用于真皮内投递治疗剂的方法

专利名称：用于真皮内投递治疗剂的方法
本申请要求2004年3月3日提交的美国临时申请No.60/550,197和2003年8月26日提交的美国临时申请No.60/497,702的优先权，并将它们完整收入本文作为参考。
1.发明领域本发明涉及用于将一种或多种生物学活性剂(特别是治疗剂)投递至受试者皮肤的真皮内(intradermal)区域(compartment)的方法和装置。本发明提供了通过真皮内投递将生物学活性剂(诸如治疗剂)投递至淋巴脉管系统的改进方法。可以依照本发明投递的治疗剂包括但不限于抗肿瘤剂、化学治疗剂、抗体、抗生素、抗血管发生剂、抗炎剂和免疫治疗剂。依照本发明投递的治疗剂具有改善的生物利用度，包括改善的全身分布和改善的特定组织投递。相对于其它药物投递方法(包括腹膜内、肌肉内和皮下投递)，依照本发明方法投递的治疗剂具有改善的临床功效和治疗效果。本发明的方法提供了优于常规药物投递方法的好处和改进，包括节省剂量、提高药物效果、降低副作用、降低转移潜力和延长存活。
2.发明背景人们早就认识到了高效且安全的施用药剂(诸如治疗剂)和药物的重要性。最近在对大分子(诸如由生物技术工业生产的蛋白质)确保适度的生物利用度和可再现的吸收方面凸现了困难(Cleland等，2001，Curr.Opin.Biotechnol.12212-219)。常规针的使用长期以来提供了通过穿过皮肤的给药对人和动物投递药剂的一种方法。一般而言，注射避免了与口服投递有关的苛刻条件，这些条件常常削弱大多数生物制品疗法的期望效果。注射还可以比口服给药提供更快的治疗效果。为了实现可重现的且高效的基于针的注射投递，同时提高使用的便利并减轻患者对常规针的不安和/或疼痛，已经做出了相当多的努力。另外，某些经皮投递系统完全消除了针，而依赖简单的疏水吸附、化学介质或外力驱动(诸如离子电渗电流(iontophoreticcurrent)或电穿孔或热穿孔或超声促渗(sonophoresis))来突破角质层(皮肤的最外层)并穿过皮肤表面来投递药剂。然而，这些投递系统一般不能可重现的横穿皮肤屏障或将药剂投递至皮肤表面以下的指定深度。因此，临床结果可能是多变的。由此，认为机械(诸如用针)突破角质层为穿过皮肤表面施用药剂提供了最可重现的方法，而且为所施用药剂的定位提供了控制和可靠性。
用于在皮肤表面以下投递药剂的方法几乎独有的包括经皮注射或输注，即穿过皮肤将药剂投递至皮肤下面的部位。经皮注射和输注包括皮下、肌肉内或静脉内给药途径，其中最常用的是肌肉内(IM)和皮下(SC)注射。
在解剖学上，身体的外表面是由两种重要组织层组成的，外面的表皮和下面的真皮，二者一起构成了皮肤(综述见《皮肤的生理学、生物化学、和分子生物学》(physiology，Biochemistry，andMolecular Biology of the SKin)，第2版，L.A.Goldsmith编，牛津大学出版社，纽约，1991)。表皮细分成五层，厚度合计75-150μm。表皮下面是真皮，它包含两层，最外面的部分称为乳头状真皮，而深层称为网状真皮。乳头状真皮含有大量的微循环血液和淋巴丛。相反，网状真皮含有较少的细胞和脉管，由致密的胶原性和弹性结缔组织组成。表皮和真皮下面是皮下组织，也称为下皮(hypodermis)，它由结缔组织和脂肪组织构成。肌肉组织位于皮下组织的下面。
如上所述，皮下组织和肌肉组织都常常用作药剂(包括治疗剂)的给药部位。然而，真皮很少作为药剂的给药部位，这可能是(至少部分)因为难以将针准确的定位于真皮内区域。另外，尽管已知真皮(特别是乳头状真皮)具有高度的脉管分布，然而至今尚未认识到可以利用这种高度的脉管分布而对所给药的药剂获得比皮下给药有所改进的吸收特性。
