一种胃肠道调理专用奶粉及其制备方法

文档序号:31053665发布日期:2022-08-06 09:43阅读:180来源:国知局
1.本发明属于奶粉
技术领域
:,具体涉及一种胃肠道调理专用奶粉及其制备方法。
背景技术
::2.目前功能性奶粉中添加的功能因子较多,常见的包括糖类、膳食纤维素、多肽、植物蛋白、益生元类、益生菌。奶粉具有各营养要素均衡全面的特点,通过在奶粉中额外增添益生元或益生元联合不饱和脂肪酸,是协助改善胃及肠道功能和稳定肠道菌群的功能性乳制品开发的新方向,同时是国内乳品生产企业的新热点。3.低聚糖和不饱和脂肪酸已广泛运用于调制乳粉、奶粉、乳饮料等产品中。一般认为功能性低聚糖能特异性诱导肠道内益生菌的生长,同时具有促进肠道蠕动和润肠功效。低聚果糖具有能够调节肠道内菌群的作用。目前其作为食品配料或辅料,通常在乳品及特定营养保健功能食品有较多应用。低聚木糖是良好的益生菌增殖的功能因子之一。不饱和脂肪酸也是常添加的功能因子,其中亚油酸具有调节肠道菌群的作用,被广泛用作食品营养补充剂。4.本发明通过对小鼠肠道菌群变化情况和胃肠道调节功能的测定,来探究胃肠道调理专用奶粉对肠道益生作用的影响,以期为充分利用功能性低聚糖和不饱和脂肪酸,开发功能性乳粉和新产品开发提供一定的参考价值。技术实现要素:5.针对上述问题,本发明提供了一种胃肠道调理专用奶粉及其制备方法。6.本发明采用的技术方案为:7.一种胃肠道调理专用奶粉,采用如下重量百分含量配比:乳固体74%~82%、低聚糖1.2%~6%、亚油酸6%~12%、麦芽糖2%~3.5%。8.优选的,采用如下重量百分含量配比:乳固体81.33%、低聚糖6%、亚油酸10%、麦芽糊精2.67%。9.优选的,所述乳固体包括奶粉和乳清蛋白粉,且所述奶粉和乳清蛋白粉按照1:9~9:1混合。10.优选的,所述奶粉和乳清蛋白粉按照9:1混合。11.优选的,所述低聚糖包括低聚果糖和低聚木糖,且所述低聚果糖与低聚木糖按照7:3~9:1混合。12.优选的,所述低聚果糖与低聚木糖按照7:3混合。13.一种胃肠道调理专用奶粉的制备方法,该制备方法包括以下步骤:14.步骤1:将原料奶进行喷雾干燥,得到喷雾干燥后的全脂奶粉;15.步骤2:将步骤1中的全脂奶粉,与乳清蛋白粉、低聚果糖、低聚木糖、亚油酸和麦芽糊精按照一定比例倒入混匀仪内混匀即可。16.本发明的有益效果:17.1、本发明按照乳固体添加量81.33%、低聚糖6%、亚油酸10%、麦芽糊精2.67%配制的胃肠道调理专用奶粉不同剂量组对小鼠润肠通便作用均有良好的作用,且中、高剂量组润肠通便作用效果更显著。且当低聚糖添加量为6g/100g时对促进双歧杆菌和嗜酸乳杆菌的发酵产酸能力最佳,而且当奶粉和乳清蛋白粉的比例为9:1时,双歧杆菌生长情况最好。附图说明18.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。19.图1为本发明中嗜酸乳杆菌336636菌落形态图;20.图2为本发明中动物双歧杆菌乳亚种192320菌落形态图;21.图3为低聚糖在不同配比下给动物双歧杆菌体外奶粉发酵液od值造成的影响;22.图4为低聚糖在不同比例之下给嗜酸乳杆菌体外奶粉发酵液od值造成的实际影响;23.图5为不同复配低聚糖添加量给嗜酸乳杆菌活菌数带来的影响;24.图6为不同乳固体比例给动物双歧杆的菌活菌数带来的影响;25.图7为不同乳固体比例给嗜酸乳杆菌活菌数带来的影响。26.附图标记如下:27.1、叶冠;2、叶冠外壁;3、篦齿;4、缘板台阶;5、机匣壁面;6、光滑曲线。