甘蔗实生苗大田移栽前褐条病接种胁迫方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗甘蔗褐条病品种选育领域，具体来说是一种甘蔗实生苗大田移栽前 褐条病接种胁迫方法，是一种达到早期选择抗褐条病组合及单株的方法。
【背景技术】
[0002] 甘蔗褐条病是属一种气传真菌病害，该病已成为我国蔗区最主要的真菌性病害之 一，曾先后淘汰了一些丰产高糖的当家品种，造成感病品种蔗茎产量和糖分的严重损失，一 般减产18~35%，重的可达40%以上，蔗糖分降低15~30% ;侵染途径一田间病株残叶是初 次侵染菌源；发病条件一瘦瘠或缺磷土壤发病重；长期阴雨天易暴发流行；台糖134、选3、 桂11等易感病；川糖61-408、云蔗89-151、89-7、桂糖17及新台糖系列等抗病，尤其是雨水 丰富的蔗区更为严重。公认为控制该病最经济有效的途径是种植抗病品种，世界各国主要 蔗区均把抗褐条病作为甘蔗育种的主要目标之一，选育抗褐条病甘蔗品种对促进产业健康 稳步发展，保障食糖安全具有重要意义。甘蔗抗褐条病育种途径有（1)通过常规的育种途 径，将筛选出的抗病优良甘蔗种质材料进行有性杂交，并对其后代进行抗病性鉴定，"五圃" 制筛选后获得优良品种(系）鉴定为抗病品种后推广应用，所需时间较长；（2)通过生物技 术手段，获得抗病基因，将抗病的外源基因导入甘蔗材料中，但还需要解决转入的外源基因 是否达到预期功能表达的问题。迄今，甘蔗抗褐条病育种时间上采用的育种的早代，利用自 然侵染法淘汰感病株；在育种的高代，采用人工接种进行田间抗病性鉴定试验的方法，进一 步淘汰感病材料。其不足是育种周期长，选育抗褐条病品种需要8-10年时间，且由于前期 施加的抗褐条病选择压力小，后期采用人工接种田间抗病性鉴定，很多材料感染褐条病，浪 费了大量的人力、物力，选育效率低。为了提高抗褐条病甘蔗品种选育效率，云南甘蔗研宄 所开展了实生苗早期筛选抗褐条病材料的研宄工作，形成了再甘蔗实生苗大田移栽前甘蔗 褐条病接种胁迫方法，淘汰抗病性差的组合和单株，使抗褐条病筛选关口提前，提高选育效 率，缩短育种年限。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于针对上述现有技术中存在的不足，提供一种甘蔗实生苗大田移 栽前进行甘蔗褐条病接种胁迫方法，为甘蔗育种提供一种早期选择抗褐条病甘蔗组合及单 株的技术方案。
[0004] 本发明通过如下技术方案予以实现： 一种甘蔗实生苗大田移栽前进行褐条病接种胁迫方法，步骤如下： (1) 从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，当假植在苗床的甘蔗实生苗生 长至4片真叶后，用褐条病菌浓度为100倍显微镜下每个视野有40-50个孢子的悬浮液对 实生苗叶片进行喷雾接种，使褐条病病菌侵入实生苗幼嫩的叶片； (2) 接种后每天对实生苗进行喷水，保持温度为18~38°C，湿度50~ 90% ; (3) 50-60天后，每10天调查一次，清除病苗和死苗，调查三次，90天后，淘汰组合发病 率大于25%的组合，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗及组合。
[0005] 本发明提供的方法，从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，收集甘蔗 褐条病病原菌孢子，模拟了湿润蔗区高温多雨的自然发病条件，达到接种甘蔗褐条病胁迫 甘蔗实生苗的效果，将组合发病大于25%的组合淘汰，通过淘汰感病的实生苗单株及大量 感病组合，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗组合及单株，缩短选育抗褐条病新品种的育 种年限，提高育种效率，有效节约选育甘蔗新品种试验用地和后期资金投入，本发明接种褐 条病菌后发病显著、重演性好、试验周期短、可操作性强、缩短选育抗甘蔗褐条病新品种的 育种年限、提高育种效率，该方法可服务于甘蔗品种选育机构，用于甘蔗抗褐条病的甘蔗新 品种选育。
[0006] 申请人近年来用于品种选育的杂交组合为900个左右，实生苗数量为20万苗，占 地3. 5-4. 0公顷，由于杂交组合量大，以传统的鉴定方法要耗费大量资金和劳动力投入，通 过采用创新的筛选方法，通过淘汰抗性差的组合和单株，节约了土地、资金和劳动力，提高 了抗褐条病甘蔗品种选育效率。
[0007] 假植实生苗接种褐条病菌孢子后，当环境条件适宜时，病斑大量产生分生孢子后， 借助气流传播蔓延，分生孢子在湿润的叶片上萌发，一般从气孔侵入，或从泡状细胞直接侵 入，然后再从新的病斑上长出分生孢子，进行重复侵染。