在芒图(Mantoux)结核菌素试验中常规使用了在皮肤表面以下并进入真皮内区域的一种给药方法。在这种程序中，使用27或30号针以小角度进入皮肤表面而注射纯化的蛋白质衍生物(Flynn等，1994，Chest 1061463-5)。然而，注射定位的一定程度不确定性可能导致一些假阴性测试结果。此外，为了在注射部位引发应答，该测试牵涉局部注射，而且芒图法并未导致真皮内注射用于全身给药药剂。
一些小组报告了所谓“真皮内”注射的全身给药。在这样的一份报告中，进行了关于皮下和所谓“真皮内”注射的比较性研究(Autret等，1991，Therapie 465-8)。测试用的药剂是降钙素，分子量约3600的一种蛋白质。尽管声称药物是真皮内注射的，然而注射使用4mm针，且以60度角推进至底部。这将导致注射液位于约3.5mm的深度，进入网状真皮的下部，或者进入皮下组织，而非进入密布脉管的乳头状真皮。事实上，如果这个小组注射到了网状真皮的下部而非进入皮下组织，那么可以预料药剂将在脉管较少的网状真皮中缓慢吸收或扩散到皮下区域，而导致在功能上与皮下给药和吸收相同。这种真实的或功能性的皮下给药将解释报告中皮下给药与所谓真皮内给药之间在达到最大血浆浓度的时间、每个测定时间的浓度和曲线下面积这些方面缺乏差异的原因。
类似的，Bressolle等通过所谓“真皮内”注射使用4号针给药头孢他啶钠(sodium ceftazidime)(Bressolle等，1993，J.Pharm.Sci.821175-1178)。这将导致在皮肤表面以下4mm深度的注射，产生真实的或功能性的皮下注射，尽管在这种情况中预料皮下吸收较好，因为头孢他啶钠是亲水性的且分子量较低。
另一个小组的报告是关于所谓的真皮内药物投递装置(美国专利号5,007,501)。指出注射是慢速，而且注射部位意图是表皮下面的一些区域，即表皮与真皮之间的界面或者是真皮或皮下组织的内部。然而，这篇参考文献没有教导暗示选择性真皮给药，也没有暗示这种选择性给药可能产生的任何可能的药物动力学优点。
由此，仍然持续需要高效的且安全的给药药剂(尤其是治疗剂)的方法和装置。
3.发明概述本发明提供了用于对受试者的皮肤给药一种或多种生物学活性剂(优选治疗剂)的方法，其中将生物学活性剂投递至受试者皮肤的真皮内区域。在一个优选的实施方案中，可以依照本发明投递的治疗剂包括但不限于抗肿瘤剂、化学治疗剂、抗体、抗生素、抗血管发生剂、抗炎剂和免疫治疗剂。
本发明部分基于发明人的以下发现，即将药剂投递至真皮内区域时，它们迅速输送至局部淋巴系统，全身分布，且分配至较深组织。依照本发明的真皮内投递治疗剂能够直接到达真皮的静脉和淋巴两种网络，并提供独特的全身药物动力学结果。通过到达这些网络，就可以实现治疗好处，包括但不限于提高临床效用和治疗效果。具体而言，发明人发现，将治疗剂给药至真皮内区域导致治疗效果相对于其它药物投递方法(包括腹膜内投递)得到提高。
在一个具体的实施方案中，本发明提供了用于投递治疗剂的改进方法，其中所述治疗剂包括但不限于抗肿瘤剂、化学治疗剂、抗体、抗生素、抗血管发生剂、抗炎剂、免疫治疗剂和抗病毒剂，且临床效用和治疗效果得到了提高。
依照本发明方法给药的生物学活性剂(诸如治疗剂)迅速通过真皮的静脉和淋巴两种网络输送。依照本发明方法投递的治疗剂在真皮内区域沉积，并以高生物利用度分布至给药部位的局部淋巴组织，随后通过更广传播的淋巴投递而进入大循环。这种治疗剂投递方法在治疗利用两种网络的病症中特别有用，包括但不限于癌、肿瘤生长和转移、病毒感染、细菌感染、寄生虫感染、免疫病症和代谢病症。
依照本发明的真皮内投递治疗剂能够直接到达真皮的静脉和淋巴两种网络，并提供独特的全身药物动力学结果。通过到达靶(诸如肿瘤)附近的这些网络，就可能实现治疗好处。真皮内给药的治疗剂还可以通过淋巴网络的介导到达免疫细胞。另外，真皮内投递治疗剂将导致全身分布，以与许多当前疗法相似的方式提供到达广泛散布的部位和器官的额外好处。
