阿兹海默症基因检测装置制造方法
【专利摘要】本实用新型提供一种阿兹海默症基因检测装置，其包含一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；薄膜垫设有一第一SNP检测区，第一SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线。第一检测线、第二检测线分别固定不同的APOE等位基因的核苷酸探针，而第一检测线与第二检测线的探针存有一核苷酸的差异。本实用新型藉由将多个涵盖APOE等位基因的单核苷酸多态性位点的探针并配合预定的侧向流方向配置于薄膜垫上形成所述的第一检测线以及第二检测线，达到有效且专一于单一步骤中测定APOE基因型的目的，以作为阿兹海默症的预防与治疗的依据。
【专利说明】阿兹海默症基因检测装置
【技术领域】
[0001]本实用新型是关于一种快速筛检基因的装置，尤指配置有适当检测部件而可供用于快速且精确的筛检APOE等位基因型的检测试片。
【背景技术】
[0002]阿兹海默症初期最常见的症状是难以记住最近发生的事，随着疾病进展，症状将会包括谵妄、易怒、具攻击性、情绪起伏不定、丧失长期记忆等。病患通常因为无法发挥正常功能，而退出家庭和社会的社交关系，并随着身体功能逐渐丧失，终致死亡。初步怀疑罹患阿兹海默症时，通常藉由行为评估以及认知测试(Cognitive test)来确认诊断，进阶的诊断为神经影像检查辅助诊断。
[0003]阿兹海默症的症状可分为早期、中期以及晚期，各时期反应在行为与认知能力损害程度有所不同。此外，依据发作的时间早晚又分为主要发生于65岁以前的早发型与发生于65岁以后的晚发型阿兹海默症，其中10%的患者属于早发型阿兹海默症，与家族病史强烈相关；而90%的患者属于晚发型阿兹海默症，与家族病史较无直接关系。早发型阿兹海默症可分为第一型阿兹海默症(Alzheimer disease type 1，ADI)、第三型阿兹海默症(Alzheimer disease type 3, AD3)以及第四型阿兹海默症(Alzheimer disease type4，AD4)，晚发型阿兹海默症即第二型阿兹海默症(Alzheimer disease type 2，AD2)。就两者的变异类型而言，相较于早发型阿兹海默症通常为APP、PSENU PSEN2基因突变所造成，晚发型阿兹海默症通常与单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)相关，例如与特定(APOE)的单核苷酸多态性有高度相关性，例如AP0E-rs7412以及AP0E-rs429358o
[0004]研究显示与晚发型阿兹海默症相关的基因型可依据SNP分为ApoE ε 2,ApoE ε 3、ApoE ε 4, ApoE ε 2 是指 SNP rs429358 与 rs7412 皆为胸苷(thymidine, Τ)，注记为 Ε2 型，为保护性基因型；ΑροΕ ε 3是指SNP rs429358与rs7412分别为T与胞苷(cytidine, C)，注记为E3型，为低风险性基因型；ApoE ε 4是指SNP rs429358与rs7412皆C，注记为E4型，为高风险性基因型。具有所述的保护性基因型、低风险性基因型与高风险性基因型的携带者(carrier)摧患阿兹海默症的风险依序由低至高。研究人员发现APOE等位基因皆为高风险性基因型的个体，注记为E4/E4，确实较为容易罹患晚发型阿兹海默症；相对的，APOE等位基因皆为保护性基因型的个体，注记为E2/E2，罹患晚发型阿兹海默症的风险相对最低(Influence of apolipoprotein E genotype on the transmission ofAlzheimer disease in a community-based sample.G.Jarvik, Ε.B.Larson, K.Goddard, G.D.Schellenberg, Ε.M.Wijsman.Am J Hum Genet.1996 January;58(I):191 - 200.)?
