一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法及其在灰霉病防治中的应用

本发明涉及灰霉病防治，具体涉及一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法及其在灰霉病防治中的应用。

背景技术：

1、灰葡萄孢（ botrytis cinerea）隶属于核盘菌科、孢盘菌属，是一种典型的坏死营养型病原菌，寄主广泛，能够引起番茄、草莓、葡萄、樱桃等1400种植物表面腐烂并形成灰色霉层。不仅如此，灰葡萄孢还可以侵染植物的多个部位，如果实、花、叶、茎等其他植物器官，在采前和采后都会引起严重的病害。灰葡萄孢的寄主非特异性和感染器官类型多样，导致其造成巨大的农业种植和采后损失（jiao et al., organic acid, a virulence factorfor pathogenic fungi, causing postharvest decay in fruits. mol plant pathol.2022）。据统计，全球每年因各种作物灰霉病的发生而导致的经济损失高达1000亿美元，对全球农业发展具有重大危害。

2、多年来，应用化学气体和化学杀菌剂是防治灰霉病的有效途径。然而，化学农药的长期使用导致了环境污染、食品安全问题以及对人体健康的不良影响。此外，由于灰葡萄孢传播速度快，寄主范围广，遗传变异量大，在过去的几十年中由于大量施用化学药剂而产生严重的抗药性。目前已经出现了对苯并咪唑类、二甲酰亚胺类和n-苯基氨基甲酸酯类等多种杀菌剂的抗性菌株（韩之琪等，灰葡萄孢对杀菌剂抗性研究进展，中国蔬菜，2014）。

3、微生物挥发性有机物（microbial volatile organic compounds，mvocs）是低沸点、低分子质量(<300 da)和高蒸汽压的亲脂性化合物。部分微生物产生的vocs 具有抑制病原菌的作用，能有效防控多种植物和农作物的病害。与传统液态药剂相比，mvocs具有低浓度被感知的优势，易于在土壤、空气等环境中远距离扩散，微生物可以在不直接接触病原菌和植物的情况下，通过其产生的抗菌vocs抑制病原菌生长，在植物病害防治中展现出巨大的应用潜力（sharifi et al., belowground plant-microbe communications viavolatile compounds. j exp bot. 2022）。目前，有关mvocs应用于灰霉病防治的报道较为少见。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法及其在灰霉病防治中的应用，该微生物固体熏蒸制剂不在被处理农产品上引入活菌，是一种安全高效的生防菌剂。

2、为解决现有技术问题，本发明采取的技术方案为：

3、一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法，包括以下步骤：

4、步骤1，取新鲜的麦粒冲洗干净，并加水煮至麦粒开口，过滤后风干，称取风干后的麦粒至锥形瓶，摇匀铺平瓶底，高温灭菌处理2次，得麦粒培养基；121℃灭菌15 min，重复灭菌2次，得到；

5、步骤2，取西塘链霉菌wy228，接种于isp-2培养基中，28℃下180rpm培养2 d，得到西塘链霉菌wy228发酵液；

6、步骤3，将西塘链霉菌wy228发酵液接入麦粒培养基中，充分混匀后，静置培养，培养期间每天摇瓶2次，培养结束后，烘干后保存，即得微生物固体熏蒸制剂。

7、作为改进的是，步骤1中称取风干后的麦粒接入锥形瓶中的量为10-40g/50g，风干后麦粒的含水率为33%-50%，高温灭菌的条件为121℃灭菌15 min。

8、作为改进的是，步骤3中西塘链霉菌wy228发酵液的接入量为5-10%，静置培养的温度为20-28℃，培养天数2天。

9、作为改进的是，步骤3中烘干采用35℃下烘箱干燥24h，保存采用的4℃低温真空保存。

10、上述制备方法得到的微生物固体熏蒸制剂。

11、上述制备方法制备得到的微生物固体熏蒸制剂在抑制灰葡萄孢上的应用。

12、作为改进的是，取微生物固体熏蒸制剂复水处理后，与待处理农产品共同放置于密闭容器内，所用微生物固体熏蒸制剂的浓度26.67 g/l，通过产生的vocs对灰葡萄孢的抑制效果，实现灰霉病的预防或治疗。

13、进一步改进的是，所述复水处理采用的是无菌水或营养液。

14、进一步改进的是，所述营养液的组分为胰蛋白胨6 g/l、葡萄糖4 g/l，添加1%cacl2。

15、一种防治草莓灰霉病的生物制剂，所述生物制剂含有上述制备方法制备得到的微生物固体熏蒸制剂。

16、有益效果

17、与现有技术相比，本发明一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法及其在灰霉病防治中的应用，具体优势如下：

18、1、本发明提供的微生物固体熏蒸制剂可产生抑菌性气体，易于在土壤、空气等环境中远距离扩散，制剂不与被处理农产品直接接触，不在其表面引入活菌；

19、2、本发明提供的微生物固体熏蒸制剂不在被处理农产品表面喷洒水性溶剂，尤其适用于表面容易损坏或腐烂、不宜用液态药剂处理的农作物，如草莓、蓝莓、生菜等；

20、3、本发明提供的微生物固体熏蒸制剂安全高效，成本低廉，使用简便，在灰霉病的防治中具有较好的市场应用前景。

技术特征：

1.一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法，其特征在于，步骤1中称取风干后的麦粒接入锥形瓶中的量为10-40g/50ml，风干后麦粒的含水率为33%-50%，高温灭菌的条件为121℃灭菌30 min。

3.根据权利要求1所述的一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法，其特征在于，步骤3中西塘链霉菌wy228发酵液的接入量为5-10%，静置培养的温度为20-28℃，培养天数2天。

4.根据权利要求1所述的一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法，其特征在于，步骤3中烘干采用35℃下烘箱干燥24h，保存采用的4℃低温真空保存。

5.基于权利要求1所述制备方法得到的微生物固体熏蒸制剂。

6.基于权利要求1所述制备方法制备得到的微生物固体熏蒸制剂在抑制灰葡萄孢上的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，取微生物固体熏蒸制剂复水处理后，与待处理农产品共同放置于密闭容器内，所用微生物固体熏蒸制剂的浓度26.67 g/l，通过产生的vocs对灰葡萄孢的抑制效果，实现灰霉病的预防或治疗。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述复水处理采用的是无菌水或营养液。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述营养液的组分为胰蛋白胨6 g/l、葡萄糖4 g/l，添加1% cacl2。

10.一种防止草莓灰霉病的生物制剂，其特征在于，所述生物制剂含有权利要求1所述制备方法制备得到的微生物固体熏蒸制剂。

技术总结
本发明公开了一种微生物固体熏蒸制剂的制备方法及其在灰霉病防治中的应用。取新鲜的麦粒冲洗干净，并加水煮至麦粒开口，过滤后风干，称取风干后的麦粒至锥形瓶，摇匀铺平瓶底，高温灭菌处理2次，得麦粒培养基；西塘链霉菌WY228发酵液；将西塘链霉菌WY228发酵液接入麦粒培养基中，充分混匀后，静置培养，培养期间每天摇瓶2次，培养结束后，烘干后保存，即得微生物固体熏蒸制剂。本发明微生物固体熏蒸制剂通过产生抑菌性气体显著抑制灰葡萄孢生长，且不在被处理农产品表面引入活菌和多余水分，对灰霉病具有安全且高效的防治能力，具有较好的市场应用前景。

技术研发人员：邢珂,丁琪禹,张露鑫,陈炳学,李成果,徐明洁,李奎,秦盛
受保护的技术使用者：江苏师范大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15