具体实施方式28.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。29.本实施例提供了一种胃肠道调理专用奶粉,采用如下重量百分含量配比:乳固体74%~82%、低聚糖1.2%~6%、亚油酸6%~12%、麦芽糖2%~3.5%。30.其中,所述乳固体包括奶粉和乳清蛋白粉,且所述奶粉和乳清蛋白粉按照1:9~9:1混合。31.其中,所述低聚糖包括低聚果糖和低聚木糖,且所述低聚果糖与低聚木糖按照7:3~9:1混合。32.一种胃肠道调理专用奶粉的制备方法,该制备方法包括以下步骤:33.步骤1:将原料奶进行喷雾干燥,得到喷雾干燥后的全脂奶粉;34.步骤2:将步骤1中的全脂奶粉,与乳清蛋白粉、低聚果糖、低聚木糖、亚油酸和麦芽糊精按照一定比例倒入混匀仪内混匀即可。35.下面通过体外实验低聚糖对益生菌生长情况测定,探究奶粉中低聚糖不同混合比例添加量对肠道益生功能影响,通过不同复配比乳固体作为营养要素,探寻对乳酸菌发酵条件最好的复配比例。挑选出最佳低聚糖复配比添加量及乳固体复配比。36.以乳固体、总低聚糖、共轭亚油酸微胶囊粉为主要原料,感官评价为指标,通过单因素结合正交试验确定调理胃肠道奶粉的最佳配方。37.通过对小鼠肠道菌群变化情况和胃肠道调节功能的测定,来探究胃肠道调理专用奶粉对肠道益生作用的影响。38.1.仪器与设备39.1.1实验菌种40.嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus.336636)、动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacteriumanimalissubsp.192320)来自北钠联创生物科技有限公司。41.1.2实验原料42.表1主要试验原料43.table1maintestmaterials[0044][0045]1.3实验试剂[0046]表2主要购买的试剂[0047]table2mainreagentspurchased[0048][0049]1.4主要仪器和设备[0050]表3主要仪器[0051]table1-3maininstruments[0052][0053]2.实验方法[0054]2.1实验动物[0055]km小鼠72只,均为雌性,新疆医科大学实验室动物中心,许可证号:syxk(新)2021-0003,适应3天,自由饮食。[0056]2.2菌种活化[0057]于安全柜中打开冻干管,将嗜酸乳杆菌和动物双歧杆菌以3%的接种量接种于自配mrs培养基中,37℃在厌氧袋中厌氧培养24h,重复操作。[0058]2.3od值测定[0059]以低聚糖代替常规mrs培养基中的葡萄糖,制成mrs-低聚糖培养基。培养基中低聚果糖与低聚木糖总添加量保持不变,调整不同复配比例,并将以葡萄糖为碳源的培养基设为对照,将嗜酸乳杆菌和动物双歧杆菌以3%接种量接种于各培养基中,培养条件37℃,厌氧环境下24h后,拿出培养基观测增殖情况,测量不同配比组od值,确定最佳低聚糖混合比例,并连续测定培养基48h后600nm处的吸光度(a)。计算两株菌的益生指标pi值按照下面公式计算:[0060][0061]其中,pp0和pp48分别为益生菌培养0h和48h的吸光度(碳源为低聚糖);pg0和pg48分别为碳源为葡萄糖时益生菌培养0h和48h吸光度;pn0和pn48分别为益生菌在无糖培养基培养0h和48h吸光度。