专利名称：海狸獭医药胸腺素注射液及其制造方法
技术领域：
本发明属于含来自哺育动物胸腺的医药用品技术领域，涉及一种海狸獭医药胸腺素注射液。
胸腺素又名胸腺肽是哺育动物胸腺产生的一簇多肽类物质，具有控制和调节动物免疫反应的作用，目前已被用于治疗免疫缺陷病以及多种免疫功能紊乱性疾病。常用的提取胸腺素的原料为小牛胸腺和仔猪胸腺，由于原料有限，导致成本极高，使胸腺素成为临床应用上的紧俏药物。中国发明专利公报1993年9月台22日公开了一篇“人胎胸腺素的制备方法”(公开号CN1076361A)专利申请，该专利申请介绍了用5-8个月龄的正常胎儿的胸腺组织制备胸腺素的方法。很显然采用此种方法制备胸腺素，其原料来源更加有限，其制造成本更加高昂，其推广应用是很困难的。
本发明的目的是要提供一种具有资源丰富、制备的注射液活性高、无毒性、临床应用安全有效的海狸獭医药胸腺素注射液及其制造方法。
海狸獭又名海狸鼠、海狸、河狸，系草食哺育动物。海狸獭易人工养殖，繁殖率高，人工养殖成本低，目前，全国各地如山东省、黑龙江省、河北省、湖南省等地都有大量人工养殖，主要用于肉食。因此，用海狸獭胸腺提取胸腺素，资源十分丰富。
本发明的目的是用以下方式来实现的。海狸獭医药胸腺素注射液是从海狸獭胸腺提取的一簇多肽类物质，其胸腺素透析物活性高，其分子量小于10000，主要成分分子量小于6000。该注射液胸腺素多肽含量7-10毫克/毫升，活性测定E-玫瑰花结平均值25-28％，收率7-10克胸腺素/千克。
本发明制造海狸獭医药胸腺素注射液的方法包括以下工艺过程1、提取胸腺在宰杀后的海狸獭身上提取新鲜胸腺，2、匀浆将新鲜胸腺除去脂肪，切成碎块置于高速组织捣碎机内，按每公斤胸腺加2-4升生理盐水，捣碎3-7分钟使成匀浆，冷冻离心机离心2000-4000转/分、7-13分钟得提取液，3、加热去杂蛋白将提取液于水浴中迅速加热至80-90℃，保持12-18分钟，迅速冷却至10℃以下，离心除去沉淀，收集清液，4、丙酮沉淀清液冷至4℃，加入4-6倍体积的-8--12℃丙酮于-8--12℃放置3-5小时，过滤收集沉淀，真空干燥得丙酮粉，5、分段盐析将丙酮粉溶于PH6.8-7.2磷酸盐缓冲液，使每毫升含蛋白质23-28毫克，加入PH6.8-7.2的饱和硫酸铵溶液使达23-28％饱和度，离心除去沉淀，上清液调PH3.8-4.2，加硫酸铵使饱和度达48-52％，离心收集盐析物，6、脱盐、干燥盐析物用冷含水丙酮反复重结晶脱盐，至检查无硫酸盐后，冷丙酮洗1-3次，次乙醚洗1-3次，抽干，真空干燥，
7、超滤将脱盐干粉溶于生理盐水并调PH7.0-7.5超滤，得超滤液，8、制剂将超滤液无菌灌装于安瓿瓶中，熔封得所需成品。
本发明的制造方法操作简单，适于大批量生产，采用加热去蛋白工序使蛋白凝固较完全，易于除去；利用冷含丙酮对盐析物进行重结晶脱盐，大大缩短时间，减少了污染机会。因而用本发明方法制造的海狸獭医药胸腺素注射液活性高，无毒性，无热源，临床应用安全有效。
