一种欧鳇人工繁殖的方法和鲤鱼脑垂体的应用
【专利摘要】本发明涉及欧鳇养殖领域，具体地，公开了一种欧鳇人工繁殖的方法和鲤鱼脑垂体的应用。涉及一种欧鳇人工繁殖的方法，该方法包括：(1)营养强化培育欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本；(2)对营养强化培育后的欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本进行低温刺激；(3)将水温升高至预催产温度并对欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本分别给药催产药物以进行催产；(4)采集游离卵和精液进行人工受精和孵化；其中，所述催产药物为鲤鱼脑垂体。还涉及鲤鱼脑垂体在欧鳇人工繁殖中的应用，以及鲤鱼脑垂体在制备用于人工繁殖欧鳇的药物中的应用。本发明的欧鳇催产药物较易获取和制备，采用欧鳇催产药物进行催产繁殖的催产率高，受精孵化效果好，产后亲鱼成活状况好。
【专利说明】
一种欧鳇人工繁殖的方法和鲤鱼脑垂体的应用
技术领域
[0001 ]本发明涉及欧鳇养殖领域，具体地，涉及一种欧鳇人工繁殖的方法和鲤鱼脑垂体 的应用。
【背景技术】
[0002] 由于欧鳇(Huso huso)属于大型鱼类，凶猛肉食性鱼类，具有肉质好和生长速度快 的优势，为现存体型最大的淡水鱼类之一，体重可达1吨以上。其性成熟时间长，人工养殖条 件下需要12年以上，其卵制成的鱼子酱为鱼子酱中的极品，价格较其它舞鱼类高出数倍或 十几倍。2002年中国首次引进，其催产繁殖不同于一般的舞鱼，国内仅见2013年任华等人 (文章编号：1006-3188(2013)-01-0020-03)对欧鳇的全人工繁殖技术研究，该文献中采用 人工注射地欧酮(D0M)和鲑鱼释放激素类似物(S-GnRHa)的方法引导成熟亲本排卵和排精， 催产率仅为75%，并且其产后的欧鳇亲本的恢复不佳，导致了其不能连续催产，影响了催产 效率。
[0003] 另外，近年来舞鳇鱼市场发展迅速，种质退化严重，亟需新的品种促进养殖结构调 整。因此，现在急需一种能够快速繁殖欧鳇的新方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为了克服现有技术中欧鳇人工繁殖种质退化严重等缺陷，提供一 种能够快速人工繁殖欧鳇的方法和鲤鱼脑垂体的应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明提供了一种欧鳇人工繁殖的方法，该方法包括：
[0006] (1)营养强化培育欧Μ雄鱼亲本和欧Μ雌鱼亲本；
[0007] (2)对营养强化培育后的欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本进行低温刺激；
[0008] (3)将水温升高至预催产温度并对欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本分别给药催产药 物以进行催产；
[0009] (4)采集游离卵和精液进行人工受精和孵化；
[0010] 其中，所述催产药物为鲤鱼脑垂体。
[0011] 第二方面，本发明提供了鲤鱼脑垂体在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0012] 第三方面，本发明提供了鲤鱼脑垂体在制备用于人工繁殖欧鳇的药物中的应用。
[0013] 本发明的欧鳇催产药物较易获取和制备，采用欧鳇催产药物进行催产繁殖的催产 率高，受精孵化效果好，产后亲鱼成活状况好。具体地，采用本发明所述的药物对欧鳇进行 催产繁殖，能够使得催产率高达80-100 %，受精率高达88-95 %。
[0014] 本发明的其它特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予以详细说明。
【具体实施方式】
