一种调控菊花插穗生根的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物插穗生根方法技术领域，具体涉及一种调控菊花插穗生根的方 法。
【背景技术】
[0002] 菊花（CArjsa/?Mevma?azori/bJiiM?)是我国十大传统名花，也是世界四大切花之 一，我国是栽培菊花的起源中心和菊属种质资源的分布中心，菊属植物中40余种，在我国 分布的有20余种，栽培菊园艺品种达数千余个。菊花在我国有悠久的栽培历史，常用的繁 殖方法有：种子(播种）繁殖、分株繁殖、组培繁殖和扦插繁殖。由于播种苗很难保持原有品 种的特性，分株繁殖的繁殖系数较低，组培繁殖需要建立无菌体系、快繁和炼苗等步骤，历 时较长，因此菊花种苗生产中常用扦插繁殖进行更新，扦插能够保持品种的优良性状，繁殖 系数较高，成苗时间短，成为菊花大规模工厂化生产的最优繁殖途径。由于菊花品种众多， 基因型差异较大，品种间生根能力不同，制约其产业化应用和工厂化生产。插穗不定根的发 生问题是其进行工厂化育苗实践的核心问题，在植物发育和形态建成等方面都有重要的研 究价值。
[0003] 銳皮留酮（ecdysterone，EDS)B卩 0 -虫兑皮留酮，1954 年，Butenandt等从 500kg香 蛹中分离出250mg最初的昆虫变态活性物质銳皮酮（ecdysone)。此后，在许多种植物中分 离出多种类似的物质。人们发现，蜕皮激素在植物界的分布不仅较动物界高，而且广，资源 丰富，如怀牛膝、川牛膝、桑叶、白毛夏枯草、泽泻、罗汉松、紫杉、乌毛蕨及紫箕等药用植物 中均含有其类似物，涉及到低等植物厥类、裸子植物、被子植物等80个科的植物类群中。动 物实验表明EDS能促进核酸及蛋白质合成、调节糖代谢、促进脂肪代谢、调苄基因表达、改 善免疫功能、影响中枢神经及心血管系统和促进细胞增殖、分化等，因此被认为有"更生诱 导物质（reviveinducer)"的作用。銳皮留酮易溶于乙醇，用乙醇很容易将其提取。研究 发现牛膝的醇提物以及醇提物的乙酸乙酯萃取物(主要成分为H)S)对成骨样细胞有显著 的促进增殖作用（高晓燕，王大为，李发美，姜志.牛膝提取物对成骨样细胞增殖的作用. 2000a，17 (3) : 201-213,高晓燕，王大为，李发美.牛膝中脱皮留酮的含量测定及促成骨样 细胞增殖活性.药学学报，2000b，35(11): 868-870)，在人表皮干细胞增殖过程中也有显 著促进作用，是促进创面愈合的主要机制（李国芳.蜕皮留酮促进人表皮干细胞增殖的初 步研究[D]，广州：南方医科大学，2009)。也有研究发现，DES可促进人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)由静止期和(或)DNA合成前期进入DNA合成期、由DNA合成期进入DNA合成后期和 (或）分裂期，对HUVEC增殖具有促进作用（吴旭.蜕皮留酮的内皮保护作用及其机理研究 [D]，广州：第一军医大学，2006)。
[0004] 通过对近五十年有关EDS的研究报道的总结发现，相关研究主要集中在分离鉴 定、化学结构和对动物的作用及其机制，另外在不同植物中的分布、积累和测定方法等方面 的研究也较多，而对植物本身的作用方面尚未见报道。缘于EDS在动物上有促进细胞增殖、 分化等的作用，本研究将其运用到菊花插穗生根上，以期找到一种菊花插穗快速生根的方 法。
【发明内容】
[0005] 本发明解决的技术问题是提供了一种调控菊花插穗生根的方法，所建立的菊花插 穗生根方法不仅生根快而且生根率高，根数较多，根长较长，易于移栽成活。
[0006] 本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种调控菊花插穗生根的方法， 其特征在于具体步骤为：春季5-6月份或秋季9-10月份，从田间选取生长一致的直径为 0. 9-1.Ocm带顶芽的菊花枝条，去掉已木质化部分后留2叶1心截成8-10cm的段作为插穗； 用摩尔浓度为3ymol/L的蜕皮留酮溶液处理插穗基部后扦插于灭过菌的蛭石苗床上，然 后覆盖塑料薄膜，控制温度为23-25 °C，每天早中晚各雾状喷水1次，每天11:00-14:30在塑 料薄膜上罩上遮阴网。
