一种用废旧塑料桶培养褶皱臂尾轮虫的方法
【专利说明】
[0001]技术领域本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种用废旧塑料桶培养褶皱臂尾轮虫的方法。
【背景技术】
[0002]裙皱臂尾轮虫Brach1nus plicatilis属轮虫门、单卵巢纲、臂尾目、臂尾轮虫科、臂尾轮虫属，是一种重要的生物饵料。海洋轮虫有50余种，多生活在沿岸浅海区。褶皱臂尾轮虫分布在温带到热带广大地区的半咸水和海水水域，喜欢有机质含量较高水体，对盐度适应能力很强，但不耐盐度的剧烈和大幅变化，最适盐度15-25%。。适温17-32°C，水温低于10°C会产生冬卵，成体死亡，最适温度25-30°C。摄食细菌、浮游藻类、小型原生动物和有机碎肩，食物颗粒大小5-25微米为宜。
[0003]自从1960年发现褶皱臂尾轮虫可用于海水鱼类育苗的活饵料以来，它就作为鱼类和甲壳类的重要的开口饵料在生产中应用。目前已报道该轮虫可作60种海水鱼类和18种甲壳动物育苗的活饵料。由于该轮虫营养丰富、适口性强、繁殖速度快、游泳较慢，适宜做鱼、虾、蟹饵料，所以开展褶皱臂尾轮虫批量养殖是近年来广大水产养殖工作者重要研宄课题。在轮虫培养过程中，提供质量优良、数量充足的饵料是保证轮虫健康成长、高产稳产的重要环节，过去常发生因饵料不足或培养方法不当导致褶皱臂尾轮虫体质瘦弱、成活率低、大量死亡或产量不稳定的情况。关于臂尾轮虫的培养方法，过去罗杰等公开了一种褶皱臂尾轮虫的培养方法(申请号CN201210010461)，该发明所述褶皱臂尾轮虫培养方法是利用废弃或老化的旧池塘作为培养池塘，以小杂鱼作为基础饵料对皱臂尾轮虫进行培养，具体步骤是将培养池塘经消毒、暴晒处理后进水，安装增氧设备，然后将基础饵料按一定量以网袋盛装吊挂于培养池塘水中，在日常管理中结合增氧设备培养13-18天，当轮虫密度达到250个/mL，开始用褶皱臂尾轮虫收集袋收集，并根据褶皱臂尾轮虫繁育速度和密度追加小杂鱼的吊挂量。本发明所述褶皱臂尾轮虫培养方法简单方便，培养轮虫密度大，营养全面，且水中肥力长久，不用频繁投饵，可大幅度降低生产成本，提高经济效益。但该法占地面积达、养殖周期长，实用价值不高。丁国际等发明了一种蛭形轮虫大量培养的方法(申请号CN200910044826)，该发明提供了一种用非生物饵料一小麦面粉作为饵料大量培养蛭形轮虫的方法，特点是采用灭菌处理后的小麦面粉加入一定量无菌水中，小麦面粉与无菌水的重量体积比为0.75-0.85g/100mL，即每100毫升无菌水中加入0.75-0.85克小麦面粉，然后经超声波破碎，再静置沉降24小时，取上清液，调节pH值至5-7。将该饵料溶液放入事先准备好的轮虫培养液中，并置于25°C恒温培养箱中培养12天，结果轮虫密度可达100?200个/mL。本发明饵料来源广泛，制作方便，可简化培养过程，降低成本。但仅投喂小麦粉，营养单调，轮虫体质较差，产量不高。另外，樊昕宇等公开了一种高浓度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法(申请号CN201210120645)，该发明包括以下步骤:培养容器消毒处理；培养基的配制；将驯化的轮虫接种到培养基中，保持培养基的温度为28-32°C，pH为7-9，溶解氧DO大于8ppm，盐度为1.5-2.0%，并向培养基内持续供应高密度淡水小球藻，当轮虫密度达到10000个/mL以上时，收集轮虫。该发明中轮虫每天生长率达到2-10倍，接种10天后密度可达平均10000-15000个/mL，用20升高浓度小球藻培养出30亿轮虫，产卵率为30-40%，轮虫的培养非常方便，可得到较纯的超微轮虫种。但该技术工艺复杂，技术要求该，一般工人难以掌握。
