用于治疗与年龄相关的疾病的组合物与方法

专利名称：用于治疗与年龄相关的疾病的组合物与方法
技术领域：
本发明涉及用于预防和治疗与年龄相关的疾病的组合物和方法。具体而言，本发明涉及使用从年龄在约6天-14天之间的鸡胚中提取出的、制成口服或舌下给药的磷脂类，治疗与年龄相关疾病的组合物和方法。
背景技术：
老化症状既在身体上又在精神上影响着人体。细胞和组织的老化可影响人的力量、精力和灵敏性。各种细胞和组织的老化可导致健康感下降、疲劳、身体和精神康复延迟、认知能力下降和失眠。进一步的身体影响包括皮肤老化、起皱纹和褪色、脱发、对体力和脑力活动的耐力和耐受的下降以及肌肉疲劳。神经内分泌紊乱，例如性能力与正常血压及血液化学性质保持力的下降都与组织老化密切相关。人体细胞和胞内粘膜的生理老化是许多这些与年龄相关的疾病的成因。
人体细胞和胞内粘膜主要由脂质组成。具体而言，这些粘膜包含磷脂、包含在水解时生成甘油和脂肪酸的一个疏水性末端和一个亲水性末端的含磷酸盐的脂质。更具体地讲，在人体中最常见的磷脂是磷酸甘油酯和鞘酯。与磷酸相关的磷酸甘油酯包括其中甘油的一个伯羟基酯化到与同某个碱或多元醇相连的磷酸上而其他羟基酯化到脂肪酸上的磷脂。鞘磷脂，这一唯一的鞘酯，是包含三个构件成分的磷脂∶一分子鞘氨醇或相关碱作为骨架，一分子脂肪酸和一个极性首基。
最丰富的磷脂是磷脂酰胆碱(也被称为卵磷脂)，和磷脂酰乙醇胺(也被称为脑磷脂)。在人体细胞和组织中还发现了磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油和双磷脂酰甘油，但是它们只构成了已发现的少数磷酸甘油酯。磷脂酰胆碱包含高于约75％在血浆中发现的磷脂和超过约20％在其他组织中发现的磷脂。磷脂酰乙醇胺包含高于10％在除血浆外的所有组织中发现的磷脂。
缩醛磷脂，一种磷脂的亚类，基本上是烷基醚酰基甘油的磷酸甘油酯类似物。它们的乙烯基醚与磷脂而非普通酯的脂肪酸键合。通常缩醛磷脂遍及人体组织，例如大脑、心脏、肺、肝、肾、睾丸、红细胞和血浆。最丰富的缩醛磷脂是乙醇胺缩醛磷脂(l-(1’-链烯基)-2-酰基甘油基磷脂酰乙醇胺)，其存在于除心脏、肝和血浆以外的所有人体组织中。只有在心脏细胞中发现了大量的胆碱缩醛磷脂。
磷脂有助于增强组织和细胞结构。它们还具有一些抗氧化剂性质，防止细胞氧化并因此而防止老化。人生理学中可利用的磷脂和缩醛磷脂的数量下降，导致与年龄相关症状的严重性增加。
减少老化症状的治疗是有必要的。特别地，已发现额外摄入得自于哺乳动物外界来源的磷脂可补充人体体内磷脂的供给。已发现在人生理学中，磷脂和缩醛磷脂有助于对年龄相关症状的治疗。哺乳动物磷脂提取物在对年龄相关症状的治疗中的成功率有限。
发明概述根据本发明的一个方面，提供了用于预防和治疗与年龄相关的身体和精神疾病的组合物。该组合物包括已经从年龄在约6天龄至约14天龄之间的鸡坯中提取出的磷脂类。
根据本发明的另一个方面，提供了一种从鸡胚中提取用于旨在减轻与年龄相关的身体和精神疾病的组合物中的磷脂的方法。将受精卵孵化约6天-约14天。分离鸡胚，用有机溶剂提取鸡胚的脂质。通过蒸发和冷冻干燥从溶剂和残留的水中分离出磷脂。
根据本发明的另一方面，提供了一种使用一种组合物来预防和治疗有此治疗需求的人受试者的与年龄相关的身体和精神疾病的方法。给受体施用一定剂量的包括从孵化约6天-约14天的鸡胚中提取出的磷脂的组合物。该剂量为足以增强身体耐力的量。
根据本发明的又一方面，提供了一种治疗有此治疗需求的人受试者的与年龄相关的身体和精神疾病的方法，给受体施用一定剂量的包括从孵化约6天-约14天的鸡胚中提取出的磷脂的组合物。该剂量为足以增强身体耐力的量。
