一种一步法完成梨微嫁接并生根的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微嫁接技术，尤其涉及一种提高梨微嫁接成活率、缩短嫁接苗培养周 期的一步法完成梨微嫁接并生根的方法。
【背景技术】
[0002] 嫁接具有改良作物品种生长表现等作用，以达到提早结果、调整生长势、增强适应 性、回避病虫害、提高产量和品质、恢复树势等目的，因而被广泛应用于梨等果树作物中。但 由于木本植物本身的特性，限制了对梨等果树优质多抗砧木品种及种质的规模化快速筛 选，嫁接亲和性砧穗组合的快速筛选，以及嫁接愈合及砧穗互作机理的深入研究。
[0003] 微嫁接是一种植物组织培养与嫁接相结合的技术，避免了植物材料的木质化对优 质砧木、嫁接亲和砧穗组合的筛选，嫁接愈合及砧穗互作机制深入研究的限制，且具有材料 一致性好，出苗量大，占用空间少等优点。但现有技术中的微嫁接技术操作繁琐，培养周期 长，嫁接口愈合率低，造成梨嫁接苗木的成活率低。
【发明内容】
[0004] 鉴于上述现有技术的不足，本发明提供的一种一步法完成梨微嫁接并生根的方 法，在提高梨嫁接苗木成活率的基础上，缩短梨微嫁接成苗时间。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明技术方案包括：
[0006] -种提高梨微嫁接成活率的方法，其包括以下步骤：
[0007] A、选择高2厘米至3厘米、生长健壮一致的梨组培苗作为砧木，在无菌条件下，于 顶部斜切去头，切面长度为〇. 3厘米至0. 7厘米，留1. 5厘米至2. 5厘米茎段，摘除砧木底 部侧芽；
[0008] B、选择与砧木生长势相近的组培苗作为接穗，于基部斜切，接穗顶部留2片-4片 幼叶，切面长度为0. 3厘米至0. 7厘米，保证接穗基部与砧木顶部斜切面相吻合；
[0009] C、将砧木顶部斜切面和接穗基部斜切面靠在一起，然后用塑料管固定嫁接部位形 成嫁接苗，再将嫁接苗接种在pH值为5. 8-6的MS+NAA 0. 5mg吨-1+308蔗糖+7-8g琼脂培 养基上，在25°C ±2°C的条件下培养，培养的光照强度为1500x-20001x，每天光照条件下培 养十二小时，然后在黑暗条件下培养十二小时，在嫁接口愈合的同时进行生根培养。
[0010] 所述的方法，其中，上述步骤A之前还包括：
[0011] 将梨组培苗培养在 MS+6-BA1. Omg ? L-1+IBA0. 3mg ? L-l+40g 蔗糖 +7-8g 琼脂上， 在pH值为5. 8-6的条件下培养25天-30天，以备挑选砧木与接穗。
[0012] 所述的方法，其中，该方法还包括步骤D :将步骤C中生根30天至40天的嫁接苗 于驯化室驯化3天-4天后，移栽于育苗基质中培养，按常规栽培方式栽培。
[0013] 本发明提供的一种提高梨微嫁接成活率的方法，通过生长素与细胞分裂素的合理 添加、蔗糖浓度的适当提高可以对植株高度及茎干粗度有一定的促进作用，便于微嫁接操 作；嫁接过程中使用'套管微嫁接技术'，操作简单，固定效果好，可以及时观察到嫁接口的 愈合情况和排除死嫁接苗；嫁接后通过生根培养基使植株生根的同时进行嫁接口愈合的诱 导，诱导生根可以增强植株对营养物质吸收的能力，对嫁接口的愈合有促进作用；所有操作 避免了植物材料的木质化对筛选优质砧木、嫁接亲和砧穗组合的限制，具有材料一致性好， 出苗量大，嫁接苗培养周期短，成活率高，占用空间少等优点。
【具体实施方式】
[0014] 本发明提供了一种一步法完成梨微嫁接并生根的方法，为使本发明的目的、技术 方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体 实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0015] 本发明提供了一步法完成梨微嫁接并生根的方法，本方法嫁接成活率为95. 27%， 嫁接愈合与生根一步完成的效率为87. 23%，分别高于传统嫁接中80%与56%的成活率， 其包括以下步骤：