[0015] 以下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体 实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0016] 在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或 值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各 个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个 新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
[0017] 本发明中极化系数指动物极到核近端边缘与动物极到植物极距离的比值;通常 地，200-300m3的培育池中水的投入量为150-240m 3。
[0018] 本发明提供了一种欧鳇人工繁殖的方法，该方法包括：
[0019] (1)营养强化培育欧Μ雄鱼亲本和欧Μ雌鱼亲本；
[0020] (2)对营养强化培育后的欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本进行低温刺激；
[0021] (3)将水温升高至预催产温度并对欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本分别给药催产药 物以进行催产；
[0022] (4)采集游离卵和精液进行人工受精和孵化；
[0023] 其中，所述催产药物为鲤鱼脑垂体。
[0024] 根据本发明所述的方法，对所述给药的方式没有特别的要求，可以为注射给药，优 选地，所述鲤鱼脑垂体以鲤鱼脑垂体含量为12-50mg/ml的溶液形式注射给药，且该溶液还 含有葡萄糖，其中，葡萄糖的浓度为8-15重量％，更优选地，制备鲤鱼脑垂体的葡萄糖溶液 的方法包括:将鲤鱼脑垂体干物质碾碎，然后用8-15%的葡萄糖溶解，从而能够显著提高欧 鳇的催产率和受精率。其中，8-15 %的葡萄糖溶液可以通过商购的5 %的葡萄糖溶液和50 % 的葡萄糖溶液按照一定配比混合而获得。其中，相对于干重200-300mg的鲤鱼脑垂体，8-15%的葡萄糖溶液的用量为6-15ml。
[0025] 根据本发明所述的方法，还可以包括:在营养强化培育欧鳇雄鱼亲本和雌鱼亲本 前选择符合要求的亲本，具体地，对雌鱼亲本的要求可以包括：已培育12年以上（例如可以 为12-18年），且雌鱼亲本卵径已达到2.5mm以上（例如可以为2.5-3.5mm)，对雄鱼亲本的要 求可以包括：已经培育10年以上（例如可以为10-18年），精巢白色。该选择的时机可以选在 需要催产前的5-10个月。
[0026] 根据本发明所述的方法，步骤(1)中，营养强化培育欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本 的条件可以为本领域各种可以促进雄鱼和雌鱼亲本性腺发育成熟的条件，例如可以包括： [0027] 水质控制：水温13-25°(：，溶解氧为6-1411^/1^，氨氮含量彡0.511^/以例如0.2- 0.5mg/L)，亚硝酸盐含量<0· lmg/L(例如0.04-0· lmg/L)，可以通过通入新鲜水而使水质的 溶解氧、氨氮和亚硝酸盐含量保持在上述范围内，例如，相对于200-300m3的培育池，控制每 秒水流量0.1 _〇. 3m3;
[0028] 投喂控制:每天投喂饲料1-2次，投饵率为0.3-0.5 %，投喂配合饲料中蛋白质含量 大于45重量％，脂肪含量8-12重量％，粗纤维含量3-5重量％，卵磷脂含量1-2重量％，维生 素 E含量3-4重量％。，当蛋白质、脂肪、粗纤维、卵磷脂和维生素 E含量之和不等于100 %时，余 量为不可避免的杂质；
[0029] 培养时间：120-150天。
[0030] 本发明中，投饵率指的是投喂饲料重量/鱼体重X 100%。
[0031] 本发明中，培育池中水的溶解氧、氨氮含量和亚硝酸盐含量测定方法均可采用自 动水质检测仪器进行检测。