结合本发明的以下说明，本发明的其他方面将显而易见。
发明详述本发明一般性地涉及胚胎磷脂，尤其是由鸡胚胎组织制备的磷酸甘油酯的缩醛磷脂，用于预防和治疗与年龄相关的疾病的治疗用途领域。本发明提供了一种用于预防和治疗这些与年龄相关的身体和认知障碍的组合物，其包含从6-14天龄的鸡胚中收集的磷脂提取物。本发明包含含早期鸡胚磷脂的药物组合物，尤其包括混入用于口服或舌下给药的惰性无毒载体中的缩醛磷脂的那些，以及制备和施用这些组合物的方法。
在胚胎和出生后的鸡大脑中通常存在两组磷脂。第一组包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇。第二组包括胆碱、乙醇胺和丝氨酸的缩醛磷脂。该第二组包括也包括鞘磷脂和乙醇胺醚磷脂。在年幼鸡胚中，第一组磷脂为胚胎化学组成的主要成分。直到鸡胚约16天龄时，第一组磷脂被非常迅速合成，而第二组磷脂的数量只有少量增加。当鸡胚约16-约20天龄时，第二组磷脂也开始迅速合成，使得第二组磷脂水平接近第一类的水平。为了预防和治疗与年龄相关的疾病，优选胚胎年龄为约6-约14天龄，更优选胚胎年龄为约9-约10天龄。
在那些年龄为大约6-约14天的早期至中期胚胎中的磷脂含有与在晚期胚胎中截然不同的磷酸甘油酯。这些中期磷酸甘油酯含有在晚期磷酸甘油酯中非典型存在的链烯基和酰基。例如，中期磷酸甘油酯包含与短链月硅酸酯或肉豆蔻酸酯键合和棕榈基醚键合的乙醇胺缩醛磷脂。
从中期胚胎中提取出的缩醛磷脂和磷脂在预防和治疗与年龄相关的疾病中起着重要作用。例如，在生物膜内层中大量存在的缩醛磷脂是有详细记载的，这说明这些脂质参与了在这些膜中结合调控机制后的信号传导。据信，在化学渗透过程中还有其他脂质的具体参与，这与辅酶Q、NADH、FMN和细胞色素a3这样的线粒体内膜组分的参与类似。还认为膜脂质组合物受到脂质形状的强烈影响，并且在脂质组合物中观察到的变化可用来稳定细胞和亚细胞膜的双分子层排列。所有这些因素都可强化细胞表面的膜，以及其他亚细胞细胞器的膜，降低与年龄相关疾病的影响。
缩醛磷脂也是抗LDL蛋白氧化的潜在保护剂。约3％-约5％的总LDL磷脂为缩醛磷脂。在体外用氧化剂氧化LDL诱导缩醛磷脂亚类在磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺中的选择性还原。与HDL缩醛磷脂(35％)相比，VLDL和LDL缩醛磷脂被大幅度氧化(减少99％)，这说明缩醛磷脂就动脉粥样硬化，脂肪和脂肪酸在血流中的积累而言起着保护作用。这也促成了对同样受到年龄影响的血压的调节。
在8和16天龄的鸡胚成纤维细胞中的胆固醇和磷脂含量进行了比较。胆固醇含量没有发生变化，而总磷脂随着时间的变化而下降，导致了胆固醇与磷脂比例的升高。此外，在这些成纤维细胞中的磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的脂肪酸组合物显示出独特的性质。例如，超过三分之二的肉豆蔻酸含量从8-16天龄的成纤维细胞中耗尽。这说明了在发育过程中膜的流动性发生了变化，一种帮助保持细胞相对强壮并有助于减轻与年龄相关症状的变化。
为了制备用于预防和治疗与年龄相关的病症的组合物，选择年龄约6天-约14天的鸡胚；优选约9天-约10天。优选在成长期间以约90°F-约100°F，优选约95°F-约100°F，更优选约99°F-约100°F的温度孵化这些胚胎。然后，使用前，通过立即冷冻这些胚胎并在约-70℃-约-90℃，优选约-75℃-约-85℃，更优选约-80℃-约-85℃的温度下将它们储藏在冷冻器中保藏直至使用。