[0062]2.4动物双歧杆菌与嗜酸乳杆菌活菌数的测定[0063]奶粉-低聚糖液体培养基:奶粉50g,低聚糖(低聚果糖、低聚木糖):10g蒸馏水1l。以添加不同低聚糖混合比例的奶粉作为培养基,设碳源为葡萄糖为对照组,将预先活化好的两株菌分别以3%接种量接种到不同低聚糖混合比例的奶粉培养基中,培养24h,进行梯度稀释,选择计数方便的梯度进行梯度稀释涂布,对长出的菌落进行计数,挑选出增殖情况最好的配比组作为最优组。[0064]2.5ph值的测定[0065]以添加不同低聚糖混合比例的奶粉作为培养基,设置碳源为葡萄糖的奶粉培养基作为对照组,培养基灭菌后,将预先活化好的两株菌分别以3%接种量接种到不同低聚糖混合比例的奶粉培养基中,培养24h后,取出菌液测定不同组分ph值。[0066]2.6配方奶粉中低聚糖添加量对两种常见益生菌活菌数影响的测定[0067]实验前对菌种进行复壮确保并提高其活力,参考上述实验中得到的低聚糖最佳混合比例,改变低聚糖总添加量,且最大添加量在国家标准gb14880-2012规定范围内,设置12组不同添加量,将复壮完成的两株菌分别以3%接种量接种到不同组份中,培养24小时后,再稀释涂布,对长出的菌落进行观测计数,并挑选出增殖情况最好的组份。[0068]2.7不同比例奶粉与乳清蛋白粉制成的培养基对两种常见益生菌活菌数影响的测定[0069]奶粉乳清蛋白粉-液体培养基:奶粉乳清蛋白粉总共50g(奶粉:乳清蛋白粉=1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1),葡萄糖:10g蒸馏水1l。一共设9组不同混合比例,取第二次复壮的液体培养基,以3%接种量接种于不同组份的培养基中,于厌氧环境中37℃培养24h,再取出梯度稀释及涂布。[0070]2.8奶粉配置原则[0071]根据《中国居民膳食指南科学研究报告(2021)》中指出每日摄入奶及奶制品200-300g,因此设置专用奶粉质量为30g(根据奶粉复配比例为1:8时可与牛奶的营养价值相同,相当于每日饮用270g牛奶),不足30g的用麦芽糊精进行补充。[0072]2.9单因素和正交试验设计[0073]根据配置原则,进行单因素试验设计(以专用奶粉30g计)[0074][0075]1全脂奶粉与乳清蛋白的含量[0076]2低聚果糖、低聚木糖[0077]正交实验因素水平表[0078][0079]正交实验设计方案[0080][0081]2.10动物分组及造模[0082]将72只小鼠随机分为6组:空白组、模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只。[0083]实验动物造模方法参考方圆之等的方法,略做改动。空白组(0.9%生理盐水)、模型组(0.9%生理盐水+9.38mg/kgbw盐酸洛哌丁胺)、阳性对照组(1.25g/kgbw市售奶粉+9.38mg/kgbw盐酸洛哌丁胺)、低剂量组(0.625g/kgbw自制专用奶粉+9.38mg/kgbw盐酸洛哌丁胺)、中剂量组(1.25g/kgbw自制专用奶粉+9.38mg/kgbw盐酸洛哌丁胺)、高剂量组(2.5g/kgbw自制专用奶粉+9.38mg/kgbw盐酸洛哌丁胺)。[0084]空白组和模型组给予0.9%生理盐水,阳性对照组、低、中、高奶粉剂量组分别按照人体推荐量的2.5、1.25、2.5、5倍计算,即1.25g/kgbw、0.625g/kgbw、1.25g/kgbw、2.5g/kgbw灌服相应剂量奶粉,连续灌服14d。第8d开始除空白组其他各组灌服盐酸洛哌丁胺9.38mg/kgbw,每天两次,边造模边给药连续7d。