阴道保健产品的制作方法

专利名称：阴道保健产品的制作方法
技术领域：
本发明涉及诸如类视黄醇、类胡萝卜素、核苷酸和核苷的化合物在润湿雌性生殖道以及改善雌性生殖道健康中的用途。所述化合物可增加阴道和宫颈细胞内粘液的分泌、促进细胞生长和基因表达，并且还可作为避孕药使用。
背景技术：
子宫、宫颈和阴道粘液细胞的分泌功能对生殖道的功能和健康具有重要的意义。例如，在月经周期内宫颈粘液的质量和数量都在发生改变，而所述改变极大的影响着人的生育能力。在雌激素水平升高的影响下，宫颈粘液变得稀薄，使得精子可以通过。在月经周期的后期，由于黄体酮水平的升高，粘液变得稠厚阻碍精子的穿入，从而失去生育能力。所述宫颈粘液的增稠被认为是黄体酮-单一避孕药发挥避孕作用的主要作用方式。
在高分子量糖蛋白的量的增加的同时，雌激素刺激稀薄的等渗粘液的生成。在月经周期的中期，宫颈粘液中含有98％的水，而在其它时段，粘液中含有90％的水。宫颈粘液同时富含着金属离子、酶(诸如碱性磷酸酯酶等)、可溶性蛋白质和盐类。宫颈粘液的凝胶相中含有被称为“粘蛋白”的高分子量糖蛋白。粘蛋白可形成由二硫键交联的胶束。雌激素和孕激素调控着这些胶束的排列。这些胶束的排列影响着粘液的流变学性质。参见Kopito等人，人类宫颈粘液中的水和电解质<Water and电解质ín human cervical粘液>.Fertil.Steril.1973；24499-506；Fordney-Settlage，D，人类宫颈粘液和精子间相互作用的综述<review of cervical mucus and sperm interactions inhumans.>Int.J.Fertil.1981；26161-169。
由于绝经期内雌激素水平下降，雌激素依赖性组织将发生退化，且出现雌激素消失的特异性现象。在绝经期内，宫颈粘液水平下降，阴道粘膜退化。随着年龄增加，阴道长度变短、皱褶消失且失去弹性。阴道分泌物变得非常稀少。当给予雌激素后，上述作用将发生逆转宫颈将分泌更多的粘液，阴道粘膜可重新获得失去的皱褶。然而，这些症状通常不会完全消失，这部分的是因为激素替代疗法中所提供的雌激素的水平比正常月经周期中所循环的雌激素的水平要低得多。
约40％的绝经后妇女经历了萎缩性阴道炎或阴道干燥。在阴道萎缩期间，阴道上皮细胞的厚度、水合作用、皱褶和血流都减少。萎缩性阴道炎的原因包括局部和系统性雌激素的量的下降，以及环境因素诸如化疗、抗组胺药、抽烟、运动过度和会阴产物(即冲洗液、出臭剂和香水)。雌激素或激素替代疗法(HRTs)可有效的减少阴道干燥。然而，一些可能的危险的副作用包括乳腺癌、子宫内膜癌、血块、恶心、胸痛和头痛的发生增加。可以获得的处方药包括Astroglide和KY滑润胶冻以及湿润剂诸如Replens和KY长效湿润剂。这些产品的组合物中基本上都是水，它们仅能提供短暂的症状的缓解(1-2天)，且基本上不能给阴道组织提供长效的作用。
因此，阴道干燥和润滑缺失是女性的一个问题，特别是在绝经期后。刺激宫颈粘液的产生可以辅助缓解阴道干燥，并且可增加外源性给药的雌激素对减轻阴道干燥的作用。相应的，还需要用于调节人类阴道中粘液水平的组合物和方法。
发明概述本发明提供了用于治疗某些生殖和阴道问题包括萎缩性阴道炎的非-激素疗法。通常的这些疗法具有很小的副作用，可刺激天然的非-激素的作用机理，增加粘液分泌，刺激基因表达，用新的组织替换老化组织，维持或恢复健康组织的功能。
由此，本发明涉及到多种治疗或预防雌性哺乳动物阴道和/或生殖问题的方法。这些方法涉及向雌性哺乳动物给予有效量的类视黄醇(retenoid)或类胡萝卜素和/或一种或多种核苷酸(s)或核苷(s)。通常的给药方法是局部给药或阴道内给药。除此之外，这些方法可以调节粘液水平以促进或降低雌性哺乳动物的生育能力，或者缓解或消除雌性哺乳动物的阴道干燥。
在一项
具体实施例方式
中，本发明提供了一种通过向雌性哺乳动物给予有效量的类视黄醇或类胡萝卜素和/或一种或多种核苷酸(s)或核苷(s)用以增加阴道或宫颈上皮细胞的生长的方法。
在另一项具体实施方式
中，所述方法涉及通过向雌性哺乳动物给予有效量的类视黄醇或类胡萝卜素和/或一种或多种核苷酸(s)或核苷(s)，从而增加P2Y2受体、或雌激素受体、或血管内皮生长因子在阴道或宫颈上皮细胞中的表达。
同样在另一项具体实施方式
中，本发明提供了一种通过向雌性哺乳动物给予有效量的类视黄醇或类胡萝卜素和/或一种或多种核苷酸(s)或核苷(s)，从而增加粘蛋白，例如粘蛋白-4在阴道或宫颈上皮细胞内表达的方法。所述方法可以预防或治疗哺乳动物的阴道干燥，或维持或促进哺乳动物内正常的阴道粘膜的保护功能。通常的类视黄醇(retenoid)、类胡萝卜素/核苷酸或核苷以及其它的化合物都以阴道内给药的方式给予。
一种或多种核苷酸(s)或核苷(s)也可以组合物的形式给药，该组合物中可含有维生素A和/或相关化合物(s)。所述核苷酸(s)或核苷(s)包括例如，dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、ATP、GTP、CTP、TTP、UTP以及任一本领域技术人员可得的所述核苷酸(s)或核苷(s)的衍生物。


图1阐述了三种较低浓度的反式-视黄酸(钻型标记)、9-顺式-视黄酸(方形标记)和13-顺式-视黄酸(白色三角形)在3天内对于ME-180细胞生长的影响。作为阴性对照，同时描述了加入了不含视黄酸的介质(白色十字架形)后对细胞生长的影响。图1a图解阐述了1nM的反式-视黄酸(钻形标记)、9-顺式-视黄酸(方形标记)和13-顺式-视黄酸(白色三角形)在3天内对ME-180细胞生长的影响。图1b图解阐述了10nM的反式-视黄酸(钻形标记)、9-顺式-视黄酸(方形标记)和13-顺式-视黄酸(白色三角形)在3天内对ME-180细胞生长的影响。图Ic图解阐述了100nM的反式-视黄酸(钻形标记)、9-顺式-视黄酸(方形标记)和13-顺式-视黄酸(白色三角形)在3天内对ME-180细胞生长的影响。ME-180细胞的数量表示在y轴上，其中，E+05表示105，E+04表示104，E+00表示100。
图2阐述了三种较高浓度的反式-视黄酸(圆形)、9-顺式-视黄酸(方形标记)、和13-顺式-视黄酸(钻形)在2天时间内对ME-180细胞生长的影响。作为阴性对照，同样描述了不含视黄酸的介质(十字形)对细胞生长的影响。图2a图解阐述了10μM反式-视黄酸(圆形)、9-顺式-视黄酸(方形)和13-顺式-视黄酸(钻形)对ME-180在2天内对细胞生长的影响。图2b图解阐述了1μM反式-视黄酸(圆形)、9-顺式-视黄酸(方形)和13-顺式-视黄酸(钻形)在2天内对ME-180细胞生长的影响。图2c图解阐述了100nM反式-视黄酸(圆形)、9-顺式-视黄酸(方形)、和13-顺式-视黄酸(钻形)在2天内对ME-180细胞生长的影响。ME-180细胞的数量在y-轴上表示。
以ME-180宫颈上皮细胞mRNA作为模板衍生获得cDNA，图3提供了用此cDNA制备得到的PCR产品的溴化乙锭-染色的2％琼脂凝胶的照片。使用两组引发剂在2-11道生产产品，两组引发剂为P2Y2-特异性引发剂(顶部，650bp，2-11道)和β-肌纤蛋白-特异性引发剂(底部，300bp)。1和12道为DNA尺寸标记器。在2、3和7道中几乎无法看见P2Y2产物，其中，2道中的模板cDNA来自于宫颈细胞，道3中的ME-180细胞没有添加维生素A，道7中的ME-180细胞没有添加维生素A或血清(7道)。向ME-180细胞中加入100nM维生素A可导致含有血清(4-6道)和不含血清(8-11道)中P2Y2表达的增加。
以ME-180宫颈上皮细胞mRNA作为模板衍生获得cDNA，图4提供了用此cDNA制备得到的PCR产品的溴化乙锭-染色的2％琼脂凝胶的照片。1道为DNA尺寸的标记器。在2-10道中使用两组引发剂以引发PCR产物ER-α-特异性引发剂(较高端)和β-肌纤蛋白-特异性引发剂(较低端)。在2道中，模板是来自ME-180细胞的cDNA，在血清存在的条件下培养。在3和7道中，模板是在不含血清的条件下培养的来自于ME-180细胞的cDNA。在4-6道，模板是在不含血清但是分别用100nM维生素A处理了4、8和16小时的条件下培养的来自于ME-180细胞的cDNA。向ME-180细胞中加入100nM维生素A可导致ER-α表达的增加。
来自于各种细胞作为模板得到的PCT产物，图5提供了使用所述PCT产物的溴化乙锭-染色的2％琼脂凝胶的照片。1和7道提供了DNA尺寸标记器。在2-6道，使用两组引发剂引发PCR产物血管内皮生长因子(VEGF)特异性引发剂(较高端)和β-肌纤蛋白-特异性引发剂(较低端)。2和6道提供了衍生自未处理的ME-180细胞的cDNA的PCR产物。3-5道提供了衍生自用100nM维生素A分别处理了4、8和16小时的ME-180细胞的cDNA的PCR产物。