为了制备供使用的冷冻胚胎，先将它们解冻，然后用捣碎器快速地将其绞碎。然后用本领域技术人员已知的任何方法将这些绞碎的胚胎碎片离心。进行该离心分离是为了分离出胚胎的液体部分。然后与乙醇混合物后通过进一步离心法除去固体相中任何残留水。也可通过冷冻干燥法、暖空气流，或本领域技术人员已知的任何其他干燥法除去残留水。如果使用用乙醇的离心法，可向乙醇中加入丙酮以增加干燥性能。在大规模制备中，可在具有局部真空的蒸发器中干燥绞碎的胚胎组织。在这种蒸发器中，应当保持真空压力从而使得绞碎组织的沸点为约50℃-约60℃。优选将真空压力保持在使沸点为约54℃-约57℃的程度。如有必要，使用温暧的空气流以进一步干燥浓缩的绞碎的胚胎混和物。为了在不化学性破坏该生物化合物的情况下获得干燥胚胎碎片的最好结果，应将空气流保持在约180℃-约200℃，优选约188℃-约192℃。
然后将绞碎的干燥胚胎组织与适当的有机溶剂，例如己烷-乙醇溶液混合，其中将绞碎的胚胎组织中的液体萃取到有机溶剂中。优选在搅拌下萃取脂质。结果，从液相中除去了脂质提取物，并将该脂质提取物暂时搁置一边。接着将脂质萃取后剩下的液相浓缩至原始体积的约5％至约15％，优选浓缩到原体积的约9％-约11％。可通过本领域任何已知的方法完成上述操作，但是优选通过使用闪蒸器在小于约40℃-约50℃，更优选在约43℃-约46℃下进行上述操作。
然后将液相分成水层和有机层。接着将有机层进一步浓缩从而获得磷脂提取物。为了从磷脂提取物中除掉任何残留水和有机溶剂，可在将它们与一部分非活性成分混合后冻干萃取的磷脂。例如，可向冻干混合物中加入食用抗氧化剂和异亮氨酸。优选通过标准冷冻干燥法冻干该磷脂提取物，但是可通过本领域技术人员已知的任何方法对其进行提纯。
将一小部分磷脂提取物放置一边并保藏以对组合物中的所得脂质进行质量分析。可通过薄层层析法、高效液相层析法(HPLC)、气相层析法、NMR光谱法或任何这些技术的组合进行分析。典型地，NMR光谱显示，作为这一方法的结果，磷脂提取物含有包含总磷脂的约50％至约70％，更优选包含总膦脂的约55％-约66％的磷脂酰胆碱。在得自该方法的磷脂提取物中通常测不到任何可估价量的磷脂酰胆碱的缩醛磷脂。磷脂酰乙醇胺及其缩醛磷脂包含磷脂提取物中约20％-约30％的总磷脂，更优选23％-约26％的总磷脂。进一步分析还显示在磷脂提取物中发现的主要脂肪酸包括C18:0和C16:0(源自磷脂酰乙醇胺)和C16:0、C20:4n6、C16:1、C22:6n3和C18:1(源自磷脂酰胆碱)。上述所用的化学命名指明了脂肪酸的长度(由紧跟“C”后的数字表明)，以及其骨架上双键的数目(由紧跟冒号后的数字表明)和这些双键的位置(由“n”后的数字表明)。
为了除去任何残留的水和有机溶剂，在将磷脂提取物与食用抗氧化剂和氨基酸混和后，将磷脂提取物进行冻干。氨基酸是人体的基本构建部件，而且包括这些氨基酸的补剂用来帮助补充这些水平。疏水性的任何氨基酸可以用于该化合物中。常用的氨基酸例如赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和半胱氨酸可以使用。更优选地，是使用异亮氨酸。具体的疏水性氨基酸，异亮氨酸常常被发现浓缩在肌肉组织中。特别地，异亮氨酸有助于在人体中形成血红蛋白。异亮氨酸也用来稳定和调节体内的血糖和能量水平。
