重瓣一品红新品种锦上花的组织培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养领域，具体地公开了重瓣一品红新品种锦上花的组织培养方法O
【背景技术】
[0002]一品红(Euphorbia Pulcherrima)别名“猩猩木”、“圣诞花”、“老来娇”。属于大戟科大戟属常绿或半常绿灌木，原产墨西哥及中美洲，现在我国各地广泛栽培利用。在人们生活水平日益上升的今天，高品质的一品红品种将受到市场日益青睐。
[0003]重瓣一品红新品种锦上花是历时17年对变异种进行培育、定型而形成的植物新品种，已获得国家新品种权保护(品种权号:20110011)。其花形硕大，呈立体双层皇冠状的，给人“花上有花”、“锦上添花”的感觉。虽然粵北隆冬寒气逼人，但一盆盆“锦上花”却怒张着一簇簇艳红宽大的花朵，一派喜气欢腾的模样，仿佛寒风中在绿枝熊熊燃烧的一团火焰。“锦上花”新品种已获得国家花卉新品种权保护。这标志着在中国使用极其广泛的“一品红”花卉系列中，终于有了第一个具有中国知识产权的产品。“锦上花”新品种市场选育成果曾获市科技进步一等奖，具有广阔而良好的推广应用前景。
[0004]重瓣一品红新品种锦上花母本植株极为稀少，而且其枝条较少，引种初期繁殖数量有限，采用传统育苗技术进行新品种培育推广时间将非常漫长。而利用组织培养技术进行工厂化育苗，不但可快速、大量繁殖，还可保持其优良性状的稳定。组培技术的应用和推广，将大幅度提高该品种繁育数量，缩短育苗时间，以满足市场对该品种的需求。
【发明内容】
[0005]为了解决上述技术问题，本发明提供了重瓣一品红新品种锦上花的组织培养方法。
[0006]本发明所采用的技术方案是:
[0007]重瓣一品红新品种锦上花的组织培养方法，包括(I)外植体处理、(2)愈伤组织诱导、(3)不定芽诱导、(4)不定芽增殖、(5)生根培养、(6)瓶苗外移培养，其特征在于:(2)中使用的培养基为MS+2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D) 2.0mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA) 0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉胶6.5g/L;(3)中使用的培养基为MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA) 2mg/L+萘乙酸(NAA) 1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉胶6.5g/L; (4)中使用的培养基为MS+吲哚丁酸(IBA)0.3mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.35mg/L+糖40g/L+卡拉胶6.5g/L; (5)中使用的培养基为 1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+糖40g/L+卡拉胶6.5g/L+活性炭 0.8g/L。
[0008]进一步地，所述步骤(I)具体为:a)取母本的顶芽、腋芽或嫩叶，b)洗衣粉水冲洗，
c)用小量的流动水冲洗整晚，d)用70%的酒精消毒5-6秒，e)无菌水冲洗5次，f)用0.1 %的升汞消毒8分钟，g)用无菌水冲洗5-6次，h)用干净滤纸吸干表面水分。
[0009]进一步地，所述步骤(I)中，选择的外植体为切取3—5cm长带有腋芽的茎段。
[0010]进一步地，所述步骤(6)具体为:在生根培养基上培养二十天后，根部长出根后就把瓶苗在温室内炼苗一星期，然后逐渐开瓶炼苗1-2天，即可将苗的根部培养基充分洗净后，用800-1000倍的多菌灵溶液浸泡1-2分钟，移栽至灭菌的土壤中，栽植后浇透水，湿度保持在93-97 %。
[0011]进一步地，所述步骤(6)中移栽后的幼苗的培养温度小于28摄氏度。
[0012]进一步地，所述步骤(6)中移栽后的幼苗的培养温度为25-26摄氏度。
[0013]进一步地，所述步骤(6)瓶苗外移培养成活后，每半个月施腐熟的花生麸水肥一次。
[0014]本发明的有益效果为:“锦上花”是重瓣一品红的上等品种，迄今为止还没人通过组培技术来繁殖。与国内一品红重瓣品种组培技术相比，本发明的一品红新品种“锦上花”组培技术在生根方面有很大优势，我们的生根率达到88%，而据国内有关机构报道其生根率仅为65%左右。因此，与国内一品红组培技术相比，本发明的一品红新品种“锦上花”组培技术达到了国内领先水平。
