专利名称：燕子掌中有效降低血糖成份3－甲基－2－丁烯基异胍及其制法的制作方法
技术领域：
本发明涉及燕子掌中有效降低血糖成分3-甲基-2-丁烯基异胍及其制法。是以景天科青锁龙属的燕子掌中药材为原料提炼的天然降糖化合物3-甲基-2-丁烯基异胍，属于用中药材提纯化合物的技术领域。
目前治疗糖尿病的药物品种虽多，但大部分西药有副作用，并有后期继发性失效的问题，也有一些中成药品种，但效果都不太明显；燕子掌中含有降糖成分，1991年3月丁庆和丁鉴曾在日本申请专利，申请号为3-81585，公开号为5-178749，名称为“降血糖剂”认为其制剂中至少含有其所提出的两种化合物一种，并给出两种化合物的结构式，但提出的化合物未命名，结构式复杂，分子量很大，是从鲜燕子掌的绿叶中提取的，1995年11月24日丁鉴又在中国专利局申请了号为95117499.名称为“从燕子掌等植物中提取降血糖与营养物质的新工艺”，所用工艺是酒精超声萃取工艺，提取的物质是不知为何种成分的DSP原粉，1997年丁庆又在中国专利局申请名称为“燕子掌多糖”的专利申请，申请号为97112555.5，这种燕子掌多糖也是一种未知成分的物质。丁庆及丁鉴在日本申请过第一个专利后在中国申请的两个专利中再未提及第一次申请中提到的两种化合物。
本发明的目的是从燕子掌中提取降血糖的有效化学成分，准确的确定化学成分和结构式，并研讨出最合理的制造工艺。
本发明的目的是以下述方案实现的经对燕子掌的分离提取，根据物化性质及光谱分析鉴定确定燕子掌中主要降糖成分为3-甲基-2-丁烯基异胍，分子式为C6H13N3分子量为127.18，熔点为108℃，化学结构式
经检索本化合物为世界首次发现，并经四川中药研究所药理室按“新药研究指南”中的技术规范进行动物试验证明为有效降血糖化合物，其动物药理实验结果如表1所列表一连续ig 3-甲基-2-丁烯基异胍(C6H13N3)7天对四氧嘧啶高血糖鼠的血糖影响
注1．大剂量组为口服3-甲基-2-丁烯基异胍，每公斤每日25毫克2．小剂量组为口服3-甲基-2-丁烯基异胍，每公斤每日12.5毫克3．与模型对照比较′P＜0.05；″P＜0.01。
3-甲基-2-丁烯基异胍纯品的制备方法方法1将燕子掌三次水煮、过滤、浓缩后的浸膏，用2倍于浸膏75％乙醇浸泡9小时后，过滤并收集滤液。然后，再将滤渣用75％乙醇浸泡9小时(乙醇量为滤渣量的2倍)，过滤并收集滤液。如此反复5次，收集5次合并醇溶液，减压回收乙醇得浸膏。将浸膏分散于水中，加浓氨水于水中，使PH值达到11。用乙酸乙酯和正丁醇萃取，将萃取液减压浓缩得浸膏，再用丙酮将浸膏溶解，除去不溶物，减压回收丙酮得浸膏。将所得浸膏拌上2.5倍量的碱性硅胶H(200-300目)，用1kg碱性硅胶上柱。先用氯仿甲醇∶水=80∶10∶1的溶剂洗脱，流速2ml/min.cm2，收集洗脱液。再用氯仿甲醇∶水=7∶3∶1的溶剂洗脱，流速1ml/min.cm2，合并两次洗脱液，经浓缩结晶，得白色针状结晶体-3-甲基-2-丁烯基异胍(纯度在97％以上)。其化学结构，理化性质鉴定见后文燕子掌的化学成分分离提取与结构鉴定。
方法2将燕子掌饮片加入2倍量水浸渍4小时，再加入10倍量水，煮沸2小时，收集第一次滤液，将第一次滤渣加入8倍量水，煮沸2小时后过滤，收集第二次滤液，再将第2次滤渣加入5倍量水，煮沸2小时后过滤，收集第3次滤液，合并3次滤液，水浴上浓缩至饴糖状流浸膏，拌入等量硅胶，装入索氏提取器，用乙酸乙酯，丙酮两种溶剂抽提。
