一种红细胞长期保存液及其在保存和运输红细胞中的应用的制作方法

本发明涉及细胞保存，尤其涉及一种红细胞长期保存液及其在保存和运输红细胞中的应用。

背景技术：

1、伴随着1907年细胞培养技术的开创，细胞的冷冻保存和复苏技术也应运而生并日益得到重视。低温冷冻保存和冷藏保存是细胞保存最常用的方法之一，在细胞的存储和运输中得到了广泛的运用。目前红细胞保存的常用方式是使用保存液在4℃条件下保存，保存期限为一个月。红细胞保存的另一种方式是使用高浓度的甘油进行液氮深低温的冻存，以实现红细胞的长期保存。

2、红细胞在4℃下保存主要是通过添加抗凝剂、能量代谢底物来维持红细胞的基本生命活动，而红细胞的液氮深低温冷冻保存则是采用甘油这种高浓度的渗透型保护剂进行细胞的冻存保护；甘油可以透过细胞膜与红细胞的胞内水结合，减少冷冻过程中冰晶生成的数量，同时减少针状冰晶的生成，从而一定程度上降低细胞膜、细胞器膜被冰晶刺破损伤的概率。

3、然而，传统的红细胞保存方式存在诸多问题，如，4℃保存方法的时限为一个月，时间较短，造成了红细胞资源的巨大浪费；冰冻保存法，因为冷冻损伤无可避免的会产生溶血现象，同时因为高浓度甘油产生的细胞毒性、人体毒性以及高渗透压的问题，无法直接回输使用，需要繁琐的洗脱操作，同时需要对残留的甘油进行含量控制，这些问题也极大地限制了冰冻红细胞的应用。

4、因此，无论是4℃保存的传统方式还是冰冻保存的方式，都存在不可避免的问题，而限制红细胞的保存使用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种红细胞长期保存液及其在保存和运输红细胞中的应用。本发明通过抗冻组分的有效组合，使保存液体系的冰点降至-10℃以下，保证混合后的红细胞悬液在-6～-10℃条件下仍然保持液体状态，规避了传统保存方式带来的“冰晶损伤”导致红细胞的破损，提高了红细胞收率，并维持了红细胞的活性。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种红细胞长期保存液，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：10～100mg/ml右旋糖酐，10～50mg/ml葡萄糖，1～10mg/ml聚乙烯吡咯烷酮，0.1～0.5mg/ml腺嘌呤核苷三磷酸。

4、优选的，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：30～70mg/ml右旋糖酐，20～40mg/ml葡萄糖，3～7mg/ml聚乙烯吡咯烷酮，0.2～0.4mg/ml腺嘌呤核苷三磷酸。

5、优选的，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：70mg/ml右旋糖酐，40mg/ml葡萄糖，7mg/ml聚乙烯吡咯烷酮，0.4mg/ml腺嘌呤核苷三磷酸。

6、本发明还提供了一种上述红细胞长期保存液在低温非冷冻保存、运输红细胞中的应用。

7、优选的，所述红细胞长期保存液的使用方法为，将红细胞与所述红细胞长期保存液混合，得到细胞悬液；将细胞悬液于-6～-10℃条件下保存。

8、优选的，所述细胞悬液中红细胞的密度为(1～70)×108cells/ml。

9、优选的，红细胞使用时，将保存的细胞悬液置于18～26℃下复温。

10、本发明提供了一种红细胞长期保存液及其在保存和运输红细胞中的应用。本发明的红细胞长期保存液能够实现红细胞在-6～-10℃条件下低温非冷冻的长期保存，通过抗冻组分的有效组合，使保存体系的冰点降至-10℃以下，保证混合细胞后悬液在-6～-10℃条件下仍然保持液体状态，不会因为冷冻而产生冰晶，规避了传统保存方式带来的“冰晶损伤”导致红细胞的破损，提高了红细胞收率。同时，-6～-10℃的存储温度条件有效降低了红细胞的代谢速率。

