本发明属于生物育种，具体为一种氨基甲酸甲酯与紫外线照射协同诱变凤梨育种的方法。
背景技术：
1、凤梨是我国四大热带水果之一，凤梨果形圆润均匀，果色呈金黄色，口感好、营养价值高、市场需求性高，我国海南、广东、广西、云南、福建等省份均有凤梨的种植分布，目前我国凤梨品种相对较少，其原因是凤梨花序较小、传统杂交育种周期长、成功率低，种子极其细微，繁育困难，通常采用无性繁殖的芽苗移栽或工厂化组织培养扩繁进行继代种植，连续多年反复种植品种退化较快，种植中自然变异产生新品种的机率极低，因此开发一种氨基甲酸甲酯与紫外线照射协同诱变凤梨育种的方法，相对于杂交育种、单一化学诱变、核辐射诱变手段育种，具有操作简便、成功率高、成本低、周期短等诸多优势，大大提高了变异系数，实现诱变株数量增加，对凤梨产业发展和提高我国凤梨种业国际竞争力都具有重要的意义。
技术实现思路
1、 本发明的目的是为了提供一种氨基甲酸甲酯与紫外线照射协同诱变凤梨育种的方法，增加凤梨育种变异系数极大提高凤梨产生新品种的育种效率。 为了实现上述发明效果，本发明采用以下技术方案， 一种氨基甲酸甲酯与紫外线照射协同诱变凤梨育种的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
2、第一步骤 制备凤梨外植体愈伤组织：选取长度为30cm凤梨吸芽，将叶片剥离干净，选取顶侧部份剪切成长2cm的茎段做外植体，然后进行外植体常规消毒处理，放在无菌滤纸上自然晾干；将晾干后的外植体接种到初代培养基中，放置于培养室中暗箱培养30天完成愈伤组织形成；培养室条件设定为：温度为28℃，空气相对湿度为70%；
3、第二步骤 氨基甲酸甲酯诱导愈伤组织：①将愈伤组织表皮轻轻划伤，浸泡于配比浓度为2mg/l的氨基甲酸甲酯溶液中浸泡处理6小时，然后再将愈伤组织用无菌纯水冲洗5遍后，置于无菌滤纸上晾干水分；②然后将处理后的愈伤组织接种到增殖培养基中，放置于培养室中培养30天后形成不定芽；本步骤培养室光照强度40μmol·m-2·s-1，光照时间设定为10小时/天；
4、第三步骤 紫外线照射不定芽诱导分化：将独立避光培养箱内设置的紫光灯打开照射30分钟消毒处理，然后将第二步中②形成的不定芽培养杯移入独立避光培养箱中接受紫外线照射，紫光灯条件设定为15w波长253－265nm，紫光灯与培养杯照射距离30cm，照射6小时后关闭紫光灯在避光培养箱中继续暗培养6天，然后移出避光培养暗箱至培养室内继续光照培养30天；本步骤培养室光照强度40μmol·m-2·s-1，光照时间设定为12小时/天；
5、第四步骤 生根促壮培养、炼苗、移植、品种选育：第三步骤移出暗箱在培养室内光照培养满30天后，将凤梨组培苗移出接种到生根培养基中进行诱导生根培养，以后每30天更换一次新制备的生根促壮培养基，本步骤培养室光照强度40μmol·m-2·s-1，光照时间设定为14小时/天；90天后可得到根系发达的健康株苗；将培养杯移到室外透光率为70%的遮阳网下进行20天炼苗培养；然后将组培杯中苗分别移植到营养土中培养；一个生长周期见开花结果后，按育种方向选育出优质特征的凤梨品种。
6、实施方式
7、下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的范围并不仅局限于实例，其要求保护的范围记载于权利要求的权项中, 本实施案例所述的一种氨基甲酸甲酯与紫外线照射协同诱变凤梨育种的方法，其特征在于，所述方法实施具体包括以下步骤，
8、第一步骤 制备凤梨外植体愈伤组织：选取长度为30cm凤梨吸芽，将叶片剥离干净，选取顶侧部份剪切成长2cm的茎段做外植体，然后进行外植体常规消毒处理，放在无菌滤纸上自然晾干；将晾干后的外植体接种到初代培养基中，放置于培养室中暗箱培养30天完成愈伤组织形成；培养室条件设定为：温度为28℃，空气相对湿度为70%；
9、第二步骤 氨基甲酸甲酯诱导愈伤组织：①将愈伤组织表皮轻轻划伤，浸泡于配比浓度为2mg/l的氨基甲酸甲酯溶液中浸泡处理6小时，然后再将愈伤组织用无菌纯水冲洗5遍后，置于无菌滤纸上晾干水分；②然后将处理后的愈伤组织接种到增殖培养基中，放置于培养室中培养30天后形成不定芽；本步骤培养室光照强度40μmol·m-2·s-1，光照时间设定为10小时/天；
10、第三步骤 紫外线照射不定芽诱导分化：将独立避光培养箱内设置的紫光灯打开照射30分钟消毒处理，然后将第二步中②形成的不定芽培养杯移入独立避光培养箱中接受紫外线照射，紫光灯条件设定为15w波长253－265nm，紫光灯与培养杯照射距离30cm，照射6小时后关闭紫光灯在避光培养箱中继续暗培养6天，然后移出避光培养暗箱至培养室内继续光照培养30天；本步骤培养室光照强度40μmol·m-2·s-1，光照时间设定为12小时/天；
11、第四步骤 生根促壮培养、炼苗、移植、品种选育：第三步骤移出暗箱在培养室内光照培养满30天后，将凤梨组培苗移出接种到生根培养基中进行诱导生根培养，以后每30天更换一次新制备的生根促壮培养基，本步骤培养室光照强度40μmol·m-2·s-1，光照时间设定为14小时/天；90天后可得到根系发达的健康株苗；将培养杯移到室外透光率为70%的遮阳网下进行20天炼苗培养；然后将组培杯中苗分别移植到营养土中培养；一个生长周期见开花结果后，按育种方向选育出优质特征的凤梨品种。
12、本发明在切片组织形成愈伤组织阶段采用氨基甲酸甲酯诱变愈伤组织与形成不定芽阶段紫外线照射诱导芽变双向协同，实现基因突变的机率倍增，一次诱变育种过程产生多个不定向变异新株，大大提高了产生凤梨新品种的育种效率。
1.一种氨基甲酸甲酯与紫外线照射协同诱变凤梨育种的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：