[0004]为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种用废旧塑料桶培养褶皱臂尾轮虫的方法，技术核心是先用平底圆形烧瓶混合培养3种海洋微藻(眼点小球藻，湛江等鞭金藻，微绿球藻)，然后在混合藻液中添加部分牛粪，兔粪，面包酵母粉，碎鱼肉，奶粉，酱油糟，鸡粪等制成轮虫饵料液，投放到事先准备好的装有培养液的废旧塑料桶中充气培养褶皱臂尾轮虫。与传统技术相比，本发明创新性表现在:1)轮虫饵料配方科学、合理，营养全面，轮虫生长快，体质健壮，产量高；2)采用废旧塑料桶培养轮虫，洗刷方便，透光性好，可重复使用，不易污染，废物利用，节约资金；3)轮虫采收，过去常采用筛絹过滤法，速度慢，效率低，本发明采用小苏打沉淀法，速度快，操作简单，花钱少。
【发明内容】
[0005]为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种用废旧塑料桶培养褶皱臂尾轮虫的方法，方法如下:
[0006]步骤I饵料微藻的培养培养液配方NaNO3 0.5份，KH2PO3 0.005份，I %的FeC6H5O7溶液0.2份，维生素B10.0002份，维生素B12 0.00002份，人尿0.8份，海泥抽出液3份，含氨25-28 %的氨水I份，多肽尿素0.2份，硫酸铵0.1份，硫酸钾0.5份，氯化钾0.8份，异丁叉二脲0.3份，草酰胺0.4份，磷酸镁铵0.08份，聚磷酸铵0.2份，硅酸钠0.8份，多胺0.0005份，脱落素0.02份，碳酸氢钠5份，土壤浸出液1.2份，麦饭石粉0.1份，煮沸冷却后的磁化海水1000份；取一个1500毫升的平底圆形烧瓶，洗刷干净，用蒸馏水润洗3遍，加入上述培养液800毫升，用无敌害生物污染、生活力强、生长旺盛、颜色正常、无明显沉淀的眼点小球藻，湛江等鞭金藻，微绿球藻藻种分别接种，进行混合培养。接种密度:眼点小球藻5万个细胞/毫升，湛江等鞭金藻4万个细胞/毫升，微绿球藻8万个细胞/毫升；然后用橡胶塞塞住瓶口，橡胶塞上打上两个孔，插入两根细玻璃管，管径4-6毫米，一根较长，用来充气，插入藻液，接近瓶底，另一根较短，两端露出橡胶塞即可，用来排气，充气管一端与空压机相连，充气量3-5升/分钟，保持藻细胞悬浮不下沉即可；将此圆形烧瓶放入微藻培养室中进行培养，共培养10天，培养过程的第1-3天，设置温度18°C，光照强度25001UX，光暗周期L: D = 12h: 12h，即每天12小时光照，12小时黑暗。培养过程的第4_6天，设置温度21°C，光照强度50001ux，光暗周期L: D = 14h:1Oh,即每天14小时光照，10小时黑暗。培养过程的第7-10天，调节温度至25°C，光照强度90001UX，光暗周期L: D = 16h: 8h ；到第7天，添加新鲜培养液80毫升，以补充营养盐的消耗；到第10天，微藻密度之和可达到3000万个细胞/毫升，倒出藻液的一半，余下的一半作为种用，添加新鲜培养液，继续培养(即采用所谓半连续培养)。到第13天，再倒出藻液的一半，另一半作为种用，添加新鲜培养液，继续培养，到第16天，再倒出藻液的一半，另一半作为种用，添加新鲜培养液，继续培养，到第19天，停止培养，全部采收。
[0007]步骤2轮虫饵料液的制备
[0008]以步骤I采收的藻液作为主要成分，添加部分辅助成分，制成轮虫的饵料液。具体是:藻液1000份，牛粪2份，兔粪I份，面包酵母粉0.5份，碎鱼肉0.8份，芝麻渣0.1份，奶粉0.3份，酱油糟0.6份，鸡粪0.8份，大蒜泥0.3份，蜂蜜渣0.1份，猪血粉0.4份；充分搅拌均匀，用网目孔径为100微米的尼龙筛絹过滤，弃渣滓，将滤液用超声器产生的超声波处理3-4分钟，目的是用超声波将大颗粒饵料打碎，变成小颗粒，以利于轮虫吞食，自然发酵48小时，稀糊状的轮虫饵料液制备完成，即可用于投喂轮虫。
