间充质干细胞冻存液、注射液和冻存方法与流程

本发明涉及细胞冻存，具体涉及一种间充质干细胞冻存液、注射液和冻存方法。

背景技术：

1、间充质干细胞(msc，mesenchyma1 stroma1 cell)作为一种成体干细胞，具有自我更新以及多向分化潜能，在体外或体内特定的诱导条件下，可分化为骨、软骨、脂肪、神经、肝、心肌、内皮等多种间质组织细胞，并具有较强的免疫调控功能。目前基于msc的临床研究已经在许多国家广泛展开，主要应用于组织损伤修复(如硬骨、软骨损伤)、自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、炎性肠炎)、器官移植后移植物抗宿主病(gvhd)、心血管疾病(如脑卒中、心肌梗死)、神经系统疾病(如阿尔茨海默症)等。现阶段用于临床研究或治疗的msc主要来源于脐带、胎盘、骨髓以及脂肪组织等，此类自体或异体来源的msc，普遍存在如保存期限较短的问题。

2、人诱导多能干细胞来源间充质样细胞(imsc，human induced pluripotent stemcells-derived mesenchymal stem cell)是由ipsc(human induced pluripotent stemcell)在特定条件下诱导分化获得，具有与msc相同的分化和免疫调节功能。在药品gmp标准下工业化制备的imsc细胞性质高度均一、特性稳定且质量可控，解决了msc疗法的现存问题并实现细胞治疗产品的标准化和可控性，可用于不同疾病的临床治疗，并提高细胞治疗的有效率和稳定性。基于上述优势，天然组织来源的间充质干细胞治疗药物正逐步向ipsc来源的间充质干细胞药物升级转变，目前国内外也已经开展了诸多imsc细胞治疗相关的临床研究。

3、然而与常规药品和其他生物制品不同，不同来源的msc治疗产品的功能性成分为具有活力的细胞，细胞治疗产品的长期有效储存和使用时的细胞状态是影响治疗效果的关键因素，也是目前细胞治疗临床转化的主要难点。现阶段细胞的长期保存主要通过冻存实现，通常经冻存复苏后的细胞应能维持较高的活率、回收率和相应的生物学功能，有效的细胞冻存主要与细胞冻存液和冻存方式有关。

4、目前常用的细胞冻存液包含较高浓度的胎牛血清、细胞培养基、二甲基亚砜(dmso，dimethylsulfoxide)等其他非渗透性和渗透性冻存保护剂，由于其成分复杂不明确，在临床使用上存在一定风险。部分培养基中添加的功能型糖衍生物由糖类化合物与烯醇的氧化产物通过加成反应制备得到，存在批次间不稳定性且批次差异较大，无法标准化制备的问题。此外，dmso对细胞和人体有一定的毒副作用。临床使用时为了去除血清、dmso等成分，通常冻存的细胞制剂复苏后需反复多次洗涤以适用于临床应用，操作繁琐污染风险增加而且导致细胞损伤和损失大，不利于临床应用。目前还未探索出一种较为理想的间充质干细胞冻存液。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是提供一种成分简单明确，冻存复苏后细胞能够直接注射，同时确保复苏后细胞的高活率和0小时回收率并维持细胞干性和生物学功能的间充质干细胞冻存液及冻存方法。为了解决上述问题，本发明提供了一种可直接输注人体的间充质干细胞冻存液，所述间充质干细胞冻存液由甘油、人血白蛋白和医用注射液组成。