[0005]为了检测不同个体或者不同细胞的基因表达(gene expression)或者等位基因型(allele genotype),过去已经发展出多种检测基因的方法,其中北方墨点(NorthernBlot)分析或者南方墨点(Southern blot)分析,其原理为令经标定的特定核苷酸探针(nucleotide probe)与经电泳分离、转染而得的含有标的RNA或DNA的薄膜进行杂交反应(hybridization),进而通过经标定的探针的讯号以侦测目标RNA或DNA存在。此外,聚合酶链式反应配合定序分析，鉴定等位基因型亦为常见手段，但由于此类方法操作上的限制，并不利于使用者在家自行筛检，必须自始至终于专业的实验室经由特定的仪器进行反应。一般而言，对于一般APOE基因的SNP的检测，仍必须通过核酸分离与定序的程序予以确认。
[0006]中国台湾第1352738号专利案提供一种侦测阿兹海默症的方法，其是针对ABCA2基因的rs908832变异基因的次要等位基因型进行检测，而可供用于测定白种人族群个体罹患早发型阿兹海默症的风险。该专利案并未提供检测晚发型阿兹海默症的技术，且此检测方法必须先萃取病人的DNA并经繁复的步骤以分别鉴定ABCA2等位基因的各种基因型，并未提供利用侧向流分析核苷酸样品的检测装置，无法于一步骤试验中辨别特定基因的等位基因型。该专利案无法解决现有技术仍需要自始至终于专业实验室经由特定的仪器进行反应而需繁琐步骤进行检测的缺点。
[0007]基于上述可知，现有技术缺乏一种快速筛检阿兹海默症的检测装置，并藉由筛检的结果以帮助个体预防或治疗阿兹海默症。
实用新型内容
[0008]有鉴于现有技术仍需多步骤纯化检体、制备样品、分析样品，藉以确认阿兹海默症相关基因的单核苷酸多态性基因型(single nucleotide polymorphism genotyping),本实用新型的目的在于解决现有技术需要重复进行不同等位基因的SNP分析的问题，提供一种阿兹海默症基因检测装置，其可同时针对APOE等位基因的单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism, SNP)位点进行侦测，达到有效且专一的测定APOE基因型的目的。此外，现有技术缺乏针对晚发型阿兹海默症的快速筛检方法，故本实用新型亦提供针对晚发型阿兹海默症的检测技术。
[0009]因此，本实用新型提供了一种阿兹海默症基因检测装置，该阿兹海默症基因检测装置包含一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；薄膜垫设有一第一 SNP检测区以及一控制线，其中第一 SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线。
[0010]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，第一检测线、第二检测线分别具有APOE等位基因的核苷酸探针，其中第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异(第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针与第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针彼此之间具有一核苷酸差异，即，第一检测线、第二检测线具有不同的APOE等位基因的核苷酸探针)。
[0011]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，APOE等位基因的核苷酸探针选自于涵盖APOE的SNP rs429358或rs7412位点的APOE基因序列片段。
[0012]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖APOE的rs429358 SNP位点。
[0013]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，薄膜垫还设有一第二 SNP检测区，第二 SNP检测区包括一第三检测线以及一第四检测线，第三检测线以及第四检测线分别具有APOE等位基因的核苷酸探针，其中第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异。所述的第二 SNP检测区是用以侦测与第一 SNP检测区不同的SNP位点，其中第三检测线以及第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针与第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针所涵盖的APOE的SNP位点不同。
[0014]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖APOE的rs7412 SNP位点。
[0015]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.3所示序列，而第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.2或SEQ ID N0.4所示序列。
[0016]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.5或SEQ ID N0.7所示序列，而第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.6或SEQ ID N0.8所示序列。
[0017]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，APOE等位基因的核苷酸探针的大小介于16至25核苷酸，其熔点温度为50°C至65°C。
[0018]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，第一 SNP检测区还包括一第五检测线、一第六检测线，以及第二 SNP检测区更包括一第七检测线、一第八检测线。
[0019]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针分别具有SEQ ID N0.3、SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.7 及 SEQ ID N0.8 所示序列。