进一步地，可冻干磷脂提取物，或不冻干则将其与抗氧化剂混合。抗氧化剂化合物为那些降低细胞结构氧化作用的化合物。这减缓了细胞老化过程并使细胞更加强壮。在本申请混合物中，抗氧化剂的加入有助于防止磷脂的氧化。用于该组合物中的优选抗氧化剂包括维生素E，及其衍生物，和维生素C及其衍生物。更优选使用维生素E和抗坏血酸棕榈酸酯(ascorbyl palmitate)，一种维生素C衍生物。维生素E，一种脂溶性天然存在的维生素，具有特别良好的抗氧化性能。已发现维生素E与冠心病比例的降低有关。维生素C不仅可预防细胞氧化，还可帮助体内胶原的合成，胶原本身可帮助修复老化皮肤和肌肉组织。已发现抗坏血酸棕榈酸酯是补剂中尤其有效的维生素C衍生物。在本发明的实施方案中还可用这些抗氧化剂代替氨基酸。
此外，优选向磷脂提取物中加入连接元素(binding element)。该连接元素是用于将该组合物的成分保持在一起。可使用任何人使用安全的基于硬脂酸盐的化合物，例如硬脂酸钙和硬脂酸锌。然而，优选的连接元素为硬脂酸镁。作为一种镁的衍生物，这种化合物常被用作促进食品中粘合的食品添加剂。
多糖是包含多数糖分子的基于碳水化合物的淀粉，其也有助于将组合物的成分保持在一起。可使用任何多糖；然而，在组合物中的优选多糖包括乳糖、纤维素和果糖。更优选使用乳糖和纤维素。
如本领域中已知的，还可加入其他成分以改善最终制剂的味道或稠度。例如，还可向组合物中加入调味剂。这种调味剂可改善组合物给药时的味道，使其偿起来更像薄荷、水果或任何消费者喜爱的味道。优选将调味剂用于以液体形式给药的组合物中，但也可用于固体形式的组合物中。
制备磷脂提取物后，再将所选成分混合起来从而获得最终组合物的剂量。这种组合物可为液体形式或固体胶囊形式。可以任何本领域技术人员已知的形式施用该组合物，例如，固体胶囊可为薄膜包衣的片剂或软明胶片剂。作为另外的实施例，可作为液体酏剂或舌下或口服喷雾剂施用液体组合物。给药形式可变化，但应当计算剂量从而使得单剂量包含约40mg-约100mg的磷脂提取物。更优选单剂量包含约50mg-约80mg的磷脂提取物。
以下实施例展示了该组合物的不同实施方案，显示了使组合物更适于不同的终形式的替换成分和最终组合物的给药方法。
实施例I鸡胚磷脂的舌下薄膜包衣的片剂

在这个实施例中，以上述方法加工鸡胚磷脂。然后将经加工的磷脂提取物与其他成分混合并掺合在一起。如本领域中公知的，胶囊是通过将该混合物倒入胶囊模中使混合物凝固而制备的。通过释放剂，例如蜡、动物脂、或膜，将胶囊从模具中释放出。上述每个组分的特定量可以生产足够的组合物以制备出约1000个薄膜包衣的片剂。
实施例II鸡胚磷脂的舌下液体混悬液

在可本实施例中使用通过上述方法制备的磷脂提取物。混合以上列举的前六种成分并将它们掺合在一起，然后加入同等量的载体乙醇和纯化水从而制备总量为1000ml的溶液。薄荷调味油是优选的调味酏剂；然而，也可用其他调味剂代替或根本不要。如本领域已知的，将各成分充分混合在一起从而制备液体组合物，并以约2ml-约10ml的剂量，优选以约3ml-约6ml的剂量配药。
需要注意的是，在该实施例中不使用氨基酸。然而，调整抗氧化剂相对于磷脂的量从而在两种成分之间保持适当的平衡。
实施例III鸡胚磷脂的口腔内喷雾气雾剂(重量百分比)

以上实施例是针对口腔内喷雾制剂(dosage)机制，一种针对口腔的喷雾。如实施例II中的那样，在本实施例中也不使用氨基酸。在此，除去氨基酸可保持混合组合物的可喷雾的液体稠度。进一步地，如实施例II中的那样，可用其他调味剂代替薄荷调味油，或干脆省略。然后将所得组合物倒入可分配定量剂量的喷雾容器中，如本领域中已知的那样。每个测定的剂量为约2ml-约10ml溶液，优选每个剂量为约3ml-约6ml溶液。
