一种向日葵盘腐型菌核病防控方法

本发明涉及微生物及其应用，具体涉及一种向日葵盘腐型菌核病防控方法。

背景技术：

1、向日葵菌核病是由核盘菌引起的一种真菌病害，其病原菌为核盘菌 sclerotinia  sclerotiorum，其致病机制主要是通过分泌水解酶类降解寄生植物细胞壁并产生草酸毒素破坏寄主细胞组织，病原菌以菌核、子囊孢子和菌丝体形式存在，该病菌可从向日葵的根、茎、叶以及花盘等不同部位侵染，引起根腐、茎腐、叶腐和盘腐，发病严重时，会引发向日葵植株整株死亡，传播速度快，范围广，造成大面积减产或绝收。仅在内蒙古种植区平均每年减产20%以上，平均年经济损失达到30亿元左右，全国平均年经济损失达到50亿元的规模。

2、核盘菌喜好低温高湿环境，在向日葵花期降雨后由菌核萌发形成的子囊盘(图5)释放的子囊孢子，弹射飘散在向日葵花盘上，造成向日葵盘腐的发生（图4），这种病害极难防治，给包括向日葵在内的油料作物生产带来巨大的经济损失。

3、对于向日葵盘腐型菌核病的防治，一般采用田间栽培管理、选用抗病品种以及药剂防治的方法，这些方法不但增加了大量成本，在盘腐型菌核病的防治上起到的作用也十分有限；同时，向日葵生长后期通常植株高大郁闭，田间人工喷药困难，如果使用无人机进行杀菌剂喷施因为后期向日葵花盘下垂，花盘正面向下，无人机从上面喷药不能有效的喷施到花盘正面，导致防治效果不理想；另外，长期使用药剂防治，也会导致病原菌产生突变，耐药性提升，产生新的抗药性弱化化学药剂的防效；过量施用化学农药也会严重影响向日葵籽粒的品质以及食用安全；因此，研究和开发一种行之有效的向日葵盘腐型菌核病防控方法，来弥补抗病品种不足和避免过度依赖化学农药进的现状是一种势在必行的方法。

技术实现思路

1、本发明提供了一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，旨在提供一种对向日葵盘腐型菌核病具体防控效果的防控方法。

2、本发明使用的技术方案如下：一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，包括如下步骤：

3、步骤1，小体积生防菌液培养，获得枯草芽孢杆菌 bacillus subtilis kb3的小体积生防菌液与巨大芽孢杆菌 bacillus megaterium tz-1的小体积生防菌液；

4、步骤2，生防菌液发酵，获得枯草芽孢杆菌 bacillus subtilis kb3的生防菌液与巨大芽孢杆菌 bacillus megaterium tz-1的生防菌液；

5、步骤3，两种生防菌液的混合，获得复合生防菌液；

6、步骤4，复合生防菌液的施用。

7、进一步，步骤1具体包括如下步骤：

8、s101，将枯草芽孢杆菌 bacillus subtilis kb3和巨大芽孢杆菌 bacillus  megaterium tz-1，两株生防菌分别接种至lb培养基上培养；

9、s102，选取单菌落，制作菌饼，分别获得枯草芽孢杆菌 bacillus subtilis kb3的菌饼与巨大芽孢杆菌 bacillus megaterium tz-1的菌饼；

10、s103，将步骤s102获得的菌饼分别移至装有100ml液体lb培养基的容器中，于28℃、180rpm摇床摇培条件下，震荡培养12h，获得枯草芽孢杆菌 bacillus subtilis kb3的小体积生防菌液与巨大芽孢杆菌 bacillus megaterium tz-1的小体积生防菌液。

11、进一步，步骤2具体包括如下步骤：

12、s201，配置7~8l液体lb培养基，加入发酵罐；

13、s202，将水蒸气通入发酵罐夹层中，进行外部加热，加热至80℃；

14、s203，待夹层温度达到80℃时，打开水蒸汽进入发酵罐内部的阀门，使水蒸气通入发酵罐内部，加热培养基至115℃，灭菌20min；

15、s204,停止通入水蒸气，通入空气的同时使罐体与蒸汽滤芯降温，将多余水蒸气排出发酵罐，同时发酵罐夹层自动注入凉水使培养基逐渐降温；

16、s205,待温度降至28℃，打开发酵罐，在发酵罐口处点燃接种环内部的吸有酒精的脱脂棉，火焰无菌条件下加入步骤1获得的小生防菌液250ml，保持空气压缩机工作状态，保证向发酵罐持续通气的条件下，开启发酵罐间歇搅拌的开关，密闭发酵24h以上后，待菌液生长为微浑浊状态，分别获得枯草芽孢杆菌 bacillus subtilis kb3的生防菌液与巨大芽孢杆菌 bacillus megaterium tz-1的生防菌液。

