铂聚集体及其制备方法

专利名称：铂聚集体及其制备方法
专利说明铂聚集体及其制备方法 本发明要求美国临时申请60/400,875，申请日为2002年8月2日的优先权。
[2]很久以来，脂质体和脂类络合物就被认为是可以提高很多生物活性剂和造影剂的治疗和诊断效果的给药系统。很多不同的抗生素和X-射线造影剂的试验显示，通过将带有脂质体或脂类络合物的生物活性剂和造影剂制成胶囊可以达到具有较高安全水平的更好治疗效果或者更好对比效果。对作为生物活性剂的胶囊系统的脂质体和脂类络合物的研究表明，这些产品的成功发展和商业化需要可以大规模生产带有合适特性的脂类囊的可重复方法。因此，人们已经在寻求根据柔性脂类化合物需求条件来连续生产具有所需尺寸和浓度、粒度分布，和重要的截留性能的脂质体或者脂类络合物的方法。当考虑到目前药物产品可接受的好的生产实践的时候，这些方法应该提供具有持续脂类比率的活性物质。作为寻找的结果，以及由于带有产品参数的脂质体和脂类络合物性质的可变性，到目前为止已经提出了很多不同的方法。
[3]传统的脂质体和脂类络合物的制备方法包括以下很多步骤，将双分子层形式的物质(典型的磷脂，或者磷脂和如胆固醇的其他脂类的混合物)溶解在圆底烧瓶中的挥发性有机溶剂或者溶剂混合物中，然后在将要阻止析相作用的如温度和压力的条件下，进行溶液的蒸发。通常将以沉淀在反应器壁上的薄膜形式存在的去除溶剂的干燥脂类混合物与含有溶解的缓冲剂、盐、调节剂和包埋的活性物质的水介质进行水合。在水合步骤中形成脂质体或者脂类络合物，致使将一部分水介质封入到脂质体中。通过搅拌、超声波或者微液化、或者随后通过一个或者多个如聚碳酸酯过滤器的过滤器挤塑，能够在激发或者不激发溶液的情况下进行水合。通过分离回收游离的、没有封入的活性物质，以及将产品过滤、杀菌、或者冻干，和包装。
[4]总的来说，在这个传统方法中，水合作用比任何步骤更多地影响形成的脂质体或者脂类络合物的类型(尺寸、脂类的层数、包埋量)。当干燥的脂膜保持稀薄时，典型地，水合作用和包埋工艺最有效率。这意味着脂类的数量越大，要求脂类沉积的表面积就越大。即使可以用玻璃珠和其他惰性不可溶的粒子来提高膜沉积的表面积，但是薄膜方法主要还是一种实验室方法。
[5]许多专利申请或专利提出其他制备脂质体或者脂类络合物的方法，包括将脂类的有机溶液注射到持续去除溶剂的水介质中，喷物干燥、冻干、微乳化、微液化等的使用。这样的专利包括，例如美国专利No.4,529,561和美国专利No.4,572,425。
[6]顺铂-顺-二胺-二氯铂(II)-是一种用于癌症系统治疗中比较有效的抗癌剂。这种化疗药物对试验动物和人体肿瘤的肿瘤模型的治疗非常有效，如子宫内膜、膀胱、卵巢和睾丸瘤，以及头和颈鳞片状细胞瘤(Sur等人，1983 Oncology 40(5)372-376；Steerenberg等人，1988Cancer Chemother Pharmacol.21(4)299-307)。顺铂还广泛地用于包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌的肺癌治疗中(Schiller等人，2001Oncology 61(Suppl1)3-13)。其他的活性铂化合物(如下定义)也用于癌症的治疗中。
[7]像其他癌症化疗剂一样，典型地，如顺铂的活性铂化合物具有剧毒。顺铂的主要不足是作为一个主要的剂量限制因素的极端肾毒性，由于只有几分钟的半衰期而通过肾脏的快速排泄，以及对血浆蛋白的较强亲和力(Freise等人，1982 Arch Int Pharmacodyn Ther.258(2)180-192)。
[8]减少活性铂化合物毒性的试验，包括联合化疗、合成类似物(Prestayko等人，1979 Cancer Treat Rev.6(1)17-39；Weiss等人，1993Drugs.46(3)360-377)，免疫疗法和脂质体包埋(Sur等人，1983；Sweiss等人，1993)。相对于游离形式的剂型，包括在脂质体内包埋的顺铂的抗肿瘤剂，在保持抗肿瘤活性的同时，具有较低毒性(Steerenberg等人，1987；Sweiss等人，1993)。
