一种牙周膜干细胞保存液及保存方法与流程

本发明涉及牙周膜干细胞保存，具体为一种牙周膜干细胞保存液及保存方法。

背景技术：

1、目前，牙周炎已成为危害口腔乃至人体健康的一大疾患，其发病率逐年上升。牙周炎发展最终的直接结果就是牙齿缺失，进而危及全身健康，因此，寻求有效的治疗途径是目前的迫切任务。如何有效地在病变根面上获得新生的牙骨质、牙周膜和牙槽骨，是治疗牙周炎的关键。牙周膜是介于牙根与牙槽骨之间的一层结缔组织，主要由成纤维细胞、成牙骨质细胞和一些未分化的间充质细胞组成。利用克隆筛选并用磁珠分离方法得到具有形成细胞克隆能力和高度增殖能力的牙周膜干细胞，证实了牙周膜中存在一种具有多向分化潜能的干细胞(byoung-moo seo，masako miura，stangronthos，et al，investigation ofmultipotent postnatal stem cells from humanperiodontal ligament，lancet 2004；364：14955)。对牙周组织发育和牙周损伤后再生机制的研究表明：牙周组织在疾病或受到外界刺激时，通过牙周膜中不同细胞亚群的增殖、分化和定向迁移，能够实现组织的修复再生。

2、种子细胞来源是进行牙周组织工程的首要问题。近年来，随着对成体干细胞研究的深入，采用成体干细胞作为种子细胞治疗牙周病已成为研究热点，而骨髓基质干细胞、牙周膜细胞、牙周膜干细胞的应用也有报道。seo的研究显示：只有不同亚群的牙周膜干细胞能分化为成牙骨质细胞样细胞、成骨细胞样细胞以及成纤维细胞样细胞，形成类似天然的牙周膜样结缔组织和牙周膜与牙骨质复合体的结构，实现完全意义上的牙周组织的自我更新，这是区别于其他成体干细胞的重要特征之一。另外，牙周炎已被证实是糖尿病、心脑血管疾病及呼吸系统疾病的危险因素，因此，利用牙周膜干细胞治疗牙周炎对全身性疾病的预防和治疗具有重要的意义。

3、总之，牙周膜干细胞研究为牙周炎的治疗提供了新思路，而对牙周膜干细胞的研究及临床应用则需要大量的牙周膜干细胞。

4、干细胞库是在深低温中储存干细胞以及搜集存储干细胞资源相关资料的场所，完善的干细胞库应具备随时随地将健康的干细胞提供于临床使用的能力。目前已成功建立有一些干细胞库(如脐带血干细胞库)，而至今仍无人牙周膜干细胞库。从乳恒牙替换至阻生牙、多生牙及正畸牙齿，大量的牙齿被废弃，其中的牙周膜干细胞资源被白白流失；因此，建立人牙周膜干细胞库，可以为自体及他人提供牙周疾病治疗及牙齿再生的种子细胞。

技术实现思路

1、本发明解决的技术问题在于克服现有技术的提供一种牙周膜干细胞保存液及保存方法。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种牙周膜干细胞保存液及保存方法，包括牙周膜干细胞保存方法,保存方法其中一个如下：

3、s1.冷冻保存：冷冻保存是最常用的干细胞保存方法之一；在冷冻过程中，干细胞会处于低温状态，以减缓其新陈代谢并保持其活力；选择合适的冷冻介质非常重要，例如细胞活存剂和冷冻保护剂等对保护细胞免受冷冻损伤非常关键；此外，冷冻容器也需要是一次性使用，以避免细菌和污染物的引入；

4、s2.低温液氮冻存：低温液氮冻存是最常用的长期储存方法之一；该方法能够将细胞保存在-196℃下，以延缓其老化和死亡；但是，需要注意的是，在液氮中长期储存干细胞可能会使细胞产生野生变异；因此，在储存前需要对细胞进行表型及基因突变的评估。

5、优选的，一种牙周膜干细胞保存液及保存方法，保存方法第二个如下：

6、s1.非血清培养基：使用非血清培养基可以更好地保护干细胞的活力和增殖能力；与传统的血清培养基相比，非血清培养基不仅能减少细胞突变的风险，还有助于减少细胞死亡和不适当的分化；

7、s2.超低温冷冻：超低温冷冻是一种保护细胞的高效方法，常用于保存干细胞时，就是通过降低环境温度至零下80摄氏度以下，以达到保护细胞并减缓其新陈代谢的目的；这种方法不仅可以延长细胞的保存时间，还能降低冷冻对细胞活力的影响；

8、s3.礼来技术：礼来技术是一种将细胞冻干的方法，通过将细胞可溶部分脱水，并在干燥和真空干燥之后储存；这种技术可稳定存储细胞，并降低细胞冷冻过程中的损伤。

9、优选的，一种牙周膜干细胞保存液及保存方法，保存方法第三个如下：

10、s1.1ml冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月；

11、s2.t-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85％请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果是：综上所述，干细胞的保存与储存技术是非常关键的，它直接影响着干细胞在疾病治疗和再生医学领域的应用。选择合适的保存和储存方法、规范操作、样品标识和记录以及定期检测都是保证干细胞质量和活力的重要步骤。此外，还有其他的一些技术可供选择，例如使用非血清培养基、超低温冷冻和礼来技术等。通过合理选择保存与储存技术，并严格遵循操作规范，我们可以有效地保护干细胞的质量和活力，为干细胞研究和应用提供坚实的基础。

技术特征：

1.一种牙周膜干细胞保存液及保存方法，包括牙周膜干细胞保存方法,其特征在于：保存方法其中一个如下：

2.根据权利要求1所述的一种牙周膜干细胞保存液及保存方法，其特征在于：保存方法第二个如下：

3.根据权利要求1所述的一种牙周膜干细胞保存液及保存方法，其特征在于：保存方法第三个如下：

技术总结
本发明公开了一种牙周膜干细胞保存液及保存方法，包括牙周膜干细胞保存方法,保存方法其中一个如下，本发明牙周膜干细胞的保存与储存技术是非常关键的，它直接影响着干细胞在疾病治疗和再生医学领域的应用；选择合适的保存和储存方法、规范操作、样品标识和记录以及定期检测都是保证干细胞质量和活力的重要步骤。此外，还有其他的一些技术可供选择，例如使用非血清培养基、超低温冷冻和礼来技术等。通过合理选择保存与储存技术，并严格遵循操作规范，我们可以有效地保护干细胞的质量和活力，为干细胞研究和应用提供坚实的基础。

技术研发人员：方旖,陈巧林
受保护的技术使用者：浙江耶大生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7