来自于各种细胞作为模板得到的PCT产物，图6提供了使用所述PCT产物的溴化乙锭-染色的2％琼脂凝胶的照片。图6中所描述的1道凝胶含有DNA尺寸标记器，特别是100bp ladder尺寸标记器(最亮谱带为600bp)。2道含有RT-PCR反应(使用衍生自宫颈RNA的模板cDNA和粘蛋白-4引发剂(800bp产品)和β-肌纤蛋白引发剂(300bp产品))的产物。3道含有相同的PCR反应(使用从ME-180细胞得到的模板cDNA)产物。4道中含有相同的PCR反应(使用从经过100nM维生素A处置24小时后的ME-180细胞得到的模板cDNA)。
发明详述本发明提供了通过向哺乳动物提供一种含有类视黄醇或类胡萝卜素(如用于增加粘液分泌和主基因的表达)，以刺激雌雄哺乳动物生殖系统内的细胞内生长的方法。组合物中还可含有一种或多种脱氧核苷酸(s)或核苷(s)。所述给药方法可以增加主基因诸如受体、生长因子和其它阴道内和宫颈上皮细胞基因的表达和活化。给予本发明组合物还可刺激阴道和宫颈细胞的细胞内生长，因此，可以替换衰老细胞从而恢复雌性生殖道的皱褶。
本发明使用早已在被人体所使用的廉价的、易于获得的活性成分，简单且有效的促进阴道和宫颈组织自我更新的自然能力并产生水分。由本发明方法产生的细胞类型、基因产品和水分都是阴道或宫颈中自然存在的类型。由此，本发明的组合物和方法可避免强烈的化学品以及非自然物质，这些物质对使用者的健康和生殖的影响尚是未知的。
本发明方法可以改变生殖器官的质量和数量，修复和替换衰老组织并且影响生殖、上皮和粘膜细胞内基因的表达。其表达可被本发明方法所影响的基因包括粘蛋白基因、受体基因、生长因子基因、蛋白激酶基因等等。
粘蛋白指的是高分子量糖蛋白类，其由粘膜组织的杯状和非杯状上皮细胞分泌或表达。粘蛋白可形成粘液，一种特定结构和功能的高水合化凝胶。不同种群的粘蛋白具有相似的结构特性，特别是从粘蛋白的蛋白主链来看。已经鉴定除了9中特定恶粘蛋白基因(MUC1、2、3、4、MUC5AC、MUC5B、MUC6、7和8)。粘蛋白是含有50-80％碳水化合物的糖蛋白。它们是结构巨大延伸的分子(分子量105-107道尔顿)，含有蛋白质主链，在其主链上连接有洗瓶刷状构型的低聚糖。低聚糖侧链，或者是毛状侧链，在装配过程中可有很大的不同，这意味着分子中有根多的碱性基团衍生自蛋白核心。这些分子可以通过二硫键交联以形成非常高分子量的凝胶。不同的组织可以制备不同类型的粘蛋白。
根据此发明，类视黄醇和类胡萝卜素(例如，维生素A)可以增加粘蛋白的表达由此可在雌性哺乳动物的生殖道内增加粘液的分泌和形成。
受体，诸如P2Y2受体、雌激素受体α(ER-a)等等的表达也是通过本发明发明的使用而提高的。例如，P2Y2受体的表达和活化的增加使dNTPs结合到上皮细胞上的该受体上的几率增加，从而使得细胞的粘蛋白分泌的增加。相似的，雌激素受体α的表达和活化的增加可以使雌激素与雌激素结合的几率增加，并活化由此受体调节的生化反应流。
进而，生长因子基因的表达可以通过本发明方法活化P2Y2受体而增加。所述生长因子基因包括，例如，血管内皮生长因子(VEGF)、上皮衍生的生长因子、血小板衍生的生长因子，以及其它生长因子。
其活性由磷酸化作用所调节的激酶和蛋白质的表达，可以通过本发明方法活化P2Y2受体进行调节。例如，P2Y2受体的活化可以导致对于可溶性鸟苷环化酶(GC-S)和cGMP-依赖型蛋白激酶(PKG)的表达的更为直接的方式。其磷酸化或去磷酸化由激酶或环化酶导致的蛋白，其活性和功能也可以被激酶或环化酶的表达水平所影响。P2Y2受体的活化可以启动一系列导致激酶和/或磷酸酶水平增加并且与所述激酶和/或磷酸酯相互作用的蛋白中的磷酸化的量的增加的反应串。例如，蛋白质磷酸酶2A(PP2A)可使与粘蛋白的分泌相关的豆蔻酰化丙氨酸-富含C激酶底物(MARCKS)蛋白质去磷酸化。MARCKS的相似蛋白的活化可以通过改变针对这些蛋白的磷酸化作用的程度而调节。由此，P2Y2受体的活化可以调节蛋白质诸如可溶性鸟苷环化酶(GC-S)、cGMP-依赖型蛋白激酶(PKG)、蛋白激酶C(PKC)、蛋白磷酸酶2A(PP2A)和MARCKS蛋白的表达和/或活性。活化P2Y2受体和其它基因的效果是增加了雌性哺乳动物生殖系统中的粘液的分泌。
本发明带来的对粘液分泌的影响包括但不限于，粘蛋白(例如，硫代和/或唾液粘蛋白)的数量和类型、粘度的变化、氢离子滞留、疏水性、磷脂含量的变化、糖基化和硫酸化、大分子装配、表面张力、粘附力、转运性能、弹性模量、抗张性质、强直度、反冲因子、粘液拉丝现象、精子穿透量、连贯性、细胞构成、羊齿状，等等。
本发明方法可以改变局部生殖系统的构成性和刺激后的分泌，包括阴道、宫颈、子宫、输卵管、前庭大腺或前庭腺以及尿道分泌物的分泌。本发明的方法和组合物可以影响生殖系统中粘液基因(包括，但不限于和粘液分泌细胞一起控制宫颈、子宫和前庭大腺和其它生殖系统中的部分中粘液分泌的基因)的功能。下生殖道(例如阴道)的扁平上皮和宫颈上皮细胞可以采用本发明的方法来进行治疗。所包括的方法是影响或改变所有上述生殖系统的腺体中的粘液基因、粘液分泌细胞和影响分泌性质的细胞、和细胞表面粘蛋白的分泌性作用的方法。
粘液可以通过其化学、物理和生物学性质鉴定。粘液的流变学或流动性质包括由于粘弹性和羊齿状(结晶作用)参数增加而导致的粘液的粘度、流速、剪切指数、粘液拉丝现象或伸展程度。改变或刺激阴道分泌的水合作用、粘度、数量或其它性质可以影响各种情况和疾病，包括，但不限于避孕、不孕不育、绝经期、性交困难、感染以及其它相关和不相关的病况。这些器官的功能和详述可参见Novak′sGynecology，12.sup.th edition，eds.Berek，Adashi and Hillard，Williams and Wilkins，Baltimore，Md.，1996。
本发明的方法和组合物还可增加雌性生殖道细胞系，例如，阴道和宫颈细胞的生长。所述细胞生长的增加可在治疗后很快或者仅仅几天之后发生。例如，治疗后仅仅2至3天，新形成的细胞的数量就可以是未处理前个体的2或3或4或5倍。根据治疗进程，新形成的细胞可以进一步的增加。例如，治疗后的个体可获得未治疗前约2至约20倍数量的年轻的新形成的细胞。其它个体可具有未治疗前约2至10倍数量的年轻的新形成的细胞。所述增加的细胞生长可修复和替换衰老细胞和组织，使雌性生殖道系变得年轻，并且大大的恢复和改善生殖相关的组织的健康状况。
因此，本发明至少具有两项总的用途。首先，本发明可增加生殖器官的分泌物中粘液和/或水的含量，从而改善健康并增加雌性生殖系统的润滑性。所述粘液的增加量还可抑制生殖并提供避孕。其次，本发明还可用于使衰老组织恢复年轻并促进这些组织的健康和弹性，例如，通过刺激细胞生长、基因表达和粘液分泌来获得。
雌性生殖系统作为内生殖器官的门禁，子宫宫颈在生殖中扮演着重要角色。以下功能都可归功于阴道/宫颈粘液以及它们在生殖中的作用1)精液在宫颈口虑过，精子被允许从相对不友善的阴道环境中进入子宫；2)精子在宫颈管内培养、养育以准备附着；3)精子储存在其中并随后释放用以与排卵作用相协调。Katz，D.F.人类宫颈粘膜研究最新资料<Human Cervical MucousResearch Update>.Am.J.Obstet.Gynecol.19911651984-6。
在雌激素的影响下，宫颈粘液变得稀薄并且粘性下降，当气铺展在玻片上时，可以看到羊齿状的图像人类宫颈粘膜研究最新资料<Human Cervical MucousResearch Update>.Am.J.Obstet.Gynecol.19911651984-6。雌激素改变宫颈粘液的实质性机理目前尚不清楚。但是可以参见，Nicosia S V.Physiology of theCervical Mucous.Sem.In Reproductive Endocrinology.1986；4313-321。宫颈粘液是粘液细胞分泌的粘蛋白和毛细渗出物的混合物，其含有水(85-98％)、电解质、血清和局部衍生的蛋白。粘蛋白是粘液的流变学性质的主要影响因素，但是所占体积不足1％。显然，在月经中期，雌激素刺激了基质细胞，其反过来刺激了粘液细胞。此时所产生的粘液的水含量更高，导致了部分的流变学变化，诸如产生了羊齿状。