[0020]进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，其中，第一检测区的第一检测线、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针是选自于SEQ ID N0.1至SEQ ID N0.4所示序列的核苷酸探针；而第二检测区的第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针是选自于SEQ ID N0.5至SEQ ID N0.8所示序列的核苷酸探针。
[0021]本实用新型的阿兹海默症基因检测装置于使用时将样品溶液施用于样品垫上，令样品溶液的标的核酸分子通过一侧向流(lateral flow)朝向吸附垫方向移动,标的核酸分子通过结合垫而与结合垫内的标定物结合后，继而进入薄膜垫，而与所述检测线的APOE等位基因的核苷酸探针专一性的结合，依据侦测第一检测区、第二检测区的第一检测线、第二检测线、第三检测线以及第四检测线的讯号可以判定标的核酸分子的APOE等位基因型，而无须再加以定序，依据本实用新型的手段可以直接简化现有技术的检测流程，于一步骤中即可测定待测对象的APOE的多种等位基因型。
[0022]依据本实用新型，所述的样品溶液是由一待测对象的核酸检体所制备而得，其含有经标定的APOE基因片段的溶液；较佳的，样品溶液中含有待测对象的核酸检体，其是利用经标定的引物所扩增出APOE基因片段，诸如于一聚合酶链式反应中以经标定的APOE引物对扩增而得的APOE基因片段。
[0023]所述的“ΑΡ0Ε等位基因的核苷酸探针”可为已知的任何APOE等位基因的序列所设计出，较佳的选自于涵盖APOE的SNP rs429358或rs7412位点的APOE基因序列片段，其中SNP rs429358为胸苷(thymidine, T)与rs7412为胞苷(cytidine, C)，即野生型正义探针；SNP rs429358为胞苷与rs7412为胸苷，即突变型正义探针；更佳的，APOE等位基因的核苷酸探针具有与E2、E3、E4型基因序列片段互补的序列，即野生型或突变型负义探针。
[0024]依据本实用新型，所述的“ΑΡ0Ε等位基因的核苷酸探针”的大小介于16至25核苷酸，其熔点温度(melting point temperature, Tm)为 50°C至 65°C。
[0025]较佳的，所述的“ΑΡ0Ε等位基因的核苷酸探针”的大小介于16至22核苷酸，其熔点温度(melting point temperature, Tm)为 5CTC至 6CTC。
[0026]依据本实用新型，所述的第一 SNP检测区与第二 SNP检测区可依照需求予以设置于薄膜垫选定的位置，而不限于第一 SNP检测区介于结合垫与第二 SNP检测区之间。另可选择的，第二 SNP检测区介于结合垫与第一 SNP检测区之间。
[0027]依据本实用新型，所述的第一 SNP检测区还可包含一第五检测线和/或第六检测线，而第二 SNP检测区还可包含一第七检测线和/或第八检测线，其中与第一检测线、二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针为突变型负义探针以及野生型负义探针相对应的第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针为野生型正义探针与突变型正义探针。类似的情形适用于第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针。
[0028]较佳的，所述的“ΑΡ0Ε等位基因的核苷酸探针”具有SEQ ID N0.1至SEQ ID N0.8任一所示序列。第一检测区与第二检测区的第一检测线、第二检测线、第三检测线以及第四检测线的相对排列位置，可依据需求选择具有特定序列的APOE等位基因的核苷酸探针，达到避免噪声产生或避免非所欲的因素影响结果。
[0029]较佳的，所述的第一 SNP检测区的第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针，它们涵盖同一 APOE的SNP位点，亦即第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针的序列只有一个核苷酸的差异。例如，但不限于:所述的差异对应于APOErs429358的SNP位点，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.1所示序列，其涵盖的rs429358位点为C，而第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ IDN0.2所示序列，其涵盖的rs429358位点为T。类似的，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针亦可具有SEQ ID N0.3所示序列，而第二检测线所具APOE等位基因的核苷酸探针为SEQ ID N0.4所示序列。
[0030]承上所述，与第一检测线、第二检测线不同，第二 SNP检测区的第三检测线、第四检测线为涵盖另一 APOE的SNP位点的APOE等位基因的核苷酸探针。较佳的，所述的第二SNP检测区所涵盖的APOE的SNP位点为APOE rs7412。例如，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.5所示序列，其涵盖的rs7412位点为C，而于第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.6所示序列，其涵盖的rs7412位点为T。类似的，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针亦可具有SEQ ID N0.7所示序列，而第四检测线所具者为SEQ ID N0.8所示序列。
[0031]由于所述的APOE等位基因的核苷酸探针为涵盖诸如APOE的SNP rs429358或rs7412位点的APOE基因序列片段，因此当待测对象的检体被施用于所述的阿兹海默症基因检测装置，可藉由第一检测线、第二检测线、第三检测线以及第四检测线是否产生讯号，以及讯号的组合形式，决定待测对象的APOE等位基因型是E2/E2、E2/E3、E3/E3、E2/E4、E3/E4或E4/E4，进而提供一罹患晚发型阿兹海默症的风险为低至高的判断结果。