[0032] 根据本发明所述的方法，该方法还可以包括:低温刺激前，对营养强化培育后的欧 鳇雌鱼亲本进行筛选，并将筛选得到的符合标准的亲本进行低温刺激。优选地，筛选欧鳇雌 鱼亲本的标准为:卵的极化系数要求达到〇. 1-0.15，从而能够显著提高欧鳇的催产率和受 精率。更优选地，筛选欧鳇雌鱼亲本的标准为:雌鱼要求体表完好无伤，腹部饱满，轻压感觉 柔软有弹性，卵长轴大于3.2_(例如为3.2-3.5mm)，极环和极斑清晰，极环和极斑占卵体的 三分之一，卵子沸水煮5-10分钟后沿长轴切开，极化系数要求达到0.1-0.15;筛选欧鳇雄鱼 亲本的标准为:雄鱼腹部硬且有凹槽。
[0033] 根据本发明所述的方法，步骤(2)中，低温刺激的方式可以为本领域各种低温刺激 的方式，优选地，所述低温刺激的方式为：以〇.04-0. l°C/h的降温速率使得水温降至8°C以 下后保持40天以上；更优选地，所述低温刺激的方式为：以0.04-0.05°C/h的降温速率使得 水温降至4-8°C后保持40-50天，从而能够显著提高欧鳇的催产率和受精率。
[0034]本发明中，所述低温刺激的条件可以包括：水体溶解氧6-14mg/L，氨氮含量彡 0 · 5mg/L (例如0 · 3-0 · 5mg/L)，亚硝酸盐含量彡0 · lmg/L (例如0 · 05-0 · lmg/L)。其中，保证上 述水质的方式为:每三天补充四分之一至三分之一的新水，例如，相对于200-300m3的培育 池，每秒水流量0.1 -0.3m3。
[0035] 根据本发明所述的方法，步骤(3)中，优选地，将水温升高至预催产温度的方式为： 以0.04-0. l°C/h的升温速率使得水温升至12-15°C，更优选地，以0.04-0.05°C/h的升温速 率使得水温升至12_15°C，从而能够显著提高欧鳇的催产率和受精率。
[0036] 根据本发明所述的方法，步骤(3)中，优选地，相对于体重为lkg的欧鳇雌鱼亲本， 所述催产药物以干基计的给药量为2-10mg ;更优选为3-6mg，从而能够显著提高欧Μ雌鱼亲 本的催产率和受精率。
[0037] 根据本发明所述的方法，步骤(3)中，优选地，相对于体重为lkg的欧鳇雄鱼亲本， 所述催产药物以干基计的给药量为l-5mg，更优选为1.5-3mg，从而能够显著提高欧Μ雄鱼 亲本的催产率和受精率。
[0038] 优选地，对欧鳇雌鱼亲本进行注射的方式为:催产药物分两次注射，第一次注射总 药量的20-30重量％，第二次注射总药量的70-80重量％，两次注射的时间间隔为12-15h，从 而能够提尚催广率和受精率。
[0039] 优选地，对欧Μ雄鱼亲本进行注射的方式为:催产药物为一次注射，从而能够提高 催产率和受精率。
[0040] 在本发明一种优选实施方式中，欧鳇雄鱼亲本催产药物的注射时间与欧鳇雌鱼亲 本第二次催产药物的注射时间相同，以便于控制雄鱼亲本排精时间与雌鱼亲本排卵时间基 本一致并便于采集卵和精液。
[0041] 本发明中，催产药物的注射部位可以为本领域公知的欧鳇身体上的各个不影响其 生长的部位，例如催产药物的注射部位可以为胸鳍。
[0042]根据本发明所述的方法，步骤(3)中，相对于200-300m3的培育池，催产期间优选保 持每秒水流量0.2-0.3m3。
[0043]根据本发明所述的方法，步骤(3)中，所述催产的条件优选包括:水温为16-17Γ， 即注射催产药物后，将水温升温至16-17Γ，从而能够显著提高欧鳇亲本的催产率和受精 率。其中，注射催产药物后，将水温升温至16-17Γ的方式可以为:给药后直接将亲本移至温 度为16-17°C的水中。
[0044] 根据本发明所述的方法，该方法包括:采集游离卵和精液进行人工受精和孵化，具 体地，可以包括:对催产(给药催产药物)24-30小时后的欧鳇雄鱼亲本和雌鱼亲本进行游离 卵和精液的米集，并依次进行人工受精、脱粘和孵化处理。其中，游尚卵和精液的米集方法 以及人工受精、脱粘和孵化处理的方法均为本领域的公知方法，例如，人工受精、脱粘和孵 化处理的方法可以包括:采用1公斤（以湿重计）卵对应10-20ml精液，倒入清水中搅拌90-120s受精，之后倒入清水清洗若干次(例如3-5次)加入25-30重量％滑石粉放入脱粘装置进 行脱粘，最后放入孵化器进行孵化，孵化水温为13-18Γ。