[9]但是，由于生物活性剂的水溶解度低，室温下大约1.0mg/ml，以及低亲油性，导致生物活性剂/脂类的比率低，所以难以在脂质体或者脂类络合物中有效地包埋顺铂。
[10]包含顺铂的脂质体和脂类络合物还存在另外一个问题-化合物的稳定性。特别地，在储存过程中的脂质体中生物活性剂效力的持久性和生物活性剂的保持力为公认问题(Freise等人，1982；Gondal等人，1993；Potkul等人，1991 Am J Obstet Gynecol.164(2)652-658；Steerenberg等人，1988；Sweiss等人，1993)，另外有报道称包含顺铂的脂质体的保存期有限，在4℃下为几个星期(Gondal等人，1993 Eur JCancer.29A(11)1536-1542；Potkul等人，1991)。
发明概述 [11]本发明描述的是一种新型的由脂类包埋的铂及其制备方法。尤为特别地，本发明描述的是一种具有高活性铂化合物与脂类比率的新型脂类络合活性铂。本发明描述的方法是形成这种新型活性铂化合物聚集体的新方法。
[12]除了其他以外，本发明提供一种包括脂质体或脂类络合物和活性铂化合物的组合物，所述脂质体包含一种或者多种脂类，其中活性铂化合物与脂类的重量比率为1∶50-1∶2，或者1∶50-1∶5，或者1∶50-1∶10。活性铂化合物与脂类的重量比率可以为，例如1∶25-1∶15。一种或者多种脂类可以包括，例如50-100mol％DPPC和0-50mol％胆固醇。一种或者多种脂类可以包括，例如50-65mol％DPPC和35-50mol％胆固醇。
[13]同时本发明还提供一种铂聚集体的制备方法，包括以下步骤(a)使活性铂化合物与疏水基质负载系统结合；(b)在第一温度下形成混合物；和(c)随后在低于第一温度的第二温度下形成混合物；其中步骤(b)和(c)对提高活性铂化合物的封装是有效的。典型地，通过加热来实现步骤(b)，而典型地，通过冷却来实现步骤(c)。在作为选择的实施例中，循环从冷却步骤开始，转换到加热步骤，重复这样两个步骤。所述方法包括继续使步骤(b)和(c)重复二或三或者更多个循环。可以通过将活性铂化合物溶解在盐溶液中形成铂溶液来制备活性铂化合物溶液。疏水基质负载系统最好包括脂质体或者脂类络合物-型的脂类。在所有的步骤(b)和(c)完成以后，铂聚集体的制备方法可以进一步包括(d)通过穿过具有分子重量定点选择能力的膜来进行过滤，去除未包封的活性铂化合物，保留需要的脂质体或者脂类络合物，并且将脂质体或者脂类络合物相容的液体加入到洗净的未包埋的活性铂化合物中。
[14]本发明进一步提供了按照本发明方法制备的聚集体和本发明组合物的药剂配方。所述配方包括药学上可接受的载体或稀释剂或者适于对病人进行吸入或注射的传输。



[15]图1显示出根据本发明的1升批次的脂类络合顺铂的稳定性。


发明内容
[16]本发明包括一种新型的脂类络合的活性铂化合物，其生物活性剂与脂类比率非常高，例如现有活性铂化合物顺铂未曾有过的。本发明中生物活性剂与脂类的重量比率是在1∶5到1∶50之间。更优选地，生物活性剂与脂类的重量比率是在1∶10到1∶30之间。最优选地，生物活性剂与脂类的重量比率是在1∶15到1∶25之间。
[17]活性铂化合物的制备方法包括将活性铂化合物与适当的疏水基质混合以及使混合物在两种单独的温度下进行一个或者多个循环。可以通过这个方法形成活性铂化合物聚集体。
[18]在水溶液中，顺铂形成晶体直径超过几微米的大晶体聚集体。在两亲基质系统，比如脂双层的存在下，小顺铂聚集体形成。例如，可以在脂双层的碳氢化合物核心区域形成聚集体。在本方法的加热循环过程中，可认为顺铂在混合物的水合区域以比双层中更快的速度返回溶液。作为采用一个以上的冷却/加热循环的结果，顺铂进一步在双层中得到积累。未将本发明限制于提出的理论中，试验显示顺铂聚集体导致界面双层区域的直接围绕物更为疏水和紧凑。这在冷却和生物循环重复时，引起活性铂化合物的高水平包埋。