在月经周期的排卵前和排卵期，在雌激素的影响下，人类宫颈以一天约600mg的速度分泌了大量的澄清且稀薄粘液。在黄体酮的影响下，该速率降至每天20-60mg，并且粘液变得稠厚且粘性。Moghissi，K S.宫颈不孕不育的机能<The function of the cervixinfertility>.Fert.Steril.1972 23295-306。
外源性的给予黄体酮作为避孕品时，宫颈粘液的粘度变化随着给药以并行方式发生变化。例如，Norplant，一种含有左炔诺孕酮的植入剂，在置入3天之内改变宫颈粘液，该作用被认为是其避孕作用的一个重要因素。Dunson T R等人，Norplant植入剂使用者产生避孕效果的作用时间第一部分宫颈粘液的变化<Timing on onset ofcontraceptive effectiveness in Norplant implant users PartI.Changes in Cervical Mucous>.Fert.Steril.199869258-66。在另一种只含黄体酮的产品Depo-Provera中也发现了相同的现象。Petta C A等人，Depo-Provera使用者产生避孕效果的作用时间第一部分宫颈粘液的变化<Timing of onset of contraceptiveeffectiveness in Depo-Provera usersPartI.Changes inCervical Mucous.>Fertil Steril.199869252-7。显然，宫颈粘液的变化可具有避孕效果，因为黄体酮的分泌与生殖力的巨大下降和生育力丧失之间具有联系。
P2Y2通道P2Y2受体是P2-嘌呤受体，是上皮细胞上的跨膜受体与嘌呤，特别是ATP和UTP发生反应。P2-嘌呤受体含有两种主要的种类P2X和P2Y。每种由至少7种类型(X1-7和Y1-7)组成。P2X类代表细胞膜配体-结合型离子通道，可通透Na+、K+、和Ca++。P2Y-嘌呤受体组成G-蛋白-连接的受体，通常与磷脂酶C配对，，由此，也与肌醇三磷酸配对。以促动能力来看，P2Y受体具有至少7种亚型。各种P2Y亚型的详细说明参见，例如，Abbrachio and Burnstock，Pharmac.Ther.64，445-475，1994，此文的整体公开内容在此引入作为参考。
P2Y2通道可以由本发明方法来调控。此通道开始于核苷酸(s)或核苷(s)结合到上皮细胞膜中的P2Y2受体。此通道典型的结合以活化蛋白激酶C(PKC)。蛋白激酶C的活化导致肌醇1，4，5-三磷酸酯和二酰基甘油水平的增加，导致Ca2+的流入(Garrad等人，J.Biol.Chem.1998，273(45)，29437-29444)。蛋白激酶C的活化也显示可影响粘蛋白的分泌(Li等人，J.Biol.Chem.2001，276(44)40982-90)。活化的蛋白激酶C可将一种称为豆蔻酰化丙氨酸富含的C激酶底物(MARCKS)的蛋白磷酸化，然后其从质膜迁移至上皮细胞的细胞质。磷酸化-MARCKS蛋白由蛋白磷酸酶2A(PP2A)在细胞质内去磷酸化，由此，重新获得其与膜结合的能力。MARCKS可与肌纤蛋白相关，肌球蛋白可由此调节含粘蛋白的颗粒向细胞外周的移动。由此，dNTP-P2Y2受体结合后发生了一系列的生化事件，最终导致了粘蛋白(一种糖蛋白，是粘液的一部分)的分泌。粘蛋白对雌性生殖道产生了天然的润滑和湿润作用。
根据此发明，维生素A(视黄酸)增加了P2Y2受体的表达，并同时增加了阴道和宫颈上皮细胞的细胞增殖。
类视黄醇和类胡萝卜素本发明组合物可包括一种或多种类视黄醇或类胡萝卜素。
IUPAC-IUB联合生化命名委员会陈述，类视黄醇是一类由四个类异戊二烯单元以头尾相连的形式结合在一起的化合物。所有的类视黄醇在形式上可衍生自含五个碳-碳双键并且在非环状结构末端含有官能团的单环母体化合物。基本的类视黄醇类结构可以再分成三段，主要是极性末端、共扼侧链、和环己烯环。最常见的天然类视黄醇的基本结构被称为视黄醇、视黄醛和视黄酸。然而，本发明的类视黄醇并不仅限于视黄醇、视黄醛和视黄酸。相反，本发明类视黄醇和类胡萝卜素还可包括落入以下式IA或IB的化合物 其中X是CH或N；R是H或1-6个碳原子的烷基；
m是0-5的整数；n是0-2的整数；r是0-2的整数；L是-(C＝Z)-NH-或-NH-(C＝Z)-，其中的Z是O或S；Q是苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基或pyrrazolyl，其中的苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基或pyrrazolyl基可以被一个或两个R1基团取代；W是F、Br、Cl、I、C1-6烷基、氟-取代的C1-6烷基、NO2、N3、OH、OCH2CH3、OC1-10烷基、四唑、CN、SO2C1-6-烷基、SO2C1-6-氟-取代的烷基、SO-C1-6烷基、CO-C1-6烷基、COOR8、苯基，苯基自身被W基团(除苯基或取代的苯基以外的基团)取代，条件是X是CH且r是0，然后n不为0且至少一个W基团不是烷基；A是(CH2)q，其中q是0-5、含有3-6个碳原子的低级支链烷基、含有3-6个碳原子的环烷基、含有2-6个碳原子和1或2个双键的烯基、含有2-6个碳原子和1或2个三键的炔基；并且B是COOH或其药学可接受的盐、COOR8、CONR9R10、CH2OH、CH2OR11、CH2OCOR11、CHO、CH(OR12)2、CHOR13O、COR7、CR7(OR12)2、CR7OR13O，其中的R7是含有1-5个碳原子的烷基、环烷基或烯基，R8是1-10个碳原子的烷基或三甲基硅烷基烷基，其中的烷基具有1-10碳原子，或者是5-10个碳原子的环烷基，或者R8是苯基或低级烷基苯基，R9和R10各自为氢、1-10个碳原子的烷基、或5-10个碳原子的环烷基、或苯基或低级烷基苯基，R11是低级烷基、环烷基、低级烷基取代的环烷基、苯基或者低级烷基苯基，R12是低级烷基，R13是2-5个碳原子的二价烷基基团。
在某些
具体实施例方式
中，类视黄醇或类胡萝卜素是式II所定义的化合物
其中R20、R21和R22各自独立的为C1-6烷基、氟-取代的C1-6烷基、羟基取代的C1-6烷基、CH2OH、CH2OR11、CH2OCOR11、CHO、CH(OR12)2、CHOR13O、COR7、CR7(OR12)2、或CR7OR13O。
术语烷基指的是任何涵盖任一和所有被认作常规烷基、支链烷基和环烷基的基团。术语烯基指的是涵盖具有一个或多个不饱和点的任一常规烯基、支链烯基和环烯基的基团。相似的，术语炔基指的是涵盖具有一个或多个三键的常规炔基、和支链炔基。
低级烷基指的是具有1至6个碳原子的烷基，对于低支链和环烷基基团来说，具有3至6个碳原子。相似的，低级烯基指的是具有2至6个碳原子的常规低级烯基，对于支链和低级环烯基来说，具有3至6个碳原子。同样的，低级炔基也相似的定义为，具有2至6个碳原子的常规低级炔基，对于支链低级炔基来说，具有4至6个碳原子。
式IA、B和II的化合物可以按照美国专利号6,437,129和美国专利号6,437,003所描述的制备，其以整体引入作为参考。
在本发明中，可以制备任一可成盐化合物的药学可接受的盐，例如，酸性或胺官能性。药学可接受的盐是任一保留母体化合物活性单不会向给药对象造成任一有害或不希望的作用的盐。药学可接受的盐可衍生自有机或无机碱。盐可以是单价或多价离子。特别感兴趣的是无机离子、钠、钾、钙和镁。有机盐可以用胺制备，特别是铵盐诸如单-、二-和三-烷基胺或乙醇胺。也可以用咖啡因，氨基丁三醇和相似的分子成盐。其中，需要有一个具有足够碱性的氮原子以形成酸加成盐，这样可以用无机或有机酸或烷化剂诸如碘代甲烷成盐。优选的盐是那些用无机酸诸如盐酸或磷酸所成的盐。简单有机酸诸如单-、双-或三-元酸中的任一种都可以使用。
本发明的某些化合物可以具有反式和顺式异构体。此外，本发明化合物可含有一个或多个手性中心，因此，可以对映异构体和非对映的形式存在。本发明的范围用以涵盖所有这种异构体，以及顺式和反式异构体的混合物、非对映混合物和对映异构体(光学异构体)消旋混合物。
核苷和核苷酸本发明组合物可含有一种或多种核苷或核苷酸。所述核苷酸或核苷可包括例如，dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、ATP、GTP、CTP、TTP、UTP，以及本领域技术人员可得到的任一所述核苷酸(s)或核苷(s)的衍生物。
在某些
具体实施例方式
中，核苷酸或核苷是式III所定义的化合物 其中X1、X2和X3各自独立的为O-或S-。在某些具体实施方式
中，X2和X3各自为O-；R1是O、亚胺、亚甲基、或二卤代亚甲基(例如，二氯亚甲基、二氟代亚甲基)。优选的，R1是氧或二氟代亚甲基。
