处理皮肤的化妆方法

专利名称：处理皮肤的化妆方法
技术领域：
本发明涉及一种改善皮肤状况和外观的化妆方法，也涉及蒎醇酸(pinolenic acid)在皮肤状况和外观改善用局部组合物制备中的用途。
皮肤是通过皮肤病学失调、环境滥用(风、空调、中央采暖)或通过可能因皮肤对太阳的暴露而加速(光照老化)的正常老化过程(慢性老化)遭遇恶化的。近年来，对皮肤外观和状况改善用化妆组合物和化妆方法的需求有了巨大增长。
消费者日益增多地寻求能处理或推迟慢性老化(随时间老化)和光照老化皮肤的可见迹像例如皱纹、线条、下垂、色素沉着过多和老年斑的“抗衰老”化妆产品。
除抗衰老外，消费者也频繁地寻求来自化妆产品的其它效益。“敏感皮肤”的概念也提高了消费者对能改善敏感、干燥和/或薄片状皮肤的外观和状况并能缓解红色和/或受刺激皮肤的化妆产品的需求。消费也期待能处理斑点、血疹、瑕疵等的化妆产品。
脂肪酸，包括蒎醇酸，在人体处理用化妆配方中的用途是已知的。例如，已知(从诸如WO 98/43513)松仁油(含有蒎醇酸)会有抗炎效果，其中，它用来涂指甲锉以抑制该锉使用时引起的任何感染。
现在，我们已经令人惊讶地进一步发现了未被公开的蒎醇酸性能，它们可在皮肤局部施用化妆组合物中用来提供以前未被公开的皮肤护理效益。
现在，我们已经发现，由于慢性老化或光照老化而引起的正常皮肤状况例如皱纹、线条、下垂、色素沉着过多和老年斑的有效处理和预防，可以通过对该皮肤施用包含蒎醇酸或其衍生物的化妆组合物来得到。我们也已经发现，蒎醇酸在化妆组合物中的使用，除抗衰老外，还有利地提供进一步的皮肤效益，例如缓解敏感的和/或受刺激的皮肤、改善回弹性、减少、干燥度/成片性和减少过度增生。
因此，按照本发明的第一方面，提供的是一种用于人体皮肤施用的、包含有效量蒎醇酸的局部组合物。
按照本发明的一个进一步方面，提供的是一种提供至少一种选自下列的皮肤护理效益的化妆方法处理/预防起皱、下垂、老化和/或光照损伤皮肤；增加皮肤中骨胶原沉积、增加皮肤中核心蛋白聚糖产生、增强组织修复；通过提高阻挡层形成来改善皮肤状况和回弹性；处理干燥和片状皮肤；减少过度增生；缓解受刺激的、红的和/或敏感的皮肤；和改善皮肤纹理、光滑性和/或牢固性；该方法包含对该皮肤施用一种包含蒎醇酸和/或其衍生物的局部组合物。
本发明也涵盖蒎醇酸和/或其衍生物在用于提供至少一种选自下列的皮肤护理效益的局部组合物中的用途处理/预防起皱、下垂、老化和/或光照损伤皮肤；增加皮肤中骨胶原沉积、增加皮肤中核心蛋白聚糖产生、增强组织修复；通过提高阻挡层形成来改善皮肤状况和回弹性；处理干燥和片状皮肤；减少过度增生；缓解受刺激的、红的和/或敏感的皮肤；和改善皮肤纹理、光滑性和/或牢固性。
因此，本发明方法和蒎醇酸的使用提供了抗衰老效益，这导致光滑和柔软皮肤的促进，而且有改善的弹性、减少或推迟的皱纹和老化皮肤外观、以及改善的皮肤颜色。可以实现外观、纹理和状况的普遍改善，尤其就皮肤的辐射、清晰度、和普遍年轻的外观而言。本发明方法和使用也有益于缓解和镇定敏感和/或受刺激的皮肤。因此，本发明方法有利地提供范围广泛的皮肤护理效益。