[0008] 试验研宄表明，甘蔗抗褐条病性状属于遗传力较高的性状，适合于有性世代选择。 其试验选择两个亲本为抗病，后代褐条病感病百分率最低，其杂种后代的抗病能力强；两 个亲本为感病，后代褐条病感病百分率最高，其杂种后代的抗病能力差，两个亲本之一为抗 病，后代褐条病感病百分率中等，在育种实践中，即可淘汰杂交后代中抗性差的组合，且通 过淘汰感病株系可以较大程度提高后一阶段育种群体的抗病水平。
[0009] 在甘蔗实生苗移栽大田前，进行褐条病菌接种胁迫，抗性差的组合，子代发病多， 根据植株感病表现，在甘蔗选育程序的第一阶段就淘汰感病组合及单株，从而初步筛选出 抗褐条病的实生苗组合及单株，缩短抗病品种及材料育种年限，提高抗病育种选择效率。
【具体实施方式】
[0010] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。 1、甘蔗实生苗移栽大田前的假植 用常规方法培育实生苗，待甘蔗实生苗生长至2片真叶后，在假植盘里进行假植，假植 盘大小可选择50孔54cmX28cm的育苗盘或者200孔68cmX34 cmX5. 6 cm漂浮盘，或根 据实际需要进行选择合适规格。
[0011] 2、搜集和配制褐条病病菌孢子悬浮液 从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，收集甘蔗褐条病病原菌孢子，用无 菌水配制成孢子悬浮液，并于每100mL水中加入3-4滴Tween-20,以增加孢子的附着力，孢 子浓度为100倍显微镜下每视野有40-50个孢子。
[0012] 3、接种胁迫方法 待假植后的甘蔗实生苗生长至4片真叶后，用褐条病菌浓度为100倍显微镜下每视 野有40-50个孢子的悬浮液对实生苗进行喷施，使褐条病病菌侵入幼嫩叶片，达到接种 褐条病病菌胁迫甘蔗实生苗的效果。接种后每天对实生苗利用喷雾器喷水，保持温度为 18~38°C，湿度 50~ 90%。
[0013] 4、实生苗对褐条病抗性评价 假植实生苗接种50-60天后，开始调查发株的发病组合及单株，并做记录，以后每各10 天调查一次，待发病状况稳定，清除病苗和死苗，计算组合发病率。整株褐条病严重程度参 照杨子林（2010)标准进行评价，如下表 甘蔗褐条病叶片病情的分级标准
【主权项】
1. 一种甘蔗实生苗大田移栽前进行褐条病接种胁迫方法，其特征在于，步骤如下： (1) 从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，当假植在苗床的甘蔗实生苗生 长至4片真叶后，用褐条病菌浓度为100倍显微镜下每个视野有40-50个孢子的悬浮液对 实生苗叶片进行喷雾接种，使褐条病病菌侵入实生苗幼嫩的叶片； (2) 接种后每天对实生苗进行喷水，保持温度为18~38°C，湿度50~ 90% ; (3) 50-60天后，每10天调查一次，清除病苗和死苗，调查三次，90天后，淘汰组合发病 率大于25%的组合，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗及组合。
2. 根据权利要求1所述的甘蔗实生苗大田移栽前进行褐条病接种胁迫方法，其特征在 于，所述步骤（1)是用无菌水配制成浓度为100倍显微镜下每视野有40-50个孢子的孢子 悬浮液，在温室用喷雾器对甘蔗实生苗叶片进行均匀喷雾接种，接种后盖上薄膜保湿过夜。
【专利摘要】本发明公开了一种甘蔗实生苗大田移栽前褐条病接种胁迫方法，从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，当假植在苗床的甘蔗实生苗生长至4片真叶后，用褐条病菌浓度为100倍显微镜下每个视野有40-50个孢子的悬浮液对实生苗叶片进行喷雾接种，使褐条病病菌侵入实生苗幼嫩的叶片，接种后每天对实生苗进行喷水，保持温度为18~38℃，湿度50~90%，50-60天后，每10天调查一次，清除病苗和死苗，调查三次，90天后，淘汰组合发病率大于25%的组合，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗及组合，采用本发明的方法能够缩短选育抗褐条病新品种的育种年限，提高育种效率，有效节约选育甘蔗新品种试验用地和后期资金投入。
【IPC分类】A01G7-06, A01G1-00
【公开号】CN104838909
【申请号】CN201510265014
【发明人】朱建荣, 赵丽萍, 吴才文, 刘家勇, 陈学宽, 赵俊, 赵培方, 覃伟, 姚丽, 杨昆, 夏红明, 昝逢刚, 吴转娣
【申请人】云南省农业科学院甘蔗研究所
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月22日