[0085](1)一般状态每日观察实验组及空白组小鼠活动状态情况、毛发颜色变化、体重量变化。实验过程中称量每只动物的体重量并记录下来,分别计算比较空白、其他各组之间体质量变化。[0086](2)专用奶粉对小鼠组织器官的安全性评价第7d后,随机取实验前小鼠,空白组,低剂量组,中剂量组和高剂量组的小鼠各两只,通过脊柱脱位处死动物并打开腹腔以取出各小鼠的小肠,之后进行组织切片观察。[0087]2.11胃肠道调理专用奶粉对洛哌丁胺诱导便秘小鼠的肠道菌群影响[0088]第14d后,新鲜小鼠粪便通过按压和腹部按摩收集至无菌ep管,液氮速冻粪便,与-80℃冰箱保存。每组随机抽三个样本通过干冰寄送方式,送至上海生工有限公司。进行16s微生物分类和测序。提供样本dna并对v3-v4区域进行16srdna扩增,引物序列为:341f:cctacgggnggcwgcag、805r:gactachvgggtatctaatcc。将纯化的扩增产物连接到测序器以建立测序数据库并在illumina平台上对其进行测序。[0089]2.12小鼠排便实验[0090]在2.11实验后,各小组小鼠禁食但正常饮水12h,除空白组,其他各组小鼠灌服盐酸洛哌丁胺(9.38mg/kgbw)30min后灌服0.4%的伊文思蓝(10ml/kgbw)并开始计时,单个饲养每只实验老鼠,自由进食和饮水,观察并记录第一次排便时间、第一次排蓝便时间及6h排便总粒数。[0091]2.13小鼠小肠推进实验[0092]该实验参考彭禛菲等的肠推进方法。在1.2.6实验后,各小组小鼠禁食但正常饮水12h,除空白组,其他各组小鼠灌服盐酸洛哌丁胺(9.38mg/kgbw)30min后灌服0.4%的伊文思蓝(10ml/kgbw),二十分钟后,处死实验各组小鼠。打开其腹腔,收集从幽门到回盲部的肠道。轻轻拉直肠道,测量小肠的总长度,计算伊文思蓝在小鼠小肠内的推进率。[0093]伊文思蓝推进概率(%)=伊文思蓝推进长度(cm)/小肠总长度(cm)×100[0094]2.13数据处理[0095]实验数据分析采用spss26、excel2016进行处理,结果用“”表示。p<0.05表示统计学上有差异显著。[0096]3.结果与分析[0097]3.1菌种活化情况[0098]如图1所示,嗜酸乳杆菌336636菌落形态:大小为1-2mm,形状为:圆形,颜色为白色,隆起度为扁平,质地粘稠。[0099]如图2所示,动物双歧杆菌乳亚种192320菌落形态:大小为2mm,形状为:圆形,颜色为乳白色,隆起度为扁平,质地湿润容易挑起。[0100]3.3不同混合比例的低聚糖对两种益生菌体外发酵液od值的影响[0101]低聚果糖(fos)与低聚木糖(xos)不同混合比例对接种双歧杆菌发酵液od值的影响效果如图3所示,添加低聚糖配比组均比对照组检测的od值有显著提高,说明双歧杆菌可利用复配低聚糖来发酵生长。当混合比例7∶3时,双歧杆菌od值为1.632a,细菌浓度最高,其次是8∶2,od值为1.615a,与7∶3配比组无显著差异(p>0.05),说明对于双歧杆菌来说,利用7∶3混合比例的低聚糖发酵同8∶2混合比例效果相似。[0102]fos与xos不同混合比例对接种嗜酸乳杆菌发酵液od值的影响可知,所有混合形式所测得的od值均显著高于葡萄糖对照组(p<0.05),表明以混合形式添加低聚糖对嗜酸乳杆菌生长产生明显促进作用(p<0.05),即也表现出复配寡糖对嗜酸乳杆菌增殖效果优于单一寡糖。低聚果糖与低聚木糖相比,低聚果糖对嗜酸乳杆菌增殖效果更好。