[0016] 步骤101 :选择生长健壮一致的梨组培苗，在无菌条件下，将该梨组培苗作为砧木 并将该砧木去头，留1. 5厘米至2. 5厘米的茎段，摘除砧木底部侧芽，沿砧木顶部斜切，切面 长度为〇. 3厘米至0. 7厘米；
[0017] 步骤102 :选择长度为1. 5厘米至2. 5厘米的梨组培苗作为接穗，接穗的粗度与砧 木相近，接穗的顶部留2片-4片幼叶，并将接穗基部斜切，切面长度为0. 3厘米至0. 7厘米， 使接穗基部斜切与砧木顶部斜切相吻合；
[0018] 步骤103 :将砧木顶部斜切面和接穗基部斜切面靠在一起，然后用塑料管固定 嫁接部位形成嫁接苗，再将嫁接苗接种在pH值为5. 8-6的MS+6-BA1.Omol?L-1+IBA 0. 3mol?L-l+30g蔗糖+7-8g琼脂培养基中，在25°C±2°C的条件下培养，培养的光照强度 为1500X-20001x，每天光照条件下培养十二小时，然后在黑暗条件下培养十二小时，待培养 20天-30天时转入下一步：
[0019] 步骤104 :将步骤103中培养的嫁接苗转移到生根用1/2MS+NAA0. 5mg?L-l+30g 蔗糖+7_8g琼脂培养基上，在pH值为5. 8-6条件下在该培养基上进行生根。
[0020] 尤其是将梨组培苗培养在含不同浓度6-BA及IBA的MS培养基上，筛选最适的砧 木、接穗诱导培养基。不同浓度的6-BA和IBA配比对山梨不定芽伸长增粗生长和增殖影响 不同，在IBA浓度一定的情况下，随着6-BA浓度的增高，山梨不定芽的伸长量和增殖数都 逐渐增大，当6-BA浓度达到1. 5mg?L-1时伸长量达到最高，之后随着浓度的增高不定芽 的伸长量减少；当6-BA浓度达到2.Omg?L-1时增殖数达到最高，之后随着浓度的增高不 定芽的增殖数减少且试管苗有玻璃化现象。在6-BA浓度一定的情况下，随着IBA浓度的增 加，山梨不定芽的伸长量和增殖数也逐渐增大，当IBA浓度为0. 3mg?L-1时达伸长量到最 高；当IBA浓度为0. 2mg?L-1时不定芽增殖数最大。就微嫁接而言，当6-BA1. 5mg?L-1， IBAO. 3mg?L-1时，继代28d后试管苗的增高值最大，但从长势上看，试管苗的节间比较短； 当6-BA1.Omg?L-l，IBAO. 3mg?L-1时，试管苗平均增长高度相对较小，但是，从长势上看， 试管苗节间正常，茎生长粗壮，叶平展，因此，6-BA1.Omg?L-l，IBAO. 3mg?L-1培养的试管 苗更适合用于嫁接，表1为不同浓度6-BA与IBA对山梨试管苗生长的影响。
[0021] 表 1
[0022]
[0023] 同时，嫁接后通过生根培养基使植株生根的同时进行嫁接口愈合的诱导，诱导生 根可以增强植株对营养物质吸收的能力，对嫁接口的愈合有促进作用。因此，对不同的生根 培养基进行生根及促进嫁接口愈合效率的筛选。将完成嫁接操作的嫁接体接种在分别添加 不同浓度的IBA，NAA及IAA的1/2MS或1/4QL培养基上，观察嫁接体的愈合与生根效率。 经观察，本专利提供的嫁接方法最高可以获得95. 27%的嫁接愈合效率。1/2MS+0. 5mg*L-1 NAA可诱导最高的愈合且生根效率，为69. 52%，嫁接体单株的平均生根数也表现出较高优 势，为10. 4,且生根嫁接体的愈合速度及生长势明显高于未生根的嫁接体。表2为不同生根 培养基对梨嫁接体愈合生根效率的影响。
