一种临床级免疫细胞冻存液、其制备及其冻存方法与流程

本发明涉及生物，特别涉及一种临床级免疫细胞冻存液、其制备及其冻存方法。

背景技术：

1、随着再生医学的发展，细胞治疗得到越来越多关注。免疫细胞作为机体防御体系的第一道防线，不仅可以在天然免疫系统发挥其主要杀瘤效应，而且在免疫反应的早期可以分泌不同的细胞因子和各种趋化因子来调节机体获得性免疫应答，是机体发挥免疫效应不可或缺的效应细胞。如t淋巴细胞、自然杀伤(nk)细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞(cik)、肿瘤浸润性t细胞(til)、树突状细胞(dc)、car-t、car-nk细胞等。细胞代谢过程需要各种蛋白酶的参与，而这些蛋白酶在环境温度低于-70℃时会集体罢工，低温贮藏的目的是通过超低温使细胞代谢活动近乎停止，更重要的是可以保持细胞的特性不变。目前现有的免疫细胞冻存液具有多种配方。主要是由含胎牛血清的细胞基础培养基和二甲基亚砜制备的得到。但二甲基亚砜(dmso)的作用是作为冷冻保护剂来保护细胞在冷冻和复苏的过程中免受损伤，在常温下对细胞有毒性作用。有文献报道，使用dmso冻存的免疫细胞在复苏后，其活性和功能性杀伤活力有所退化。此外，细胞冻存液中一般要使用胎牛血清保护细胞膜，提高冻存复苏过程的细胞存活率。但是胎牛血清会增加动物病原污染的机率，这都会给细胞以后的使用增加不确定因素。

2、目前对于免疫细胞的冻存大多数使用经典冷冻方法，即使用胎牛血清、dmso等将生物样本进行预处理，并以程序性降温做预处理，再转移至液氮中长期保存，这种方法对细胞损伤及毒性较大，影响细胞的后续应用。

3、因此，有必要对免疫细胞的冻存液进行改进，为临床的应用提高免疫细胞的安全性和有效性。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提供一种临床级免疫细胞冻存液、其制备及其冻存方法，对免疫细胞的冻存液进行改进，为临床的应用提高免疫细胞的安全性和有效性。

2、为实现上述目的，本发明一方面提出一种临床级免疫细胞冻存液，包括如下组分：

3、

4、优选地，所述人血白蛋白溶液为20％的人血白蛋白溶液。

5、本发明第二方面提供临床级免疫细胞冻存液的制备方法，包括以下步骤：

6、步骤1、按照无血清免疫细胞冻存液的配方的体积占比，取定量的海藻糖、右旋糖酐溶液装于储液瓶中，使用涡旋混匀仪充分混匀使海藻糖充分溶解；

7、步骤2、在储液瓶中加入定量的甘油，充分混匀后使用过滤器过滤除菌；

8、步骤3、过滤除菌后，在冻存液中加入定量的人血白蛋白溶液，充分混匀后放入4℃条件下保存。

9、本发明第三发面提供临床级免疫细胞的冻存方法，包括以下步骤：

10、步骤1、将培养得到的免疫细胞离心除去培养基成分；

11、步骤2、将除去培养基成份得到的免疫细胞加入平衡液中室温静置10分钟；

12、步骤3、离心、清洗免疫细胞后，将免疫细胞加入到预装有冻存液的冻存管中。

13、步骤4、静置3～5min后将冻存液迅速放入液氮内进行冻存。

14、优选地，在所述的步骤4中，在冻存过程中采取玻璃化冻存方法。

15、本发明公开的一种临床级免疫细胞冻存液、其制备及其冻存方法，可进行免疫细胞的长期冻存，冻存后细胞活力和表型无改变，对于免疫细胞有特异的保护作用；而且所述冻存液不含血清和培养基成份，不会引起溶血和凝血，冻存剂可供血液回输使用，可直接应用于临床。

技术特征：

1.一种临床级免疫细胞冻存液，其特征在于，一种临床级免疫细胞冻存液，包括如下组分：

2.根据权利要求1所述的一种临床级免疫细胞冻存液，其特征在于，所述人血白蛋白溶液为20％的人血白蛋白溶液。

3.一种临床级免疫细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.一种临床级免疫细胞冻存液的冻存方法，其特征在于，步骤1、将培养得到的免疫细胞离心除去培养基成分；

5.根据权利要求4所述的一种临床级免疫细胞冻存液的冻存方法，其特征在于：在所述的步骤4中，在冻存过程中采取玻璃化冻存方法。

技术总结
本发明公开一种临床级免疫细胞冻存液，包括如下组分：本发明可进行免疫细胞的长期冻存，冻存后细胞活力和表型无改变，对于免疫细胞有特异的保护作用；而且所述冻存液不含血清和培养基成份，不会引起溶血和凝血，冻存剂可供血液回输使用，可直接应用于临床。

技术研发人员：何文丽
受保护的技术使用者：上海中赛德康生物制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15