2、优选的，所述间充质干细胞冻存液中：甘油的体积浓度为0.2％-30％；人血白蛋白的质量浓度为0.2％-18％；余量为医用注射液。

3、优选的，所述间充质干细胞冻存液中：甘油的体积浓度为1％-15％；人血白蛋白的质量浓度为1％-15％；余量为医用注射液。

4、优选的，所述间充质干细胞冻存液中：甘油的体积浓度为2％-15％；人血白蛋白的质量浓度为1％-15％；余量为医用注射液。

5、优选的，所述间充质干细胞冻存液中：甘油的体积浓度为5％-15％；人血白蛋白的质量浓度为1％-15％；余量为医用注射液。

6、更优选的，所述间充质干细胞冻存液中：甘油的体积浓度为5％-15％；人血白蛋白的质量浓度为5％-10％；余量为医用注射液。

7、优选的，所述医用注射液选自复方电解质注射液、氯化钠注射液和右旋糖酐氯化钠注射液中的一种。

8、更优选的，所述医用注射液为复方电解质注射液。

9、本发明提供了一种间充质干细胞注射液，所述间充质干细胞注射液包含本发明所述的间充质干细胞冻存液和间充质干细胞。

10、本发明提供了一种间充质干细胞的冻存方法，包括以下步骤：使用本发明所述的间充质干细胞冻存液将间充质干细胞进行冻存。

11、优选的，所述冻存方式为直接将所述间充质干细胞置于-196℃以下的温度下冻存。

12、优选的，所述间充质干细胞在所述间充质干细胞冻存液中的冻存密度为8×106-12×106个细胞/ml。

13、有益效果

14、本发明的间充质干细胞冻存液成分简单明确，均采用临床级试剂，不含血清和动物源成分且不含有dmso，冻存复苏后的细胞可直接输注人体从而显著减少洗涤过程所带来的细胞损伤和损失，更适于临床级间充质干细胞的长期储存。冻存液中各组分相互配合，能够大大减少冻存过程中对细胞的伤害，显著提高复苏后细胞的活率和0小时回收率并维持细胞的干性和生物学功能(包括淋巴细胞增殖抑制能力和三系分化能力)，同时细胞冻存液的批次稳定，冻存效果重复性良好，并且细胞复苏后可在室温放置，具有较好的室温稳定性，有效维持了间充质干细胞的高活率、高0小时回收率和生物学功能。此外，根据本发明某些实施方案的间充质干细胞冻存液还具有高的24小时活细胞回收率，细胞增殖能力良好。

技术特征：

1.一种可直接输注人体的间充质干细胞冻存液，所述间充质干细胞冻存液由甘油、人血白蛋白和医用注射液组成。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述间充质干细胞冻存液中，甘油的体积浓度为0.2％-30％，人血白蛋白的质量浓度为0.2％-18％，余量为医用注射液。

3.根据权利要求2所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述间充质干细胞冻存液中，甘油的体积浓度为1％-15％，人血白蛋白的质量浓度为1％-15％，余量为医用注射液。

4.根据权利要求3所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述间充质干细胞冻存液中，甘油的体积浓度为2％-15％，人血白蛋白的质量浓度为1％-15％，余量为医用注射液。

5.根据权利要求4所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述间充质干细胞冻存液中，甘油的体积浓度为5％-15％，人血白蛋白的质量浓度为1％-15％，余量为医用注射液。

6.根据权利要求5所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述间充质干细胞冻存液中，甘油的体积浓度为5％-15％，人血白蛋白的质量浓度为5％-10％，余量为医用注射液。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述医用注射液为选自复方电解质注射液、氯化钠注射液和右旋糖酐氯化钠注射液中的一种。

8.根据权利要求7所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述医用注射液为复方电解质注射液。

9.一种间充质干细胞注射液，所述间充质干细胞注射液包含权利要求1-8任意一项所述的间充质干细胞冻存液和间充质干细胞。

10.一种间充质干细胞的冻存方法，包括以下步骤：

11.根据权利要求10所述的冻存方法，其特征在于，所述冻存的方式为：直接将所述间充质干细胞置于-196℃以下的温度下冻存。

12.根据权利要求11所述的冻存方法，其特征在于，所述间充质干细胞在所述间充质干细胞冻存液中的冻存密度为8×106-12×106个细胞/ml。

技术总结
本发明提供了一种间充质干细胞冻存液，所述冻存液由甘油、人血白蛋白(HSA)和医用注射液组成。本发明的间充质干细胞冻存液组分简单明确，均采用临床级试剂，不含血清和动物源成分且不含有DMSO，冻存细胞复苏后可直接输注人体，显著减少洗涤过程所带来的细胞损失和损伤，更适于临床级间充质干细胞的长期储存。使用本发明的冻存液批次间稳定和室温稳定性均较好，能有效维持冻存后间充质干细胞良好的增殖能力和生物学功能且冻存过程简单，为临床级间充质干细胞的存储和广泛应用提供了条件。

技术研发人员：请求不公布姓名,请求不公布姓名,请求不公布姓名,请求不公布姓名,请求不公布姓名,请求不公布姓名
受保护的技术使用者：安徽中盛溯源生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27