一种白颖苔草组织培养的方法

本发明属于组织培养领域，具体涉及一种白颖苔草组织培养的方法。

背景技术：

1、白颖苔草(carexrigescens(franch)v.krecz)是莎草科苔草属的一种多年生植物，广泛分布于中国北部的辽宁、河北、河南、山东和内蒙古。白颖苔草对冷、荫、干旱和高温等非生物胁迫具有很强的耐受性。它可以适应各种土壤条件，常用作城市景观和体育场建设草坪草。

2、由于苔草长期适应了固有的生殖对策，其营养繁殖已占主导，用种子繁殖几乎退化。种子的深休眠、低萌发率较为普遍，这使得该属植物的开发利用和种子扩大繁殖受到严重制约。因此，本发明旨在建立高效的再生体系，为白颖苔草离体快繁提供思路，并为转基因工程奠定基础。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种组织培养白颖苔草的方法及其培养基配方，解决了当前对于白颖苔草的组织培养技术中，诱导率不高、生芽困难、资源消耗量大而且浪费严重的问题。

2、本发明首先提供一种组织培养白颖苔草的方法，所述方法包括如下步骤：

3、s1、以白颖苔草种子为外植体，消毒；

4、s2、以诱导培养基进行诱导培养和增殖培养；

5、所述诱导培养基为以ms固体培养基为基础培养基，添加2,4-d、6-ba、naa和蔗糖，获得的固体培养基，所述诱导培养基中2,4-d浓度为2mg/l、6-ba浓度为1mg/l、naa的浓度为1mg/l、蔗糖的浓度为30g/l；

6、s3、以分化培养基进行丛生芽诱导；

7、所述分化培养基为以ms固体培养基为基础培养基，添加6-ba、naa和蔗糖，获得的固体培养基，所述分化培养基中6-ba浓度为1mg/l、naa的浓度为1mg/l、蔗糖的浓度为30g/l。

8、上述方法中，所述诱导培养基和分化培养基的ph值可为5.9-6.0。

9、本发明的组织培养白颖苔草的方法还包括如下步骤：

10、s4、以生根培养基进行生根培养；

11、所述生根培养基为以1/2ms固体培养基为基础培养基，添加蔗糖，获得的固体培养基，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/l。

12、上述方法中，所述生根培养基的ph值可为5.9-6.0。

13、本发明的组织培养白颖苔草的方法还包括炼苗移栽的步骤。

14、上述方法中，所述增殖培养为继代增殖两至三次，每代的培养时间为25天。

15、上述方法中，所述诱导培养和增殖培养在黑暗条件下进行。

16、上述方法中，所述丛生芽诱导的光照条件为每天24小时中16小时光照，其余时间黑暗，光照强度为600lx。

17、上述方法中，所述生根培养的光照条件为每天24小时中16小时光照，其余时间黑暗，光照强度为600lx。

18、上述方法中，所述培养在温度为25±1℃的环境中进行。

19、上述方法中，所述固体培养基含有凝固剂，所述丛生芽分化培养基用的凝固剂为凝胶，浓度为3g/l，所述诱导培养基、继代培养基、生根培养基用的凝固剂均为琼脂，浓度为6g/l。

20、本发明还提供上述方法在白颖苔草种植中的应用。

21、本发明还提供上述方法在白颖苔草育种中的应用。

22、本发明以成熟胚作为外植体，发明人经过大量长期实践操作，发现只有成熟胚作为外植体才能实现白颖苔草较高诱导率的保证由于白颖苔草种子有种皮包被且包于果囊，内生菌多，极易污染，如何防止外植体污染是以后繁殖的关键步骤，因此，发明人采用20％浓度naclo溶液进行消毒处理40min，大大降低了外植体污染的概率。

23、白颖苔草再生体系的相关研究未见报道，发明人采用适时调整培养基中的激素浓度促进愈伤组织发育，并根据当前生长程度适当调整激素浓度或改用同效激素。

24、本发明培养过程速度快，再生频率较高，变异率较低，周期相对较短，能较好地保持白颖苔草的遗传稳定性。

技术特征：

1.一种组织培养白颖苔草的方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法还包括炼苗移栽的步骤。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述增殖培养为继代增殖两至三次，每代的培养时间为25天。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述诱导培养和增殖培养在黑暗条件下进行。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述丛生芽诱导的光照条件为每天24小时中16小时光照，其余时间黑暗，光照强度为600lx。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于：所述生根培养的光照条件为每天24小时中16小时光照，其余时间黑暗，光照强度为600lx。

8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于：所述培养在温度为25±1℃的环境中进行。

9.权利要求1-8任一所述的方法在白颖苔草种植中的应用。

10.权利要求1-8任一所述的方法在白颖苔草育种中的应用。

技术总结
本发明属于组织培养领域，具体提供了一种组织培养白颖苔草的方法，所述方法包括如下步骤：S1、以白颖苔草种子为外植体，消毒；S2、以诱导培养基进行诱导培养和增殖培养；S3、以分化培养基进行丛生芽诱导。本发明的白颖苔草组织培养的方法培养过程速度快，再生频率较高，变异率较低，周期相对较短，能较好地保持白颖苔草的遗传稳定性，为白颖苔草离体快繁提供思路，并为转基因工程奠定基础。

技术研发人员：孙彦,王潞雨,李跃,胡倩楠,李茂娜
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15