[0045] 根据本发明所述的方法，该方法还可以包括:对亲本进行产后护理。优选地，所述 产后护理的条件包括:连续3-5天注射营养物和消炎药物。其中营养物和消炎药物可以以液 体制剂的形式注入，例如，对于45mL的液体制剂，可以由40mL 5-10重量％的葡萄糖溶液， 5mL 10-11重量％维生素 C(Vc)溶液，青霉素160-180万IU混合制得。其中，可以每天注射一 次。相对于体重为lkg的亲本，液体制剂的单次注射量为0.1-0.2mL，其中，雄鱼和雌鱼亲本 无差异，注射量可以相同或不同。IU表示国际单位。
[0046] 第二方面，本发明提供了鲤鱼脑垂体在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0047]根据本发明所述的应用，优选地，所述鲤鱼脑垂体以鲤鱼脑垂体含量为12_50mg/ mL的溶液形式注射给药，且该溶液还含有葡萄糖，其中，葡萄糖的浓度为8-15重量％。制备 鲤鱼脑垂体的葡萄糖溶液的方法如上所述，在此不再赘述。
[0048]第三方面，本发明提供了鲤鱼脑垂体在制备用于人工繁殖欧鳇的药物中的应用。
[0049] 以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中：
[0050] 催产率=产卵鱼尾数/催产鱼总数X 100% ;
[0051] 受精率=发育良好受精卵/参与受精的总卵数X 100%，其中，发育良好受精卵是 指在受精后第3天用显微镜观察受精卵的形态，将处于卵黄栓时期的受精卵定义为发育良 好受精卵，并记录其数量，另外，还需要记录参与受精的总卵数。
[0052] 制备例1
[0053]本制备例用于说明本发明的用于催产欧鳇的药物鲤鱼脑垂体溶液的制备。
[0054] 鲤鱼脑垂体干物质200mg，称量后用碾砵碾碎溶解于10ml 15重量％的葡萄糖溶 液，其中，l〇ml 15重量％的葡萄糖溶液用2.2ml 50重量％的葡萄糖溶液和7.8ml 5重量％ 的葡萄糖溶液配制而成。
[0055] 制备例2
[0056] 本制备例用于说明本发明的用于催产欧鳇的药物鲤鱼脑垂体溶液的制备。
[0057] 鲤鱼脑垂体干物质228mg，称量后用碾砵碾碎溶解于12ml 10重量％的葡萄糖溶 液。10ml 15重量％的葡萄糖溶液需要用1.3ml 50重量％的葡萄糖溶液和13.7ml 5重量％ 的葡萄糖溶液配制而成。
[0058] 实施例1
[0059 ]本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。 [0060] (1)在需要催产前的8个月时选择欧鳇雌鱼亲本（已培育13年，且其卵径已达到 3.3mm，体重50kg)和欧Μ雄鱼亲本（已培育11年，穿刺肉眼可见白色精液，体重50kg )，然后 对欧鳇雌鱼亲本和雄鱼亲本进行营养强化培育150天，控制水质条件为:培育池为25mX 8m X 1.5m水泥池，水深lm，每秒水流量0. lm3,水温20°C，使得溶解氧为6mg/L，氨氮含量为 0.4mg/L，亚硝酸盐为0.05mg/L;控制投喂方式为:每天投喂饲料1次，投饵率为0.3 %，投喂 配合饲料中蛋白质含量为83重量％，脂肪含量9.9重量％，粗纤维含量5重量％，卵磷脂2重 量％，维生素 E含量3重量％〇;
[0061] (2)检查欧鳇雌鱼亲本，当雌鱼腹部饱满，轻压感觉柔软有弹性，卵长轴为3.5mm， 极环和极斑清晰，极环和极斑占卵体的三分之一，卵子沸水煮5分钟后沿长轴切开，极化系 数要求达到0.15，且雄鱼腹部硬且有凹槽时，以0.05°C/h的降温速率使得水池中水温降至8 °C保持40天(低温刺激），然后再以0.05°C/h的升温速率使得水温升至12°C(将水温升高至 预催产温度），水池中通过三天补充四分之一的新水，每秒水流量〇.2m 3使得水体溶解氧为 6mg/L，氨氮含量为0.3mg/L，亚硝酸盐含量为0.05mg/L，其中，控制投喂方式同步骤(2); [0062] (3)对升温处理后的欧鳇雄鱼亲本和雌鱼亲本的胸鳍分别注射制备例1的催产药 物鲤鱼脑垂体葡萄糖溶液以进行催产处理，注射完催产药物后将亲本移至温度为16°C的水 中；相对于体重为lkg的欧鳇雌鱼亲本，催产药物的注射总量以干重计为4mg，催产药物分两 次注射，第一次注射总药量的20重量％，第二次注射总药量的80重量％，欧鳇雌鱼亲本两次 催产药物注射时间间隔12小时;相对于体重为lkg的欧鳇雄鱼亲本，催产药物的注射总量以 干重计为2mg，催产药物为一次注射，欧鳇雄鱼亲本催产药物的注射时间与欧鳇雌鱼亲本第 二次催产药物的注射时间相同，该催产处理的水质条件同步骤(3)(除了每秒水流量保持 0.3m 3外)和控制投喂方式同步骤(2);