本文中使用的“处理”这一术语，在其范围内包括减少、推迟和/或预防以上提到的皮肤状况例如起皱的、老化的、光损伤的，和/或受刺激的皮肤，以及通过预防或减少该皮肤的起皱和提高其挠曲性、牢固性、光滑性、柔软性与弹性来普遍提高皮肤质量和改善其外观与纹理。按照本发明的化妆方法以及蒎醇酸和/或衍生物的使用可以用于处理已经处于起皱、老化、光损伤、干燥和受刺激的状况的皮肤，或者用于处理年轻皮肤以预防或减少以上提到的那些由于正常老化/光照老化过程而引起的恶化性变化。
蒎醇酸是一种在5位、9位、和12位有三个双键的不饱和长链(C18)脂肪酸。它可以以大约25％的水平在诸如松仁油中发现。
本发明也包括该游离酸的衍生物，因此，该衍生物包含蒎醇酸片段。较好的衍生物包括从该酸的羧基的取代衍生的那些，例如酯类(如视黄酯、甘油三酯、甘油单酯、甘油二酯、磷酸酯)、酰胺类(如神经酰胺衍生物)、盐类(如碱金属和碱土金属盐、铵盐)；和/或从C18碳链的取代衍生的那些，例如α-羟基和/或β-羟基衍生物。
在甘油三酯衍生物的情况下，包括甘油主链上蒎醇酸取代基的所有位置异构体。该甘油三酯必须含有至少一个蒎醇酸片段。例如，该甘油主链上三个可酯化位置中，1位和2位可以用蒎醇酸酯化，且3位上可以用另一种脂质酯化，或作为一种替代，该甘油主链可以在1位和3位上用蒎醇酸(PA)酯化，而在2位上用另一种脂质酯化。
因此，可以富含蒎醇酸甘油三酯的油也会适合于在本发明中使用。
本说明书中无论何处使用“蒎醇酸”这一术语，都要理解的是也包括其包含蒎醇酸片段的衍生物。“蒎醇酸片段”系指一种蒎醇酸衍生物的蒎醇脂肪酰基部分。
要按照本发明采用的有效成分蒎醇酸是以有效量存在于该局部组合物中的。通常，该有效成分的总量是以该组合物的0.0001wt％～50wt％之间的数量存在的。为了以最低成本使效益最大化，该数量较好的是0.01wt％～10wt％，最好的是0.1wt％～5wt％。
按照本发明使用的组合物也包含一种皮肤病学上/化妆上可接受的载体，以充当该有效成分蒎醇酸或其衍生物的稀释剂、分散剂或载体。该载体可以包含皮肤护理产品中常用的材料，例如水、液体或固体润肤剂、硅油、乳化剂、溶剂、保湿剂、增稠剂、粉末、推进剂等。
该载体通常会占该组合物的5wt％～99.9wt％、较好25wt％～80wt％，而且在其它化妆添加剂不存在时，可以构成该组合物的余额。
除有效成分蒎醇酸外，也可以包括其它特定皮肤效益有效成分，例如防晒剂、其它皮肤色泽变淡剂、皮肤晒黑剂。该载体也可以进一步包括香味剂、不透明化剂、防腐剂、着色剂、缓冲剂等添加剂。
为了制备本发明方法中使用的局部组合物，可以采用皮肤护理产品的通常制备方式。各该有效成分一般是以惯常方式掺入一种皮肤病学上可接受载体中的。各该有效成分可以适当地先溶解或分散于要掺入该组合物中的水或另一种溶剂或液体的一部分中。较好的组合物是水包油或油包水乳状液。
该组合物可以呈惯常皮肤护理产品例如霜剂、凝胶剂或洗剂等的形式。该组合物也可以呈一种所谓“用后洗去”产品的形式，例如浴用或淋浴用凝胶，该产品可以含有该有效成分的输送系统以促进漂洗期间对皮肤的粘附。最好，该产品是一种“留在皮肤上”产品；即一种要施用到皮肤上而在它施用到皮肤上之后没有立即跟着一个仔细漂洗步骤的产品。
该组合物可以以任何适用方式例如用广口瓶、瓶子、管子、roll-ball等惯常方式进行包装。
