与猪产仔数性状相关的分子标记及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于猪分子标记制备与应用【技术领域】，具体涉及一种与猪产仔数性状相关的分子标记及其应用，所述的分子标记从猪PTGS2基因内含子基因片段筛选得到。所述的分子标记的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:1和图4所示，在该序列表SEQ?ID?NO:1的第486bp处有一个A/C碱基突变，该突变导致PCR-BmrⅠ-RFLP多态性。本发明还公开了该分子标记的制备方法及其在与猪产仔数性状关联分析中的应用。本发明为猪产仔数性状标记辅助检测提供了新的标记资源。
【专利说明】与猪产仔数性状相关的分子标记及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及猪分子标记制备【技术领域】，具体涉及一种与猪产仔数性状相关的分子标记及其应用，所述的分子标记从猪PTGS2基因中克隆得到，它包括猪PTGS2基因编码区序列突变位点的检测方法与应用。
【背景技术】
[0002]畜牧业的发展水平是判断国家和地区农业发达程度的关键指标(李顺，2010)。养猪业是畜牧业的重要组成部分，猪肉需求量在中国肉类制品中位居首位。随着人们对繁殖性状的日益重视，产仔数作为最重要的繁殖性状正受到越来越多的关注和研究。Chris指出，将母猪单胎产仔数增加I头，英国养猪业利润将增加7亿元左右。决定产仔数的关键因素是胚胎成活率，而影响胚胎成活率最关键时期为胚胎附植(着床)时期(Bazer etal.，2009)。PGs对于胚泡着床和蜕膜化有着很重要的作用，它能够增强毛细血管通透性及促有丝分裂活性以保证胚胎附植的顺利完成。PTGS2是合成PGs起始阶段重要的限速酶，PGs在生殖过程中能否发挥生理功能取决于PTGS2的表达。与此同时，缺乏PTGS2本身也会导致卵母细胞成熟度遭到破坏，排卵、受精、蜕膜化等过程发生异常。
[0003]猪PTGS2基因定位于9号染色体，全长11.3kb。包含十个外显子，九个内含子。mRNA全长为3596bp。PTGS包括结构型同工酶PTGSl和诱导型同工酶PTGS2。两者在表达调控功能上均有较显著差异。PTGS2能够促进形成癌症，是肿瘤生成的促进剂。另一方面，PTGS2与排卵、胚胎附植、分娩等生理过程密切相关。小鼠实验表明，前列腺素E2(PGE2)受体亚型EP3和EP4在H0XA10 (-/-)小鼠子宫基质中受到P4异常调节，而H0XA11、孕激素受体(PR)等则未受影响。EP3和EP4在子宫中的表达量与野生型小鼠差异较大。这说明在小鼠子宫中H0XA10能特异性介导P4对EP3、EP4的调节。PGs对生殖过程有很重要的作用。卵泡分泌的PGF2a能够让卵巢平滑肌收缩有助于排卵；PGs能够增强毛细血管通透性及促有丝分裂活性以保证胚胎附植的顺利完成；子宫产生的PGF2a能够溶解黄体；分娩时PGF2a能够进一步收缩子宫以利于分娩。PTGS2是合成PGs起始阶段重要的限速酶，PGs生理功能的实现取决于PTGS2的表达。与此同时，缺乏PTGS2本身也会导致卵母细胞成熟度遭到破坏，排卵、受精、蜕膜化等一系列生理过程无法正常完成。PTGS2在胚泡着床及蜕膜化过程中的表达受H0XA10与P4调控。
[0004]常规选择法改良产仔数的缺点很明显，选择过程花费时间较长，耗费金钱较多，准确性有待提高(Johnson et al., 1999 ；Linville et al., 2001)。目前,标记辅助选择(MAS)已作为常规选择法的辅助手段而被广泛应用，大大提高了产仔数性状的改良速度。标记辅助选择(MAS)包括随机引物扩增多态性(RAPD)标记、微卫星标记、PCR-RFLP标记、分子标记与QTL位点的连锁分析方法等(赵西彪，2008)。其中PCR-RFLP因检测不受发育阶段、性别等外部条件的影响，所标记的变异数目不受限制，实用可靠而得到广泛的应用。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，获得一种与猪产仔数性状相关的分子标记，从猪PTGS2基因的编码区序列克隆得到本发明的分子标记，寻找突变位点以及基因多态性的检测方法，为猪产仔数性状检测提供一种分子标记和检测方法。
[0006]本发明的技术方案如下:
[0007] 申请人:克隆得到一种与猪产仔数性状相关的分子标记，它包含猪(国外血缘猪大白猪和中国地方猪血缘猪陆川猪、隆林猪等)PTGS2基因1550bp的序列，其核苷酸序列如下所示:
【权利要求】
1.一种与猪产仔数性状相关的分子标记，其核苷酸序列如下所示:
2.一种扩增如权利要求所述分子标记的引物，其DNA序列如下所示: 正向引物:GTGCACTACATACTTACCCACTTC， 反向引物:AGGCTTCCCAGCTTTTATA。
3.一种与猪产仔数性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于以下步骤: 从大白猪、陆川猪、隆林猪耳缘组织中提取基因组DNA，在位于猪PTGS2基因突变位点附近设计一对引物，该引物的DNA序列如序列表SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3所示，对猪基因组DNA进行PCR扩增和序列测定，得到如权利要求1或序列表SEQ ID NO:1所示的片段，通过序列比对，筛查SNP，再利用SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3所示的引物对进行PCR扩增，将PCR扩增获得的片段进行Bmr I酶切分型及检测。
4.权利要求1所述的分子标记在猪产仔数性状标记辅助选择中的应用。
5.权利要求2所述的引物在猪产仔数性状在标记辅助选择中的应用。
【文档编号】C12N15/10GK103911382SQ201410176235
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年4月27日 优先权日:2014年4月27日
【发明者】赵书红, 陈尚上, 林瑞意, 朱猛进, 李新云, 曹建华, 李长春, 余梅 申请人:华中农业大学