[0032]综上所述，本实用新型藉由将涵盖不同的APOE等位基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点的核苷酸探针，依照预定的侧向流方向固定于薄膜垫的第一检测线、第二检测线、第三检测线及第四检测线，于施用样品溶液于样品垫，经反应后，比较参照第一 SNP检测区与第二 SNP检测区的第一检测线、第二检测线、第三检测线及第四检测线的讯号，而可以于单一步骤反应中专一且准确的测定待测对象的APOE的SNP基因型，而判定APOE等位基因型，提供罹患晚发型阿兹海默症风险的预测，以作为预防与治疗的依据。
【专利附图】
【附图说明】
[0033]图1是本实用新型的较佳实施例的俯视示意图。
[0034]图2是图1的侧视剖面示意图。
[0035]图3是本实用新型的薄膜垫的操作原理示意图。
[0036]图4A至图4F为本实用新型的较佳实施例的实施状态参考图。
[0037]图中符号说明:
[0038]10 基板
[0039]20样品垫
[0040]30吸附垫
[0041]40结合垫
[0042]50薄膜垫
[0043]511第一检测线
[0044]512第二检测线
[0045]521第三检测线
[0046]522第四检测线
[0047]53控制线
【具体实施方式】
[0048]本实用新型的一种阿兹海默症基因检测装置，其包含一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；薄膜垫设有一第一 SNP检测区、一第二 SNP检测区以及一控制线，其中第一 SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线，以及第二 SNP检测区包括一第三检测线以及一第四检测线，第一检测线、第二检测线、第三检测线以及第四检测线分别固定一APOE等位基因的核苷酸探针。所述的阿兹海默症基因检测装置是将样品垫20、吸附垫30、结合垫40、薄膜垫50固定于基板10上而组装成。
[0049]所述的第一 SNP检测区的第一检测线511、第二检测线512各自具有一 APOE等位基因的核苷酸探针，所述APOE等位基因的核苷酸探针彼此之间具有一核苷酸差异，通过第一 SNP检测区的第一检测线、第二检测线讯号，可以判断待侧对象的APOE基因的特定位点的单核苷酸多态性。
[0050]在本实用新型的一较佳实施例中，第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖同一 APOE的rs429358 SNP位点，它们只有一个核苷酸的差异，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.1所示序列，其涵盖的rs429358位点为C，而第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.2所示序列，其涵盖的rs429358位点为T。在本实用新型的另一较佳实施例中，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针亦可具有SEQ ID N0.3所示序列，其涵盖的rs429358位点为C，而第二检测线所具APOE等位基因的核苷酸探针为SEQ ID N0.4所示序列，其涵盖的rs429358位点为T。
[0051]在本实用新型的一较佳实施例中，第三检测线、第四检测线为涵盖APOE的SNPrs7412位点的APOE等位基因的核苷酸探针，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.5所示序列，其涵盖的rs7412位点为C，而于第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID勵.6所示序列，其涵盖的1^7412位点为1'。在本实用新型的另一较佳实施例中，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针亦可具有SEQ ID N0.7所示序列，其涵盖的rs7412位点为C，而第四检测线所具APOE等位基因的核苷酸探针为SEQ ID N0.8所示序列，其涵盖的rs7412位点为T。
[0052]在本实用新型的一较佳实施例中，所述阿兹海默症基因检测装置具有主要如上述所述的结构，除此之外，其中第一 SNP检测区还可包括一第五检测线、一第六检测线，以及第二 SNP检测区还可包括一第七检测线、一第八检测线。
[0053]在本实用新型的一较佳实施例中，第一检测区包括第一检测线、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针，它们为涵盖SNP rs4293582位点的野生型与突变型正义、负义探针，如选自于SEQ ID N0.1至SEQ ID N0.4所示序列的核苷酸探针；而第二检测区包括第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针，它们为涵盖SNP rs7412位点的野生型与突变型正义、负义探针，如选自于SEQ ID N0.5至SEQ ID N0.8所示序列的核苷酸探针。如前所述，当正义、负义探针同时存在时，作为检测结果的准确性的重复确认，而更进一步避免假性检测结果发生。
[0054]在本实用新型的另一较佳实施例中，第一检测线、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针选自于SEQ ID N0.5至SEQ ID N0.8，第一检测线、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针各自为具有SEQ ID N0.5至SEQ ID N0.8所示不同序列的核苷酸探针；而第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针选自于SEQ ID N0.1至SEQ ID N0.4 ;第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八 检测线的APOE等位基因的核苷酸探针各自为具有SEQ ID N0.1至SEQ ID N0.4所示不同序列的核苷酸探针。
[0055]本实用新型藉由下列实施例作为例示说明，以使得所请范畴更为清楚，而不应作为解释保护范围的限制。