下面是本发明的非限定性实施例在宰杀后的海狸獭身上提取新鲜胸腺，将新鲜胸腺除去脂肪，切成碎块置于高速组织捣碎机内，按每公斤胸腺加3升生理盐水，捣碎5分钟使成匀浆，冷冻离心机离心3000转/分、10分钟得提取液，将提取液于水浴中迅速加热至85℃，保持15分钟，迅速冷却至10℃以下，离心除去沉淀，收集清液，清液冷至4℃，加入5倍体积的-10℃丙酮于-10℃放置4小时，过滤收集沉淀，真空干燥得丙酮粉，将丙酮粉溶于PH7.0磷酸盐缓冲液，使每毫升含蛋白质25毫克，加入PH7.0的饱和硫酸铵溶液使达25％饱和度，离心除去沉淀，上清液调PH4.0，加硫酸铵使饱和度达50％，离心收集盐析物，盐析物用冷含水丙酮反复重结晶脱盐，至检查无硫酸盐后，冷丙酮洗2次，次乙醚洗2次，抽干，真空干燥，将脱盐干粉溶于生理盐水并调PH7.2超滤，得超滤液，将超滤液无菌灌装于2毫升安瓿瓶中，熔封得所需的海狸獭医药胸腺素注射液成品。
用本发明制得的海狸獭医药胸腺素注射液对25位病人临床试验，对不同病种肌注或皮下注射5-10毫升，每周两次，类风湿关节炎有效率79％，重症肌无力为75％。对慢性乙型肝炎患者，隔日1次注射，每次注射10毫克持续现两个月，肝功能恢复正常，常见症状消失，对病毒性肝炎的总有效率80％以上。
权利要求
1.一种海狸獭医药胸腺素注射液，其特征在于是从海狸獭胸腺提取的一簇多肽类物质，其胸腺素透析物活性高，其分子量小于10000，主要成分分子量小于6000。
2.根据权利要求1所述的海狸獭医药胸腺素注射液，其特征在于该注射液胸腺素多肽含量7-10毫克/毫升，活性测定E-玫瑰花结平均值25-28％，收率7-10克胸腺素/千克。
3.一种制造权利要求1所述的海狸獭医药胸腺素注射液的方法包括以下工艺过程(1)提取胸腺在宰杀后的海狸獭身上提取新鲜胸腺，(2)匀浆将新鲜胸腺除脂肪，切成碎块置于高速组织捣碎机内，按每公斤胸腺加2-4升生理盐水，捣碎3-7分钟使成匀浆，冷冻离心机离心2000-4000转/分、7-13分钟得提取液，(3)加热去杂蛋白将提取液于水浴中迅速加热至8-90℃，保持12-18分钟，迅速冷却至10℃以下，离心除去沉淀，收集清液，(4)丙酮沉淀清液冷至4℃，加入4-6倍体积的-8--12℃丙酮于-8--12℃放置3-5小时，过滤收集沉淀，真空干燥得丙酮粉，(5)分段盐析将丙酮粉溶于PH6.8-7.2磷酸盐缓冲液，使每毫升含蛋白质23-28毫克，加入PH6.8-7.2的饱和硫酸铵溶液使达23-28％饱和度，离心除去沉淀，上清液调PH3.8-4.2，加硫酸铵使饱和度达48-52％，离心收集盐析物，(6)脱盐、干燥盐析物用冷含水丙酮反复重结晶脱盐，至检查无硫酸盐后，冷丙酮洗1-3次，次乙醚洗1-3次，抽干，真空干燥，(7)超滤将脱盐干粉溶于生理盐水并调PH7.0-7.5超滤，得超滤液，(8)制剂将超滤液无菌灌装于安瓿瓶中，熔封得所需成品。
全文摘要
本发明属于含来自哺育动物胸腺的医药用品技术领域,涉及一种海狸獭医药胸腺素注射液。海狸獭医药胸腺素注射液,是从海狸獭胸腺提取的一簇多肽类物质,其胸腺素透析物活性高,其分子量小于10000,主要成分分子量小于6000。胸腺素多肽含量7－10毫克/毫升,活性测定E－玫瑰花结平均值25－28%,收率7－10克胸腺素/千克。其制造方法包括提取胸腺、匀浆、加热去杂蛋白、丙酮沉淀、分段盐析、脱盐、干燥、超滤、制剂。
文档编号A61K38/32GK1362262SQ0110680
公开日2002年8月7日 申请日期2001年1月3日 优先权日2001年1月3日
发明者康梦松, 郭赛容 申请人:徐礼贵