[0015]重瓣一品红新品种“锦上花”是一个相当高品质的品种，利用组织培养的方法是目前生物技术上最先进的方法，是在短期内能大量生产苗株的方法，其经济效益是相当可观的，值得我们大力推广。
[0016]为了更好地理解和实施，下面详细说明本发明。
【具体实施方式】
[0017]【实施例1】主要技术措施和特点
[0018]1、外植体的处理
[0019]—品红新品种“锦上花”组织培养快速繁殖的外植体以嫩叶(具有主叶脉)或顶芽、侧芽、腋芽为好。当时把“锦上花”母本拿过来是正值韶关最冷的2月，因此把母体放在温室养了2个月，同时在取才的前10天进行了控水。在下午的时候，剪取了母本的顶芽、腋芽还有嫩叶。首先用洗衣粉水冲洗干净，然后放在水龙头下以最小量的水下间断冲洗一个晚上，第二天早上进行处理后接于培养基上。在接种前，用70%的酒精消毒5-6秒，用无菌水冲洗5次，再用0.1 %的升汞消毒8分钟，用无菌水冲洗5-6次。最后用干净滤纸吸干外植体表面水分，接到诱导愈伤组织的培养基上。
[0020]2、愈伤组织的诱导
[0021]把处理好的外植体，接于愈伤组织的诱导培养基上。我们设置了两个配方的培养进行对比，
[0022]①MS+2-4D2.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+鹿糖 40g/L+卡拉胶 6.5g/L
[0023]②MS+6BA0.8mg/L+鹿糖 40g/L+卡拉胶 6.5g/L
[0024]PH值都为5.8，都在25 °C条件下培养25-30天。
[0025]通过对比实验，结果表明:采用MS+2-4D2.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉胶6.5g/L培养基，植体切口处长出许多愈伤组织，利用茎段诱导率达到90%，是一种适宜的锦上花愈伤组织诱导培养基。
[0026]3、不定芽的诱导
[0027]将愈伤组织转移到不定芽的诱导培养基上，我们也设置了两个培养基配方。①MS+6BA2mg/L+NAAl.0mg/L+鹿糖40g/L+卡拉胶6.5g/L，②MS+6BAlmg/L+糖40g/L+卡拉胶6.5g/L，PH值都为5.8，温度在25°C，光照在2000LX条件下进行培养。
[0028]通过对比实验，结果表明:以MS+6BA0.35/L+IBA0.3/L+糖40g/L+卡拉胶6.5g/L培养基为最佳。
[0029]4、不定芽的增值
[0030]要想有大量的生根苗，必需把不定芽大量增值。把诱导培养基上形成的丛生芽剪取下来，在无菌状态下接种于增值培养基上。增值培养基我们设置了 3个配方进行了试验。[0031 ]① MS+IBA0.05mg/L+6BA0.05mg/L+糖 40g/L+卡拉胶 6.5g/L，
[0032]②MS+IBA0.3mg/L+6BA0.05mg/L+糖 40g/L+卡拉胶 6.5g/L，
[0033]③MS+IBA0.3mg/L+6BA0.35mg/L+糖 40g/L+卡拉胶 6.5g/L。
[0034]通过对比实验，结果表明:以1/2MS+IBA0.6mg/L++NAAl.0mg/L+糖40g/L+卡拉胶
6.5g/L培养基为最佳，生根率达到88 %。
[0035]5、生根的培养
[0036]有了大量的丛生芽后，就是生根培养了。目的就是要在芽苗茎基部形成粗壮的根系。为此，我们也设置了两个培养基的配方。①1/2MS+IBA0.6mg/L+NAAl.0mg/L+糖40g/L+卡拉胶 6.5g/L+活性炭 0.8g/L，② 1/2MS+NAA1.0mg/L+糖 40g/L+卡拉胶 6.5g/L+活性炭 0.8g/L。
[0037]6、生根瓶苗的外移
[0038]在生根培养基上培养二十天后，根部长出根后就把瓶苗在温室内炼苗一星期，然后逐渐开瓶炼苗1-2天，即可将苗的根部培养基充分洗净后，用800-1000倍的多菌灵溶液浸泡1-2分钟，移栽至灭菌的基质中，栽植后浇透水，湿度保持在95 %左右，温度在25°C左右，以后逐渐减少遮阴和喷雾次数，同时注意喷药防治病菌感染并切实加强肥水管理。培养10-15天长出新根后可移至正常环境条件下，已适应自然光照和温度、湿度条件，逐渐成为商品苗。由于我们还有一个推广应用研究，因此把一部分可以上市的成品苗换袋，换袋后注意遮荫和肥水的管理，一般十天左右薄薄的施一次肥。一品红“锦上花”需要的光照比较强，在有三个节后就可打顶，促其侧芽生长。一般要打几次顶，在有十四节后停止打顶，并通过控制光照，使其苞片转色，变红。“锦上花”花形硕大，非常漂亮，这样就可以投入到花卉市场销售了。
[0039]试验结果表明:诱导愈伤组织利用带有腋芽的茎段诱导率达到90%;丛生芽的诱导率达到95% ;生根的诱导率达到88%，具有很好的效果。