[19]本发明的配方具有显著的高包埋率。在某些情况下，包埋率几乎可以达到92％。这个数据比传统水合包埋达到的最有效的包埋率要高很多，其大约是2-10％。本发明的这个功效在实施例3中有所说明。
[20]本发明的制备方法包括将活性铂与合适的疏水基质负载系统结合以及使溶液在较低温度和较高温度下循环。优选地，循环进行一次以上。更优选地，循环进行两次或更多次，或者三次或更多次。循环的低温部分可以采用零下25摄氏度到25摄氏度。更优选地，这个步骤采用零下5到5摄氏度或者在1和5摄氏度之间。为了便于生产以及达到所期望的温度，冷却和加热步骤可以保持一段时间，比如大约5-300分钟或者30-60分钟。加热步骤包括将反应器加热到4摄氏度至70摄氏度。更优选地，加热步骤包括将反应器加热到45摄氏度至55摄氏度。上述温度范围特别适合于主要包括二棕榈酸磷脂酰胆碱(DPPC)和胆固醇的脂类混合物。
[21]另外一种确认温度循环的方法是依据循环中加热和冷却步骤之间的温度差。这种温度差可以为，例如25摄氏度或者更多，比如25到70摄氏度的差量，优选的差量是40到55摄氏度。以提高活性铂化合物的包埋为基础来选择加热和冷却步骤的温度。不受理论的限制，可以相信选择能够实质上有效提高处理混合物中活性铂化合物溶解度的较高温度是有用的。优选地，加热步骤的温度为50摄氏度或者更高。也可以选择低于或者高于脂类混合物中脂类转变温度的温度。
[22]如常规试验能够决定的，在某些情况下，方法中采用的合适温度可以随方法中采用的脂类混合物而变化。
[23]合成的活性铂络合物具有高或很高的药与脂类比率。配方可以适用于吸入或者注射。
[24]为了公开目的，采用下列技术术语 [25]“溶液输灌”是包括在少量、优选微量的工艺相容溶剂中溶解一种或者多种脂类来形成脂类悬浮液或者溶液(优选溶液)，然后将溶液注射到包含生物活性剂的水介质中的方法。典型地，能够在含水工艺，例如透析中洗净工艺相容溶剂。优选地，通过溶液输灌，优选为乙醇输灌来形成循环冷却/加热的混合物。酒精为优选溶剂。“乙醇输灌”，一种溶液输灌类型，是包括在少量、优选微量的乙醇中溶解一种或者多种脂类来形成脂类溶液，然后将溶液注射到包含生物活性剂的水介质中的方法。“少量”溶液是在输灌过程中与形成脂质体或者脂类络合物相容的数量。
[26]“疏水基质负载系统”是由上述溶液输灌方法生产的脂类/溶液混合物。
[27]用于本发明的脂类可以是合成的、半合成的或者天然存在的脂类，包括磷脂、维生素E、固醇、脂肪酸、醣脂、阴离子脂、阳离子脂。所述磷脂能够包括卵磷脂(EPC)、磷脂酰甘油(EPG)、磷脂酰肌醇(EPI)、磷脂酰丝氨酸(EPS)、磷脂酰乙醇胺(EPE)和磷脂酸(EPA)；大豆相应物，大豆卵磷脂(SPC)；SPG、SPS、SPI、SPE和SPA；氢化的卵和大豆相应物(例如HEPC、HSPC)，硬脂酸(stearically)修正的卵磷脂乙醇胺，胆固醇衍生物，类胡罗卜素，其他通过酯键结构成的卵磷脂，该酯由在2和3位上含有12-26个碳原子链的甘油和在1位上含有不同个包括胆碱、甘油、肌糖、丝氨酸、乙醇胺的主要基团的甘油组成，以及相应的卵磷脂酸。这些脂肪酸链可以是饱和或者不饱和的，磷脂可以由不同长度和饱和度的脂肪酸构成。特别地，配方的组合物可以包括DPPC，自然存在的肺表面活性剂的主要成分。其他的例子包括肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和二棕榈酸磷脂酰胆碱(DPPC)和二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)，二油酰磷脂酰-乙醇胺(DOPE)和混合磷脂，如棕榈酰硬脂酰磷脂酰-胆碱(PSPC)和棕榈酰硬脂酰磷脂酰甘油(PSPG)，三酰甘油，seranide、二酰甘油，鞘氨醇，鞘磷脂和如单-油酰-磷脂乙醇胺(MOPE)的单酰磷脂。