R2是H或Br。优选的，R2是H。式III的化合物的例子是尿嘧啶核苷5′-三磷酸酯(UTP)和尿嘧啶核苷5′-O-(3-硫代三磷酸酯)(UTPγS)。
在另一项具体实施方式
中，核苷酸或核苷是由式IV定义的化合物
其中的Y是尿嘧啶或腺嘌呤。
在本发明的进一步的具体实施方式
中，核苷酸或核苷是式V所定义的化合物 其中X1、X2、X3和R1如上文所定义；当R2不存在且在N-1和C-6(腺嘌呤)之间存在一个双键时，R3和R4是H，或者，当R2是O且在N-1和C-6(腺嘌呤1-氧化物)之间存在一个双键时，R3和R4是H，或者，R3，R4和R2一起为-CH＝CH-，形成一个从N-6至N-1的环，其中在N-6和C-6(1，N6-乙烯腺嘌呤)之间为双键。
在本发明的进一步的具体实施方式
中，核苷酸或核苷是式VI所定义的化合物
其中X1、X2、X3和R1如上文所定义；当R7不存在且在N-3和C-4(胞嘧啶)之间存在一个双键时，R5和R6是H，或者，R5、R6和R7一起为-CH＝CH-，组成从N-3至连接在R5和R6(3，N4-乙烯胞嘧啶)上的N原子的环。
由此，本发明组合物可以含有一种或多种具有能有效刺激阴道或雌性生殖到粘膜分泌物的量的式III、IV、V或VI的化合物。
可描述上述式III的化合物包括(a)尿嘧啶核苷5′-三磷酸酯(UTP)；(b)尿嘧啶核苷5′-O-(3-硫代三磷酸酯)(UTPyS)；以及(c)5-溴-尿嘧啶核苷5′-三磷酸酯(5-BrUTP)。这些化合物都是已知的，或者可以通过公知操作或本领域技术人员显而易见的变化性操作制得的。通常参见N.Cusack and S.Hourani，Annals N.Y.Acad.Sci.603，172-81(entitled″Biological Actions of ExtracellularATP″)。例如，UTP可以根据Kenner，等人，J.Chem.Soc.1954，2288；或Hall和Khorana，J.Am.Chem.Soc.76，5056(1954)中的方法制备。参见See Merck Index，Monograph No.9795(11th Ed.1989)。UTPγS可以按照记载于R.S.Goody and F.Eckstein，J.Am.Chem.Soc.93，6252(1971)中的方法制备。
阐述式IV的化合物包括，P1，P4-二(阿糖腺苷-5′)四磷酸酯或P1，P4-二(尿嘧啶核苷-5′)四磷酸酯。这些化合物可以按照已知的操作或其修饰性操作制备，如记载于P.Zamecnik，等人，，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89，838-42(1981)；和K.Ng and L.E.Orgel，Nucleic Acids Res.15(8)，3572-80(1987)中的方法。P1，P4-二(尿嘧啶核苷-5′)四磷酸酯可以通过与C.Vallejo，等人，，Biochem.Biophys.Acta 438，304-09(1976).记载的方法相似的方法制备。
阐述上式V的化合物包括(a)阿糖腺苷5′-三磷酸酯(ATP)和(b)1，N6-乙烯阿糖腺苷5′-三磷酸酯。
阐述上式VI的化合物包括(a)胞啶5′-三磷酸酯和(b)3，N4-乙烯胞啶5′-三磷酸酯。这些化合物可以按照已知的操作或其本领域技术人员显而易见的修饰性操作来制备。例如，核苷的磷酸化作用通过诸如D.Hoard and D.Ott，J.Am.Chem.Soc.87，1785-1788(1965)；M.Yoshikawa，等人，Tetrahedron Lett.5065-68(1967)and idem.，Bull.Chem.Soc.(Jpn)42，3505-08(1969)；J.Moffatt and H.Khorana，J.Am.Chem.Soc.83，649-59(1961)；和B.Fischer，等人，J.Med.Chem.36，3937-46(1993)以及其中的参考资料中的方法来实施。胞啶和阿糖腺苷的乙烯衍生物通过诸如areprepared byknown methods such asN.Kotchetkov，et al.，Tetrahedron Lett.1993(1971)；J.Barrio，等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.46，597(1972)；J.Secrist，等人，Biochemistryll，3499(1972)；J.Bierndt，等人，Nucleic Acids Res.5，789(1978)；K.Koyasuga-Mikado，等人，Chem.Pharm.Bull.(Tokyo)28，932(1980)中所描述的方法制备。α、β和γ硫代磷基团的衍生物可以通过以下方法或者改编后的方法衍生得到J.Ludwig and F.Eckstein，J.Org.Chem.54，631-35(1989)；F.Eckstein and R.Goody，Biochemistry 15，1685(1976)；R.Goody and F.Eckstein，J.Am.Chem.Soc.93，6252(1971)。
R1为CCl2和CF2的式III、V或VI的化合物可以通过与G.Blackburn，等人，J.Chem.Soc.Perkin Trans.I，1119-25(1984).所描述的方法相似的方法制备。R1是CH2的式I、II、III的化合物可以通过与T.Myers，等人，，J.Am.Chem.Soc.85，3292-95(1963)所描述的方法相似的方法制备。
此外，UTP、ATP、CTP、P1P4-二(阿糖腺苷-5′)四磷酸酯、3，N4-乙烯胞啶三磷酸酯、1，N6-乙烯腺嘌呤5′-三磷酸酯、阿糖腺苷1-氧化5′三磷酸酯、ATPγS、ATPβS、ATPαS、AMPPCH2-P、AMPPNHP、N4-乙烯胞啶和1，N6-乙烯阿糖腺苷都是商业可得的，例如，购自SigmaChemical Company，PO Box 14508，St.Louis，Mo.63178。
使用方法本发明涉及多种治疗或预防雌性哺乳动物的阴道和/或生殖问题的方法。这些方法涉及向雌性哺乳动物提供有效量的类视黄醇或类胡萝卜素和/或一种或多种核苷酸(s)或核苷(s)。通常的给药是局部或阴道内给药。
治疗雌性哺乳动物阴道和/或生殖问题包括调节粘液水平以促进或降低雌性哺乳动物的剩余能力，或者缓解或消除雌性哺乳动物的阴道干燥。治疗因此可包括缓解或消除一种以上的雌性哺乳动物的阴道和/或生殖问题。
在一项
具体实施例方式
中，本发明方法增加了阴道或宫颈上皮细胞的生长。在另一项具体实施方式
中，该方法涉及增加P2Y2受体或雌激素受体或血管内皮生长因子在阴道或宫颈上皮细胞中的表达。所述方法可以预防或治疗哺乳动物的阴道干燥，或者维持或促进哺乳动物中阴道粘液正常的保护性功能。
此文中所使用的术语“哺乳动物”指的是动物，通常的是恒温动物。哺乳动物包括牛、水牛、绵羊、山羊、猪、马、猫、大鼠、兔、小鼠和人类。同样包括其它的家畜、驯养动物和系留动物。
治疗涉及向雌性动物给予有效量的类视黄醇或类胡萝卜素、维生素A、维生素A前体或相关视黄酸、视黄醛或视黄醇。维生素A前体是可以产生维生素A的化合物，例如，类胡萝卜素诸如β-胡萝卜素。相关的视黄酸、视黄醛或视黄醇华哈瓦具有与维生素A相似的活性。类视黄醇、维生素A、维生素A前体和/或相关化合物(s)可以含有其它活性成分，例如，一种或多种核苷酸(s)或核苷(s)、其它维生素(例如，维生素E)、真芦荟等等的组合物的形式给药。通常的，含有维生素A和其它的化合物(s)的组合物都是阴道内给药的。
组合物给予本发明组合物以改善雌性生殖系统的健康，以刺激润滑性液体的分泌和/或已知生殖。
为了获得所需效果(s)，组合物可以单一或分开剂量给药，例如，至少约0.001μg/kg至约100-200mg/kg，约0.01μg/kg至约30-50mg/kg，约0.1μg/kg至约10-20mg/kg，或约1.0μg/kg至约1.0至约10mg/kg体重的一种或多种类视黄酸或类胡萝卜素或核苷酸或核苷，尽管其它的剂量也可获得有益的效果。所给药的量可根据不同的因素，包括但不限于哺乳动物的疾病、重量、健康状况、健康、年龄进行改变，而无论是需要预防生育或治疗阴道干燥。所述因子可以容易的由临床医生使用本领域可得的动物模型或其它的测试系统来确定。
