一种创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法与流程

本发明涉及生物医药，尤其涉及创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法。

背景技术：

1、半月板损伤是临床常见的疾病，半月板损伤的程度与关节软骨表面增加的应力呈正比，半月板损伤后可引起软骨表面单位应力增加，进而导致继发性骨关节炎。构建半月板损伤致创伤性膝骨关节炎模型能够更好地研究半月板损伤导致膝骨关节炎的致病机制、炎症发展进程、关节病理性改变，以及提出更好的治疗方案。

2、目前，现有报道的半月板损伤致关节炎模型，主要采用手术切除半月板诱导的，优点是完整切除半月板，关节炎症反应较重，但其有人为手术切开关节软组织，造成过多的额外损伤，而且与运动导致半月板损伤发病机制存在一定的差异，未能较好的复制临床上半月板损伤致关节炎的动物模型。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供简易创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法，更好地构建与临床上发病机制相似的半月板损伤致创伤性膝骨关节炎模型，研究半月板损伤导致膝骨关节炎的致病机制、炎症发展进程、关节病理性改变，以及提出更好的治疗方案。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，包括以下步骤：

3、s1.在动物造模时，适应性饲养1周，将造模兔称质量后，按3.5ml/kg剂量腹腔注射10％水合氯醛溶液将实验兔麻醉；

4、s2.待完全麻醉后，剪刀于右侧膝关节内侧附近备皮，显露皮肤后，消毒右侧膝关节内侧皮肤；

5、s3.定位内侧膝眼(即髌骨下方与髌韧带内侧凹陷中)，于内侧膝眼下0.5cm处采用小针刀针刃纵向进针破坏半月板前角(入针后即有阻力，若无阻力则针尖进入关节腔，需退针重新调整角度)；

6、s4.造模完毕后，退出小针刀，棉签按压针眼止血；

7、s5.术后不固定患肢，自由活动，1周后开始进行驱赶运动，共计造模时间为6周。

8、优选地，所选择实验动物为雌性日本长耳大白兔，体质量为(2.0±0.5)kg。

9、优选地，所选择小针刀直径规格为0.35mm～1.2mm，小针刀进针深度为2mm～8mm。

10、优选地，所选择小针刀进针角度(即针尖与髌韧带的夹角)为40°～50°。

11、优选地，造模过程中所需驱赶运动频次为每周7次(即每日1次)，造模过程中所需驱赶运动每天时间为5分钟～40分钟。

12、一种创伤性膝骨关节炎模型的构建评价方法，包括以下步骤：

13、s1.在建立模型结束时，取兔血清进行炎性指标检测；

14、s2.切下术侧兔膝关节，去除皮肤，放置中性福尔马林固定2天；

15、s3.制作成切片，通过显微镜观察膝关节病理变化，并进行mankin's和oochas病理评分；观察血清il-1β、血清tnf-ɑ含量、滑膜组织mmp-13、inos蛋白表达量、膝关节软骨collagenⅱ免疫组化表达的变化。

16、优选地，病理评分人员选择为3名～5名，膝关节mankin's病理评分标准为6分～9分，膝关节oochas病理评分标准为12分～18分。

17、优选地，血清il-1β和tnf-ɑ含量的测定高于阴性样本平均值，且高于平均值2倍。

18、优选地，膝关节滑膜组织mmp-13和inos蛋白表达量高于阴性样本平均值，且高于平均值2倍。

19、优选地，膝关节软骨组织collagenⅱ阳性表达低于阴性样本平均值，且低于平均值2倍。

20、与相关技术相比较，本发明提供的简易创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法具有如下有益效果：

21、本发明提供简易创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法，通过驱动运动进行造模，造模起第2周到第6周进行驱赶运动(相当于驱赶运动5周)，该方法不仅能够短时间成功建立模型，而且稳定性好，与临床发病高度相似。

技术特征：

1.一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：所选择实验动物为雌性日本长耳大白兔，体质量为(2.0±0.5)kg。

3.根据权利要求1所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：所选择小针刀直径规格为0.35mm～1.2mm，小针刀进针深度为2mm～8mm。

4.根据权利要求1所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：所选择小针刀进针角度(即针尖与髌韧带的夹角)为40°～50°。

5.根据权利要求1所述的一种半月板损伤致创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：造模过程中所需驱赶运动频次为每周7次(即每日1次)，造模过程中所需驱赶运动每天时间为5分钟～40分钟。

6.一种创伤性膝骨关节炎模型的构建评价方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建评价方法，其特征在于：病理评分人员选择为3名～5名，膝关节mankin's病理评分标准为6分～9分，膝关节oochas病理评分标准为12分～18分。

8.根据权利要求6所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建评价方法，其特征在于：血清il-1β和tnf-ɑ含量的测定高于阴性样本平均值，且高于平均值2倍。

9.根据权利要求6所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建评价方法，其特征在于：膝关节滑膜组织mmp-13和inos蛋白表达量高于阴性样本平均值，且高于平均值2倍。

10.根据权利要求6所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建评价方法，其特征在于：膝关节软骨组织collagenⅱ阳性表达低于阴性样本平均值，且低于平均值2倍。

技术总结
本发明公开了一种创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法，涉及生物医药技术领域。该创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，包括以下步骤：S1.在动物造模时，适应性饲养1周，将造模兔称质量后，按3.5ml/kg剂量腹腔注射10％水合氯醛溶液将实验兔麻醉；S2.待完全麻醉后，剪刀于右侧膝关节内侧附近备皮，显露皮肤后，消毒右侧膝关节内侧皮肤；S3.定位内侧膝眼(即髌骨下方与髌韧带内侧凹陷中)，于内侧膝眼下0.5cm处采用小针刀针刃纵向进针破坏半月板前角。本发明通过驱动运动进行造模，造模起第2周到第6周进行驱赶运动(相当于驱赶运动5周)，该方法不仅能够短时间成功建立模型，而且稳定性好，与临床发病高度相似。

技术研发人员：梁子聪,孙正梅,陈燕萍,江勇,陆瑞娜,曾升友,王恒,周枝,覃建锋,叶劲松,周美春,严国波,沈振华,朱胜章
受保护的技术使用者：黔南民族医学高等专科学校
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16