本发明的方法可以每日对需要处理的皮肤实施一次或多次。皮肤外观的改善通常会在3～6个月之后变得可见，因皮肤状况、本发明方法中使用的有效成分的浓度、所使用组合物的数量及其施用频率而异。一般来说，用手、手指或一种适用器具，把少量例如0.1～5ml该组合物从一种适用容器或施用器施用到皮肤上并铺展和/或擦到皮肤上。任选地可以跟着一个漂洗步骤，因该组合物是配制成一种“留在皮肤上”产品还是配制成一种“用后洗去”产品而异。
为了可以更容易地理解本发明，给出以下实施例，但仅供说明。
现在，仅借助于实例并参照附图来解释本发明，其中-

图1和2显示蒎醇酸对核心蛋白聚糖和原胶原I向上调节的影响；-图3和4证实蒎醇酸对成纤维细胞中受刺激PGE2水平的影响和对成纤维细胞中PMA刺激sICAM-1水平的影响；-图5显示蒎醇酸对角质化膜形成的影响；和-图6显示蒎醇酸对角质细胞分化的影响。
实施例以下实施例证实蒎醇酸的抗衰老效益。
从我们的正在审查的欧洲专利申请No.99908956.8得知，在活体试验中，可以用局部视黄酸处理引起原胶原I和核心蛋白聚糖的向上调节(epregulation)。为此，该申请中“为了比较目的而在局部视黄酸处理之后活体皮肤中原胶原I和核心蛋白聚糖向上调节的识别”标题下的段落全文列为本文参考文献。
实施例1人体皮肤成纤维细胞中原胶原-I和核心蛋白聚糖合成的测定程序皮肤成纤维细胞条件培养基的制备把通道2的原发人体前皮肤(foreskin)成纤维细胞(P2)以10000细胞/cm2接种到12孔平皿上，在5％二氧化碳和4％氧的氛围下在补加了10％胎牛血清的Dulbeccos改进伊格尔培养基(DMEM)中保持24小时。在这段时间之后，该细胞用无血清DMEM洗涤，然后用新鲜的无血清DMEM进一步培养60小时。然后，该成纤维细胞单层再次用无血清DMEM洗涤。把试验试剂和载体对照组添加到三重复样品细胞中，使最终体积为0.4ml/孔新鲜无血清DMEM，进一步培养24小时。这种成纤维细胞条件培养基要么立即分析要么用液氮速冻并在-70℃贮存以备未来分析。然后进行细胞计数，随后把来自dot-blot分析的数据标准化成细胞数。
皮肤成纤维细胞条件培养基中原胶原-I和核心蛋白聚糖蛋白质的dot-blot试验来自用载体(作为对照组)或试验试剂处理的皮肤成纤维细胞的条件培养基样品补加20mM二硫苏糖醇(200mM储备溶液的1∶10稀释)和0.1％硫酸十二烷酯钠(10％储备溶液的1∶100稀释)，充分混合，然后在75℃培养2分钟。该试验的标准是用来自以10000细胞/cm2在175cm2烧瓶中接种并保持在如上所述的无血清DMEM中的成纤维细胞的净成纤维细胞条件培养基的系列稀释产生的。
随后，用Bio-Rad公司的96孔Bio-Dot装置像制造商指导准则中所述那样把试验样品以三重复样施用到一片预先润湿的Immobilon-P转移膜上。每孔施用大约200μl培养基。让该培养基在重力下通过该膜过滤(30分钟)，此后该膜用PBS(200μl)洗涤2次。让这些PBS洗涤液在重力下通过该膜过滤(2×15分钟)。然后，把该BiO-Dot装置附着到一根真空支管上，在抽吸下进行第三次和最后一次PBS洗涤。把该装置拆卸开，取出该膜并迅速按照要求切割，然后置于封闭缓冲剂中于4℃过夜。