[0056]实施例
[0057]阿兹海默症基因检测装置的制造
[0058]如图1与图2所示，本实施例提供一阿兹海默症基因检测装置，其包括一基板10、一样品垫20、一吸附垫30、一结合垫40以及一薄膜垫50，其中基板10的一侧面的一端设置样品垫20，基板10的该侧面的另一端设置吸附垫30，位于样品垫20与吸收垫30之间并与样品垫20邻接设置结合垫40，结合垫40与吸附垫30之间设置薄膜垫50，薄膜垫50横向平行设置有一第一 SNP检测区51以及一第二 SNP检测区52以及一控制线53，其中该第一SNP检测区51包括一第一检测线511和一第二检测线512，该第二 SNP检测区52包括一第三检测线521和一第四检测线522。
[0059]所述的阿兹海默症基因检测装置的制备方式简述如下，其与一般免疫层析检测大致相同。首先提供一基板10、一样品垫20、一吸附垫30、一结合垫40的本体以及一薄膜垫50，所述的基板10为塑料材料所制造而成；所述的样品垫20为玻璃纤维所制成；所述的吸附垫30为纤维纸；所述的结合垫40的本体为玻璃纤维所制成；所述的薄膜垫50为硝化纤维素薄膜。
[0060]所述的结合垫40包括一本体与一标定物，此处的标定物为与胶体金结合的抗-Digoxigenin (Dig)抗体,其能够辨识Dig,而能与经Dig标定的APOE基因片段结合,胶体金的聚集沉淀会呈现肉眼可见的颜色，可藉此判定与标定物结合的标的基因片段的存在与否。结合垫40是藉由将玻璃纤维本体浸溃于含有与胶体金结合的抗-Digoxigenin (Dig)抗体的溶液后干燥而得。
[0061]将卵白素(sti^ptavidin)与经生物素(biotin)标定的具有SEQID N0.3,SEQ IDN0.4、SEQ ID N0.7及SEQ ID N0.8所示序列的探针的混合溶液喷涂于薄膜垫50，形成四条间隔的并行线，形成所述的第一检测线511、第二检测线512、第三检测线521、第四检测线522，如图3所示,藉以分别与rs429358为C、rs429358为T、rs7412为C、rs7412为T的APOE等位基因片段相结合。
[0062]将经生物素标定的rs429358突变型负义探针(注记为MAT)，即经生物素标定的具有如SEQ ID N0.3所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针，通过与卵白素结合而固定于薄膜垫，以形成所述的第一检测线511。
[0063]将经生物素标定的rs429358野生型负义探针(注记为WAT)，即经生物素标定的具有如SEQ ID N0.4所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针，通过与卵白素结合而固定于薄膜垫，以形成所述的第二检测线512。
[0064]将经生物素标定的rs7412野生型负义探针(注记为WAT)，即经生物素标定的具有如SEQ ID N0.7所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针，通过与卵白素结合而固定于薄膜垫，以形成所述的第三检测线521。
[0065]将经生物素标定的rs7412突变型负义探针(注记为MAT)，即经生物素标定的具有如SEQ ID N0.8所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针，通过与卵白素结合而固定于薄膜垫，以形成所述的第四检测线522。
[0066]另于薄膜垫50第四检测线522与吸附垫30之间涂布针对抗Dig抗体的二级抗体(Ant1-Dig secondary antibody),形成控制线53,以辨识标定与胶体金结合的抗Dig抗体，作为阳性反应的对照组。
[0067]将样品垫20、吸附垫30、结合垫40、薄膜垫50固定于基板10上，组装成所述的阿兹海默症基因检测装置。
[0068]由检体准备样品溶液
[0069]取待测对象A、B、C、D、E及F的核酸检体，使用经Dig标定的引物AP0E_A(SEQ IDN0.9)以及APOE-C (SEQ ID N0.10)，进行聚合酶链式反应扩增大小为303碱基对的经Dig标定的APOE基因片段，其涵盖rs429358以及rs7412的SNP位点，并且齐备含有该经标定的APOE基因片段的样品溶液A、B、C、D、E及F。
[0070]以阿兹海默症基因检测装置分析检体
[0071]配合参考图3所示，将前述样品溶液各自施用于一阿兹海默症基因检测装置的样品垫10，使之均匀分布进入结合垫40，该经Dig标定的APOE基因片段于结合垫40中与胶体金结合的抗Dig抗体结合,胶体金结合的抗Dig抗体与经Dig标定的APOE基因片段通过毛细现象继续移动进入薄膜垫50，第一检测线511、第二检测线512、第三检测线521、第四检测线 522 的具有如 SEQ ID N0.3、SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.7 及 SEQ ID N0.8 所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针会专一'丨生的与结合有胶体金结合的抗Dig抗体的经Dig标定的APOE基因片段反应，而胶体金聚集而显现颜色，没有作用的胶体金结合的抗Dig抗体会与控制线53的针对抗Dig抗体的抗体结合而显现颜色。
[0072]样品溶液A施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4A所示，显示样品溶液A中经Dig标定的APOE基因片段与第一 SNP侦测区的第二检测线512以及第二 SNP侦测区的第四检测线522结合，表示检体A的APOE等位基因型为E2/E2型。
[0073]样品溶液B施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4B所示，显示样品溶液B中经Dig标定的APOE基因片段与第一 SNP侦测区51的第二检测线512以及第二 SNP侦测区52的第三检测线521、第四检测线522结合，表示检体B的APOE等位基因型为E2/E3型。
[0074]样品溶液C施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4C所示，显示样品溶液C中经Dig标定的APOE基因片段与第一 SNP侦测区51的第一检测线511、第二检测线512以及第二 SNP侦测区52的第三检测线521、第四检测线522结合，表示检体C的APOE等位基因型为E2/E4型。