[0063] (4)对催产处理后24小时的欧鳇雄鱼亲本和雌鱼亲本进行游离卵和精液的采集， 并依次进行人工受精、脱粘和孵化处理，具体方法为:采用1公斤（以湿重计)卵对应l〇ml精 液，倒入清水中搅拌90s受精，之后倒入清水清洗若干次(例如3次)加入25重量％滑石粉放 入脱粘装置进行脱粘，最后放入孵化器进行孵化，孵化水温15°C，统计欧鳇的催产率和受精 率，结果见表1;
[0064] (5)对亲本进行产后护理。所述产后护理的条件为:连续3天每天注射一次营养物 和消炎药物。其中营养物和消炎药物以液体制剂的形式注入，该液体制剂由40mL 5重量％ 的葡萄糖溶液，5mL 10重量％Vc溶液，青霉素160万IU混合制成，相对于体重为lkg的亲本， 液体制剂的单次注射量为〇. lmL，其中雄鱼和雌鱼亲本注射量和注射药物种类相同。
[0065] 实施例2
[0066] 本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0067] (1)在需要催产前的8个月时选择欧鳇雌鱼亲本（已培育13年，且其卵径已达到 3.0mm，体重为60kg)和欧Μ雌鱼亲本(已培育12年，肉眼可见白色精液，体重为60kg)然后对 欧鱼皇雌鱼亲本和雄鱼亲本进行营养强化培育150天，控制水质条件为:培育池为25m X 8m X 1.5m水泥池，水深1.2m，每秒水流量0.15m3,水温20°C，使得溶解氧为10mg/L，氨氮含量为 0.3mg/L，亚硝酸盐含量为0.05mg/L;控制投喂方式为:每天投喂饲料2次，投饵率为0.3 %， 投喂配合饲料中蛋白质含量为83重量％，脂肪含量9.9重量％，粗纤维含量5重量％，卵磷脂 含量2重量％，维生素 E含量3重量％〇;
[0068] (2)检查欧鳇雌鱼亲本，当雌鱼腹部饱满，轻压感觉柔软有弹性，卵长轴为3.5mm， 极环和极斑清晰，极环和极斑占卵体的三分之一，卵子沸水煮5分钟后沿长轴切开，极化系 数要求达到0.1，且雄鱼腹部硬且有凹槽时，以〇.〇45°C/h的降温速率使得水池中水温降至6 °C保持40天(低温刺激），然后再以0.045°C/h的升温速率使得水温升至13°C(将水温升高至 预催产温度），水池中每三天补充四分之一的新水，每秒水流量〇.25m3使得水体溶解氧为 l〇mg/L，氨氮含量为0.3mg/L，亚硝酸盐含量为0.05mg/L，其中，控制投喂方式同步骤(2); [0069] (3)对升温处理后的欧鳇雄鱼亲本和雌鱼亲本的胸鳍分别注射制备例2的催产药 物鲤鱼脑垂体葡萄糖溶液以进行催产处理，注射完催产药物后将亲本移至温度为17°C的水 中；相对于体重为lkg的欧鳇雌鱼亲本，催产药物的注射总量以干重计为3.8mg，催产药物分 两次注射，第一次注射总药量的30重量％，第二次注射总药量的70重量％，欧鳇雌鱼亲本两 次催产药物注射时间间隔13小时;相对于体重为lkg的欧鳇雄鱼亲本，催产药物的注射总量 以干重计为1.9mg，催产药物为一次注射，欧鳇雄鱼亲本催产药物的注射时间与欧鳇雌鱼亲 本第二次催产药物的注射时间相同，该催产处理的水质条件同步骤(3)(除了每秒水流量保 持0.2m 3外)和控制投喂方式同步骤(2);
[0070] (4)对催产处理后24小时的欧鳇雄鱼亲本和雌鱼亲本进行游离卵和精液的采集， 并依次进行人工受精、脱粘和孵化处理，具体方法为:采用1公斤（以湿重计)卵对应15ml精 液，倒入清水中搅拌90s受精，之后倒入清水清洗若干次(例如5次)加入30重量％滑石粉放 入脱粘装置进行脱粘，最后放入孵化器进行孵化，孵化水温18°C，统计欧鳇的催产率和受精 率，结果见表1;
