一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法

本发明涉及生物医药，尤其涉及一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法。

背景技术：

1、乳腺癌是女性最常见的恶性疾病。在这些患者中，导致死亡的主要原因不是原发肿瘤，而是远处转移的肿瘤。癌细胞转移的机制，包括乳腺癌转移，在很大程度上是未知的，也是癌症研究的一个焦点。大多数乳腺癌是侵袭性的，经常转移到淋巴结，然后转移到远处的器官，包括骨、肺、肝和脑。目前还没有有效的转移性乳腺癌治疗方法。

2、因此，在基础研究中开发抑制转移性乳腺癌的化疗和免疫治疗药物具有重要意义。监测活体小鼠的肿瘤进展在技术上也是具有挑战性的。基础和转化乳腺癌研究在很大程度上依赖于实验动物模型。理想情况下，乳腺癌模型应在肿瘤病因、生物学行为、病理学和对治疗的反应方面与人类乳腺癌具有共性。乳腺癌转移模型具有短期追踪肿瘤进展和易于跟踪活体小鼠肿瘤进展的优势。

3、为了解决本领域当前所面临构建得到的乳腺癌转移动物模型为临床试验提供了一个很好的替代方案的技术问题，本发明提供了一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法。

技术实现思路

1、本发明实施例的目的在于提供一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，旨在解决本领域当前所面临构建得到的乳腺癌转移动物模型为临床试验提供了一个很好的替代方案的技术问题。

2、一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，包括以下步骤：

3、（1）实验动物的准备；

4、（2）肿瘤细胞预处理；

5、（3）建立慢性不可预知性应激联合孤养法模型的三阴性乳腺癌肝气郁滞证肝转移性动物模型：

6、a、对动物进行慢性不可预知性应激刺激和孤养，包括夹尾刺激、频闪照明、模具束缚、倾斜鼠笼垫湿辅料和电击足底，将夹尾刺激、频闪照明、模具束缚、倾斜鼠笼垫湿辅料和电击足底5种刺激方法纳入随机表格之中，每天随机给予2种刺激；其中，

7、夹尾刺激：每次夹尾刺激25-35min，每隔2.5-3.5h刺激1次，每天进行2-5次；

8、频闪照明：每天2h；

9、模具束缚：夹尾刺激后将每只老鼠独立关入动物约束系统1-3h，每日1次；

10、倾斜鼠笼和垫湿辅料：每次倾斜鼠笼2h；

11、电击足底：电流强度1.0ma，10s/次，间隔1 min刺激1次，共30次；

12、b、14天后，将肿瘤细胞注射到动物第四对乳腺脂肪垫内中；

13、c、肿瘤细胞株原位种植完成后，再进行步骤a，对动物进行慢性不可预知性应激刺激联合孤养。

14、通过该方法构建得到的肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型为临床试验提供了一个很好的替代方案，为临床药物作用机制的研究、药物筛选和评价、疫苗研究与开发提供了实验材料，具有较好的临床应用价值。

15、下面对本申请的技术方案作进一步的说明:

16、一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，包括以下步骤：

17、（1）实验动物的准备；

18、（2）肿瘤细胞预处理；

19、（3）建立慢性不可预知性应激联合孤养法模型的三阴性乳腺癌肝气郁滞证肝转移性动物模型：

20、a、对动物进行慢性不可预知性应激刺激和孤养，包括夹尾刺激、频闪照明、模具束缚、倾斜鼠笼垫湿辅料和电击足底，将夹尾刺激、频闪照明、模具束缚、倾斜鼠笼垫湿辅料和电击足底5种刺激方法纳入随机表格之中，每天随机给予2种刺激；其中，

21、夹尾刺激：每次夹尾刺激30min，每隔3h刺激1次，每天进行4次；

22、频闪照明：每天2h；

23、模具束缚：夹尾刺激后将每只老鼠独立关入动物约束系统2h，每日1次；

24、倾斜鼠笼和垫湿辅料：每次倾斜鼠笼2h；

25、电击足底：电流强度1.0ma，10s/次，间隔1 min刺激1次，共30次；

26、b、14天后，将肿瘤细胞注射到动物第四对乳腺脂肪垫内中；

27、c、肿瘤细胞株原位种植完成后，再进行步骤a，对动物进行慢性不可预知性应激刺激联合孤养。

28、在其中一个实施例中,所述动物包含有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴、绵羊、山羊。

29、优化的，所述动物为小鼠，其中小鼠为6周龄balb/c雌性，体重为17～22g。

30、在其中一个实施例中,在所述步骤（2）中，肿瘤细胞为乳腺癌细胞，乳腺癌细胞，由luciferace荧光标记的4t1鼠源乳腺癌细胞；

31、其中，4t1鼠源乳腺癌细胞在步骤（2）中的用量为1×105～5×105cells/ml。

32、在其中一个实施例中,在所述步骤（3）中，肿瘤细胞注射到小鼠第四对乳腺脂肪垫内中还包括如下步骤：

33、s1、去除小鼠的腹部乳房部位毛发，清洁暴露的腹部皮肤；

34、s2、采用碘酒和/或75％酒精清洁皮肤。

35、s3、在清洁后的第四对乳房皮肤做一个切口；

36、s4、切口采用外科手术刀对清洁后的颈部皮肤进行切割得到的；

37、s5、将肿瘤细胞注射到乳房垫中

38、s6、将分离的肌肉复位，覆盖伤口部位，手术缝合。

39、优化的，所述切口长度为0.5-1.5cm。

40、所述切口长度为1cm。

41、优化的，所述的将肿瘤细胞注射到乳房垫中采用设备是可调节计量微量注射器。

42、与现有技术相比，本发明一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法具有：

43、通过该方法构建得到的肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型为临床试验提供了一个很好的替代方案，为临床药物作用机制的研究、药物筛选和评价、疫苗研究与开发提供了实验材料，具有较好的临床应用价值。

技术特征：

1.一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求1或2所述的一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，所述动物包含有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴、绵羊、山羊。

4.根据权利要求3所述的一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，所述动物为小鼠，其中小鼠为6周龄balb/c雌性，体重为17～22g。

5.根据权利要求1或2所述的一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，

6.根据权利要求4所述的一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，肿瘤细胞注射到小鼠第四对乳腺脂肪垫内中还包括如下步骤：

7.s3、在清洁后的第四对乳房皮肤做一个切口；

8.根据权利要求6所述的一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，所述切口长度为0.5-1.5cm。

9.根据权利要求7所述的一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，所述切口长度为1cm。

10.根据权利要求6所述的一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，其特征在于，所述的将肿瘤细胞注射到乳房垫中采用设备是可调节计量微量注射器。

技术总结
本发明适用于生物医药技术领域，提供了一种肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型的构建方法，包括实验动物的准备、肿瘤细胞预处理、建立慢性不可预知性应激联合孤养法模型的三阴性乳腺癌肝气郁滞证肝转移性动物模型；通过该方法构建得到的肝气郁滞型乳腺癌肝转移动物模型为临床试验提供了一个很好的替代方案，为临床药物作用机制的研究、药物筛选和评价、疫苗研究与开发提供了实验材料，具有较好的临床应用价值。

技术研发人员：林家茂,李洋,张志钦,陈云松
受保护的技术使用者：山东第一医科大学附属肿瘤医院（山东省肿瘤防治研究院、山东省肿瘤医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14