本发明提供了提高生物学活性剂在特定组织中的生物利用度的改进方法，包括但不限于皮肤组织、淋巴组织(例如淋巴结)、粘膜组织、生殖组织、子宫颈组织(cervical tissue)、阴道组织和由不同类型组织组成且执行特定功能的身体任何部分即器官，包括但不限于肺、脾、结肠、胸腺。在有些实施方案中，组织包括与环境相互作用或可到达环境的任何组织，例如皮肤、粘膜组织。本发明涵盖的其它组织包括但不限于血淋巴样系统；淋巴样组织(例如上皮相关淋巴样组织和粘膜相关淋巴样组织或MALT(MALT可以进一步分成有组织的粘膜相关淋巴样组织(O-MALT)和弥散的淋巴样组织(D-MALT))；初级淋巴样组织(例如胸腺和骨髓)；次级淋巴样组织(例如淋巴结、脾、消化、呼吸和泌尿生殖组织)。本领域技术人员将领会，次级MALT包括肠相关淋巴样组织(GALT)；支气管相关淋巴样组织(BALT)；和生殖泌尿系统。MALT具体包括淋巴结、脾、与上皮表面相关的组织诸如颚(palentine)和鼻咽扁桃体、小肠中的派伊尔结(Peyer’spatches)以及呼吸和泌尿生殖系统中的各种节结、皮肤和眼的结膜。O-MALT包括扁桃体(颚、舌、鼻咽和管)的咽周淋巴样环、食管节结和贯穿整个消化道由十二指肠至肛管散布的类似淋巴样组织。
除了其它好处，依照本发明真皮内投递生物学活性剂提供了如下好处，即迅速吸收进入局部淋巴，所投递药剂对特定组织的靶向和沉积提高，且全身和组织生物利用度提高。这些好处对于投递诸如抗肿瘤剂、抗体和抗生素等治疗剂尤其有用。依照本发明方法的真皮内投递药剂将药剂沉积在真皮内和淋巴区域以及深部组织中，导致药剂迅速且在生物学上显著的集中到这些区域和组织中。
通过真皮内投递将各种治疗剂直接靶向淋巴，实现了有益的治疗效果，包括节省剂量、提高药物效果、降低副作用、降低转移潜力和延长生存期。既然本发明的投递方法能够使得治疗剂既全身又局部沉积，那么本发明提供了用于治疗疾病的改进方法。因此，通过提高所投递治疗剂的沉积量、组织生物利用度、更快的开始作用(onset)、和更快的清除，本发明提供了用于治疗疾病(诸如癌)的改进方法。本发明提供了为了治疗疾病(特别是癌)给药至少一种治疗剂的方法，包括以受控速率、体积和压力将药剂给药至受试者皮肤的真皮内区域，使得药剂沉积在ID区域中并由淋巴脉管系统吸收。
通过提高所投递治疗剂的沉积量、组织生物利用度、更快的开始作用、和更快的清除，本发明还提供了用于治疗位于特定身体组织和器官的疾病的改进方法，诸如那些组织和器官的感染，例如呼吸道感染。本发明提供了为了治疗疾病(特别是感染)给药至少一种治疗剂的方法，包括以受控速率、体积和压力将药剂投递至受试者皮肤的真皮内区域，使得药剂沉积在真皮内区域中并由淋巴脉管系统吸收。
在用于本文时，投递到真皮内区域中或真皮内投递意指将生物学活性剂给药到真皮中的方式，使得药剂易于到达富含脉管的乳头状真皮，且迅速吸收到毛细血管和/或淋巴管中而成为全身性生物可用的。这可以这样来实现，即将药剂置于真皮的上部区域即乳头状真皮，或者脉管较少的网状真皮的上部，使得药剂易于扩散到乳头状真皮中。生物学活性剂在乳头状真皮下面而在网状真皮中但足够高于真皮与皮下组织之间界面的这个真皮区域中的受控投递应当能够使得药剂有效(向外)移动至(未受干扰的)脉管和淋巴毛细管床(在乳头状真皮中)，在此它能够通过这些毛细管吸收进入体循环，而不会在通行过程中被任何其它皮肤组织区域扣押(sequestered)。在有些实施方案中，将生物学活性剂主要置于至少约0.3mm、更优选至少约0.4mm、且最优选至少约0.5mm的深度至不超过约2.5mm、更优选不超过约2.0mm、且最优选不超过约1.7mm的深度将导致药剂的迅速吸收。尽管不想受限于具体的作用机制，将生物学活性剂主要置于更大深度和/或进入网状真皮的下部可能导致淋巴对药剂的吸收不够有效，因为药剂将缓慢吸收到脉管较少的网状真皮或皮下区域中。