将乙酸乙酯部抽提物和丙酮部抽提物分别进一步分离、纯化，分别得到两种白色针状晶体，经鉴定是同种化合物3-甲基-2-丁烯基异胍。纯度在97％以上化学名3-甲基-2-丁烯基异胍化学结构式 分子式C6H13N3分子量127.18熔点108℃(实测值)化学结构鉴定
红外吸收光谱(IR)数据测定表
核磁共振氢谱1H NMR)测定数据表1H NMR)数据
核磁共振碳谱(13C NMR)测定数据表
质谱测定数据表质荷比(m/z)相对丰度备注实测值127(M+) 126(M-H)+112(M-CH3)+112(M-CH3)+84(M-CH3N3)+70(M-CH3N2)+
本发明的优点通过深入细致的科研工作，首次发现燕子掌中降糖有效成分，3-甲基-2-丁烯基异胍；并对制剂作了大量的动物药理，毒理实验和临床实验，证明对四氧嘧啶大、小鼠的血糖、体重、月存活率均有显著的保护效果；本发明的制备工艺，先制成饮片，再按中药技术规范制成本发明产品，质量稳定可控，疗效可靠，安全。与上述提及的燕子掌多糖或DSP原粉不同，本发明降糖化学物质为首次发现的新化合物，3-甲基-2-丁烯基异胍，有明确的命名、分子式、结构式和熔点，尤其值得提出的是本发明的制备工艺用的是传统中药制备工艺，上述提及的相关专利用的是生物制药工艺，本发明是先将燕子掌全草按中药饮片制备工艺制成饮片，饮片是一种稳定的原料，有便于运输、贮存，不会变质等优点，而相关专利用的是燕子掌的鲜叶，资源利用率很低，本发明有两种不同的工艺，可繁可简，制成的3-甲基-2-丁烯基异胍的含量也不同，且提取出来的物质结构明确，分子量小，比多糖，DSP原粉等混合物质，降糖机理清楚，胍类的降糖性质已被公认，生产时质量标准可控。是运用先进的科学技术与传统中医药理论和实践相结合而开发的新产品。保留了西药有效成分明确，作用机理清楚，质控指标严格，疗效稳定和中药的纯天然本质，毒副作用小的特点。
实施例1本发明涉及的中药材-燕子掌植物，为景天科青锁龙属，原产地在南非，世界各地广泛栽培为观赏植物，学名Crassula argenteaThunb)记载在(InBailey,Mauu Cult PL,456,1949)，《北京植物杂志》有详细描述。
燕子掌Crassula argentea Thunb In Bailey,Mauu Cult PL,456,1949)常绿肉质亚灌木。株高50-100厘米，大者可达2米。茎肥厚，圆柱状，基部木质化，多二歧对称分枝成-整齐美观树形。叶对生，肥厚，内质，例卵形、长圆形匙形，长2-5厘米，宽1.5-2.5厘米，先端圆钝，基部渐狭，不成柄状，亦不相连接，全缘，亮绿色，无毛。花10余朵成密集圆锥花序；花白色或淡粉色，长8-10毫米，5数；花瓣狭，有短尖头，栽培通常不开花。
原产地南非，世界各地广为栽培，作为观赏植物。
本发明涉及的燕子掌植物已开始规模种植。经北京师范大学生物系贺士元教授鉴定；与原产于南非的燕子掌是同种植物。经发明者开发研究，采用高温、高湿、高紫外线条件及合理栽培管理，标志植物性成熟的开花特征，种植期2-3年后，已在温室棚内开花。
实施例2燕子掌的药用及中药饮片的制备燕子掌作为降低血糖的中药单方制剂。首先应对燕子掌植物所含有效降低血糖的化学成分3-甲基-2-丁烯基异胍的含量进行测定，以确定植物的药用部位和采收时间，应用高效液相法测定结果如表一、表二所示。