实施例IV鸡胚磷脂的口服软明胶片剂

在该实施例中，对实施例I中的组合物，可使用一种替换制剂，包括更适合软明胶剂量的替换连接元素。制备软明胶片剂的方法是本领域熟知的，与实施例I中的相类似。这些成分将生产足够的组合物，产生约1000个软明胶片剂。
实施例V鸡胚磷脂的口服薄膜包衣的片剂

在本实施例中，对实施例I中的薄膜包衣的片剂，可使用一种替换制剂，包括替换连接元素。如实施例I，这些成分将生产足够的组合物，产生约1000个薄膜包衣的片剂。
提供上述的实施例作为代表性的所建议的剂量方法。优选剂量水平为每天约1剂量-约3剂量，更优选每天单剂量。
如上述实施例I所示的方法加工从年龄为约6天-约14天龄的鸡胚中的磷脂提取物，然后在15月大的雄性小鼠上测验该胚胎磷脂对寿命的作用。本领域中熟知的是，这一组合物时15月大的雄性小鼠的作用相当于该组合物对约40-45岁的人的作用。将总共100只NIAbalb/cNNia小鼠分成3组。对第一组中的30只小鼠施用盐水溶液。对第二组中的30只小鼠施用上述实施例I中加工的组合物，然而用不含磷脂的鸡胚提取物部分代替磷脂提取物。对最后一组中的40只小鼠施用如上述实施例I用鸡胚磷脂提取物加工的组合物。对每组每周施用一次口服剂量。在本试验的前10个月中，40只接受鸡胚磷脂处理的小鼠中只有一只死亡(2.5％)，而30只被施用盐水溶液组中的小鼠中的7只(23.3％)和30只被施用非磷脂鸡胚提取物组合物的组中小鼠中的7只(23.3％)死亡。
对整个试验来说，施用非磷脂组的存活模型与对照组的基本相似。相反，施用含磷脂提取物的组合物的一组具有明显更低的死亡率，如表I所示。
表I小鼠的死亡率

对21各年龄为约47岁-约70岁的人受试者进行试验。以每周两次口服剂量施用8周如实施例I制备的含磷脂提取物的组合物。每次给药剂量相当于在每只约10天龄的10个鸡胚中所含的磷脂，约为40mg-约100mg磷脂提取物。
基于试验开始后4周、8周和10周的患者所做的陈述，对源自年龄为约6天-约14天大的鸡胚的磷脂提取物对人受试者的作用进行主观试验。这些陈述所基于的问卷调查，其包括工作表现、情绪稳定性、精神和身体疲倦、头疼、睡眠模式、食欲、食物消化、性能力、毛发指甲的生长、和其他身体和精神活动显著变化的评估。在超过60％的受试者中发现对这些问题的大部分作出了明显的肯定反应。进一步地，在身体耐力试验中还观察到相当大的改善。对受试者进行的附加生化研究显示出在血小板计数、肝酶值(例如碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶)、总胆固醇水平和禁食葡萄糖值方面存在显著改善。
虽然本文中的本发明已通过结合其优选实施方案来描述了，但是本领域的技术人员可以理解的是可以进行没有特别说明的增加、改良、替换、和删除，而不会背离在所附权利要求书中所定义的本发明的精神和范围。
权利要求
1.一种用于预防和治疗与年龄相关的身体和精神疾病的组合物，其包含从年龄在约6天龄至约14天龄之间的鸡胚中提取出的磷脂类。
2.权利要求1中的组合物，其中所述的鸡胚年龄在大约9天龄至约10天龄之间。
3.权利要求1中的组合物，其进一步包含至少一种氨基酸。
4.权利要求3中的组合物，其中所述的氨基酸选自异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸和半胱氨酸。
5.权利要求4中的组合物，其中所述的氨基酸包含异亮氨酸。
6.权利要求1中的组合物，其进一步包含至少一种抗氧化剂。