本发明治疗剂的给药可以是单一剂量、多剂量、连续或间断模式来给药的，其取决于例如，受者的健康状况和其它本领域医生公知的因素，而不论是为了治疗性还是预防性目的。本发明组合物的给药可以基本上连续的在一段预选的时段内给药，或者可以一系列间隔剂量的形式给药。通常会考虑局部给药。
组合物则是通过将活性成分以适宜的浓度相结合的方式制备得到。其它的由本领域技术人员选择的活性或非活性试剂都可任选的加入其中。剂量单元中所包含的给定活性试剂的绝对重量的范围很广。例如，约为0.00μg至约50mg，或约0.01μg至约10mg，或约0.1μg至约1mg的至少一种视黄酸衍生物或脱氧核苷三磷酸酯，或者诸多类视黄醇或类胡萝卜素和核苷酸或核苷可以进行给药。另外的，单位剂量可以从约0.00μg至约1000μg，从约0.01μg至约750μg，从约0.1μg至约1mg，从约1.0μg至约750μg，从约2.5μg至约600μg，从约5.0μg至约500μg，或者从约7.5μg至约400μg。
本发明组合物的每日剂量也可进行改变。所述每日剂量可以例如，从约0.001mg/天至约50mg/天，从约0.01mg/天至约25mg/天，从约0.1mg/天至约12mg/天，从约0.1mg/天至约8mg/天，从约0.1mg/天至约4mg/天以及从约0.1mg/天至约2mg/天的一种或多种类视黄醇或类胡萝卜素或核苷酸或核苷。
类视黄醇或类胡萝卜素或核苷酸或核苷在组合物中的浓度也可以改变。例如，浓度可以从约1μM至约1000μM，或者从约5μM至约500μM，或者从约7μM至约300μM，或者从约8μM至约200μM，或者从约10μM至约100μM。
由此，本发明含有治疗性组合物的一种或多种适宜的单位剂型可以通过各种途径给药，包括口服、非肠道、(包括皮下、静脉、肌内和腹膜)、直肠、皮肤、经皮、胸腔内、肺内、阴道内和鼻内(呼吸)途径给药。治疗性组合物可以制成用于缓释(例如，使用微囊化，参见WO94/07529和美国专利号4,962,091)的剂型。适当的时候，制剂也可方便的存在于分离的单位剂型中，并可通过任一药学领域中公知的方法制备。所述方法可包括将治疗性试剂于液体载体、固体基质、半-固体载体、细分的固体自体和它们的结合体相混合的步骤，然后，如有需要，将产品引导或塑形成所需的给药方式。
当本发明的治疗性组合物制备成阴道内给药时，它们通常与药学可接受的载体、稀释剂或赋型剂相结合以形成一种药学制剂、或单位剂型。对于阴道内给药，组合物可以制成溶液、混悬液、乳液、粉末、颗粒制剂，或者存在于天然或合成性聚合物或树脂中。活性组合物也可以丸剂或糊剂的形式存在。本发明的阴道内给药的治疗性组合物也可制成缓释形式的，例如，组合物可以被包衣、微-包裹，或者置于缓释给药装置中。在所述制剂中的活性物质总量为制剂重量的0.1-99.9％。
“药学可接受”指的是可与其它制剂成分相容的载体、稀释剂、赋型剂和/或盐，并对受者没有毒害性。
含本发明治疗性组合物的药物制剂可以使用公知和易于获得的成分通过本领域公知的操作制备。例如，组合物可以与常规赋型剂、稀释剂或载体制备，制成片剂、胶囊、溶液、混悬液、粉末、气溶胶等等。适于所述制剂的赋型剂、稀释剂、和载体的例子包括缓冲剂、和填充剂和增充剂诸如淀粉、纤维素、糖、甘露醇和硅衍生物。诸如羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙甲基纤维素和其它的纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮的粘合剂也可包括其中。诸如甘油的湿润剂、诸如碳酸钙和碳酸钠的崩解剂也可包括其中。用于延缓溶出的试剂诸如石蜡也可包括其中。吸收促进剂诸如季铵类化合物可以包括在其中。表面活性剂诸如 蜡醇和单硬脂酸甘油酯可以包括其中。吸附载体诸如高岭土和膨润土可以加入。润滑剂诸如滑石、硬脂酸钙和镁、以及固体聚乙二醇可以加入。本发明组合物也可含有增稠剂诸如纤维素和/或纤维素衍生物。它们还可含有胶类诸如汉升胶、瓜尔胶或carbo胶或阿拉伯胶，或者另外的聚乙二醇类、皂土和蒙脱石等等。本发明组合物也可含有其它的维生素诸如维生素B、维生素C或维生素E。在一项具体实施方式
中，本发明组合物还可含有芦荟油。
本发明治疗性组合物还可制成乳液、混悬液、水性或无水溶液或分散体，或者，另外的，便于阴道内给药的乳液或混悬液或药膏的形式。活性组合物和其它成分可以组成存在于油性或水性载体中的混悬液、溶液、或乳液，并可含有配制性试剂诸如混悬剂、稳定剂和/或分散剂。此外，通过将无菌固体无菌隔离，或者通过从溶液中冷冻干燥以使活性组合物和其它的成分可以粉末状形式存在，用于在使用前与适宜的载体例如，无菌且不含热源的水构成制剂。
这些制剂可含有本领域公知的药学可接受的载体、和佐剂。除了水之外，也可以例如，使用从生理学观点可接受的一种或多种有机溶剂(s)选自诸如丙酮、乙醇、异丙醇、乙二醇醚诸如以“Dowanol”出售的产品、聚乙二醇、短链酸的C1-C4烷基酯、乳酸乙酯或异丙酯、甘油三脂肪酸酯诸如以“Miglyol”销售的产品、豆蔻酸异丙酯、动物矿物和植物油以及聚硅氧烷的溶剂。
如有需要，可以加入选自抗氧化剂、表面活性剂、其它防腐剂、成膜剂、角质溶解剂或comedolytica gents、香料、矫味料和着色剂的佐剂。可加入的抗氧化剂诸如叔-丁基氢醌、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯和a-生育酚及其衍生物。
此外，组合物非常适于制成缓释剂型等剂型。可以这样制备制剂以使它们在一段时间内在雌性生殖系统中释放活性组合物。可以制备包衣、包膜、以及保护性基质，例如，选自聚合性物质诸如多乳酸-乙醇酸酯、脂质体、微乳、微粒或蜡。
对于阴道内给药，治疗剂可以按照本领域公知的方法制备用以直接给予阴道区域。适于阴道给药可以是例如，膏剂、乳剂、凝胶、分散体或微乳、增稠至极稠或略稠的洗液、浸透垫、软膏、气溶胶制剂(例如，喷雾或泡沫剂)、膏剂、洗液、糊剂、凝胶剂、喷雾剂和气溶胶的形式。另外的，组合物可以制成部分含有粘附性聚合诸如丙烯酸聚丙烯酸酯/乙酸乙烯酯共聚物。
油膏和膏剂可以，例如，与水性或油性基质一起，在加入适宜的增稠剂和/或胶凝剂的情况下制备。洗液可以与水性或油性基质一起制备，其通常含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、增稠剂或着色剂。液体喷雾常规的从压力包装中传送释放，例如，通过一种特定形状的封闭物释放。活性组合物也可通过电离子透入释放，诸如公开于美国专利号4,140,122；4,383,529或4,051,842中所述。本发明治疗试剂在阴道制剂中的重量百分比可以取决于各种因子，但是通常为制剂总重量的0.01％-95％，典型的为0.1-85％重量。
本发明药物制剂可包括作为任选成分的药学可接受的载体、稀释剂、增溶或乳化剂、以及它们的本领域可得的盐。所述物质的示例包括常规盐水溶液诸如生理缓冲盐水溶液和水。
可用于本发明药物制剂的载体和/或稀释剂的特定的非-限制性示例包括水和生理可接受的缓冲盐水溶液诸如pH约为4.5至约5.5的磷酸酯缓冲盐水溶液。
进而，无论用于上诉病况或其它的病况，活性成分还可用于与其它的治疗性试剂相联合使用，所述治疗剂包括例如，抗-微生物试剂、疼痛缓解剂、抗-盐试剂、维生素(例如，维生素B、C或E)、芦荟油等等。
本发明进一步的涉及到用于调控生殖和/或阴道干燥的包装了的药物组合物，诸如小盒或其它的容器。小盒或者容器可含有治疗有效量的控制生殖和/或阴道干燥的药物组合物以及使用控制生殖和/或阴道干燥的药物组合物的说明书。药物组合物包括治疗性有效量的本发明的组合物用以控制阴道干燥。
此外，本发明提供了可以缓释模式释放类视黄醇、类胡萝卜素和/或核苷的阴道插入剂。所述阴道插入剂可以是生物可降解的或非-生物可降解的。阴道插入剂可提供以适宜速度缓释活性成分的方式，以获得所需的粘液分泌、基因表达和细胞增殖的水平。
在某些
具体实施例方式
中，活性成分可以与油性基质或油膏一起以形成阴道插入剂。此类制剂含有活性成分和含溶解的和/或混悬的抗菌剂/防腐剂的碳氢-基质的半固体，以及缓冲系统。这些基质中的矿物油组分可以是科中粘度的掺入了异丁烯、胶体硅或固体石蜡的硬脂酸盐的矿物油。上述系统的例子是白色和黄色凡士林。此类的基质可以通过熔融将高-熔点蜡掺入到流体矿物油中获得，或者通过在升高温度下将聚乙烯掺入到矿物油中获得。聚硅氧烷(也叫硅酮)适于用作此类基质中，并且典型的具有约0.5-10.sup.6厘沲的粘度。连接到聚硅氧烷上的有机物优选的为低分子量含1-8个碳原子的碳氢基团诸如低级烷基、低级烷烯基、苯基和烷基取代的苯基、和苯基(低级)烷基诸如苄基。在所述基团中，每一低级烷基或烯基优选的含有1-3个碳，诸如二甲基硅醚聚合物。