为核心蛋白聚糖分析制备的膜用PBS中的3％(w/v)BSA/0.1％(v/v)吐温-20封闭，而为原胶原-I分析制备的膜用PBS中的5％(w/v)无脂干燥奶粉/0.05％吐温-20封闭。次日，这些膜用要么人体原胶原-I的原发抗体(MAB1912；大鼠单克隆抗体；Chemicon Int.公司，Temecula，CA)要么人体核心蛋白聚糖的原发抗体(兔多克隆抗体；Biogenesis)的1∶10000稀释在室温下探测2小时。随后，这些膜用TBS/0.05％吐温-20洗涤(3×5分钟)，然后与所要求的125I-共轭抗大鼠或抗兔F(ab’)2碎片(Amersham)的1∶1000稀释一起在室温下培养1小时。
此后，这些Immobilon条再次用TBS/吐温-20洗涤(3×5分钟)，然后使之在室温下风干。干燥的膜用玻璃纸包裹，对一台MolecularDynamics储能磷光屏暴露16～18小时。这段时间结束时，暴露的磷光屏使用ImageQuantTM软件由一台磷光成像仪(Molecular DynamicsPhosphorimager SF)扫描。点强度是使用Image QuantTM中的量化工具由计算机辅助影像分析评价的，并标准化成细胞数，还确定了相对于100任意单元的载体处理对照值而言各种试验试剂对核心蛋白聚糖和原胶原-I合成的影响。
以下表1指出蒎醇酸对人体皮肤成纤维细胞中原胶原-I和核心蛋白聚糖合成的影响及其施用数量。为了使这些结果归一化，确定了相对于100任意单元的载体处理对照值而言该试验物质的影响。图1和2以图示法显示更多数据点的结果。
为此较起见，用视黄酸进行一个试验，以评价它对人体皮肤成纤维细胞中核心蛋白聚糖合成的影响。这些试验中使用的试剂的浓度对细胞活性没有影响。
表1蒎醇酸对原胶原-I和核心蛋白聚糖合成的影响
表1中的结果指出，与对照组比较，蒎醇酸显著上调了人体皮肤成纤维细胞中原胶原-I和核心蛋白聚糖两者的合成。
皮肤中核心蛋白聚糖的水平是与皮肤状况和外观改善相联系的。提高皮肤中核心蛋白聚糖的水平对于皮肤中骨胶原的受控和改正沉积来说是重要的，该沉积是与很多皮肤效益例如皱纹抹平和光损伤皮肤的皮肤修复相联系的。
实施例2本实施例测量了蒎醇酸对减少皮肤成纤维细胞的炎性反应的影响。
成纤维细胞PGE2和ICAM试验人体皮肤成纤维细胞的胞内粘附分子(ICAM)和PEG2产生会被炎性刺激PMA(佛波醛肉豆蔻酸酯·乙酸酯)诱发。PMA代表一种会诱发细胞中氧化应激和炎性反应的外部应激子。这种模型用来模拟活体中的发炎。
把通道2的原发人体前皮肤成纤维细胞(P2)以35,000细胞/孔接种到96孔平皿上，在5％二氧化碳的氛围下在补加了10％胎牛血清的Dulbeccos改进伊格尔培养基(DMEM)中保持24小时。蒎醇酸以三重复样品添加到二甲基亚砜中的新鲜细胞培养基(DMEM，补加了10％胎牛血清)中(乙醇，最终浓度1％)，进一步培养24小时。向该培养基中添加佛波醛肉豆蔻酸酯·乙酸酯(PMA)(Sigma)10nM，该细胞进一步培养24小时。对照组既不含有任何试验化合物也不含有任何PMA。然后，该成纤维细胞/培养基就像以下紧接着叙述的那样分析或在液氮中速冻并在-70℃贮存以备未来分析。然后进行细胞计数，随后把来自dot-blot分析的数据标准化成细胞数。