[0007] 进一步优选，所述的蜕皮留酮溶液处理插穗基部的时间为1-1. 5小时。
[0008] 进一步优选，所述的蜕皮甾酮溶液为药用植物怀牛膝、川牛膝、桑叶、白毛夏枯草、 泽泻、罗汉松、紫杉、乌毛蕨或紫箕的乙醇提取物。
[0009]目前菊花的生根大多采用萘乙酸粉剂，需要人工合成，生产工艺繁琐，而蜕皮甾酮 来源于植物，存在于80个科的植物类群中，并且易于提取、定量。本发明操作相对简单，所 投成本较低，省时省力，具有广阔的应用前景。
【具体实施方式】
[0010] 以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本 发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发 明的范围。
[0011] 实施例1 1材料和方法 I. 1材料 供试采料为药用菊花品种'怀黄菊'azori/bJi?Ramat. 'Huaihuang'）。药用菊花发源于河南，以产于古怀庆府(今河南焦作辖区温县、泌 阳、武陟、孟州）一带的"怀菊花"最为有名，是著名的"四大怀药"（怀山药、怀菊花、怀地黄、 怀牛膝）之一。怀黄菊属于菊科(Asteraceae)菊属（L.)，是怀菊花中的优 良种质，是目前怀区主栽品种，久负盛名。
[0012] 1. 2试验方法 春季5-6月份或秋季9-10月份，从田间选取生长一致的带顶芽的菊花枝条(直径0. 9 -I. 0cm)，去掉已木质化部分后留2叶1心截成8-10cm的段作为插穗；用怀牛膝、桑叶、 泽泻等药用植物的乙醇提取物一含l、3、5、7iimol/L的蜕皮留酮溶液分别处理插穗基部 1-1. 5小时后扦插于灭过菌的蛭石苗床上，然后覆盖塑料薄膜，温度控制为23-25°C，每天 早中晚各雾状喷水1次，每天11:00-14:30在塑料薄膜上罩上遮阴网。三个重复，每个重 复60个插穗。以蒸馏水浸泡插穗基部1-1. 5小时为对照1，以本研究室前期常用的方法： 20mg/LNAA浸泡插穗基部10-15分钟为对照2。扦插至21天统计生根率、根长、生根数。
[0013] 开始生根时间的观察采取的方法为：按照上述方法处理插穗基部，在同样的苗床 上另设实验区，扦插后第5d开始，每天上午检查插穗的生根情况。每处理10个插穗，3个重 复。
[0014] 1. 3数据处理 数据处理用SPSS13.0。对平均生根数、平均根长和生根率进行方差分析，采用 "Duncan"法进行平均数多重比较。
[0015] 实验结果 不同浓度的蜕皮留酮溶液处理对'怀黄菊'插穗生根的影响见表1。
[0016] 表1不同浓度的蜕皮甾酮溶液处理'怀黄菊'插穗生根情况(扦插后21天）
注：同一时期实验结果中同一列数据后不同小写字母表示表示在/^ 0. 05水平上达 到显著差异。
[0017] 由表1可以看出：与对照1相比，无论春季还是秋季，适宜浓度的蜕皮甾酮溶液处 理均能使'怀黄菊'快速生根，最早生根时间为扦插后7天，最晚生根时间为扦插后10天， 提前7-10天，达到和对照2 (NAA处理)一样的提前效果，使其生根率保持在较高的水平，而 且显著增加其平均根长和平均生根数，以3ymol/L蜕皮留酮处理效果为最佳。
[0018] 实施例2 1材料和方法 I. 1材料 供试材料为黄色观赏艺菊兼食用菊品种'春日见山'（ Ramat. ^Chunrijianshan,)〇
