一种植物提取物型肉羊精液低温稀释液及制备方法和应用

本发明涉及一种植物提取物型肉羊精液低温稀释液及制备方法和应用，属于动物繁殖。

背景技术：

1、目前，肉羊养殖规模不断扩大，养殖企业越来越多。为了提高经济效益，企业引进科学的繁殖配种技术，人工授精技术就是其中之一，它简单且高效。精液保存技术是指将采集到的精液经过一定处理，延长精液存活时间，可使人工授精技术免受地域和时间的限制。精液保存方式有三种，常温保存(15-25℃)、低温保存(0-5℃)、冷冻保存(-196℃)。低温保存温度低，精子代谢速率慢，保存效果优于常温保存，且操作和设备要求没有冷冻保存那么高。精液在代谢过程中会产生活性氧(ros)，适量ros可以维持精子正常生理功能，但过多ros会氧化精子质膜上的不饱和脂肪酸，破坏精子质膜完整性，降低精液质量。因此，稀释液中需要添加抗氧化剂来中和过多的ros。

2、为此，有必要通过研究如何缓解氧化应激来发明可以提高肉羊精液低温保存品质的新型稀释液，来提高人工受精技术的效率。植物提取物型抗氧化剂有着抗氧化性能强、安全性高、价格低廉等优点，但是否可以在精液保存或者肉羊精液低温保存中使用尚未可知。

技术实现思路

1、本发明针对上述现有技术中存在的问题，提供一种植物提取物型肉羊精液低温稀释液及制备方法和应用，提供植物提取物在肉羊精液保存中的作用效果，通过缓解氧化应激来提高肉羊精液的低温保存效果。

2、本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

3、第一方面，本发明提供一种植物提取物型肉羊精液低温稀释液，该植物提取物肉羊精液低温稀释液包括基础稀释液和第一稀释液；

4、所述基础稀释液包括tris、柠檬酸、果糖、大豆卵磷脂、双抗；

5、所述第一稀释液包括安石榴甙。

6、第二方面，本发明提供一种植物提取物型肉羊精液低温稀释液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

7、步骤1)、将2.07～4.07g tris、0.64～2.64g柠檬酸、1～3g果糖、0.05～0.15g大豆卵磷脂和4～6万iu的双抗溶解于40ml双蒸水中，50～70℃水浴加热5～15分钟，水浴加热，得到基础稀释液母液；

8、步骤2)、称取0.005～0.015g安石榴甙溶解于10ml双蒸水中，得到安石榴甙母液；

9、步骤3)、取1ml经步骤2)配制得到的安石榴甙母液，向1ml安石榴甙母液中添加9ml双蒸水，得到第一稀释液；

10、步骤4)、然后向离心管中加入基础稀释液母液、第一稀释液和双蒸水，得到安石榴甙稀释液，即植物提取物型肉羊精液低温稀释液。

11、进一步地，步骤1)中水浴加热的条件为50～70℃水浴加热5～15分钟。

12、进一步地，步骤1)具体步骤如下：取3.07g tris、1.64g柠檬酸、2g果糖、0.1g大豆卵磷脂、5万iu的双抗溶解于40ml双蒸水中，60℃水浴加热10min，得到基础稀释液母液。

13、进一步地，步骤2)具体步骤如下：称取0.01084g安石榴甙避光溶解于10ml双蒸水中，得到安石榴甙母液。

14、进一步地，步骤4)中所述的安石榴甙稀释液浓度为5μmol/l、15μmol/l、30μmol/l或45μmol/l。

15、第三方面，本发明提供所述的植物提取物型肉羊精液低温稀释液在提高肉羊精液低温保存品质的应用。

16、本发明方法科学合理，通过发明，提供的一种植物提取物型肉羊精液低温稀释液，将采集到的精液，利用全自动精子分析仪检查合格后混合均匀。利用配制的不同浓度安石榴甙稀释液对精液进行稀释，用多层棉布包裹，放置于冰箱4℃冷藏中低温保存。在保存期间，针对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位、丙二醛含量、过氧化氢酶活性(精子运动性能、功能完整性、氧化应激参数、抗氧化酶活性、能量代谢参数五个方面进行检测)，以明确这种植物提取物型抗氧化剂(安石榴甙)在肉羊精液保存中作用。本发明通过添加不同浓度安石榴甙，提高了肉羊精液的低温保存效果，在精液低温保存期间，相比于对照组，添加植物提取物(安石榴甙)的精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率下降缓慢，尤其30μmol/l的安石榴甙保存的精液质量最好。添加安石榴甙组的精子线粒体膜电位和过氧化氢酶活性显著高于对照组，丙二醛含量显著低于对照组，30μmol/l的安石榴甙保存精液的抗氧化性能最强，精液质量最高。本发明旨在客观的评价可以提高肉羊精液低温保存的稀释液及其新型植物提取物在其中的作用效果，并使用低成本的稀释液配方，极大的延长精液保存时间，提高精子的有效存活时间。

技术特征：

1.一种植物提取物型肉羊精液低温稀释液，其特征在于，该植物提取物肉羊精液低温稀释液包括基础稀释液和第一稀释液；所述基础稀释液包括tris、柠檬酸、果糖、大豆卵磷脂、双抗；所述第一稀释液包括安石榴甙。

2.权利要求1所述的植物提取物型肉羊精液低温稀释液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的植物提取物型肉羊精液低温稀释液的制备方法，其特征在于，步骤1)中水浴加热的条件为50～70℃水浴加热5～15分钟。

4.根据权利要求2所述的植物提取物型肉羊精液低温稀释液的制备方法，其特征在于，步骤1)具体步骤如下：取3.07g tris、1.64g柠檬酸、2g果糖、0.1g大豆卵磷脂、5万iu的双抗溶解于40ml双蒸水中，60℃水浴加热10min，得到基础稀释液母液。

5.根据权利要求2所述的植物提取物型肉羊精液低温稀释液的制备方法，其特征在于，步骤2)具体步骤如下：称取0.01084g安石榴甙避光溶解于10ml双蒸水中，得到安石榴甙母液。

6.根据权利要求2所述的植物提取物型肉羊精液低温稀释液的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述的安石榴甙稀释液浓度为5μmol/l、15μmol/l、30μmol/l或45μmol/l。

7.权利要求1所述的植物提取物型肉羊精液低温稀释液在提高肉羊精液低温保存品质的应用。

技术总结
本发明公开一种植物提取物型肉羊精液低温稀释液及制备方法和应用，属于动物繁殖技术领域，包括以下步骤：将2.07～4.07gTris、0.64～2.64g柠檬酸、1～3g果糖、0.05～0.15g大豆卵磷脂和4～6万IU的双抗溶解于40mL双蒸水中，水浴加热，得到基础稀释液母液；称取0.005～0.015g安石榴甙溶解到10ml双蒸水中；向1mL安石榴甙母液中添加9mL双蒸水，得到第一稀释液，然后向离心管中加入基础稀释母液、第一稀释液和双蒸水，得到安石榴甙稀释液；通过本发明制备出来的植物提取物型肉羊精液低温稀释液极大的延长精液保存时间，提高精子的有效存活时间，且成本低。

技术研发人员：李拥军,王旭洋,张柳明,江才雨,孙宇轩,孙晓梅
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25