一种小鼠自发性肝癌模型的构建方法

本发明涉及生物，具体涉及一种小鼠自发性肝癌模型及其构建方法和应用。

背景技术：

1、肝细胞癌是一种高度异质性的癌症，通常经由“肝炎-肝硬化-肝癌”三部曲演变而来，同时伴有潜在的慢性肝病和合并症。目前常用的小鼠肝癌模型包括：1)基因工程小鼠模型；2)化学诱导小鼠模型；3)同种或异种移植瘤模型。其中基因工程小鼠前期建模周期长，成本昂贵，此外基于基因工程构建的小鼠模型更适用于研究具体特定基因在肝癌发生发展过程的作用，传统的建模方式主要是通过重组基因敲入或目的基因敲除构建，现有的转基因肝癌小鼠模型多采用cmyc联合其他基因共转染后过表达构建，该方法的造模成本高、成瘤不均一、不稳定，同时由于肝癌有明显的异质性，导致该模型不易用于评价除特定基因外的其他基因在肝癌发生发展过程中的作用，因此对于自发性肿瘤的研究有一定局限性。单纯化学诱导的小鼠肝癌模型包括使用遗传毒性和非遗传毒性的致癌物来诱导小鼠肿瘤发生，但这一模型也不能完全模拟肝癌在体内的发生过程，尤其是不能重现部分病人早期肝内胆汁淤积的病理生理过程，导致该方法构建的模型也有一定缺陷。同种或异种移植瘤模型是目前最常用的肝癌原发性模型，主要通过皮下或肝脏原位等途径注射肿瘤单细胞悬液或种植瘤块形成原发性肝癌模型，然而该模型不能完全模拟患者体内肿瘤生长微环境，瘤内免疫细胞数量也较自发性肿瘤明显减少，因此在免疫治疗相关研究中也不能作为较为理想的模型。

2、为了解决上述问题，本发明提供了一种新型小鼠自发性肝癌成瘤模型及其构建方法和应用。

3、本发明第一方面提供了一种自发性肝癌动物模型的构建方法，包括胆管结扎和化学诱导步骤。

4、在某些实施方式中，所述化学诱导的试剂选自den，ccl4，afb，硫代乙酰胺(taa)。

5、在某些实施方式中，所述化学诱导的试剂为硫代乙酰胺(taa)。

6、在某些实施方式中，所述胆管结扎一周到两周后拆线再进行硫代乙酰胺(taa)饮水诱导。

7、在某些实施方式中，所述硫代乙酰胺(taa)饮水中taa浓度为0.05％。

8、在某些实施方式中，所述动物选自小鼠、大鼠或兔。

9、在某些实施方式中，所述方法进一步包括胆管结扎前的动物准备、动物麻醉和术前消毒步骤。

10、在某些实施方式中，所述方法进一步包括硫代乙酰胺(taa)饮水诱导后的模型功能验证步骤。

11、在某些实施方式中，所述功能验证包括组织形态学检查、he染色及肝癌相关标志物免疫组织化学检测。

12、本发明第二方面提供了根据本发明第一方面所述的方法获得的动物模型在研究肝细胞癌发生发展过程中的组织病理，分子特征以及肿瘤微环境改变中的应用。

13、本发明第三方面提供了根据本发明第一方面所述的方法获得的动物模型作为临床前动物模型用于新型抗肿瘤药物开发、肝细胞癌实验性治疗及诊断研究的验证中的应用。

14、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

15、1)本发明提供了一种新型小鼠自发性肝癌成瘤模型，较目前常用的致肝癌模型(如单纯的化学诱导)，更加贴近临床肝癌发生发展的病理生理过程。临床部分肝癌患者在发生发展过程中会存在胆汁淤积的病理生理过程，本发明通过结扎胆道模拟肝癌发生早期胆汁淤积、胆管渐进性破坏和肝内持续性炎症,进而引起胆管细胞和肝细胞损伤,并逐步进展为肝纤维化。1-2周后将胆道结扎线放开，继而予以小鼠硫代乙酰胺(taa)饮水，taa在肝中代谢为硫氧化物,进而产生自由基和活性氧,破坏细胞膜的通透性,诱导肝细胞增殖,通过进一步维持肝纤维化导致持续性肝损伤，并逐步发展为肝硬化，最终引起肝癌发生。硫代乙酰胺诱导的肝纤维化模型在形态和功能上均与人肝纤维化相似，成功率高且不易逆转，能够维持持续的肝损伤；由硫代乙酰胺诱导的肝纤维化、肝硬化模型类似于人类发生肝纤维化、肝硬化时出现的病理生理改变，更具有临床前模型的应用意义。

16、2)本发明的新型小鼠自发性肝癌成瘤模型较基因工程小鼠简单易行，材料采购容易，成瘤率高且较均一。

17、3)本发明的新型小鼠自发性肝癌成瘤模型较同种或异种移植瘤模型有更贴近临床患者的肿瘤免疫微环境。

18、4)通过所述方法构建获得的肝癌动物模型可用于研究肝细胞癌发生发展过程中的组织病理，分子特征以及肿瘤微环境改变；同时也可作为临床前动物模型用于新型抗肿瘤药物开发、肝细胞癌实验性治疗及诊断研究的验证。

技术实现思路

技术特征：

1.一种自发性肝癌动物模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括胆管结扎和化学诱导步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化学诱导的试剂选自den，ccl4，afb，硫代乙酰胺(taa)。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述化学诱导的试剂为硫代乙酰胺(taa)。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述胆管结扎一周到两周后拆线再进行硫代乙酰胺(taa)饮水诱导。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述硫代乙酰胺(taa)饮水中taa浓度为0.05％。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述动物选自小鼠、大鼠或兔。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括胆管结扎前的动物准备、动物麻醉和术前消毒步骤；可选地，所述方法进一步包括硫代乙酰胺(taa)饮水诱导后的模型功能验证步骤。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述功能验证包括组织形态学检查、he染色及肝癌相关标志物免疫组织化学检测。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法获得的动物模型在研究肝细胞癌发生发展过程中的组织病理，分子特征以及肿瘤微环境改变中的应用。

10.根据权利要求1-8任一项所述的方法获得的动物模型作为临床前动物模型用于新型抗肿瘤药物开发、肝细胞癌实验性治疗及诊断研究的验证中的应用。

技术总结
本发明公开了一种自发性肝癌动物模型的构建方法，包括胆管结扎和利用硫代乙酰胺的化学诱导步骤。通过所述构建方法获得的新型小鼠自发性肝癌成瘤模型较同种或异种移植瘤模型有更贴近临床患者的肿瘤免疫微环境。可用于研究肝细胞癌发生发展过程中的组织病理，分子特征以及肿瘤微环境改变；同时也可作为临床前动物模型用于新型抗肿瘤药物开发、肝细胞癌实验性治疗及诊断研究的验证。

技术研发人员：丁振斌,高正,傅修涛,姚娜,陈佳锋,李小刚,冯山入,周俭
受保护的技术使用者：复旦大学附属中山医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16