本发明属于农药，涉及一种植物源农药，特别涉及一种云南旱烟杀线虫提取物的制备方法及其应用。
背景技术：
1、根结线虫(meloidogyne spp.)是最具破坏性的植物病害之一。根结线虫具有广泛的寄主范围，大部分的栽培作物受到根结线虫的攻击。目前根结线虫病的防治主要以化学农药为主，然而大量的化学合成杀线虫剂对环境造成污染，严重影响人类及其它动物的安全。且单一的防治药剂容易使线虫产生抗性。因此，寻求环境友好植物源药剂是防治根结线虫病的趋势。
2、烟草是我国重要的经济作物之一，其在种植过程中也容易被根结线虫感染，严重影响烟草的产量和品质。然而烟草本身是一味传统药物，具有丰富的次生代谢产物，是较好的植物源杀线虫剂的来源，若能将烟草开发成环境友好的植物源杀线虫剂，可以提升烟草在抗病害防御方面的应用，同时为开发优质抗根结线虫烟草种质资源提供方向。
3、云南地方旱烟产自于云南会泽，是地方特有品种。目前尚未有文献报道其杀线虫作用方面的研究。
技术实现思路
1、针对现有技术问题，本发明提供了一种云南旱烟杀线虫提取物的制备方法及其应用
2、本发明是通过如下技术方案实现的。
3、第一方面，本发明提供一种云南旱烟杀线虫提取物的制备方法，其包含以下步骤：
4、(1)将云南旱烟原料加入溶剂进行提取获得提取液，提取液减压浓缩获得浸膏，所述溶剂为80vol％～100vol％的甲醇或乙醇水溶液；
5、(2)将步骤1所得浸膏加水溶解，再用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯部分，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物；
6、(3)将步骤2所得乙酸乙酯萃取物经硅胶色谱柱层析分离纯化得所述杀线虫提取物。
7、优选地，所述云南旱烟为“大柳叶”上部叶。
8、优选地，步骤1提取中云南旱烟原料与溶剂的质量体积比为1:5～8，单位为g/ml，所述原料与溶剂的质量体积比是指原料的质量与溶剂的体积之比，例如，每g原料采用5～8ml的溶剂进行提取。
9、优选地，步骤1中所述提取方式为浸提，浸提时间为1～2天，次数为2～5次。
10、优选地，步骤2所述加水溶解，水的用量为旱烟原料质量的0.2～0.5倍，萃取用乙酸乙酯体积为溶解用水体积的1～4倍，萃取2～5次。
11、优选地，步骤3所述色谱柱层析分离，填料为100-200目硅胶，色谱柱高径比为10～15:1,填料用量与乙酸乙酯萃取物的质量比为3～5:1，洗脱溶剂为石油醚：丙酮20:1～7:3，依次用石油醚：丙酮20:1、10:1、8:2洗脱，每个梯度洗脱3～6个柱体积，除去非活性部分杂质，在用石油醚：丙酮7:3洗脱3～6个柱体积，收集洗脱液，浓缩、干燥得所述杀线虫提取物。
12、第二方面，本发明提供所述杀线虫提取物在制备杀线虫药物中的应用。
13、优选地，所述线虫为根结线虫；
14、更优选地，所述根结线虫为南方根结线虫。
15、本发明通过杀线虫活性实验发现，用本发明所述杀线虫提取物处理南方根结线虫，当浓度为20mg/ml时，在24h线虫平均死亡率到达到100％说明本发明所述旱烟杀线虫提取物具有很强的杀线虫活性，可以直接作为单方制剂或是与其他组分复配用于植物线虫的防治。
16、第三方面还提供一种杀线虫制剂，由所述旱烟杀线虫提取物和农业或林业上可接受药用辅料组成。
17、优选地，所述药用辅料包括分散剂、润湿剂、增稠剂、稳定剂、防冻剂、消泡剂、稀释剂、乳化剂、或填充剂中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合例如增溶剂和稀释剂的组合、分散剂和稳定剂的组合等，其他任意的组合方式便不在此一一赘述。
18、本发明对所述杀线虫制剂的剂型并没有特殊限定，优选为液体剂、水乳剂、微乳剂、分散剂、悬浮剂、可湿性粉剂和颗粒剂。以所述云南旱烟提取物为活性成分的杀线虫药物可以根据实际需要被制备成任一种药物剂型，各剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法进行制备。
19、本发明对所述药物的应用方法并没有特殊限定，如可进行喷雾、灌根、撒施、沟施、穴施等，也可用于施用至作物生长的区域如土壤或种子处理等。
20、本发明所述药物可以施用于任何遭受线虫侵害的作物中，这些作物包括粮食作物，蔬菜和林木等。
21、对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
22、本发明以云南地方特色旱烟为研究对象，经醇溶剂提取、浓缩、乙酸乙酯萃取、柱色谱分离等制备步骤，制备得到一种杀线虫提取物。该制备方法简单，方便，易于工业化生产。并通过杀线虫活性实验发现，该提取物具有很好的杀线虫活性，可以直接作为单方制剂或是与其他组分复配用于植物线虫的防治。其来源于天然植物，毒性低，安全环保，在农作物中的残留少，对人、畜的危害性小，很好解决了现有的杀线虫剂毒性较大，在作物中的残留较多的问题，提高了农业生产的安全性，具有重要经济和社会意义。
1.一种云南旱烟杀线虫提取物的制备方法，其特征在于，其包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1所述提取中旱烟原料与溶剂的质量体积比为1:5～8，单位为g/ml。
3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1中所述提取方式为浸提，浸提时间为1～2天，次数为2～4次。
4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2所述加水溶解，水的用量为旱烟原料质量的0.2～0.5倍，萃取用乙酸乙酯体积为溶解用水体积的1～4倍，萃取2～5次。
5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3所述硅胶色谱柱层析分离，填料为100-200目硅胶，色谱柱高径比为10～15：1,填料用量与乙酸乙酯萃取物的质量比为3～5:1。
6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3所述硅胶色谱柱层析分离，洗脱溶剂为石油醚：丙酮20:1～7:3，依次用石油醚：丙酮20:1、10:1、8:2洗脱，每个梯度洗脱3～6个柱体积，除去非活性部分杂质，在用石油醚：丙酮7:3洗脱3～6个柱体积，收集洗脱液，浓缩、干燥得所述杀线虫提取物。
7.权利要求1-6任一项所述制备方法制备所得杀线虫提取物在制备杀线虫药物中的应用。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述线虫为根结线虫。
9.一种杀线虫制剂，其包含权利要求1至6任一项所述杀线虫提取物和农业或林业上可接受的药用辅料。
10.根据权利要求9所述制剂，其特征在于，所述制剂为液体剂、水乳剂、微乳剂、分散剂、悬浮剂、可湿性粉剂和颗粒剂。