[28]“生物活性剂”是对细胞、病毒、组织、器官或者有机体作用，使细胞、病毒、组织、器官或者有机体的功能产生变化的物质。本发明中使用的生物活性剂是活性铂，例如顺铂。
[29]“活性铂”化合物是含有配位铂，同时具有抗肿瘤性质的化合物。额外的活性铂化合物包括，例如卡铂和如奥沙利铂的DACH-铂化合物。
[30]试验结果明显地显示出在脂质体囊形成过程中主要通过包埋顺铂来实现封装。结果进一步显示出，由于顺铂浓度比溶解极限高很多，所以顺铂的物理状态为固态(聚集体)或者脂质结合。结果进一步显示出过程中不需要冷冻混合物，但是冷却到比冷冻温度高的温度可以产生更好的效果。结果进一步显示出3个冷却和加热循环的包埋效果和6个循环的包埋效果类似，其说明3个循环的温度处理足以实现优选级别的包埋。
[31]结果进一步显示了在增加包埋顺铂效率的同时，可以扩大这个过程的规模。因此，本发明进一步提供用来供应适于整个给药为200mLS或更多、或者800mLS或更多(适当的少量增加)的方法。所有其他的都相同，可以相信生产较大体积通常比小规模易达到增加的效果。如果这样的体积适于给药时，能够减少体积来使其适于存储。
[32]结果进一步显示了，由于最小限度的泄漏，通过本发明方法制备的脂类络合顺铂能够保持包埋在一年以上。配方的独特性的进一步证实显示出顺铂被限制在脂质体结构中并且不易泄漏。
实施例 实施例1 [33]将70mg DPPC和28mg胆固醇溶解在1ml乙醇中，并且加入到10ml的，溶解在0.9％的盐溶液的4mg/ml顺铂中。
[34](i)使等分部分(50％)的样品经过冷却到4℃和加热到50℃的三个循环。试管中的等分部分通过冰箱冷却和通过水浴进行加热。通过透析冲洗得到的未包埋的顺铂(游离顺铂)。
[35](ii)不经过温度循环处理，而是直接通过透析冲洗样品的剩余部分。
表1经过和未经过冷却和加热循环处理顺铂的包埋率顺铂的最终浓度，μg/ml％包封率没有经过冷却和加热循环处理的脂类561.4络合顺铂冷却和加热循环之后的脂类络合顺铂3609.0 实施例2 [36]通过嵌入双层中疏水核心区域的二苯基己三烯的荧光各向异性测定脂类络合顺铂(“HLL”顺铂或者“高负荷脂质体”顺铂)的双层膜硬度，该脂类络合顺铂如实施例1中所述由冷却/加热循环过程制备得到。[参见Jahnig，F.，1979 Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76(12)6361.]通过氘同位素对TMA-DPH(三甲基氨-二苯基己三烯)荧光强度的交换效应测量双层的水合作用。[参见Ho，C.，Slater，S.J.，and Stubbs，C.D.，1995 Biochemistry 346188.] 表2脂质体、未经过冷却/加热循环过程的脂类络合顺铂和HLL顺铂的水合程度和硬度。对照剂(没有顺铂的脂质体)未经过冷却/加热循环过程的脂类络合顺铂 HLL 顺铂 双层的硬度0290.29 0.36 双层的水合程 度1.131.15 1.02 实施例3 [37]将1.0g DPPC和0.4mg胆固醇溶解在6ml乙醇中。将60mg顺铂在65℃下溶解于10ml 0.9％的盐溶中。在10ml得到的顺铂溶液中加入1ml得到的脂类混合物。将脂类/顺铂悬浮液冷却到大约4℃并且在该温度下保持20分钟，加热到50℃并保持20分钟。在加热过程中通过将N2鼓入到悬浮液中来除去乙醇。将冷却和加热步骤再重复5次。
表3顺铂包埋率总顺铂的浓度(mg/ml)％顺铂包埋率 药∶脂类(重量) HLL顺铂5.891.6 1∶26 实施例4 [38]使用卵磷脂(PC)和胆固醇(以摩尔比57∶43)来制备顺铂配方。将0.55毫摩尔卵磷脂(PC)和0.41毫摩尔胆固醇溶解在2ml乙醇中，并且加入到20ml的4mg/ml顺铂溶液中。每个样品的等分部分(50％)经过3个冷却和加热循环，并且通过透析洗净。每个样品的另一等分部分直接通过透析洗净。利用最终浓度和初始浓度的比率计算包埋率。
