高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法
【专利摘要】本发明公开了一种高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法，取待测菌株接种于脱脂奶粉平板培养基上35℃培养24h后，革兰氏染色，镜检；再分别取待测菌株1.0ml用基因组DNA提取试剂盒提取DNA模板，设计合成PCR扩增引物，上游引物P1：5＇-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3＇；下游引物P2：5＇-AGTAAGGAGGTGATCCAACCGCA-3＇，进行16SrDNA的PCR扩增。对菌株选择性强，鉴定方法科学，时间周期短，效率高。
【专利说明】高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于生物【技术领域】，具体涉及菌株的鉴定方法。
[0003]
【背景技术】
[0004]催化蛋白质水解的酶类有很多种类，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和地衣芽孢杆菌蛋白酶等。蛋白酶对所作用的反应底物有严格的选择性，一种蛋白酶仅能作用于蛋白质分子中一定的肽键，如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶主要由霉菌、细菌,其次由酵母、放线菌生产。
[0005]现有技术鉴定枯草芽孢杆菌的方法普遍存在对菌株选择性低，鉴定方法不科学，时间周期长，效率低的问题。
[0006]
【发明内容】
[0007]为了克服现有【技术领域】存在的上述缺陷，本发明的目的在于，提供一种高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法，解决现有技术对菌株选择性低，鉴定方法不科学，时间周期长，效率低的问题。
[0008]本发明提供的高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法，包括以下步骤:
一、形态学鉴定，取待测菌株接种于脱脂奶粉平板培养基上35°C培养24h后，革兰氏染色，镜检；
二、PCR鉴定，分别取待测菌株1.0ml用基因组DNA提取试剂盒提取DNA模板，设计合成 PCR 扩增引物，上游引物 P1: 5 ' - AGAGTTTGATCCTGGCTCAG -3 ;;下游引物 P2:5 '-AGTAAGGAGGTGATCCAACCGCA -3 ;，进行 16S rDNA 的 PCR 扩增，PCR 反应条件为:94°C预变性lOmin，然后94°C变性lmin，54°C退火lmin，72°C延伸2min，共25个循环，最后72°C延伸IOmin0
[0009]本发明提供的高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法，其有益效果在于，对菌株选择性强，鉴定方法科学、时间周期短、效率高。
[0010]
【具体实施方式】
[0011]下面结合一个实施例，对本发明提供的高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法进行详细的说明。
[0012]实施例
[0013]本实施例的高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法，包括以下步骤:
一、形态学鉴定，取待测菌株接种于脱脂奶粉平板培养基上35°C培养24h后，革兰氏染色，镜检；
二、PCR鉴定，分别取待测菌株1.0ml用基因组DNA提取试剂盒提取DNA模板，设计合成 PCR 扩增引物，上游引物 P1: 5 ' - AGAGTTTGATCCTGGCTCAG -3 ;;下游引物 P2:5 '-AGTAAGGAGGTGATCCAACCGCA -3 ;，进行 16S rDNA 的 PCR 扩增，PCR 反应条件为:94°C预变性lOmin，然后94°C变性lmin，54°C退火lmin，72°C延伸2min，共25个循环，最后72°C延伸IOmin0
[0014]PCR产物纯化后连接克隆载体并转化，酶切鉴定后送至上海Invitrogen公司测序，所测序列提交GenBank进行同源性比较。所得序列为:
【权利要求】
1.一种高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的鉴定方法，其特征在于:包括以下步骤: 一、形态学鉴定，取待测菌株接种于脱脂奶粉平板培养基上35°C培养24h后，革兰氏染色，镜检； 二、PCR鉴定，分别取待测菌株1.0ml用基因组DNA提取试剂盒提取DNA模板，设计合成 PCR 扩增引物，上游引物 P1: 5 ' - AGAGTTTGATCCTGGCTCAG -3 ;;下游引物 P2:5 '-AGTAAGGAGGTGATCCAACCGCA -3 ;，进行 16S rDNA 的 PCR 扩增，PCR 反应条件为:94°C预变性lOmin，然后94°C变性lmin，54°C退火lmin，72°C延伸2min，共25个循环，最后72°C延伸IOmin0`
【文档编号】C12Q1/68GK103882097SQ201210561060
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2012年12月21日 优先权日:2012年12月21日
【发明者】张述智, 夏伟, 朱绍辉, 张 浩, 王晓丽, 徐权汗, 李之详, 许团辉 申请人:青岛中仁药业有限公司