[0071] (5)对亲本进行产后护理。所述产后护理的条件为:连续3天每天注射一次营养物 和消炎药物。其中营养物和消炎药物以液体制剂的形式注入，该液体制剂由40mL 5重量％ 的葡萄糖溶液，5mL 10重量％Vc溶液，青霉素160万IU混合制成，相对于体重为lkg的亲本， 液体制剂的单次注射量为〇. lmL，其中雄鱼和雌鱼亲本注射量和注射药物种类相同。
[0072] 实施例3
[0073 ]本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。 [0074] (1)在需要催产前的8个月时选择欧鳇雌鱼亲本（已培育13年，且其卵径已达到 3.1mm，体重50kg)和欧鳇雌鱼亲本(已培育13年，肉眼可见白色精液，体重50kg)然后对欧鳇 雌鱼亲本和雄鱼亲本进行营养强化培育150天，控制水质条件为:培育池为25m X 8m XI. 5m 水泥池，水深lm，每秒水流量0.2m3，水温25 °C，使得溶解氧10mg/L，氨氮含量为0.2mg/L，亚 硝酸盐含量为〇. 〇4mg/L;控制投喂方式为:每天投喂饲料1次，投饵率为0.3 %，投喂配合饲 料中蛋白质含量为83重量％，脂肪含量9.9重量％，粗纤维含量5重量％，卵磷脂含量2重 量％，维生素 E含量3重量％〇;
[0075] (2)检查欧鳇雌鱼亲本，当雌鱼腹部饱满，轻压感觉柔软有弹性，卵长轴为3.3mm， 极环和极斑清晰，极环和极斑占卵体的三分之一，卵子沸水煮5分钟后沿长轴切开，极化系 数要求达到0.12，且雄鱼腹部硬且有凹槽时，以0.04°C/h的降温速率使得水池中水温降至4 °C保持45天(低温刺激），然后再以0.04 °C/h的升温速率使得水温升至15°C(将水温升高至 预催产温度），水池中通过每三天补充四分之一的新水，每秒水流量〇.3m 3,使得水体溶解氧 为14mg/L，氨氮含量为0.3mg/L，亚硝酸盐含量为0.05mg/L，其中，控制投喂方式同步骤(2); [0076] (3)对升温处理后的欧鳇雄鱼亲本和雌鱼亲本的胸鳍分别注射制备例1的催产药 物鲤鱼脑垂体葡萄糖溶液以进行催产处理，注射完催产药物后将亲本移至温度为17°C的水 中；相对于体重为lkg的欧鳇雌鱼亲本，催产药物的注射总量以干重计为4mg，催产药物分两 次注射，第一次注射总药量的20重量％，第二次注射总药量的80重量％，欧鳇雌鱼亲本两次 催产药物注射时间间隔15小时;相对于体重为lkg的欧鳇雄鱼亲本，催产药物的注射总量以 干重计为2mg，催产药物为一次注射，欧鳇雄鱼亲本催产药物的注射时间与欧鳇雌鱼亲本第 二次催产药物的注射时间相同，该催产处理的水质条件同步骤(3)(除了每秒水流量保持 0.3m 3外)和控制投喂方式同步骤(2);
[0077] (4)对催产处理后24小时的欧鳇雄鱼亲本和雌鱼亲本进行游离卵和精液的采集， 并依次进行人工受精、脱粘和孵化处理，具体方法为:采用1公斤（以湿重计）卵对应20ml精 液，倒入清水中搅拌120s受精，之后倒入清水清洗若干次(例如5次)加入25重量％滑石粉放 入脱粘装置进行脱粘，最后放入孵化器进行孵化，孵化水温15°C，统计欧鳇的催产率和受精 率，结果见表1;
[0078] (5)对亲本进行产后护理。所述产后护理的条件为:连续3天每天注射一次营养物 和消炎药物。其中营养物和消炎药物以液体制剂的形式注入，该液体制剂由40mL 5重量％ 的葡萄糖溶液，5mL 10重量％Vc溶液，青霉素160万IU混合制成，相对于体重为lkg的亲本， 液体制剂的单次注射量为〇. lmL，其中雄鱼和雌鱼亲本注射量和注射药物种类相同。
[0079] 实施例4
[0080] 本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0081] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，相对于lkg的欧鳇雌鱼亲本，所 述催产药物的注射总量以干重计为1 〇mg。
[0082] 实施例5
[0083]本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0084] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，相对于lkg的欧鳇雄鱼亲本，所 述催产药物的注射总量以干重计为5mg。
