一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法

本发明属于植物组织培养，具体的说，涉及一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法。

背景技术：

1、塔黄（rheum nobile），隶属于蓼科（polygonaceae）大黄属（rheum），多年生高大草本，国内主要分布于西藏喜马拉雅山麓及云南西北部，生于海拔4000-4800m的高山流石滩及湿草地。植株根状茎及根长而粗壮，茎单生直立，基生叶呈莲座状，茎生叶及大型叶状圆形，近革质，上部有包裹起层层叠叠的半透明黄色苞片，远望像一座金黄色的宝塔，故此而得名，是一种极具观赏价值的珍稀濒危高山花卉。塔黄是我国重要的药用植物资源，其根茎入药，民间应用广泛，收载于《藏药志》，具有泻热、导滞、散瘀、消肿的功效，主要用于致泻和治疗黄水病，疗效显著，近年来由于大量采挖，种群数量急剧减小。塔黄需要经过5-7年营养生长才能开花，种子成熟后，便会枯萎死亡，自然环境条件恶劣种子萌发率低，严重影响种群维持及更新。加之在全球变暖的背景下，大量高山植物的适宜生境正在丧失，高山植物多样性面临巨大的威胁，采取必要的措施保护高山植物多样性成为摆在保护生物学家面前的一个紧迫的课题。

2、植物离体保存是指利用组织培养技术，将植物的组织和器官（如根、茎、叶、成熟或未成熟的胚等）在人工条件下进行保存，使其分化后重新生长为完整植株。离体培养技术可以快速、大量地实现植物个体的克隆快繁，对不能通过种子库保存、以及珍稀濒危的物种保存和快速繁殖提供了一种高效途径。开展塔黄种质资源保存方法相关研究，促进收集高山极端环境下形成的特殊物种及其所携带的基因信息，将对进一步深入研究高原地区植物适应性演化具有重要意义，以及为高山药用、观赏野生植物种质资源的保护，引种驯化和栽培提供理论基础和技术支持。目前，关于塔黄的组织培养技术进行离体保存相关方面未见报道。

技术实现思路

1、为了克服背景技术中存在的问题，本发明提供了一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，通过外植体种子的萌发、丛芽增殖、生根诱导、离体保存，建立了塔黄的快繁和离体保存体系，继代周期达18个月以上，为高山重要野生植物资源的收集保护、引种驯化、开发利用提供技术支撑。

2、为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

3、所述的高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法具体包括以下步骤：

4、1）萌发培养：以塔黄种子作为外植体，消毒后接种于萌发培养基上，种子萌发后继续培养获得无菌小苗，所述萌发培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括naa0.5mg/l、蔗糖20g/l和琼脂6g/l，ph为5.8；

5、2）增殖培养：将无菌小苗接种于增殖培养基上进行从芽增殖，所述增殖培养基以ms培养基为基本培养基，还包括ba2.0mg/l、tdz0.1mg/l、蔗糖30g/l和琼脂6g/l，ph为5.8；

6、3）生根诱导：将增殖得到的丛芽分成单株接种到诱导培养基上进行生根诱导，所述诱导培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括naa1.0mg/l、蔗糖20g/l和琼脂6g/l，ph为5.8；

7、4）离体保存：将生根后的植株接种到离体保存培养基上进行离体保存，所述的离体保存培养基包括花宝1号2g/l、tdz0.1mg/l、蔗糖20g/l和琼脂6g/l，ph为5.8。

8、作为优选，步骤1）所述的消毒包括用无菌水浸泡种子48h，然后用75%乙醇浸泡20s，2%naclo消毒6min，无菌水漂洗5-6次，再将种子置于无菌滤纸上晾干。

9、作为优选，步骤1）所述萌发培养的培养条件为光照强度1600lx，光照时间12h/d，温度23±2℃。

10、作为优选，步骤4）所述离体保存条件为光照强度1600lx，温度20℃。

11、本发明的有益效果：

12、本发明提供了一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，以塔黄种子为材料，通过外植体消毒，萌发培养得无菌小苗，并对其进行从芽增殖、生根诱导和离体保存，建立了塔黄的快繁和离体保存体系，继代3次后增殖系数高达1:20.17，离体保存继代周期可达18个月以上。该方法有效地解决了塔黄的组培快繁问题，大大延长了离体保存周期，为高山重要野生植物资源的收集保护、引种驯化、开发利用提供技术支撑。

技术特征：

1.一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，其特征在于：步骤1）所述的消毒包括用无菌水浸泡种子48h，然后用75%乙醇浸泡20s，2%naclo消毒6min，无菌水漂洗5-6次，再将种子置于无菌滤纸上晾干。

3.根据权利要求1所述的一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，其特征在于：步骤1）所述萌发培养的培养条件为光照强度1600lx，光照时间12h/d，温度23±2℃。

4.根据权利要求1所述的一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，其特征在于：步骤4）所述离体保存条件为光照强度1600lx，温度20℃。

技术总结
本发明涉及一种高山植物塔黄的组培快繁及离体保存方法，属于植物组织培养技术领域，本发明包括以下步骤：1）萌发培养：以塔黄种子作为外植体，消毒后接种于萌发培养基上，种子萌发后继续培养获得无菌小苗；2）增殖培养：将无菌小苗接种于增殖培养基上进行从芽增殖；3）生根诱导：将增殖得到的丛芽分成单株接种到诱导培养基上进行生根诱导；4）离体保存：将生根后的植株接种到离体保存培养基上进行离体保存。本发明通过外植体种子的萌发、丛芽增殖、生根诱导、离体保存，建立了塔黄的快繁和离体保存体系，继代周期达18个月以上，为高山重要野生植物资源的收集保护、引种驯化、开发利用提供技术支撑。

技术研发人员：李村富,何俊,李春芳
受保护的技术使用者：中国科学院昆明植物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16