如图4所示,当混合比例为7∶3时,od值达到最大,为1.422,并显著高于其他配比组(p<0.05),说明对嗜酸乳杆菌来说,当混合比例达到7∶3时生长效果达到最好。[0103]两株菌在分别以最佳复配低聚糖为唯一碳源、葡萄糖为唯一碳源、无糖mrs培养基下发酵48h后经过计算的益生指标pi值如下表。[0104]表7两菌株培养48h后发酵液的pi值[0105][0106]两株乳酸菌对复配低聚糖的利用程度不同。两株乳酸菌发酵复配低聚糖的pi值均达到了0.6以上,表明其有很好的增殖效果。两株菌相比,嗜酸乳杆菌的pi值大于动物双歧杆菌,体现出嗜酸乳杆菌比动物双歧杆菌在此条件下有更强的发酵能力,两种乳酸菌以相同碳源的培养基发酵,嗜酸乳杆菌相比于其他乳酸菌增殖效果更好。对复配低聚糖嗜酸乳杆菌表现出更强的利用能力。原因可能为不同菌株分泌不同的糖苷酶,不同菌株擅长水解不同链长的低聚糖。[0107]3.3不同混合比例的低聚糖对两种益生菌活菌数的影响[0108]不同混合比例低聚糖对双歧杆菌活菌数的影响可知,奶粉中低聚糖混合比例不同,测得活菌数也不同。添加低聚糖的配比组活菌数明显要比未添加低聚糖的对照组高(p<0.05)此结果同时表明低聚糖对双歧杆菌的生长有一定促进作用。说明fos和xos以混合形式加入到奶粉中能够促进双歧杆菌的生长繁殖。当混合比例为7:3时活菌数达到最高,为8.03×107cfu/ml,并且显著高于对照组以及其他配比组(p<0.05)。[0109]奶粉中添加不同混合比例的fos和xos对嗜酸乳杆菌的影响可知。奶粉中以不同混合比例添加低聚糖配比组中活菌数显著高于不添加低聚糖碳源为葡萄糖的对照组(p《0.05),说明低聚糖以混合形式加入奶粉中也能够对嗜酸乳杆菌的生长产生促进作用。其中比例为7:3时,嗜酸乳杆菌活菌数达到最高,为5.58×107cfu/ml,其次是9:1,两组之间无显著差异(p>0.05)。[0110]3.4不同混合比例的低聚糖对ph值的影响[0111]奶粉中添加不同低聚糖混合比例对接种双歧杆菌的ph值影响可知,不同低聚糖配比组间ph值不同,所有添加低聚糖的奶粉ph值均显著低于未添加低聚糖的对照组(p《0.05)。说明双歧杆菌可以利用复配低聚糖来发酵产酸,并且产酸量明显大于奶粉对照组。比值为7:3时,测得ph值最低,为4.19,与对照组相比,下降6.05%。比值为8:2时,ph值为4.21,与对照组相比下降5.61%,并且两组之间没有显著差异(p》0.05),表明双歧杆菌利用7:3和8:2两种低聚糖混合比例的产酸量相近,并且明显优于其他配比组(p《0.05)。[0112]奶粉中添加不同低聚糖混合比例对嗜酸乳杆菌ph值影响可知,加入混合低聚糖的奶粉ph值均显著低于不加低聚糖的对照组(p《0.05)。混合比例7:3时,ph最低4.39,与对照组相比ph值下降5.59%差异显著(p《0.05)。其次是8:2这一配比组,ph结果为4.41,与对照组相比下降5.16%差异显著(p《0.05)。当比例为9:1时,ph值4.40,三个配比组均显著低于其他配比组(p《0.05),但是三组之间无显著差异(p》0.05)。说明配方奶粉中gos和fos混合比例为7:3及8:2和9:1时,生长效果最佳。[0113]3.5奶粉中不同低聚糖添加量对益生菌活菌数的影响[0114]奶粉中低聚糖不同添加量对肠道益生功能有不同影响,根据上述结果确定的低聚糖最佳配比,改变低聚糖总添加量,以不添加低聚糖的奶粉培养基为对照组,测定活菌数增殖情况。不同总低聚糖添加量对双歧杆菌的影响结果可知,添加低聚糖奶粉组中双歧杆菌活菌数全显著高于对照组(p《0.05)。