与依照本发明方法ID投递生物学活性剂有关的改进好处不仅可以使用基于微型装置的注射系统来实现，还可以使用其它投递系统来实现，诸如使流体或粉末进入ID区域的少用针(needle-less)或不用针(needle-free)的冲击注射，借助微型装置增强的离子电渗(ionotophoresis)，以及流体、固体或其它剂量形式在皮肤中的直接沉积。在具体的实施方案中，生物学活性剂的给药是通过将针或套管插入受试者皮肤的真皮内区域来实现的。
3.1定义在用于本文时，“真皮内”指将生物学活性剂给药到真皮中的方式，使得药剂易于到达富含脉管的乳头状真皮，且迅速吸收到毛细血管和/或淋巴管中而成为全身性生物可用的。这可以这样来实现，即将药剂置于真皮的上部区域即乳头状真皮，或者脉管较少的网状真皮的上部，使得药剂易于扩散到乳头状真皮中。生物学活性剂在乳头状真皮下面而在网状真皮中但足够高于真皮与皮下组织之间界面的这个真皮区域中的受控投递应当能够使得药剂有效(向外)移动至(未受干扰的)脉管和淋巴毛细管床(在乳头状真皮中)，在此它能够通过这些毛细管吸收进入体循环，而不会在通行过程中被任何其它皮肤组织区域扣押。在有些实施方案中，将生物学活性剂主要置于至少约0.3mm、更优选至少约0.4mm、且最优选至少约0.5mm的深度至不超过约2.5mm、更优选不超过约2.0mm、且最优选不超过约1.7mm的深度将导致药剂的迅速吸收。尽管不想受限于具体的作用机制，将生物学活性试剂主要置于更大深度和/或进入网状真皮的下部或SC区域将导致淋巴的吸收不够有效。
在用于本文时，“真皮内投递”指将药剂投递至真皮内区域，正如Pettis等在WO02/02179A1(PCT/US01/20782)和美国申请系列号09/606,909中所述(将它们完整收入本文作为参考)。
在用于本文时，“皮下投递”指将药剂沉积在受试者皮肤的皮下层中，深度大于2.5mm。
在用于本文时，“药物动力学、药效学和生物利用度”正如Pettis等在WO02/02179A1(PCT/US01/20782，优先权日期2000年6月29日)中所述。
在用于本文时，“改善的药物动力学”指与常规给药方法相比，在给药指定量的药剂后，提高的生物利用度、缩短的滞后时间(Tlag)、缩短Tmax、加快的吸收速率、更快的开始作用和/或升高的Cmax。
在用于本文时，“生物利用度”指指定剂量的给药药剂中到达血液部分的总量。这通常以浓度对时间图谱中的曲线下面积来测量。
在用于本文时，“组织”指一起执行功能的一组或一层细胞，包括但不限于皮肤组织、淋巴组织(例如淋巴结)、粘膜组织、生殖组织、子宫颈组织、阴道组织和由不同类型组织组成且执行特定功能的身体任何部分即器官，包括但不限于肺、脾、结肠、胸腺。在用于本文时，组织包括与环境相互作用或可到达的任何组织，例如皮肤、粘膜组织。
在用于本文时，“组织生物利用度”指在体内在特定组织中生物可利用的药剂的量。这些量通常以可能涉及结合、标记、检测、输送、稳定性、生物学作用的活性或可用于诊断和/或治疗的其它可测量特性来测量。另外，应当理解“组织生物利用度”的定义还包括特定组织可利用的药剂的量。“组织生物利用度”包括在特定组织中积累的药剂总量、呈递给特定组织的药剂的量、单位质量/体积的特定组织中积累的药剂的量、以及每个时间单位中特定质量/体积的特定组织中积累的药剂的量。组织生物利用度包括在体内在特定组织或组织集合(诸如构成脉管和/或各种身体器官的组织集合，器官即由不同类型组织构成且执行特定功能的身体部分，实例包括脾、胸腺、肺、淋巴结、心、和脑)中可利用的药剂的量。
在用于本文时，“滞后时间(lag time)”指给药药剂与达到可测量或可检测血液或血浆水平的时间之间的延迟。Tmax值代表达到药剂的最大血液浓度的时间，而Cmax值指通过指定的剂量和给药方法达到的最大血液浓度。开始作用时间是Tlag、Tmax和Cmax的函数，因为所有这些参数都影响达到实现生物学效果所必需的血液(或靶组织)浓度所必需的时间。可以通过直观检查图形结果来测定Tmax和Cmax，而且常常能够为比较给药药剂的两种方法提供足够信息。然而，可以使用数学模型和/或本领域技术人员知道的其它手段通过动力学分析更精确的测定该数值。