17、进一步，步骤s205具体包括如下步骤：间歇搅拌具体为工作2min，停止5min的交替循环搅拌。

18、进一步，步骤3具体包括如下步骤，将步骤2获得的两种生防菌液进行等比例混合获得复合生防菌液，按照1×108cfu/ml的浓度配置。

19、进一步，向日葵开花期2d后，以及盛花期，将步骤3获得复合生防菌液与水按照1:9的比例混合稀释，均匀喷施在向日葵的花盘表面。

20、进一步，通过喷施器械均匀喷施在向日葵的花盘表面，向日葵按照宽窄行种植：宽行190m、窄行60cm，宽行之间用于行驶喷施器械。

21、进一步，步骤4具体包括如下步骤，将步骤3获得复合生防菌液，按复合生防菌液：水为1：10的比例混合稀释，喷施于蜂箱蜜蜂进出口处。

22、根据权利要求8所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，每隔2h在每个蜂箱喷施10ml菌液。

23、本发明所达到的有益效果为：

24、1.本发明通过直接花盘喷施和通过喷施到蜜蜂上让蜜蜂携带生防菌传播到向日葵花盘，实现向日葵盘腐型菌核病的高效防控。

25、2.蜜蜂传菌，针对性极强，蜜蜂采蜜时，将生防菌带至每一朵花蕊，点对点防治。

26、3.使用生防菌减少了农药的施用量，降低成本的同时减轻药害。

技术特征：

1.一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，步骤1具体包括如下步骤：

3.根据权利要求1所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，步骤2具体包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，步骤s205具体包括如下步骤：间歇搅拌具体为工作2min，停止5min的交替循环搅拌。

5.根据权利要求1所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，步骤3具体包括如下步骤，将步骤2获得的两种生防菌液进行等比例混合获得复合生防菌液，按照1×108cfu/ml的浓度配置。

6.根据权利要求1所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，向日葵开花期2d后，以及盛花期，将步骤3获得复合生防菌液与水按照1:9的比例混合稀释，均匀喷施在向日葵的花盘表面。

7.根据权利要求6所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，通过喷施器械均匀喷施在向日葵的花盘表面，向日葵按照宽窄行种植：宽行190m、窄行60cm，宽行之间用于行驶喷施器械。

8.根据权利要求1所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，步骤4具体包括如下步骤，将步骤3获得复合生防菌液，按复合生防菌液：水为1：10的比例混合稀释，喷施于蜂箱蜜蜂进出口处。

9.根据权利要求8所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，白天在蜜蜂外出采蜜的时间段，每隔2h在每个蜂箱喷施10ml菌液。

10.根据权利要求8所述的一种向日葵盘腐型菌核病防控方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌bacillus subtilis kb3，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名：bacillus subtilis，保藏编号为：cgmcc no.23108；和巨大芽孢杆菌bacillus megaterium tz-1，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名：bacillus megaterium，保藏编号为cgmcc no.22296。

技术总结
本发明涉及微生物及其应用技术领域，具体涉及一种向日葵盘腐型菌核病防控方法；小体积生防菌液培养、生防菌液发酵、两种生防菌液的混合获得复合生防菌液、复合生防菌液的施用四个步骤，实现向日葵盘腐型菌核病防控；复合生防菌液的施用可以通过直接花盘喷施和通过喷施到蜜蜂上让蜜蜂携带生防菌传播到向日葵花盘，实现向日葵盘腐型菌核病的高效防控。

技术研发人员：韩升才,贾海滨,刘金善,张存霞,曹彦,包海柱,赵君,陈龙俊,冀宇飞,张晓红,李佳乐,李朝乾,孟欣蝶,张译丹,吴兆冉,张玉蓉,李婕超,闫国欣,陈浩
受保护的技术使用者：内蒙古农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19