吸收基质可与油相系统一同使用。除了活性成分，能乳化大量水的附加成分也可以使用。制备的油包水(w/o)乳液的特点是外相是油相。防腐剂/抗菌剂诸如对羟苯甲酸酯、缓冲系统等等可以掺入到这些基质中与活性成分一起作为被乳化的水性溶液。各种常规用作乳化剂的添加剂包括但不限于单独或联合形式的胆固醇、羊毛脂(含胆固醇和胆固醇酯以及其它乳化剂)、羊毛脂衍生物、蜂蜡、脂肪醇、羊毛蜡醇、低HLB(疏水性/疏脂性平衡)乳化剂、以及各种例子型和非离子型表面活性剂。
油包水(W/O)乳液基质可以用在本发明的阴道插入剂中。这些制剂可以是包括液体或膏剂的常规吸收基质的广义范围。特命可以通过将活性成分与将其溶解或分散在其中的油相成分、抗菌剂/防腐剂和缓冲盐一起制成混合，并加入水以形成油包水乳液。
水包油(O/W)乳液基质可以用在本发明的阴道插入剂中。这些体系为半固体乳液、微乳或含灭滴灵的泡沫乳化体系。通常，所述体系具有“膏状白色”的外观。典型的，内部的油相在组合物中的重量百分比约为10％至约40％，而外相中可含80％或更多的水。油相可含有但不限于，长链醇(鲸蜡醇、硬脂醇)、长链酯(肉豆蔻酯、棕榈酸酯、硬脂酸酯)、长链酸(棕榈酸、硬脂酸)、植物和动物油一起各种蜡。这些可以与阴离子、阳离子、非离子或两性表面活性剂一起，或者与特定的非离子型表面活性剂一起制备。以下示例是这些体系的示例，但是本领域技术人员可以理解，代替、加入、省去某些特点的组分是本领域技术人员可以做到的。
含有活性成分的阴道插入剂和栓剂可以是例如，油性质地，可以在体温下熔融，或者是可以在阴道流体中熔融的聚乙二醇-基质的组合物。栓剂的附加基质是甘油和甘油明胶。
使用胶凝剂制备的缓冲凝胶与活性成分一起制成阴道插入剂。胶凝剂的某些例子是纤维、阳离子聚合物、聚氧乙烯和羧乙烯聚合物。本发明制剂中有用的纤维包括例如，甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、和羟丙基纤维素。本发明制剂中使用的阳离子性聚合物包括“Polyquaternium-10”，一种聚合性羟乙基纤维素与三甲铵-取代的环氧化物反应得到的季铵盐，等等。本发明制剂中使用的聚氧乙烯包括羊毛脂的聚氧乙烯-聚氧丙稀酯及其衍生物。用于本发明制剂的羧乙烯聚合物包括交联丙烯酸聚合物，例如，商业上可从B.F.Goodrich Co.，Akron，Ohio，得到的CARBOPOL.TM。
阴道插入剂可以含有提供在长时间内以恒定素的释放活性试剂的聚合的混合物或包衣剂。在某些具体实施方式
中，阴道插入剂含有水-溶性致孔剂诸如聚乙二醇(PEG)，其可与水溶性聚合混合以增加插入物的耐久性，并且延长活性物质的释放。所述水溶性致孔剂可以是聚乙二醇、聚丙二醇、糖(乳糖、蔗糖、葡萄糖等等)聚合的混合、盐类、泊洛沙姆、聚乙烯醇以及其它水溶性食品级和药品级添加剂。
当PEG作为致孔剂使用时，PEG的分子量为约200至约20,000，另外的，从约400至约8,000。例如，可使用具有分子量为540至约8000的PEG。在另一项具体实施方式
中，PEG的分子量约为1,000至约8,000或以上。用于给本发明制剂包衣的PEG的分子量取决于PEG成膜的能力，所成的膜非-粘性，具有足够的强度并能产生足够的孔径以控制体内或体外活性成分在所需时段内的释放。
本发明中所使用的致孔剂的量足以调节生物活性化合物以所需速率释放。优选的，有效量的致孔剂可提供长期的活性试剂的传递给药，由此可增加缓释药物植入剂的可用寿命。有效量的致孔剂可取决于所需的释放速率和持续时间，以及在包衣过程中形成连续的微孔薄膜的能力。为了保证在一段较长的时间内的持续释放，需使用高分子量的PEG。例如，PEG 8000以10-50％优选20-45％，最优选30-45％的浓度使用时，可以提供长于100天内的释放。PEG的浓度在此以每干燥基质的重量％表示，并代表干燥后包衣薄膜中PEG的浓度。相似的，薄膜的厚度为5-50μm，优选为30从10-30μM，最优选的为15-25μm。
以实施例中所显示的体内和体外研究为基础，活性成分的溶解速率和掺入在包衣薄膜中的致孔剂的量之间存在着很好的对应关系。根据所需的释放长度，可以根据需要调节PEG的浓度范围。例如，可以根据包衣插入剂的体外活性成分在120-小时时间点的溶出速率中预测出体内的溶出释放维持时间。
本发明阴道插入剂可含有水不溶性聚合物。所述聚合的例子可以是乙基纤维素、丙烯酸树脂、甲基丙烯酸和丙烯酸醚酯的共聚物、聚乳酸、PLGA、聚氨酯、聚乙烯醋酸乙酯共聚物、聚苯乙烯-丁二烯共聚物和硅酮橡胶、或者它们的混合物。例如，聚合物和以商品名AquacoatECD 30和Eudragit RS 30和NE 30D(Rhom Tech，Inc.的注册商标)出售的化合物都可以使用。
适于用于本发明的聚合物是在致孔剂存在的喷雾和干燥操作中能形成连续包衣薄膜的聚合物。使用所述聚合制备的控释薄膜负责插入期间非常的稳定。薄膜必须具有足够的强度以抗御撕裂和内渗透压，并且具有足够的稳定性以在插入期间溶胀或水合化。
在一项
具体实施例方式
中，本发明包衣制剂用于包衣含有活性成分的小丸，以压制成固体、生物可降解的插入计，然后给药用于刺激粘液分泌、基因表达和/或细胞增殖。
本发明进一步的通过以下非限制性的实施例进行阐述。
实施例1材料和方法细胞系。37℃下CO2气体条件下，人宫颈上皮细胞(ME-180，ATCC)在含10％热灭活胎牛血清(Invitrogen)McCoy′s SA介质(Invitrogen)中繁殖培养。所用的反式-、9-顺式-和13-顺式-视黄酸都购自ICNBiomedicals。视黄酸母液在DMSO中制备。
毒性和增殖试验。细胞毒性/增殖试验如下进行。先用HBSS冲洗ME-180细胞，再加入3mL of胰蛋白酶(0.25％)，并加入EDTA置于T75烧瓶15分钟。在胰蛋白酶中的ME-180细胞加入的7mL的含10％FBS的McCoy′s SA介质中。ME-180细胞；离心5分钟，除去上浮液。ME-180细胞重新混悬在10mL的含FBS的McCoy′s SA介质中用于计数。ME-180细胞离心5分钟，除去上浮液。ME-180细胞重新混悬成6×104个细胞每mL(62mL总体积)的浓度。在三块24-孔的平板中，向总计60个孔的每个孔中加入1毫升液体。ME-180细胞在孔中附着过夜。然后从ME-180细胞中除去介质，然后细胞用1mL的HBSS冲洗一遍。含10％FBS的1mL的McCoy′s SA介质向每一含有不同浓度(0-10μM)的视黄酸的平板中重复加入。在加入了含视黄酸的介质后的第1、2或三天计数每板中的ME-180细胞。
细胞计数。从ME-180细胞中除去介质，细胞用1mL的HBSS冲洗一遍。向每一个孔中加入胰蛋白酶(150uL)持续～15分钟用以除去细胞。向每孔中加入含10％FBS的1mL的McCoy′s 5A介质。充分混合ME-180细胞，并使用血细胞计数器计算细胞数量。
从ME-180细胞中提取RNA。ME-180细胞以每个T25烧瓶中2×105细胞个的数量分散(5mL总体积)，并繁殖4天。在第4天，除去介质。含0、10nM、100nM或1μM反式-视黄酸的的含10％FBS的5mL的McCoy′s SA介质重复加入到ME-180细胞之中。ME-180细胞与这些溶液一起孵化4、8、16或24小时。除去介质，700μL的溶胞缓冲液加入到烧瓶中。用细胞刮棒从烧瓶中刮去细胞。根据制造商的说明书使用Ambion RNA queous将RNA分离出来。沉淀的RNA重新混悬于1uL的含RNase抑制剂的经DEPC-处理过的水中。作为对照的总宫颈RNA购自Ambion，Inc。
RNA的逆转录。约7μL的RNA与3μL的引发剂在80℃下孵化10分钟，然后立即置于冰中。制备含有4μLDEPC水、4μL 5X反应缓冲液、1μL dNTPs、1μL的RNase抑制剂和1μL的逆转录酶的主混合物用于反应。向RNA/引发剂溶液中将加入10μL的主混合物，并在42℃下放置2小时。所得cDNA与3.5μL的NaOH溶液在70℃下孵化10分钟以水解剩余的RNA。5μL的0.5M Tris/EDTA加入溶液中以中和溶液。为了沉析cDNA，加入125μL的3M NH40Ac、5μL的直链聚丙烯酰胺和700μL的无水乙醇。搅拌溶液并在-20℃下放置过夜。在4℃的14000rpm条件下离心样本30分钟。除去乙醇，干燥样本10分钟，cDNA重新在10-12μL的PCR级别水中混悬。