[0019] I. 2试验方法 春季5-6月份或秋季9-10月份，从田间选取生长一致的带顶芽的菊花枝条(直径0. 9 -I. 0cm)，去掉已木质化部分后留2叶1心截成8-lOcm的段作为插穗；用怀牛膝、桑叶、泽泻 等药用植物的乙醇提取物一含1、3、5、7ymol/L的蜕皮留酮溶液分别处理插穗基部1-1. 5 小时后扦插于灭过菌的蛭石苗床上，然后覆盖塑料薄膜，温度控制为23-25°C，每天早中晚 各雾状喷水1次，每天11:00-14:30在塑料薄膜上罩上遮阴网。三个重复，每个重复60个 插穗。以蒸馏水浸泡插穗基部1-1. 5小时为对照1，以本研究室前期常用方法：的20mg/L NAA浸泡插穗基部10-15分钟为对照2。扦插至21天统计生根率、根长、生根数。
[0020] 开始生根时间的观察采取的方法为：按照上述方法处理插穗基部，在同样的苗床 上另设实验区，扦插后第5d开始，每天上午检查插穗的生根情况。每处理10个插穗，3个重 复。
[0021] 1. 3数据处理 数据处理用SPSS13.0。对平均生根数、平均根长和生根率进行方差分析，采用 "Duncan"法进行平均数多重比较。
[0022] 实验结果 不同浓度的蜕皮留酮溶液处理对'春日见山'插穗生根的影响见表2。
[0023] 表2不同浓度的蜕皮甾酮溶液处理'春日见山'插穗生根情况(扦插后21天）
注：同一时期实验结果中同一列数据后不同小写字母表示表示在/^ 0. 05水平上达 到显著差异。
[0024] 由表2可以看出：与对照1相比，无论春季还是秋季，适宜浓度的蜕皮留酮溶液处 理均能使'春日见山'快速生根，最早生根时间为扦插后10天，最晚生根时间为扦插后13 天，提前7-10天，达到和对照2 (NAA处理）一样的提前效果，使其生根率保持在较高的水 平，而且显著增加其平均根长和平均生根数，以3ymol/L蜕皮留酮处理效果为最佳。
[0025] 以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该 了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原 理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入 本发明保护的范围内。
【主权项】
1. 一种调控菊花插穗生根的方法，其特征在于具体步骤为：春季5-6月份或秋季9-10 月份，从田间选取生长一致的直径为0. 9-1. Ocm带顶芽的菊花枝条，去掉已木质化部分后 留2叶1心截成8-10cm的段作为插穗；用摩尔浓度为3 ymol/L的蜕皮留酮溶液处理插穗 基部后扦插于灭过菌的蛭石苗床上，然后覆盖塑料薄膜，控制温度为23-25°C，每天早中晚 各雾状喷水1次，每天11:00-14:30在塑料薄膜上罩上遮阴网。2. 根据权利要求1所述的调控菊花插穗生根的方法，其特征在于：所述的蜕皮留酮溶 液处理插穗基部的时间为1-1. 5小时。3. 根据权利要求1所述的调控菊花插穗生根的方法，其特征在于：所述的蜕皮留酮溶 液为药用植物怀牛膝、川牛膝、桑叶、白毛夏枯草、泽泻、罗汉松、紫杉、乌毛蕨或紫箕的乙醇 提取物。
【专利摘要】本发明公开了一种调控菊花插穗生根的方法，属于植物插穗生根方法技术领域，具体步骤为：春季5-6月份或秋季9-10月份，从田间选取生长一致的直径为0.9-1.0cm带顶芽的菊花枝条，去掉已木质化部分后留2叶1心截成8-10cm的段作为插穗；用摩尔浓度为3μmol/L的蜕皮甾酮溶液处理插穗基部1-1.5小时后扦插于灭过菌的蛭石苗床上，然后覆盖塑料薄膜，控制温度为23-25℃，每天早中晚各雾状喷水1次，每天11:00-14:30在塑料薄膜上罩上遮阴网。目前菊花的生根大多采用萘乙酸粉剂，需要人工合成，生产工艺繁琐，而蜕皮甾酮来源于植物，存在于80个科的植物类群中，并且易于提取、定量。本发明操作相对简单，所投成本较低，省时省力，具有广阔的应用前景。
【IPC分类】A01G1/00
【公开号】CN105027938
【申请号】CN201510509981
【发明人】李金亭, 赵喜亭, 马梦丹, 蒋丽薇, 王灿, 朱玉婷, 王添乐
【申请人】河南师范大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年8月19日