前列腺素E2(PGE2)试验取50μl体积培养基，在轻轻摇荡培养平板之后用于PGE2试验。培养基中的PGE2水平是用一种Biotrak PGE2免疫试验试剂盒(Amersham，英国)测定的。该试验依据的是样品中无标记PGE2与固定量辣根过氧化物酶标记PGE2之间对有限量固定PGE2特异性抗体的竞争。无标记样品PGE2的浓度是按照同时得到的一条标准曲线确定的。
ICAM-1试验将培养基放弃，细胞用Dulbecco PBS洗涤。向洗涤的细胞中添加150μl 0.1％Triton X-100(Sigma)3分钟，以萃取细胞膜中的ICAM。将萃取物转移到Eppendoff离心管中，以1000g离心2分钟以除去细胞碎屑。用100μl体积上清液进行ICAM试验。可溶性ICAM-1是用商业上可得的免疫酶法试验试剂盒(R & D Systems)评价的。样品中ICAM-1的浓度是根据平行进行的标准曲线确定的。
从PGE2和ICAM试验得到的结果综合在以下表2中，并以图示法显示于图3和4中。
表2 蒎醇酸对人体皮肤成纤维细胞中PMA诱发的ICAM和PGE2产生的影响
*用酶免疫试验可检测的最大水平以上结果显示，用一种炎性刺激例如PMA(佛波醇肉豆蔻酸酯·乙酸酯)挑战细胞引起炎性反应增长，如同用前列腺素E2(PGE2)产生来衡量的。蒎醇酸，即使以0.1μm的水平，也会大幅降低炎性反应，如同用PGE2产生来衡量的。因此，这些结果证实蒎醇酸具有良好的抗炎活性。
以上结果也证实，用PMA挑战细胞会引起ICAM产生增加。蒎醇酸减少了胞内粘附分子(ICAM)的产生，该分子是发炎的另一种标记物。因此，这些结果进一步证实蒎醇酸有良好的抗炎作用。
实施例3把通道3(P3)的人体前皮肤角质细胞以4000细胞/孔接种到96孔平皿的Dulbecco改进伊格尔培养基(DMEM)中，其中含有0.03mM钙。这些细胞在处理前生长3天。处理载体是DMSO。处理4天后，将细胞收获，用100μl磷酸盐缓冲食盐水(PBS)洗涤3次。然后，该细胞用1％Triton X-100、50mM Tris pH8.0、0.02mM Leupeptin、0.02mM Pepstatin萃取。然后，60μl/孔萃取物用Pico Green DNA试验即分子探针法检测DNA浓度(ng/孔)。
然后，这些细胞用200μl PBS、再用100μl 2％SDS洗涤，向每孔中添加20mM DTT。然后，这些平皿用一种Titertek平皿密封剂(ICN)密封，在一种不透空气湿环境(即一种衬有湿纸的密封夹心盒)中于60℃培养过夜。然后，该萃取物用Dot-Blot装置(Bio-rad公司)在重力下通过一种PVDF转移膜(Bio-rad公司)过滤。然后，该膜在银染色(Bio-rad公司银染色试剂盒)之前用蒸馏水洗涤。然后，该染色的dot-blot膜用Phoretix阵列软件(Phoretix国际公司)分析。
结果结果显示于以下表3中，并以图示法显示于图5和6中。
表3
*相对于零值而言。对于DNA值来说P＜0.001。
这些结果显示，在应对0.1～20μm蒎醇酸施用方面，角质化膜产生如何增加、DNA水平如何降低。这里角质细胞分化增强的指示，并表明蒎醇酸能改善原位皮肤屏障形成和回弹性、而且减少经皮失水和角质细胞增殖。
实施例4以下配方描述了一种适合于按照本发明的方法和用途的水包油霜剂。所指出的百分率是以组合物的重量计的。