聚合酶链反应(PCR)。使用Advantage 2 PCR小盒(Ambion)制备用于PCR反应的主混合物，其中含有37-38μL的PCR级水、5μL的10X PCR缓冲剂、1μL的dNTPs、1μL的β-肌纤蛋白引发剂(10μM，任选对照)和2μL的试验引发剂(10μM，P2Y2，血管内皮生长因子(VEGF)或雌激素受体α(ER-α))。加入2微升的cDNA和1μL的DNA聚合酶。循环条件如下95℃下5分钟，循环25-30次(95℃下30秒，63或65℃下1分钟，68℃下3分钟)；68℃下5分钟。所使用的PCR引发剂为
P2Y2-特异性引发剂(得650bp的PCR产品为)编码链5′-TGTCTTCGCCCTCTGCTTCC-3′(序列号1)；非编码链5′-GTCAGGCCAGGGGTGTCATT-3′(序列号2)。
β-肌纤蛋白-特异性引发剂(PCR product 300bp)编码链5′-AGTCGGTTGGAGCGAGCATC-3′(序列号3)；非编码链5′-GGGCACGAAGGCTCATCATT-3′(序列号4)；雌激素受体α(ER-α)特异性引发剂(PCR产品650bp)编码链5′-GGCTGCAAGGCCTTCTTCAA-3′(序列号5)；非编码链5′-CATGCGGAACCGAGATGATG-3′(序列号6)。
血管内皮生长因子(VEGF)特异性引发剂(PCR产品750bp)编码链5′-GCCACCACACCATCACCATC-3′(序列号6)；非编码链5′-CCCAAAGCACAGCAATGTCC-3′(序列号7)。
粘蛋白-4(MUC-4)特异性引发剂(PCR产品800bp)编码链5′-AGCCCAGGACTGTGGTCTGC-3′(序列号8)；非编码链5′-GCTCACGTTCAGGGCTGTCA-3′(序列号9)；实施例2维生素A对宫颈细胞生长和基因表达的影响研究ME-180宫颈细胞与某些浓度的维生素A衍生物的相互反应以确定维生素A衍生物是否会影响ME-180的细胞生长和基因表达。
ME-180细胞的细胞增殖。ME-180细胞与维生素A衍生物一起孵化至3天。每天计数ME-180细胞的数量。这些试验的所得结果示于图2和3中。
图1中的数据显示，使用非常低浓度的维生素对细胞生长基本没有影响。例如，0.0nM(阴性对照)、1nM、10nM和100nM的反式-视黄酸、9-顺式-视黄酸或13-顺式-视黄酸对细胞生长几乎没有影响。然而，暴露于反式-视黄酸中的细胞显示，其生长要快于暴露在其它试剂或不暴露在试剂中的细胞(未暴露的、阴性对照细胞)。
因此，进行另一项使用100nM至10μM浓度的视黄酸的试验。如图2所阐述的，在用1μM或10μM反式-视黄酸治疗后的，比没有用视黄酸处置(阴性对照)出现了更多的细胞。这些数据表明反式-视黄酸促进培养的ME-180细胞生长。相反，用13-顺式-视黄酸处置的细胞育阴性对照一样都没有生长，这表示13-顺式-视黄酸在微摩尔浓度下对ME-180细胞有害。
使用聚合酶链反应和ME-180 cDNA的表达试验。从用反式-视黄酸(维生素A)处置24小时的ME-180细胞中分离出RNA。在沉淀后，RNA用作上述逆转录DNA合成的模板。然后使用PCR工艺以放大新合成的DNA用以确定P2Y2受体基因大致的转录水平(约600bp PCR产品)。保持在恒定表达水平中的“机构-保护基因”或基因也用PCR方法以进行比较。用P2Y2测试的机构保护基因是β-肌纤蛋白(～300bp产品)。
如图3所示，对照β-肌纤蛋白引发剂的加入导致合成了约300bp的cDNA产品，这与所有的样本中的量大致相当。该结果显示，大致相同量的模板RNA出现在所有的样本中。然而，如图3同时所表示的，P2Y2产品基本上不可在2、3和7(宫颈cDNA对照，不含维生素A的ME-180细胞，不含维生素A或血清的ME-180细胞)中见到。由此，在不存在维生素A的情况下，在ME-180细胞中几乎不存在P2Y2mRNA。
然而，在向ME-180细胞中加入100nM维生素A后，无论是介质中存在血清(图3，4-6道)还是不存在血清(图3，8-11道)的情况下，P2Y2的表达都有所增加。这些数据表明，低浓度的维生素A对治疗萎缩性阴道炎有效。
暴露在维生素A中的不含血清的细胞样本同样需测试其它可能影响萎缩性阴道炎的基因的表达。使用被设计成可放大雌激素受体α(ER-α)基因的引发剂，使用从极度缺乏血清的细胞中获得的RNA样本进行PCR反应。在对照(图4，2道)中可以看到ER-α产品(650bp)，其中的模板为血清存在下培养的ME-180细胞中得到的cDNA。在不含血清或维生素的样本中，cDNA片断预示着检测不到ER-α基因表达(3和7道，图4)。然而，在暴露在100nM维生素A但不暴露在血清中4、8和16小时后得到样本中，ER-α基因表达(分别为4-6道)。这些数据表明，未在血清中培养下，维生素A可以诱导ER-α在宫颈上皮细胞中的表达。增加生殖道中上皮细胞上雌激素受体的数量可增加受体被雌激素激活的几率。
进而，用100nM维生素处置ME-180细胞也可增加血管内皮生长因子(VEGF)，一种与血管形成相关的重要因子的表达。如图5所示，可在用100nM维生素A处置的ME-180细胞中检测到约700bp产品特性的VEGF。
这些试验表明，维生素A(反式-视黄酸)是无毒的并且可用于促进患萎缩性阴道炎的妇女的阴道的天然湿润。维生素A在微摩尔浓度下增加宫颈细胞生长，这可以帮助强化阴道组织。维生素A的存在可增加雌激素受体α、内皮生长因子和P2Y2受体基因在宫颈上皮细胞的表达。这种表达的增加可以帮助治疗萎缩性阴道炎。
实施例3维生素A增加粘蛋白-4的表达材料和方法从血清不存在情况下用0nM或100nm维生素A处置的ME-180宫颈细胞中分离RNA(如上文所述)。RNA进行逆转录以形成DNA，使用PCR技术(如上文所述)以确定维生素A对粘蛋白-4(MUG-4)表达的影响。
结果如图6所示，加入对照β-肌纤蛋白引发剂可导致300bp DNA产品的合成，其在所有样本的量中大致相当。该结果表示，在所有样本中，模板RNA的量大致相同。然而，同样如图6所示，在宫颈cDNA对照组(2道)中发现了MUC-4产品(800bp)。在不含维生素的ME-180细胞中(3道)，没有MUC-4产品。然而，在向ME-180细胞中加入了100nM维生素A后，在治疗后4或8小时检测到了MUC-4(分别为4和5道)。在用100nM维生素A处置16小时后(道6)，MUC-4表达下降但是仍能检测到。这些数据表示，低浓度的维生素A通过增加MUC-4的表达可用于治疗萎缩性阴道炎。
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权利要求
1.一种增加雌性生殖道中上皮细胞生长的方法，包括向阴道腔中给予有效量的含有类视黄醇和类胡萝卜素的组合物。
2.一种增加P2Y2受体在阴道或宫颈上皮细胞中表达的方法，包括向阴道腔中给予有效量的含有类视黄醇和类胡萝卜素的组合物。
3.一种增加雌激素受体在阴道或宫颈上皮细胞中表达的方法，包括向阴道腔中给予有效量的含有类视黄醇和类胡萝卜素的组合物。
4.一种增加血管内皮生长因子在阴道或宫颈上皮细胞中表达的方法，包括向阴道腔中给予有效量的含有类视黄醇和类胡萝卜素的组合物。
5.一种预防或治疗由此预防或治疗要求的哺乳动物阴道干燥的方法，包括，向阴道腔给予有效量的含有类视黄醇和类胡萝卜素以及药学可接受的用于阴道腔区域的载体的组合物。
6.一种维持或促进阴道粘液的正常保护功能的方法，包括，向阴道腔给予有效量的含有类视黄醇和类胡萝卜素以及药学可接受的用于阴道腔区域的载体的组合物。
7.一种增加粘蛋白-4在阴道或宫颈上皮细胞中表达的方法，包括，向阴道腔给予有效量的含有类视黄醇和类胡萝卜素的组合物。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中的类视黄酸或类胡萝卜素是式IA或IB 其中X是CH或N；R是H或1-6个碳原子的烷基；m是0-5的整数；n是0-2的整数；r是0-2的整数；L是-(C＝Z)-NH-或-NH-(C＝Z)-，其中的Z是O或S；Q是苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基或pyrrazolyl，其中的苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基或pyrrazolyl基可以被一个或两个R1基团取代；W是F、Br、Cl、I、C1-6烷基、氟-取代的C1-6烷基、NO2、N3、OH、OCH2CH3、OC1-10烷基、四唑、CN、SO2C1-6-烷基、SO2C1-6-氟-取代的烷基、SO-C1-6烷基、CO-C1-6烷基、COOR8、苯基，苯基自身被W基团(除苯基或取代的苯基以外的基团)取代，条件是当X是CH且r是0，然后n不为0且至少一个W基团不是烷基；A是(CH2)q，其中q是0-5、含有3-6个碳原子的低级支链烷基、含有3-6个碳原子的环烷基、含有2-6个碳原子和1或2个双键的烯基、含有2-6个碳原子和1或2个三键的炔基；并且B是COOH、COOR8、CONR9R10、CH2OH、CH2OR11、CH2OCOR11、CHO、CH(OR12)2、CHOR13O、COR7、CR7(OR12)2、CR7OR13O，其中的R7是含有1-5个碳原子的烷基、环烷基或烯基，R8是1-10个碳原子的烷基或三甲基硅烷基烷基，其中的烷基具有1-10碳原子，或者是5-10个碳原子的环烷基，或者R8是苯基或低级烷基苯基，R9和R10各自为氢、1-10个碳原子的烷基、或5-10个碳原子的环烷基、或苯基或低级烷基苯基，R11是低级烷基、环烷基、低级烷基取代的环烷基、苯基或者低级烷基苯基，R12是低级烷基，R13是2-5个碳原子的二价烷基基团；或者，它们的药学可接受的盐类。