表4带有不同卵磷脂的顺铂包埋率以及药与脂类的比率PC 未冷却和加热 冷却和加热 最终 [顺铂] (mg/ml) ％ 包埋 药∶脂类 (重量) 最终 [顺铂] (mg/ml) ％ 包埋 药∶脂类 (重量)DOPC0.16 4.0 1∶1420.215.31∶108EggPC0.09 2.3 1∶2470.123.01∶185DMPC0.15 3.8 1∶1230.246.01∶77DPPC0.17 4.3 1∶1150.8521.31∶23HSPC0.11 2.8 1∶2020.235.81∶97DSPC0.10 2.5 1∶1840.5814.51∶32 实施例5 [39]将脂类配方(DPPC∶胆固醇为5∶2，w/w)溶解在乙醇中，并且加入到顺铂溶液。混合物的一部分经过冷却到4摄氏度、和加热到55摄氏度的循环处理，另一部分未经过循环处理。然后经过透析洗净脂类/顺铂悬浮液。
表5经过和未经过冷却和加热循环处理的顺铂浓度顺铂溶液的起 始浓度 脂类浓度 冷却和加热循环顺铂的总浓度 0.2mg/ml 1.4mg/ml否未检测到 0.2mg/ml 1.4mg/ml是未检测到 4.0mg/ml 28mg/ml否0.22mg/ml 4.0mg/ml 28mg/ml是 0.46mg/ml 实施例6 对本发明中包埋的顺铂囊体积的测定 [40]本实施例的目的是通过测定脂质体中包埋的顺铂浓度来测定脂质体包埋的顺铂(HLL顺铂)性质。
V总＝V脂质体+V外部 [V脂质体的测量] 在450nm的吸收 重铬酸盐V外部V脂质体HLL顺铂0.874 0.67mg/ml1.88ml0.12ml单纯的盐0.822 0.60mg/ml2mll0ml [41]方法1)通过离心过滤装置浓缩2ml根据实施例4所述制备的HLL顺铂。2)获得0.8ml的浓缩样品，并且在获得的原始体积中加入1.2ml的1mg/ml重铬酸盐。还要制备0.8ml普通盐+1.2ml的重铬酸盐来作为对比物。3)通过测量在450nm时的吸收来检测在重铬酸盐中的不同。为了避免脂质体样品的浑浊，两种样品都通过离心过滤器过滤。
[42]结果脂质体占总体积的6％。
V脂质体＝1.53μL/μmol脂质体(总脂类39.3mM) 下一步，V脂质体＝V截留+V双层 测量HLL顺铂囊的薄片来检测V双层。
[HLL顺铂囊薄片的测量]F总F内部％位于小叶最外层的探针脂类*荧光强度141931134920 ％位于小叶最外层的探针脂类＝(F总-F内部)×100÷F总 [43]方法在按照实施例9的方法(1升批次)制备的顺铂囊中加入0.5重量％的荧光探针脂类(NBD-PE)。这种探针脂类均匀分布在膜的里部和外部。通过存在于HLL顺铂中的脂质体层的多少来测定位于膜最外层(脂质体的表面)的探针与余下探针的数量比率。通过加入还原剂连二亚硫酸盐以仅仅熄灭表面探针来测定位于脂质体外部和脂质体内部的探针比率。然后，通过清洁剂使脂质体断裂来达到完全熄灭。
结果最外层的双层外壳占总脂质体的40％。
[44]根据几何学的计算，位于最外面双层外壳的双薄片和三薄片的％脂类分别是52％和36％。因此，可以推断出HLL顺铂的平均薄片数为三。
[45]假设为三薄片囊，计算出V脂质体/V截留的比率是1.2635。因此，截留体积为 V截留＝V脂质体÷1.2635＝1.53μL/μmol脂类÷1.2635＝1.21μL/μmol脂类＝1.21μL/μmol脂类×39.3mM(总脂类浓度)＝47.6μL/M] [46]每毫升HLL顺铂的截留体积是47.6μL，占总体积的4.76％。如果假定包埋顺铂存在于脂质体的水区域中，预计其局部顺铂浓度为21.0mg/ml。这个浓度不仅比室温下顺铂的溶解极限要高，而且重要地，比初始变化浓度(4mg/ml)要高得多。
