一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠

本发明属于医学动物实验领域，具体地说是一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠。

背景技术：

1、舍格伦综合征(sjogren syndrome,ss)是一种病因不明的自身免疫性疾病。因此，在患者身上模拟疾病的动物模型的发展不仅对于了解ss的生物学，而且对于验证实验性治疗方法的安全性和有效性至关重要。非肥胖糖尿病(nod)小鼠模型是最广泛使用的ss模型之一。这些小鼠在唾液腺和血清中出现与ss患者相似的年龄依赖性组织病理学变化。虽然nod小鼠涎腺炎的发展可能伴随着唾液腺功能的丧失，但据报道这种ss样表型是不稳定的；

2、近年来发展了其他几种模型，每种模型都显示了ss的不同方面。在所有这些模型中，一个共同的主题是炎症浸润和分泌功能障碍。为此，提出一种ss新型模型小鼠esr1敲除鼠，使其能够表达许多与ss相关的条件，为研究ss的多个方面提供有用的模型。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠，以解决背景技术中所提出的问题。

2、一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠，包括利用crispr/cas技术，设计sgrna，通过应用高通量电转受精卵方式，获得esr1基因敲除小鼠，评价esr1信号在舍格伦综合征形成中的作用，构建esr1基因敲除c57bl/6j-esr1em1c/cya鼠，检测esr1基因敲除小鼠与对照组小鼠的唾液腺生理病理指标，评价esr1基因敲除小鼠的唾液腺损伤和系统损伤，将小鼠麻醉眼球取血及取下颌下腺组织，用于h&e染色、免疫组织化学和elisa法测定。

3、优选的，唾液流率和水消耗评估实验具体为：用40mg/kg戊巴比妥钠腹膜内给药常规麻醉小鼠，皮下注射1.0mg/kg毛果芸香碱，使用预先称重的棉片从口腔中收集唾液，间隔5分钟，总共30分钟，再次称重棉片，唾液分泌指数通过增加量mg/体重g计算。

4、优选的，所述h&e染色实验具体为：使用二甲苯对每个5μm的颌下腺切片脱蜡，再使用梯度乙醇水合颌下腺切片，用h&e试剂染色颌下腺，应用光学显微镜检查颌下腺的组织形态。

5、优选的，所述免疫组织化学实验具体为：将石蜡包埋的组织切片制备为5μm组织切片，再将组织切片在二甲苯中脱蜡，并在乙醇梯度中水合，用蒸馏水冲洗后，内源性过氧化物酶的活性被氧化氢溶液阻断，将组织切片与一抗esr1(1：200)、aqp5(1：200)、ro/ssa(1：500)和la/ssb(1：500)在4℃下孵育过夜，然后将组织切片与山羊抗兔igg抗体在室温下孵育60分钟，切片在分级乙醇系列中脱水，并用中性树脂密封，最后在光学显微镜下观察阳性染色细胞。

6、优选的，所述elisa检测实验具体为：离心获取小鼠血清，取出所需的预包被板条，标准品孔和空白孔每孔加入100μl的calibrator diluent，样品孔孔中加血清样品50μl，再向每孔中加入50μl的biotin-conjugate，粘上封板膜，室温孵育2h，孵育结束后用washbuffer洗3次，甩干，每孔加入100μl的streptavidin-hrp，室温孵育1h，wash buffer洗3次，甩干，每孔加入100μl tmb substrate solution室温30min，再加10μl终止液，酶标仪450nm处读取od值。

7、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

8、本发明通过构建esr1基因敲除小鼠，为研究esr1信号在舍格伦综合征形成中的作用提供了实验模型，检测esr1基因敲除小鼠与对照组小鼠的唾液腺生理病理指标，评价了esr1基因敲除小鼠的唾液腺损伤和系统损伤，同时将小鼠麻醉眼球取血及取下颌下腺组织，用于h&e染色、免疫组织化学和elisa法测定，为研究舍格伦综合征ss提供了实验方法。

技术特征：

1.一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠，其特征在于：包括利用crispr/cas技术，设计sgrna，通过应用高通量电转受精卵方式，获得esr1基因敲除小鼠，评价esr1信号在舍格伦综合征形成中的作用，构建esr1基因敲除c57bl/6j-esr1em1c/cya鼠，检测esr1基因敲除小鼠与对照组小鼠的唾液腺生理病理指标，评价esr1基因敲除小鼠的唾液腺损伤和系统损伤，将小鼠麻醉眼球取血及取下颌下腺组织，用于h&e染色、免疫组织化学和elisa法测定。

2.如权利要求1所述一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠，其特征在于：唾液流率和水消耗评估实验具体为：用40mg/kg戊巴比妥钠腹膜内给药常规麻醉小鼠，皮下注射1.0mg/kg毛果芸香碱，使用预先称重的棉片从口腔中收集唾液，间隔5分钟，总共30分钟，再次称重棉片，唾液分泌指数通过增加量mg/体重g计算。

3.如权利要求1所述一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠，其特征在于：所述h&e染色实验具体为：使用二甲苯对每个5μm的颌下腺切片脱蜡，再使用梯度乙醇水合颌下腺切片，用h&e试剂染色颌下腺，应用光学显微镜检查颌下腺的组织形态。

4.如权利要求1所述一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠，其特征在于：所述免疫组织化学实验具体为：将石蜡包埋的组织切片制备为5μm组织切片，再将组织切片在二甲苯中脱蜡，并在乙醇梯度中水合，用蒸馏水冲洗后，内源性过氧化物酶的活性被氧化氢溶液阻断，将组织切片与一抗esr1(1：200)、aqp5(1：200)、ro/ssa(1：500)和la/ssb(1：500)在4℃下孵育过夜，然后将组织切片与山羊抗兔igg抗体在室温下孵育60分钟，切片在分级乙醇系列中脱水，并用中性树脂密封，最后在光学显微镜下观察阳性染色细胞。

5.如权利要求1所述一种自发的舍格伦综合征新型模型小鼠，其特征在于：所述elisa检测实验具体为：离心获取小鼠血清，取出所需的预包被板条，标准品孔和空白孔每孔加入100μl的calibrator diluent，样品孔孔中加血清样品50μl，再向每孔中加入50μl的biotin-conjugate，粘上封板膜，室温孵育2h，孵育结束后用wash buffer洗3次，甩干，每孔加入100μl的streptavidin-hrp，室温孵育1h，wash buffer洗3次，甩干，每孔加入100μltmb substrate solution室温30min，再加10μl终止液，酶标仪450nm处读取od值。

技术总结
本发明属于医学动物实验领域，提供了一种自发的舍格伦综合征(Sjogren’s syndrome,SS)新型模型小鼠，包括利用CRISPR/Cas技术，设计sgRNA，通过应用高通量电转受精卵方式，获得ESR1基因敲除小鼠；本发明通过构建ESR1基因敲除小鼠，为研究ESR1信号在舍格伦综合征形成中的作用提供了实验模型，检测ESR1基因敲除小鼠与对照组小鼠的唾液腺生理病理指标，评价了ESR1基因敲除小鼠的唾液腺损伤和系统损伤，同时将小鼠麻醉眼球取血及取下颌下腺组织，用于H&E染色、免疫组织化学和ELISA法测定，为研究舍格伦综合征提供了实验方式。

技术研发人员：李江,陈波
受保护的技术使用者：广州医科大学附属口腔医院（广州医科大学羊城医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29