表一燕子掌植物各饮片部位3-甲基-2-丁烯基异胍含量
表二南非(纳米比亚)原产植物燕子掌一年生饮片枝、叶中3-甲基-2-丁烯基异胍含量。
由含量测定燕子掌植物的药用应全草入药，还可看出，栽培的燕子掌植物降低血糖的有效成分含量超过南非原产燕子掌植物降低血糖的有效成分含量。一年生全草植物总含量平均值为2.06％，两年生全草植物总含量平均值为2.96％，三年生全草植物总含量平均值为2.76％。由于该植物属亚灌木，一年后有的部位开始木质化，亩产量没有大的提高。因此，本发明认为采收时间，无论从有效成分含量评价，还是综合经济指标评价，以一年生植物全草入药为宜。
实施例3燕子掌饮片的制备将燕子掌植物连根拨起，凉晒使其水分失去30％左右，用清水洗净，切成长5-8厘米，宽2-3厘米条块状。在阳光下或送干燥机中以低于60℃温度进行振动流化干燥，使其含水率低于10％，杂质含量低于3％以下的技术规范。整个加工过程使燕子掌鲜品加工成中药饮片，得率为5％左右。
权利要求
1.一种燕子掌中有效降糖成分3-甲基-2-丁烯基异胍，其特征在于此降糖物质的主要降糖化合物为首次发现的天然降糖化合物，3-甲基-2-丁烯基异胍，分子式为C6H13N3，分子量为127.18，熔点为108℃，化学结构式
2.一种燕子掌中有效降糖成分3-甲基-2-丁烯基异胍物质的制备方法，其特征在于将燕子掌饮片三次水煮、过滤、浓缩后的浸膏，用2倍于浸膏75％乙醇浸泡9时后，过滤并收集滤液；然后，再将滤渣用75％乙醇浸泡9小时(乙醇量为滤渣量的2倍)，过滤并收集滤液；如此反复5次，收集5次合并乙醇溶液，减压回收乙醇得浸膏，将浸膏分散于水中，加浓氨水于水中，使PH值达到11，用乙酸乙脂(和正丁醇萃取，将萃取液减压浓缩得浸膏，再用丙酮将浸膏溶解，除去不溶物，减压回收丙酮得浸膏，将所得浸膏拌上2.5倍量的碱性硅胶H(200-300目)，用1kg碱性硅胶上柱，先用氯仿甲醇∶水=80∶10∶l的溶剂洗脱，流速2ml/min·cm2，收集洗脱液，再用氯仿∶甲醇∶水=7∶3∶1的溶剂洗脱，流速1ml/min·cm2，合并两次洗脱液，经浓缩结晶，得白色针状结晶体-3-甲基-2-丁烯基异胍，纯度在97％以上。
3.一种燕子掌中有效降糖成分3-甲基-2-丁烯基异胍的制备方法，其特征在于将燕子掌饮片加入2倍水浸渍4小时，再加入10倍量水，煮沸2小时，收集第一次滤液；将第一次滤渣加入8倍量水，煮沸2小时后过滤，收集第二次滤液，再将第2次滤渣加入5倍量水，煮沸2小时后过滤，收集第3次滤液，合并3次滤液，在水浴上浓缩至饴糖状流浸膏，拌入等量硅胶，装入索氏提取器，用乙酸乙酯、丙酮两种溶剂抽提，将乙酸乙酯部抽提物和丙酮部抽提物分别进一步分离、纯化分别得到两种白色针状晶体，经鉴定是同种化物3-甲基-2-丁烯基异胍，纯度在97％以上。
全文摘要
本发明为燕子掌中药有效降糖成分3－甲基－2－丁烯基异胍及其制备方法,天然降糖化合物3－甲基－2－丁烯基异胍为首次发现,分子式为C
文档编号A61P3/00GK1300731SQ0013588
公开日2001年6月27日 申请日期2000年12月21日 优先权日2000年12月21日
发明者王福东, 杨家友, 万尧德, 汪汉卿 申请人:王福东