11、右旋糖酐和聚乙烯吡咯烷酮作为非渗透性细胞保护剂，可以有效保护细胞膜的稳定性，同时，右旋糖酐和聚乙烯吡咯烷酮作为一种血容量扩充剂，回输后可以有效提高血浆胶体渗透压，维持血压，进一步促进红细胞回输治疗的作用，关键的，聚乙烯吡咯烷酮具有降低保存体系冰点的作用，使保存体系在-6～-10℃条件下仍然维持液态而不冷冻产生冰晶。葡萄糖作为营养源，是细胞维持生命活动的重要物质，同时，本发明中葡萄糖也起到了调节保存体系渗透压的作用。腺嘌呤核苷三磷酸(atp)在细胞内发挥着重要的作用，是细胞内主要的能量供应来源，参与细胞的生化反应、信号转导、离子平衡和调节调控多项细胞活动，atp不仅是细胞生命活动的基础，也是细胞功能维持的保障。

12、相比于传统4℃的保存方法，本发明的方法保证了红细胞在-6～-10℃的低温条件下仍然处于液态非冻结的状态，同时相对低温的条件下细胞的代谢速率进一步降低，三磷酸腺苷等能量物质消耗速率降低，红细胞自身的寿命延长，因此红细胞的保存时限由现有的一个月延长至四个月以上，极大地拓展了红细胞的保存时间，也打破了因时限而产生的资源浪费、应用限制等问题；同时，本发明中适当的组分浓度组合相比于4℃的保存方法可以有效降低运输时流体剪切力造成的红细胞损伤的风险，避免因红细胞内容物释放而造成临床回输时产生过敏等问题，进一步提高临床应用的安全性。

13、相比于高浓度甘油冰冻保存法，本发明的细胞保存液组分均为药用级别，组分右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮自身还具有替代血浆的功能，因此，本发明的细胞保存液保存红细胞后可直接整体回输治疗，方法更安全、高效，无需添加具有毒性的高浓度渗透性保护剂，也无需在使用时进行繁琐的洗脱操作，规避了严苛的存储运输条件并降低了成本，同时因为降低保存体系冰点的设计，使得红细胞在低温条件下不会受到冰晶生成的影响，避免了冰晶刺破细胞膜导致细胞损伤，有效维持了红细胞的活性，保证红细胞功能。

技术特征：

1.一种红细胞长期保存液，其特征在于，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：10～100mg/ml右旋糖酐，10～50mg/ml葡萄糖，1～10mg/ml聚乙烯吡咯烷酮，0.1～0.5mg/ml腺嘌呤核苷三磷酸。

2.根据权利要求1所述的红细胞长期保存液，其特征在于，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：30～70mg/ml右旋糖酐，20～40mg/ml葡萄糖，3～7mg/ml聚乙烯吡咯烷酮，0.2～0.4mg/ml腺嘌呤核苷三磷酸。

3.根据权利要求2所述的红细胞长期保存液，其特征在于，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：70mg/ml右旋糖酐，40mg/ml葡萄糖，7mg/ml聚乙烯吡咯烷酮，0.4mg/ml腺嘌呤核苷三磷酸。

4.一种权利要求1～3任一项所述红细胞长期保存液在低温非冷冻保存、运输红细胞中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述红细胞长期保存液的使用方法为，将红细胞与所述红细胞长期保存液混合，得到细胞悬液；将细胞悬液于-6～-10℃条件下保存。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述细胞悬液中红细胞的密度为(1～70)×108cells/ml。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，红细胞使用时，将保存的细胞悬液置于18～26℃下复温。

技术总结
本发明提供了一种红细胞长期保存液及其在保存和运输红细胞中的应用，属于细胞保存技术领域。本发明的红细胞长期保存液，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：10～100mg/mL右旋糖酐，10～50mg/mL葡萄糖，1～10mg/mL聚乙烯吡咯烷酮，0.1～0.5mg/mL腺嘌呤核苷三磷酸。本发明通过抗冻组分的有效组合，使保存液体系的冰点降至‑10℃以下，保证混合后的红细胞悬液在‑6～‑10℃条件下仍然保持液体状态，规避了传统保存方式带来的“冰晶损伤”导致红细胞的破损，提高了红细胞收率，并维持了红细胞的活性。

技术研发人员：姜强,郑红领,岳德胜
受保护的技术使用者：南京三生生物技术股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29