基推出1~2ml。

13、进一步地，s4中的培养基为ms培养基，其中含有8~10wt%椰乳。

14、进一步地，s4中的培养条件为25℃~28℃，日光灯照明光照强度1500lx每天10~12h光照。

15、进一步地，该方法操作过程均为无菌操作，所用器具、水和培养基均进行无菌处理。

16、本发明具有以下有益效果：

17、1、根据兰花种皮的成分，采用复合酶处理专一性强，作用时间短，可以快速有效地去除种胚周围的种皮，且不会损坏兰花的种胚，安全高效；

18、2、采用兰花蒴果内进行酶处理可有效避免环境中杂菌的污染，更有益于兰花种子萌发；

19、3、采用兰花蒴果内进行酶处理，结合种子在蒴果内进行短期的暗培养，可较好地模拟自然环境中兰花种子萌发中共生菌的作用效果，有益于兰花种子萌发；

20、4、采用兰花蒴果连接针头、针头滤器、注射器进行酶液注入及清洗的结构方便处理流程与操作，并且接针头、双针头滤器、注射器均经过无菌处理，复合酶液经过针头滤器后也实现了过滤除菌，避免了杂菌的污染。

21、5、通过在兰花蒴果内进行酶处理，兰花种子的破壁率可达90%以上，兰花种子的萌发率可达60%以上，萌发时间缩短1/5-1/4，萌发效果良好。

技术特征：

1.一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：s1中兰花蒴果表面清洗时采用无菌水摇洗后捞出，消毒时采用75%的酒精擦洗蒴果表皮多次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：s1中的酶液为木质素过氧化物酶、纤维素酶、中性蛋白酶、糖化酶中的一种或几种；加水配成溶液，质量浓度为0.05%-0.08%。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述酶液中木质素过氧化物酶、纤维素酶、蛋白酶和糖化酶的质量比为1~2:1~2:1:1。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：s2中第一针头过滤器和第二针头过滤器的孔径为0.25μm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：s2中酶解反应时，蒴果及其连接的结构放入培养皿，培养皿放入培养箱中进行酶解；每隔30分钟将第一注射器中的酶液推出0.5-1ml。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：s3中暗培养时，每隔1天将第二注射器中的ms培养基推出1-2ml。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：s4中的培养基为ms培养基，其中含有8~10wt%椰乳。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：s4中的培养条件为25℃-28℃，日光灯照明光照强度1500lx每天10-12h光照。

10.根据权利要求1~9任意一项所述的方法，其特征在于：该方法操作过程均为无菌操作，所用器具、水和培养基均进行无菌处理。

技术总结
本发明提供了一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法，包括兰花蒴果的清洗、消毒，酶液的配制；然后利用注射器将酶液注入蒴果内进行酶解，后更换培养液对蒴果内进行清洗，最后取出蒴果内的种子接种涂布在培养基上进行萌发培养，使得兰花种子萌发。采用本发明提供的萌发方法，具有原材料易得、操作处理方便，兰花种子萌发率高，萌发时间短等特点，能够实现兰花种子的快速萌发。

技术研发人员：邵伟,林直,熊泽
受保护的技术使用者：三峡大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13