实施例7冷却温度对HLL顺铂包埋效率的影响 [47]本实施例的目的是找到最适宜的冷却温度，使顺铂达到最高的包埋率，并且避免冷冻和解冻。得到的的数据有助于优化生产工艺。后灌输温度处理 样品实际温度冷却和加热循环 [顺铂] Mg/ml ％包埋率干冰浴(-70℃)冻结15分钟冷却和15分钟升温循环6次0.348.5制冷器(-20℃)0℃15分钟冷却和15分钟升温循环6次0.9824.5冰浴4℃15分钟冷却和15分钟升温0.6315.8 (1℃)循环6次 [48]通过乙醇灌输制备20mg/ml的DPPC，8mg/ml的胆固醇和4mg/ml的顺铂悬浮液。将样品分为三等份，在三个不同的冷却温度下经过6次冷却和加热循环处理。在温度循环的一个处理之后，透析样品来除去游离的顺铂。
实施例8 温度循环次数对包埋效率的影响 [49]为了使顺铂达到最好的包埋效率，本实施例测定最适宜的温度循环次数。这将有助于确定必要的工艺，以实现顺铂最佳包埋效率。
温度 循环 次数低脂类(7.5mg/ml DPPC &3mg/ml胆固醇)高脂类(12.5mg/ml DPPC &5mg/ml胆固醇) [顺铂]％包封 [顺铂]％包封 0个循环 0.05mg/ml1.3 0.21mg/ml5.3 1个循环 0.11mg/ml2.8 0.23mg/ml5.8 3个循环 0.39mg/ml9.8 0.88mg/ml22 [50]按照前面的实施例制备样品。样品冷却温度为0℃。通过15分钟冷却和15分钟加热来实现温度循环。顺铂的起始浓度是4mg/ml，通过透析除去游离的顺铂。
实施例9 批量规模与工艺效率 [51]检验包埋效率是否因批次大小而发生改变。按照实施例4制备20mL的批次。按照下述步骤制备1L批次 1.在65℃下，将四克顺铂溶解在1L 0.9％氯化钠注射液中。
2.在65℃下，将20克DPPC和8克胆固醇溶解在120mL纯乙醇中。
3.当以300转/分钟(65℃)的速度混合顺铂溶液时，将脂类溶液以20mL/分钟的流速加入(灌输)到顺铂溶液中。
4.灌输后，使用丙烯乙二醇/水浴将顺铂/脂类分散体冷却到零下5℃到0℃，并保持45分钟(冷却)。
5.将分散体加热到50℃，并保持15分钟(加热)。
6.按照步骤4和步骤5描述的冷却/加热循环过程再进行两次(总共3个循环)。
7.通过膜渗滤冲洗分散体来除去游离的顺铂。渗透去除速率为17-22mL/分钟。通过用新鲜无菌的0.9％氯化钠溶液补充渗透剂来使分散体体积(1L)保持恒定。
[52]按照同一方法制备200mL的批次，但是只使用20％的组分。
[53]用初始成分的脂类/药(重量/重量)比率除以最终产品中脂类/药比率来定义工艺效率。批次#批次大小脂类/药的 预形成脂类/药的最 终产品 工艺效率C3-18FT-0420ml4.454.50.08C3-18FT-17200ml5.8527.30.21C3-18FT-19200ml5.8537.20.16C3-18FT-23200ml5.8536.90.16PC-1L-5081L5.8514.40.41CL-CISP-TN-011L7.019.20.36CL-CISP-TN-021L7.021.20.33 实施例10包埋脂质体络合顺铂的稳定性 [54]在内容物泄漏的时间内对1L批次的HLL顺铂的稳定性进行监视。得到的数据见图1。
[55]本说明书引述的包括但不限于专利和专利申请的出版物和参考资料，虽然只是引述了一个部分，但在此将其整体作为参考。本申请要求优先权的任何专利申请按照对上述出版物和参考资料的态度在此一并参考。
[56]虽然本发明只着重描述了优选的实施例，但是，可以使用变化的优选设备和方法，以及可以试图使用与这里描述的方法不同的方法进行，这对于本领域一般人员而言是显而易见的。因此，本发明包括在下述权利要求的精神和范围内的所有修改。
权利要求
1.一种包括脂质体或脂类络合物和包埋的活性铂化合物的组合物，所述脂质体或脂类络合物包括一种或多种脂类，其中活性铂化合物与脂类的重量比率为1∶50到1∶2。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中活性铂化合物与脂类的重量比率为1∶50到1∶5。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中活性铂化合物与脂类的重量比率为1∶50到1∶10。