7.权利要求6中的组合物，其中所述的至少一种抗氧化剂选自维生素E、维生素E衍生物、维生素C和维生素C衍生物。
8.权利要求6中的组合物，其中所述的至少一种抗氧化剂包含维生素E和抗坏血酸棕榈酸酯。
9.权利要求1中的组合物，其进一步包括至少一种连接元素。
10.权利要求9中的组合物，其中所述的至少一种连接元素是硬脂酸盐化合物。
11.权利要求10中的组合物，其中所述的至少一种连接元素选自硬脂酸镁、硬脂酸钙和硬脂酸锌。
12.权利要求11中的组合物，其中所述的至少一种连接元素包括硬脂酸镁。
13.权利要求1中的组合物，其进一步包含至少一种多糖。
14.权利要求13中所述的组合物，其中所述的至少一种多糖选自果糖、乳糖和纤维素。
15.权利要求14中的组合物，其中所述的至少一种多糖包含乳糖和纤维素。
16.权利要求1中的组合物，其进一步包括一种调味剂。
17.一种用于预防和治疗与年龄相关的身体和精神疾病的组合物，其包含从年龄在约6天龄至约14天龄的鸡胚中提取出的磷脂类；异亮氨酸；维生素E；抗坏血酸棕榈酸酯；硬脂酸镁；乳糖；和纤维素。
18.权利要求17中的组合物，其中所述的鸡胚年龄在约9天龄至约10天龄之间。
19.一种从鸡胚中提取磷脂类的方法，该磷脂用于用来减轻与年龄相关的身体和精神疾病的组合物中，该方法包括孵化所述鸡胚约6天-约14天；为进行化学提取而制备该鸡胚；将脂质从所述鸡胚中提取出；从所述脂质中分离出磷脂类；和冻干所述磷脂类。
20.权利要求19中的方法，其中所述的鸡胚被孵化了约9天-约10天。
21.一种使用用于治疗有此治疗需求的人受试者中的与年龄相关的身体和精神疾病的组合物的方法，该方法包括施用一个剂量的包含从孵化约6天-约14天的鸡胚中提取出的磷脂类的组合物，其中所述的剂量足以增强身体耐力。
22.权利要求21中的方法，其中所述的鸡胚被孵化了约9天-约10天。
23.权利要求21中的方法，其中所述组合物的形式选自片剂形式、液体酏剂形式和口内喷雾形式。
24.权利要求21中的方法，其中所述的组合物包含约40mg-约100mg的磷脂类。
25.权利要求24中的方法，其中所述的组合物包含约50mg-约80mg的磷脂类。
26.一种治疗与年龄相关的病症的方法，包括摄入一个剂量的包含从孵化了约6天-约14天的鸡胚中提取出的磷脂类的组合物。
27.权利要求26中的方法，其中所述的鸡胚被孵化了约9天-约10天。
28.权利要求26中的方法，其中所述的剂量是口服摄入的。
29.权利要求28中的方法，其中所述的剂量形式选自片剂形式、液体酏剂形式和口内喷雾形式。
30.权利要求28中的方法，其中所述的剂量包含约40mg-约100mg的磷脂类。
31.权利要求30中的方法，其中所述的剂量包含约50mg-约80mg的磷脂类。
全文摘要
本发明提供了一种用于预防和治疗与年龄相关的身体和精神疾病的组合物，包括从年龄在约6天龄－约14天龄的鸡胚中提取的磷脂类。还提供了一种通过将其孵化约6天－约14天而提取这些磷脂的方法。然后制备这些鸡胚以用于化学提取，并从这些鸡胚中提取出脂质。进一步提供了一种通过对人受试者施用足够剂量的组合物，而对有此治疗需求的人受试者，预防和治疗与年龄相关的身体和精神疾病的方法，该组合物包括从被孵化了约6天－约14天的鸡胚中提取出的磷脂类。
文档编号A61K35/12GK1756536SQ200480005850
公开日2006年4月5日 申请日期2004年1月2日 优先权日2003年1月3日
发明者大卫·S·康, 中希·金伯利·康 申请人:大卫·S·康, 中希·金伯利·康