随着低聚糖添加量增高,双歧杆菌活菌数有逐步增长的趋势。当总添加量为6g/100g时,菌落数达到最高为1.62×108cfu/ml,其次是5g/100g、5.5g/100g剂量组,三个剂量组之间没有显著性差异(p》0.05),且均显著高于其他剂量组(p《0.05)。[0115]添加不同剂量混合低聚糖对嗜酸乳杆菌活菌数的计数结果如图5,不同总低聚糖添加剂量对嗜酸乳杆菌的生长作用不同,且均显著优于不添加低聚糖的对照组(p《0.05),说明奶粉中复配低聚糖的添加对嗜酸乳杆菌生长繁殖起促进作用。随添加剂量的增加,嗜酸乳杆菌活菌数也随之增高。当添加剂量6g/100g时,嗜酸乳杆菌生长效果最佳达到7.2×107cfu/ml,且显著高于对照组以及其他几个配比组(p《0.05)。当添加量为1g/100g,嗜活菌数最低为5.87×107cfu/ml,显著低于其他配比组(p《0.05),分析原因可能是由于碳源不足,并不能较好的促进双歧杆菌、乳酸菌的增殖。[0116]3.6胃肠道调理专用奶粉中不同乳固体混合比例对益生菌活菌数的影响[0117]乳固体不同混合比例对双歧杆菌活菌数的影响如图6,乳固体之间混合比例不同,所测得的活菌数也不同。所设配比组中,当奶粉比例不断提高,乳清蛋白粉比例不断降低时,活菌数呈现上升趋势,且当奶粉与乳清蛋白粉比例达到9:1时活菌数达最高为2.79×108cfu/ml,且远高于其他配比组(p《0.05),说明当乳固体比例为9:1时最利于双歧杆菌的生长增殖。[0118]乳固体不同混合比例对嗜酸乳杆菌活菌数的影响如图7,乳固体之间混合比例不同,所测得的活菌数也有所差异。当比例9:1时双歧杆菌活菌数达到最高1.25×108cfu/ml,且远高于其他配比组(p《0.05),其次是比例6:4时双歧杆菌活菌数为9.75×107cfu/ml,两配比组存在显著差异(p《0.05),说明当奶粉与乳清蛋白粉比例达到9:1时最利于嗜酸乳杆菌增殖。[0119]3.7单因素与正交试验[0120]乳固体最佳添加量为24g、低聚糖最佳添加量为1.8g、亚油酸最佳添加量为3.15g。[0121]润肠通便专用奶粉配方:以30g计各组分添加量分别为乳固体添加量81.33%、低聚糖6%、亚油酸10%、麦芽糊精2.67%。[0122]3.8胃肠道调节功能的测定和小鼠肠道菌群变化情况[0123](1)整个实验中,小鼠基本状态正常,活动量、毛色均无异常。小鼠体重在实验前各组小鼠之间无显著性差异(p>0.05),实验7d后空白组和其他各组比较无显著差异(p>0.05),表明灌胃生理盐水和胃肠道调理专用奶粉未对小鼠体重产生影响,实验14d后空白组与模型组、阳性对照组、低剂量组差异显著(p<0.05),表明盐酸洛哌丁胺对小鼠体重有一定影响,从体重增长数值看,盐酸洛哌丁胺会减缓小鼠体重增长速度。这一结论与黄小丽等在研究在研究造模组与空白组在体重、粪便含水量及口肛传输时间上有统计学差异结论相一致。此外,实验过程中,小鼠的粪便形状正常,未出现便秘、腹泻以及未出现其他不良症状,表明复配功能性低聚糖和共轭亚油酸的胃肠道调理专用奶粉对小鼠生长状况无不良影响。[0124](2)组织切片观察发现各剂量组小鼠小肠壁杯状细胞完整,空白组和各剂量组没有明显差异,说明添加两种低聚糖和共轭亚油酸的专用奶粉对小鼠的小肠没有损坏。[0125](3)与空白组比较,模型组小鼠首粒排便时间、首粒排蓝便时间显著增加(p<0.05)、6h排便总粒数显著减少(p<0.05),说明便秘模型造模成功。