[0040]本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变形不脱离本发明的精神和范围，倘若这些改动和变形属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变形。
【主权项】
1.重瓣一品红新品种锦上花的组织培养方法，包括(I)外植体处理、(2)愈伤组织诱导、(3)不定芽诱导、(4)不定芽增殖、(5)生根培养、(6)瓶苗外移培养，其特征在于:(2)中使用的培养基为MS+2，4_二氯苯氧乙酸2.0mg/L+6-苄氨基嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉胶6.5g/L; (3)中使用的培养基为MS+6-苄氨基嘌呤2mg/L+萘乙酸1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉胶6.5g/L; (4)中使用的培养基为MS+吲哚丁酸0.3mg/L+6_苄氨基嘌呤0.35mg/L+糖4(^/1+卡拉胶6.58/1;(5)中使用的培养基为1/215+吲哚丁酸0.61^/1+萘乙酸1.01^/1+糖40g/L+卡拉胶6.5g/L+活性炭0.8g/L02.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)具体为:a)取母本的顶芽、腋芽或嫩叶，b)洗衣粉水冲洗，c)用小量的流动水冲洗整晚，d)用70 %的酒精消毒5-6秒，e)无菌水冲洗5次，f)用0.1 %的升汞消毒8分钟，g)用无菌水冲洗5-6次，h)用干净滤纸吸干表面水分。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)中，选择的外植体为切取3—5cm长带有腋芽的茎段。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)具体为:在生根培养基上培养二十天后，根部长出根后就把瓶苗在温室内炼苗一星期，然后逐渐开瓶炼苗1-2天，即可将苗的根部培养基充分洗净后，用800-1000倍的多菌灵溶液浸泡1-2分钟，移栽至灭菌的土壤中，栽植后浇透水，湿度保持在93-97 %。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中移栽后的幼苗的培养温度小于28摄氏度。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中移栽后的幼苗的培养温度为25-26摄氏度。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)瓶苗外移培养成活后，每半个月施腐熟的花生麸水肥一次。
【专利摘要】本发明公开了重瓣一品红新品种锦上花的组织培养方法，包括(1)外植体处理、(2)愈伤组织诱导、(3)不定芽诱导、(4)不定芽增殖、(5)生根培养、(6)瓶苗外移培养，其特征在于：(2)中使用的培养基为MS+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)2.0mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉胶6.5g/L；(3)中使用的培养基为MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA)2mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉胶6.5g/L；(4)中使用的培养基为MS+吲哚丁酸(IBA)0.3mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.35mg/L+糖40g/L+卡拉胶6.5g/L；(5)中使用的培养基为1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+糖40g/L+卡拉胶6.5g/L+活性炭0.8g/L。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105613295
【申请号】CN201610040973
【发明人】李秋兰, 黄立军, 刘介东, 张朝旺, 姚为锋, 钟灼坤, 梁韶华, 李小兵, 陈世明
【申请人】韶关市林业科学研究所
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年1月21日