[0075]样品溶液D施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4D所示，显示样品溶液D中经Dig标定的APOE基因片段与第一 SNP侦测区51的第二检测线512以及第二 SNP侦测区52的第三检测线521结合，表示检体D的APOE等位基因型为E3/E3型。
[0076]样品溶液E施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4E所示，显示样品溶液E中经Dig标定的APOE基因片段与第一 SNP侦测区51的第一检测线511、第二检测线512以及第二 SNP侦测区52的第三检测线521结合，表示检体E的APOE等位基因型为E3/E4型。
[0077]样品溶液F施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4F所示，显示样品溶液F中经Dig标定的APOE基因片段与第一 SNP侦测区51的第一检测线511以及第二 SNP侦测区52的第三检测线521结合，表示检体F的APOE等位基因型为E4/E4型。
[0078]基于上述检测结果可见，所述样品溶液制备后施用于所述的阿兹海默症基因检测装置，可于单一的步骤于检测线位置呈现颜色，显示检体A-F的来源待检测对象之APOE等位基因型分别为E2/E2型、E2/E3型、E3/E3型、E2/E4型、E3/E4型、E4/E4型，判定所属检
测对象罹患晚发型阿兹海默症的风险分别为低至高。
[0079]
【权利要求】
1.一种阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，该阿兹海默症基因检测装置包含一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；薄膜垫设有一第一 SNP检测区以及一控制线，其中第一 SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线。
2.如权利要求1所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第一检测线、第二检测线分别具有APOE等位基因的核苷酸探针，其中第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异。
3.如权利要求2所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，APOE等位基因的核苷酸探针选自于涵盖APOE的SNP rs429358或rs7412位点的APOE基因序列片段。
4.如权利要求3所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖APOE的rs429358SNP位点。
5.如权利要求4所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，薄膜垫还设有一第二SNP检测区，第二 SNP检测区包括一第三检测线以及一第四检测线，第三检测线以及第四检测线分别具有APOE等位基因的核苷酸探针，其中第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异。
6.如权利要求5所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖APOE的rs7412 SNP位点。
7.如权利要求1至6任一项所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.3所示序列，而第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.2或SEQ ID N0.4所示序列。
8.如权利要求5或6所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.5或SEQ ID N0.7所示序列，而第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.6或SEQ ID N0.8所示序列。
9.如权利要求7所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.5或SEQ ID N0.7所示序列，而第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQ ID N0.6或SEQ ID N0.8所示序列。
10.如权利要求1至6中任一项所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，APOE等位基因的核苷酸探针的大小介于16至25核苷酸，其熔点温度为50°C至65°C。
11.如权利要求1至6中任一项所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第一SNP检测区还包括一第五检测线、一第六检测线，以及第二 SNP检测区更包括一第七检测线、一第八检测线。
12.如权利要求5所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针分别具有SEQ ID N0.3、SEQID N0.4、SEQ ID N0.7 及 SEQ ID N0.8 所示序列。
13.如权利要求11所述的阿兹海默症基因检测装置，其特征在于，第一检测区的第一检测线、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针是选自于SEQID N0.1至SEQ ID N0.4所示序列的核苷酸探针；而第二检测区的第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针是选自于SEQ ID N0.5至SEQ IDN0.8所示序列的核苷酸探针。
【文档编号】C12M1/34GK203582863SQ201320811500
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2013年12月10日 优先权日:2013年5月28日
【发明者】关淑君, 林咏翔, 施惠馨, 黄雪茵, 蔡岳颖 申请人:大江基因医学股份有限公司