与模型组比较,阳性对照组首次排便时间和6h排便粒数没有显著差异(p>0.05),表明市售奶粉虽然有一定胃肠道调理作用但不明显,阳性对照组与低剂量组在首次排便时间、排蓝便时间、6h排便总粒数均没有显著差异,表明低剂量专用奶粉作用效果与市售奶粉作用相似。自制胃肠道调理专用奶粉具有显著促进便秘小鼠首次排便时间和首次蓝便时间的作用,且呈剂量相关性。增加胃肠道调理专用奶粉的剂量,则增加了促进小鼠排便的效果。实验结果与翟红梅在探究益生元奶粉对大鼠排便的影响实验结果相类似。而不同剂量组之间的6h排便粒数没有显著差异(p>0.05),分析原因可能与粪便大小不同、以及粪便软硬程度和含水量不同。[0126](4)模型组伊文思蓝的推进率与空白组伊文思蓝的推进率相比有显著差异(p<0.05),这说明在盐酸洛哌丁胺作用下成功建立了小鼠的便秘模型。小鼠灌胃不同剂量胃肠道调理专用奶粉14d后,墨汁推进率在阳性对照组与模型组间无显著差异(p<0.05),而低、中、高剂量组小鼠的伊文思蓝推进率较模型组均有明显增加(p<0.05),说明胃肠道调理专用奶粉可以促进小鼠的肠道蠕动,并且随着剂量的增加,伊文思蓝推进率也随之提高。而市售奶粉虽有作用,但表现不明显。此结论与刘萌颖等在探究奶粉中不同低聚糖添加量对小鼠润肠通便肠推进的影响作用结果相一致。表明含有低聚糖和亚油酸的胃肠道调理专用奶粉可以促进和增强小鼠小肠的推进力。而低剂量组和中剂量组体现出相似的推进率。[0127](5)采用16srdna微生物分类测序技术分析小鼠粪便菌群组成,结果发现,在门水平,小鼠肠道菌群主要由bacteroidetes(拟杆菌门)、firmicutes(厚壁菌门)、proteobacteria(变形菌门)组成,在属水平,粪便菌群组成最显著的变化是lactobacillus的丰度增加;空白组和模型组的丰度只有7.84%和7.34%,而高剂量组的lactobacillus的丰度已经达到29.3%,证明洛哌丁胺药物对小鼠菌群的影响,同时表明胃肠道调理奶粉可以通过益生肠道有益菌从而达到胃肠道调理的作用。[0128]4讨论[0129]4.1奶粉中低聚糖混合比例的确定[0130]本实验通过对乳酸菌od值、ph值和活菌数的测定来确定低聚果糖与低聚木糖的最佳混合比例,在od值的测定中,双歧杆菌od值结果显示,fos与xos混合比例为7:3和8:2时生长较好,与对照组相比分别提高了12.32%和11.15%,呈显著性差异(p《0.05)。嗜酸乳杆菌od值测定中,比例7:3时,菌落浓度较高,显著高于其他配比组(p《0.05)表明培养基中加入复合低聚糖优化培养基碳源后可以使其od值显著提高。有研究者发现在乳制品中添加复配低聚糖发酵植物乳杆菌,能够显著其生长速度。综合比较两种益生菌对复配低聚糖的利用情况来看,配比为7:3时,对乳酸菌促进生长效果最好。[0131]在嗜酸乳杆菌测定中,7:3时生长达到最佳效果,9:1配比组与7:3配比组没有显著差异(p>0.05),可以看出嗜酸乳杆菌对低聚糖混合比例为7:3和9:1时利用效果相似,综合考虑,最优低聚糖混合比例为7:3。[0132]益生元无法被人体很好的消化吸收,但可促进人体肠道内益生菌的生长,在肠道益生菌增殖时,会产生大量短链脂肪酸,导致ph下降,本试验根据测定添加不同低聚糖混合比例奶粉的ph值来进一步确定低聚糖最佳配比。两种益生菌均可以利用配方奶粉中的混合fos和xos来发酵产酸。双歧杆菌测定中,比例为7:3和8:2时,ph值最低且无显著差异,说明双歧杆菌对这两种低聚糖混合比例利用效果较好。