[0085] 实施例6
[0086] 本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0087] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，营养强化培育后将欧鳇雌鱼亲 本和欧鳇雄鱼亲本直接放入至8 °C水中进行培养。
[0088] 实施例7
[0089 ]本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0090] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，步骤(2)中，低温刺激时，以0.2 °C/h降温速率降温至8°C。
[0091] 实施例8
[0092 ]本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0093] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，低温刺激后将欧鳇雌鱼亲本和 欧鳇雄鱼亲本直接放入至12 °C水中进行养殖。
[0094] 实施例9
[0095] 本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0096] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，步骤(2)中，将水温升高至预催 产温度时，以〇. 2 °C /h升温速率升温至12 °C。
[0097] 实施例10
[0098] 本实施例用于说明欧鳇人工繁殖的方法以及催产药物在欧鳇人工繁殖中的应用。
[0099] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，低温刺激前且营养强化培育后 筛选选择雌鱼亲本时，卵子沸水煮5分钟后沿长轴切开，极化系数要求为0.18。
[0100] 对比例1
[0101] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，步骤(2)中，不将水温升高至预 催产温度，而是直接将低温刺激后的亲本注射药物进行催产。
[0102] 对比例2
[0103] 按照实施例1的方法进行欧鳇人工繁殖，不同的是，步骤(3)中，注射溶液中的药物 为地欧酮(D0M)和鲑鱼释放激素类似物，地欧酮(D0M)和鲑鱼释放激素类似物的重量比为1: 2〇
[0104] 表1 rnmfii
[0107] 由以上表1的数据可以看出，本发明的欧鳇催产药物较易获取和制备，采用欧鳇催 产药物进行催产繁殖的催产率高，受精孵化效果好，产后亲鱼成活状况好。具体地，采用本 发明所述的药物对欧鳇进行催产繁殖，能够使得催产率高达80-100 %，受精率高达88-95%〇
[0108] 以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中 的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这 些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0109] 另外需要说明的是，在上述【具体实施方式】中所描述的各个具体技术特征，在不矛 盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可 能的组合方式不再另行说明。
[0110] 此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本 发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
【主权项】