9.权利要求1-7中任一项的方法，其中类视黄酸或类胡萝卜素是式II的化合物 其中R20、R21和R22各自独立的为C1-6烷基、氟-取代的C1-6烷基、羟基取代的C1-6烷基、CH2OH、CH2OR11、CH2OCOR11、CHO、CH(OR12)2、CHOR13O、COR7、CR7(OR12)2、或CR7OR13O，其中的R7是含有1-5个碳原子的烷基、环烷基或烯基，R11是低级烷基、环烷基、低级烷基取代的环烷基、苯基或低级烷基苯基，R12是低级烷基，R13是2-5个碳原子的二价烷基；或者它的药学可接受的盐。
10.权利要求1-7中任一项的方法，其中的类视黄酸或类胡萝卜素是维生素A、β-胡萝卜素、视黄醛、视黄酸或视黄醇。
11.权利要求1-7中任一项的方法，其中进一步的包括给予有效量的核苷酸或核苷。
12.权利要求11的方法，其中的核苷酸或核苷是式III的化合物 其中的X1、X2和X3各自独立的为O-或S-；R1是O、亚胺、亚甲基、或二卤代亚甲基；且R2是H或Br-；或者它的药学可接受的盐。
13.权利要求11的方法，其中的核苷酸或核苷是式IV的化合物 其中Y是尿嘧啶或腺嘌呤；或者它的药学可接受的盐。
14.权利要求11的方法，其中的核苷酸或核苷是式V的化合物 其中的X1、X2和X3各自独立的为O-或S-；R1是O、亚胺、亚甲基、或二卤代亚甲基；且当R2不存在且在N-1和C-6(腺嘌呤)之间存在一个双键时，R3和R4是H，或者，当R2是O且在N-1和C-6(腺嘌呤1-氧化物)之间存在一个双键时，R3和R4是H，或者，R3，R4和R2一起为-CH＝CH-，形成一个从N-6至N-1的环，其中在N-6和C-6之间为双键；或者它们的药学可接受的盐。
15.权利要求11的方法，其中的核苷酸或核苷是式VI的化合物 其中X1、X2和X3各自独立的为O-或S-；R1是O、亚胺、亚甲基、或二卤代亚甲基；且当R7不存在且在N-3和C-4之间存在双键时，R5和R6是H，或者R5、R6和R7一起为-CH＝CH-并组成从N-3开始至连接在R5和R6上的氮原子结束的环。
16.权利要求11的方法，其中的核苷酸或核苷是dATP、ATP、dGTP、GTP、dCTP、CTP、dTTP、TTP、dUTP或UTP。
17.权利要求1-7中任一项的方法，其中的有效量包括约0.01mg至约1mg的类视黄酸或类胡萝卜素。
18.权利要求1-7中任一项的方法，其中的有效量包括约0.1微摩尔至约100微摩尔的类视黄酸或类胡萝卜素。
19.权利要求1-7中任一项的方法，其中的组合物包括洗液、膏剂、凝胶、喷雾剂、泡沫剂或阴道插入剂。
20.一种增加雌性生殖道中粘液分泌的组合物，其中包含有效量的类视黄醇和类胡萝卜赛、有效量的核苷酸或核苷，以及药学可接受的用于阴道腔体的赋型剂。
21.权利要求20的组合物，其中的类视黄醇或类胡萝卜素是式IA或IB的化合物 其中X是CH或N；R是H或1-6个碳原子的烷基；m是0-5的整数；n是0-2的整数；r是0-2的整数；L是-(C＝Z)-NH-或-NH-(C＝Z)-，其中的Z是O或S；Q是苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基或pyrrazolyl，其中的苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基或pyrrazolyl基可以被一个或两个R1基团取代；W是F、Br、Cl、I、C1-6烷基、氟-取代的C1-6烷基、NO2、N3、OH、OCH2CH3、OC1-10烷基、四唑、CN、SO2C1-6-烷基、SO2C1-6-氟-取代的烷基、SO-C1-6烷基、CO-C1-6烷基、COOR8、苯基，苯基自身被W基团(除苯基或取代的苯基以外的基团)取代，条件是X是CH且r是0，然后n不为0且至少一个W基团不是烷基；A是(CH2)q，其中q是0-5、含有3-6个碳原子的低级支链烷基、含有3-6个碳原子的环烷基、含有2-6个碳原子和1或2个双键的烯基、含有2-6个碳原子和1或2个三键的炔基；并且B是COOH、COOR8、CONR9R10、CH2OH、CH2OR11、CH2OCOR11、CHO、CH(OR12)2、CHOR13O、COR7、CR7(OR12)2、CR7OR13O，其中的R7是含有1-5个碳原子的烷基、环烷基或烯基，R8是1-10个碳原子的烷基或三甲基硅烷基烷基，其中的烷基具有1-10碳原子，或者是5-10个碳原子的环烷基，或者R8是苯基或低级烷基苯基，R9和R10各自为氢、1-10个碳原子的烷基、或5-10个碳原子的环烷基、或苯基或低级烷基苯基，R11是低级烷基、环烷基、低级烷基取代的环烷基、苯基或者低级烷基苯基，R12是低级烷基，R13是2-5个碳原子的二价烷基基团；或者它的药学可接受的盐。
22.权利要求20的组合物，其中的类视黄醇或类胡萝卜素是式II的化合物 其中R20、R21和R22各自独立的为C1-6烷基、氟-取代的C1-6烷基、羟基取代的C1-6烷基、CH2OH、CH2OR11、CH2OCOR11、CHO、CH(OR12)2、CHOR13O、COR7、CR7(OR12)2、或CR7OR13O，其中的R7是含有1-5个碳原子的烷基、环烷基或烯基，R11是低级烷基、环烷基、低级烷基取代的环烷基、苯基或低级烷基苯基，R12是低级烷基，R13是2-5个碳原子的二价烷基；或者它的药学可接受的盐。
23.权利要求20的组合物，其中类视黄酸或类胡萝卜素是维生素A、β-胡萝卜素、视黄醛、视黄酸或视黄醇。
24.权利要求20的组合物，其中的核苷酸或核苷是式III的化合物 其中X1、X2和X3各自独立的为O-或S-；R1是O、亚胺、亚甲基、或二卤代亚甲基；以及R2是H或Br；或者它的药学可接受的盐。
25.权利要求20的组合物，其中的核苷酸或核苷是式IV的化合物 其中Y是鸟嘧啶或腺嘌呤；或者它们的药学可接受的盐。
26.权利要求20的组合物，其中的核苷酸或核苷是式V的化合物 其中X1、X2和X3各自独立的为O-或S-；R1是O、亚胺、亚甲基、或二卤代亚甲基；且当R2不存在且在N-1和C-6(腺嘌呤)之间存在一个双键时，R3和R4是H，或者，当R2是O且在N-1和C-6(腺嘌呤1-氧化物)之间存在一个双键时，R3和R4是H，或者，R3，R4和R2一起为-CH＝CH-，形成一个从N-6至N-1的环，其中在N-6和C-6之间为双键；或者它们的药学可接受的盐。
27.权利要求20的组合物，其中的核苷酸或核苷是式VI的化合物 其中X1、X2和X3各自独立的为O-或S-；R1是O、亚胺、亚甲基、或二卤代亚甲基；且当R7不存在且在N-3和C-4之间存在双键时，R5和R6是H，或者R5、R6和R7一起为-CH＝CH-并组成从N-3开始至连接在R5和R6上的氮原子结束的环。
28.权利要求20的组合物，其中的核苷酸或核苷是dATP、ATP、dGTP、GTP、dCTP、CTP、dTTP、TTP、dUTP或UTP。
29.权利要求20的组合物，其中的有效量包括约0.01mg至约1mg的类视黄酸或类胡萝卜素。
30.权利要求20的组合物，其中的有效量包括约0.1微摩尔至约100微摩尔的类视黄酸或类胡萝卜素。
31.权利要求20的组合物，其中的组合物包括洗液、膏剂、凝胶、喷雾剂、泡沫剂。
32.权利要求20的组合物，其中的组合物包括阴道插入剂。
全文摘要
本发明提供了一种用于增加雌性哺乳动物生殖道中粘液分泌的组合物和方法。
文档编号A61K31/203GK1678261SQ03821047
公开日2005年10月5日 申请日期2003年9月11日 优先权日2002年9月19日
发明者J·M·比利亚努埃瓦 申请人:金伯利-克拉克环球有限公司