*Brij 56是鲸蜡醇POE(10)**Alfol 16RD是鲸蜡醇实施例5以下配方描述一种按照本发明的乳状液霜剂。
以上实施例4和5的局部组合物都提供一种有效的化妆处理，当施用到已经由老化或光照老化而恶化的皮肤上时能改善起皱、老化、光损伤、和/或受刺激皮肤的外观，或当施用到年轻皮肤上时有助于预防或推迟这样的恶化性变化。该组合物可以以惯常方式加工。
权利要求
1.一种局部组合物，包含(a)有效量的蒎醇酸(Pinolenic acid)；和(b)皮肤病学上可接受的载体。
2.按照权利要求1的局部组合物，其中，该蒎醇酸是以该局部组合物的0.1～5wt％的水平存在于该局部组合物中的。
3.一种提供至少一种选自下列的皮肤护理效益的化妆方法处理/预防起皱、下垂、老化和/或光照损伤皮肤；增加皮肤中骨胶原沉积、增加皮肤中核心蛋白聚糖产生、增强组织修复；通过增强阻挡层形成来改善皮肤状况和回弹性；处理干燥和片状皮肤；减少过度增生；缓解受刺激的、红的和/或敏感的皮肤；和改善皮肤纹理、光滑性和/或牢固性；该方法包含对该皮肤施用一种包含蒎醇酸和/或其衍生物的局部组合物。
4.蒎醇酸和/或其衍生物在用于提供至少一种选自下列的皮肤护理效益的局部组合物中的用途处理/预防起皱、下垂、老化和/或光照损伤皮肤；增加皮肤中骨胶原沉积、增加皮肤中核心蛋白聚糖产生、增强组织修复；通过增强阻挡层形成来改善皮肤状况和回弹性；处理干燥和片状皮肤；减少过度增生；缓解受刺激的、红的和/或敏感的皮肤；和改善皮肤纹理、光滑性和/或牢固性。
5.蒎醇酸和/或其衍生物在一种提供至少一种选自下列的皮肤护理效益的局部组合物的制备中的用途处理/预防起皱、下垂、老化和/或光照损伤皮肤；增加皮肤中骨胶原沉积、增加皮肤中核心蛋白聚糖产生、增强组织修复；通过增强阻挡层形成来改善皮肤状况和回弹性；处理干燥和片状皮肤；减少过度增生；缓解受刺激的、红的和/或敏感的皮肤；和改善皮肤纹理、光滑性和/或牢固性。
6.蒎醇酸和/或其衍生物，用于处理/预防起皱、下垂、老化和/或光照损伤皮肤；增加皮肤中骨胶原沉积、增加皮肤中核心蛋白聚糖产生、增强组织修复；通过提高阻挡层形成来改善皮肤状况和回弹性；处理干燥和片状皮肤；减少过度增生；缓解受刺激的、红的和/或敏感的皮肤；和改善皮肤纹理、光滑性和/或牢固性。
7.一种局部组合物，包含(i)有效量的蒎醇酸和/或其衍生物；和(ii)化妆品上和/或皮肤病学上可接受的载体，且用于处理/预防起皱、下垂、老化和/或光照损伤皮肤；增加皮肤中骨胶原沉积、增加皮肤中核心蛋白聚糖产生、增强组织修复；通过增强阻挡层形成来改善皮肤状况和回弹性；处理干燥和片状皮肤；减少过度增生；缓解受刺激的、红的和/或敏感的皮肤；和改善皮肤纹理、光滑性和/或牢固性。
全文摘要
通过局部施用一种包含蒎醇酸(pinolenic acid)和/或其衍生物的组合物，提供一种处理老化、敏感、干燥、薄片状、有皱纹和/或光照损伤的皮肤的化妆方法。本发明也涉及适用于这样的化妆处理的组合物。
文档编号A61K8/30GK1486174SQ01822161
公开日2004年3月31日 申请日期2001年11月7日 优先权日2000年11月21日
发明者S·L·布拉克福德, R·S·京格, P·帕马, J·S·罗杰斯, P·R·亚特斯, S L 布拉克福德, 亚特斯, 京格, 罗杰斯 申请人:荷兰联合利华有限公司