1. 一种欧鳇人工繁殖的方法，其特征在于，该方法包括： (1) 营养强化培育欧Μ雄鱼亲本和欧Μ雌鱼亲本； (2) 对营养强化培育后的欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本进行低温刺激； (3) 将水温升高至预催产温度并对欧鳇雄鱼亲本和欧鳇雌鱼亲本分别给药催产药物以 进行催产； (4) 采集游离卵和精液进行人工受精和孵化； 其中，所述催产药物为鲤鱼脑垂体。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述鲤鱼脑垂体以鲤鱼脑垂体含量为12-50mg/ml 的溶液形式注射给药，且该溶液还含有葡萄糖，其中，葡萄糖的浓度为8-15重量％。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，相对于体重为lkg的欧鳇雌鱼亲本，所述催产 药物以干基计的给药量为2-10mg;优选为3-6mg;和/或 相对于体重为lkg的欧Μ雄鱼亲本，所述催产药物以干基计的给药量为l-5mg，优选为 1.5_3mg;和/或 对欧鳇雌鱼亲本进行给药的方式为:催产药物分两次给药，第一次给药总药量的20-30 重量％，第二次给药总药量的70-80重量％，两次注射的时间间隔为12-15h;对欧鳇雄鱼亲 本进行给药的方式为:催产药物为一次给药。4. 根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述低温刺激的方式为：以0.04- 0.1°C /h的降温速率使得水温降至8 °C以下后保持40天以上； 优选地，所述低温刺激的方式为：以0.04-0.05°C/h的降温速率使得水温降至4-8°C后 保持40-50天。5. 根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述低温刺激的条件包括:水体溶 解氧6-14mg/L，氨氮含量<0.5mg/L，亚硝酸盐含量<0.1mg/L。6. 根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，将水温升高至预催产温度的方式 为：以0.04-0.1°C /h的升温速率使得水温升至12-15 °C ; 优选地，以0.04-0.05 °C /h的升温速率使得水温升至12-15 °C。7. 根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述催产的条件包括:水温为16-17 Γ。8. 根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，营养强化培育欧鳇雄鱼亲本和欧鳇 雌鱼亲本的条件包括： 水质控制:溶解氧6_14mg/L，氨氮含量彡0.5mg/L，亚硝酸盐含量彡0.1mg/L，水温13-25 °C； 投喂控制:每天投喂饲料1-2次，投饵率为0.3-0.5 %，投喂配合饲料中蛋白质含量大于 45重量％，脂肪含量8-12重量％，粗纤维含量3-5重量％，卵磷脂含量1-2重量％，维生素 E含 量3_4重量％〇; 培养时间：120-150天。9. 根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，该方法还包括:低温刺激前，对营养 强化培育后的欧鳇雌鱼亲本进行筛选，并将筛选得到的符合标准的亲本进行低温刺激，其 中，筛选的标准为:卵的极化系数要求达到〇. 1-0.15。10. 鲤鱼脑垂体在欧鳇人工繁殖中的应用。11.鲤鱼脑垂体在制备用于人工繁殖欧鳇的药物中的应用。
【文档编号】A61K35/60GK106069900SQ201610424423
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月15日 公开号201610424423.5, CN 106069900 A, CN 106069900A, CN 201610424423, CN-A-106069900, CN106069900 A, CN106069900A, CN201610424423, CN201610424423.5
【发明人】齐茜, 刘晓勇, 依布拉英·买丽坎, 白喜军
【申请人】北京渔夫水产技术开发中心