4.根据权利要求1所述的组合物，其中活性铂化合物是顺铂。
5.根据权利要求1所述的组合物，其中活性铂化合物与脂类的重量比率为1∶25到1∶15。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中活性铂化合物是顺铂。
7.根据权利要求6所述的组合物，一种或多种脂类包括DPPC。
8.根据权利要求7所述的组合物，一种或多种脂类包括胆固醇。
9.根据权利要求7所述的组合物，一种或多种脂类包括50-100[90？]摩尔％DPPC和0-50摩尔％胆固醇。
10.根据权利要求7所述的组合物，一种或多种脂类包括50-65摩尔％DPPC和35-50摩尔％胆固醇。
11.一种制备铂聚集体的方法，包括以下步骤
(a)使活性铂化合物与疏水基质负载系统结合；
(b)在第一温度下形成混合物；和
(c)随后在比第一温度低的第二温度下形成混合物；
其中步骤(b)和(c)对提高活性铂化合物的封装是有效的。
12.根据权利要求11所述的方法，进一步包括继续使步骤(b)和(c)重复总共两个或者更多个循环。
13.根据权利要求11所述的方法，其中通过将活性铂化合物溶解在盐溶液中形成铂溶液来制备活性铂化合物溶液。
14.根据权利要求13所述的方法，其中活性铂化合物是顺铂。
15.根据权利要求11所述的方法，其中疏水基质负载系统包括脂质体或者脂类复合型脂类。
16.根据权利要求15所述的方法，其中一种或多种脂类包括DPPC。
17.根据权利要求15所述的方法，其中一种或多种脂类还包括胆固醇。
18.根据权利要求11所述的方法，其中通过将一种或多种脂类溶解在乙醇中形成脂类溶液并且将所述脂类溶液注射到包含活性铂化合物的水介质中来制备疏水基质负载系统。
19.根据权利要求11所述的方法，进一步包括继续使步骤(b)和(c)重复总共三个或者更多个循环。
20.根据权利要求19所述的方法，其中步骤(c)包括在零下25摄氏度到25摄氏度的温度下形成混合物。
21.根据权利要求19所述的方法，其中步骤(c)包括在零下5摄氏度到5摄氏度的温度下形成混合物。
22.根据权利要求19所述的方法，其中步骤(b)包括在4摄氏度到75摄氏度的温度下形成混合物。
23.根据权利要求19所述的方法，其中步骤(b)包括在45摄氏度到55摄氏度的温度下形成混合物。
24.根据权利要求11所述的方法，其中步骤(b)和(c)的温度差为25摄氏度或者更多。
25.根据权利要求24所述的方法，其中步骤(b)的温度是50摄氏度或者更高。
26.根据权利要求11所述的方法，其中步骤(b)的温度是50摄氏度或者更高。
27.按照权利要求11所述方法制备的铂聚集体。
28.按照权利要求14所述方法制备的铂聚集体。
29.一种包括权利要求1所述的组合物和药学上可以接受的载体或者稀释剂的药物配方。
30.一种包括权利要求1所述的组合物，适合于病人吸入的药物配方。
31.一种包括权利要求1所述的组合物，适合于对病人注射的药物配方。
32.根据权利要求11所述的方法，进一步包括在所有的步骤(b)和步骤(c)完成以后
(d)通过穿过具有分子量定点选择能力的膜来进行过滤，去除未包封的活性铂化合物，保留需要的脂质体或者脂类络合物，并且将脂质体或者脂类络合物相容的液体加入到洗净的未包埋的活性铂化合物中。
全文摘要
本发明涉及一种组合物及其制备方法，所述组合物包括脂质体和活性铂化合物，所述脂质体包括一种或多种脂类，且具有高的活性铂与脂类的比率。
文档编号A61K9/127GK1681478SQ03821989
公开日2005年10月12日 申请日期2003年8月4日 优先权日2002年8月2日
发明者J·李, B·S·米勒, F·吴, L·T·伯尼 申请人:川塞夫有限公司