[0024] 有报道表明，聚乙烯醇（PVA)可提高植物的生根效率，故在筛选出的 1/2MS+0. 5mg?L-lNAA愈合生根培养基中添加不同浓度的PVA，观察嫁接体的愈合及生根 效率。经观察，在添加PVA的培养基上生长的嫁接体愈合效率没有明显的提升，但接种于 1/2MS+0. 5mg*L-1NAA+2.OOmg.L-1PVA培养基上的嫁接体愈合且生根效率明显提升，最高 可达87. 23 %，但生根数量没有明显提升。表3为添加不同浓度PVA对梨嫁接体愈合生根效 率的影响。
[0025] 表 2
[0026]
[0028] 表 3
[0029]
[0031] 更进一步的，上述步骤101之前还包括：
[0032] 将梨组培苗培养在 MS+6-BA1. Omg ? L-1+IBA0. 3mg ? L-l+30g 蔗糖 +7-8g 琼脂上， 在pH值为5. 8-6的条件下培养25天-30天，以备挑选砧木与接穗。
[0033] 而且该方法还包括步骤105 :将步骤D中生根20天至30天的嫁接苗于驯化室驯 化3天-4天后，移栽于育苗基质中培养，按常规栽培方式栽培。
[0034] 当然，以上说明仅仅为本发明的较佳实施例，本发明并不限于列举上述实施例，应 当说明的是，任何熟悉本领域的技术人员在本说明书的教导下，所做出的所有等同替代、明 显变形形式，均落在本说明书的实质范围之内，理应受到本发明的保护。
【主权项】
1. 一种一步法完成梨微嫁接并生根的方法，其包括以下步骤： A、 选择高2厘米至3厘米、生长健壮一致的梨组培苗作为砧木，在无菌条件下，于顶部 斜切去头，切面长度为0. 3厘米至0. 7厘米，留1. 5厘米至2. 5厘米茎段，摘除砧木底部侧 芽； B、 选择与砧木生长势相近的组培苗作为接穗，于基部斜切，接穗顶部留2片-4片幼叶， 切面长度为0. 3厘米至0. 7厘米，保证接穗基部与砧木顶部斜切面相吻合； C、 将砧木顶部斜切面和接穗基部斜切面靠在一起，然后用塑料管固定嫁接部位形成嫁 接苗，再将嫁接苗接种在PH值为5. 8-6的MS+NAA 0. 5mg ? L-l+30g蔗糖+7-8g琼脂培养 基上，在25°C ±2°C的条件下培养，培养的光照强度为1500x-20001x，每天光照条件下培养 十二小时，然后在黑暗条件下培养十二小时，在嫁接口愈合的同时进行生根培养。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤A之前还包括： 将梨组培苗培养在MS+6-BA1. Omg ? L-1+IBA0. 3mg ? L-l+40g蔗糖+7-8g琼脂上，在pH 值为5. 8-6的条件下培养25天-30天，以备挑选砧木与接穗。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括步骤D :将步骤C中生根30 天至40天的嫁接苗于驯化室驯化3天-4天后，移栽于育苗基质中培养，按常规栽培方式栽 培。
【专利摘要】本发明公开了一种一步法完成梨微嫁接并生根的方法，其包括以下步骤：于增殖培养基上培养高度、粗度、生长势达到嫁接要求的梨组培苗，选择高2厘米至3厘米、生长健壮一致的组培苗，在无菌条件下，于顶部斜切去头作为砧木；选择与砧木生长势相近的组培苗作为接穗，于基部斜切留梢；将砧木顶部斜切面和接穗基部斜切面紧密靠在一起，用塑料套管固定嫁接部位形成嫁接苗，再将嫁接苗接种于培养基中，在25℃±2℃，每天光照十二小时，黑暗十二小时条件下进行嫁接口愈合的同时也进行生根培养。避免了植物材料的木质化对筛选优质砧木、嫁接亲和砧穗组合的限制，具有材料一致性好，出苗量大，嫁接苗培养周期短，成活率高，占用空间少等优点。
【IPC分类】A01G1/06
【公开号】CN105103968
【申请号】CN201510570474
【发明人】王然, 杨英杰, 宋健坤, 黄曼娜, 李志军
【申请人】青岛农业大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月9日