在嗜酸乳杆菌ph值测定中,7:3和8:2及9:1时ph值较低三者没有显著差异(p《0.05),但都显著低于其他配比组(p《0.05)。考虑到两种益生菌,比例7:3时对促进两种菌的发酵产酸能力最佳。在od值、活菌数及ph值测定中,均表明低聚糖混合比例为7:3时,对两种菌的促生长效果最佳。因此,最终确定奶粉中低聚糖混合比例为7:3。益生指标测定中相比于双歧杆菌,嗜酸乳杆菌能够更好的利用复配低聚糖。[0133]4.2奶粉中低聚糖添加量对益生菌活菌数的影响[0134]在活菌数测定中,添加低聚糖的配方奶粉可以有效促进乳酸菌的生长,随着低聚糖添加量的增高,两种菌的活菌数也逐渐升高。在双歧杆菌测定中,当添加量为6g/100g、5.5g/100g、5g/100g时,活菌数显著高于其他剂量组及对照组(p《0.05),且三组之间没有明显差异(p》0.05)。在嗜酸乳杆菌活菌数测定中,当添加量为6g/100g时活菌数最高。综合两种益生菌,6g/100g两种低聚糖添加量对双歧杆菌和嗜酸乳杆菌的生长有较好的促进效果。同时也得出随着培养基碳源含量的提高,乳酸菌的菌体数量也出现相应的增长。[0135]4.3奶粉中乳固体比例对益生菌活菌数的影响[0136]通过体外发酵试验对奶粉中不同混合比例的乳固体进行研究,在对双歧杆菌活菌数的测定中,当奶粉和乳清蛋白粉的比例为9:1时,双歧杆菌生长情况最好。在对嗜酸乳杆菌活菌数的测定中,当乳固体配比为9:1和6:4时两者没有显著差异,但都显著高于其他配比组(p《0.05)。综合两种菌的生长情况最终确定奶粉和乳清蛋白粉混合比例为9:1。[0137]4.4对肠道菌群的影响[0138]大量研究表明,亚油酸具有调节肠道菌群,影响肠道微生态的潜在功能。通过给大鼠灌服功能性低聚糖可以调节其体内肠道菌群,促进胃肠道蠕动。本试验通过对小鼠肠道菌群及胃肠道调理效果的测定,探究胃肠道调理专用奶粉中复配低聚糖和共轭亚油酸对肠道益生功能的影响。实验结果表明胃肠道调理专用奶粉可缩短小鼠首粒排便时间、增加伊文思蓝推进率,改善小鼠的便秘症状,调节小鼠肠道菌群,不影响小鼠小肠壁的杯状细胞,具有润肠通便的作用。[0139]5结论[0140]本实验通过对双歧杆菌和嗜酸乳杆菌生长情况的测定,探究配方奶粉中低聚果糖和低聚木糖不同添加量及不同混合比例乳固体对益生功能的影响,以两种益生菌od值pi值、活菌数和ph值为指标,确定低聚果糖和低聚木糖的最佳混合比例为7:3,配方奶粉中总低聚糖添加量为6g/100g,奶粉与乳清蛋白的最佳混合比例为9:1,作为本实验最终奶粉配方的低聚糖和乳固体含量的确立。[0141]润肠通便专用奶粉配方:以30g计各组分添加量分别为乳固体添加量81.33%、低聚糖6%、亚油酸10%、麦芽糊精2.67%。[0142]胃肠道调理专用奶粉不同剂量组对小鼠润肠通便作用均有良好的作用,且中、高剂量组润肠通便作用效果更显著,同时验证在奶粉中添加复配低聚糖和不饱和脂肪酸达到润肠通便的可行性,此项研究结果为低聚糖和不饱和脂肪酸在功能性奶粉的应用开发提供一定理论支持。[0143]以上所述,仅用以说明本发明的技术方案而非限制,本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其它修改或者等同替换,只要不脱离本发明技术方案的精神和范围,均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。当前第1页12当前第1页12
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