[0009]步骤3
[0010]轮虫的培养取一 25升的废旧塑料桶(花生油桶、饮料桶或矿泉水桶均可)，白色透明，以利透光，用10ppm孔雀石绿溶液浸泡5小时，后用洗洁精、试管刷洗刷干净，再用蒸馏水润洗3遍，加入12升煮沸冷却磁化海水，加入2升步骤2所述稀糊状的轮虫饵料液，摇匀，选择活泼、健康、无敌害生物的褶皱臂尾轮虫接种，接种密度25-45个/毫升。从第2天开始，每天补加步骤2所述稀糊状的轮虫饵料液0.5升。温度控制在23-26°C，光照1500-25001ux,从桶口插入一根细玻璃管充气，玻璃管直径4_6毫米。玻璃管通过乳胶管或塑料管与空气压缩机相连，气体成分和比例为Ven+V纯氧气=99%+1% (体积比)。充气量4-8升/分钟，充气量太大反而不利于轮虫的摄食和生活。将此塑料桶置于室内培养，空调控温，节能灯照明。培养到第12天，轮虫密度可达2000-5000个/毫升，即可采收。
[0011]步骤4轮虫的采收
[0012]用10升的量筒取步骤3所述轮虫培养液，按每升培养液加小苏打(NaHCO3) 3.5克的量加入小苏打，搅拌均匀，静置沉淀24小时，由于培养液pH值的迅速升高和释放的热量，轮虫休克、昏迷，下沉到底部，弃上清液，得底部沉积的轮虫，然后用10%的乙酸溶液(体积比)中和、调节pH值至7.0-8.2，摇匀，再沉淀24小时，弃上清液，得轮虫，即可用以投喂扇贝、鱼苗、对虾、梭子蟹等经济动物。
[0013]有益结果
[0014]为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种用废旧塑料桶培养褶皱臂尾轮虫的方法，技术核心是先用平底圆形烧瓶混合培养3种海洋微藻(眼点小球藻，湛江等鞭金藻，微绿球藻)，然后在混合藻液中添加部分牛粪，兔粪，面包酵母粉，碎鱼肉，奶粉，酱油糟，鸡粪等制成轮虫饵料液，投放到事先准备好的装有培养液的废旧塑料桶中充气培养褶皱臂尾轮虫。与传统技术相比，本发明创新性表现在:1)轮虫饵料配方科学、合理，营养全面，轮虫生长快，体质健壮，产量高；2)采用废旧塑料桶培养轮虫，洗刷方便，透光性好，可重复使用，不易污染，废物利用，节约资金；3)轮虫采收，过去常采用筛絹过滤法，速度慢，效率低，本发明采用小苏打沉淀法，速度快，操作简单，花钱少。
【附图说明】
[0015]图1褶皱臂尾轮虫形态图；
[0016]图2用圆形烧瓶培养饵料微藻的方法；箭头所指为充气气体走向；
[0017]图3用废旧塑料桶培养褶皱臂尾轮虫方法；箭头所指为充气气体走向。
【具体实施方式】
[0018]一种用废旧塑料桶培养褶皱臂尾轮虫的方法，步骤如下:
[0019]步骤I饵料微藻的培养
[0020]按重量份计培养液配方为NaNO3 0.5份，KH2PO3 0.005份，I %的FeC6H5O7溶液0.2份，维生素B10.0002份，维生素B12 0.00002份，人尿0.8份，海泥抽出液3份，含氨25-28%的氨水I份，多肽尿素0.2份，硫酸铵0.1份，硫酸钾0.5份，氯化钾0.8份，异丁叉二脲0.3份，草酰胺0.4份，磷酸镁铵0.08份，聚磷酸铵0.2份，硅酸钠0.8份，多胺0.0005份，脱落素0.02份，碳酸氢钠5份，土壤浸出液1.2份，麦饭石粉0.1份，煮沸冷却后的磁化海水1000份；取一个1500毫升的平底圆形烧瓶，洗刷干净，用蒸馏水润洗3遍，加入上述培养液800毫升，用无敌害生物污染、生活力强、生长旺盛、颜色正常、无明显沉淀的眼点小球藻，湛江等鞭金藻，微绿球藻藻种分别接种，进行混合培养；接种