在用于本文时，“常规投递”指用于投递任何物质的任何方法，它们具有或认为具有与皮下投递相似或较低的、改进的生物动力学和生物动态学。常规投递可以包括皮下、离子电渗和皮内投递方法，诸如Gross在US5,800,420中所述。
在用于本文时，术语“病症”和“疾病”可互换使用，指受试者的病况。疾病包括身体(系统或器官)之功能的任何中断、停止或紊乱。
在用于本文时，术语“癌”指由异常的、不受控制的细胞生长引起的赘生物或肿瘤。在用于本文时，癌明确包括白血病和淋巴瘤。术语“癌”指牵涉这样的细胞的疾病，它们有可能转移至较远部位并展示与非癌细胞不同的表型特性，例如在三维基质(诸如软琼脂)中形成集落或者在三维基底膜或胞外基质制备物中形成管状网络或网样基质。非癌细胞在软琼脂中不形成集落，而且在三维基底膜或胞外基质制备物中形成独特的球样结构。癌细胞在它们的发展过程中获得了一组特征性的功能性能力，尽管是通过不同的机制。这些能力包括规避凋亡、生长信号自给自足、对抗生长信号不敏感、侵入组织/转移、无限增殖的潜力和持续的血管发生。术语“癌细胞”意图涵盖恶变前和恶性两种癌细胞。在有些实施方案中，癌指保持局部化的良性肿瘤。在其它实施方案中，癌指已经侵入并破坏邻近身体结构且传播至较远部位的恶性肿瘤。在还有一些实施方案中，癌与特异癌抗原有关。
在用于本文时，术语“受试者”和“患者”可互换使用。在用于本文时，受试者优选哺乳动物，诸如非灵长类(例如牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)和灵长类(例如猴和人)，最优选人。
在用于本文时，“治疗有效量”指足以治疗或控制疾病或病症的治疗剂的量。治疗有效量可以指足以延迟疾病的发作或将其降至最低的治疗剂的量，例如延迟癌的传播或将其降至最低。治疗有效量还可以指在疾病的治疗或控制中提供治疗性好处的治疗剂的量。另外，治疗有效量对于本发明的治疗剂而言指单独或联合其它治疗在疾病的治疗或控制中提供治疗性好处的治疗剂的量。
在用于本文时，术语“预防剂”指可用于预防病症或其复发或传播的任何药剂。
在用于本文时，“预防有效量”可以指足以预防过度增殖性疾病(特别是癌)在患者中发生、复发或传播的预防剂的量，包括但不限于易患过度增殖性疾病的患者，例如在遗传上易患癌或先前暴露于致癌物质的患者。预防有效量还可以指在疾病预防中提供预防性好处的预防剂的量。另外，预防有效量对于本发明的预防剂而言指单独或联合其它药剂在疾病预防中提供预防性好处的预防剂的量。
在用于本文时，术语“治疗”指根除、减少或减轻疾病或病症的症状。在有些实施方案中，治疗指通过给药一种或多种治疗剂而根除、清除、修正、或控制原发性、区域性、或转移性癌组织。在某些实施方案中，这些术语指通过对患有这种疾病的受试者给药一种或多种治疗剂来延迟癌的传播或将其降至最低。
在用于本文时，术语“控制(manage)”指通过对受试者给药不能治愈疾病的预防剂或治疗剂获得的有益效果。在某些实施方案中，对受试者给药一种或多种预防剂或治疗剂来“控制”疾病，从而预防疾病的发展或恶化。
在用于本文时，术语“预防”指通过给药预防剂或治疗剂而在受试者中预防病症的一种或多种症状的发作或复发。
在用于本文时，短语“副作用”涵盖由预防剂或治疗剂产生的不想要的和不利的作用。不利的作用总是不想要的，但是不想要的作用不一定是不利的。预防剂或治疗剂的不利作用可能是有害的或不舒服的或危险的。化学疗法的副作用包括但不限于胃肠中毒诸如早期和晚期形成腹泻和气胀、恶心、呕吐、厌食、白细胞减少、贫血、嗜中性粒细胞减少、虚弱、腹部绞痛、发烧、疼痛、体重减轻、脱水、秃头、呼吸困难、失眠、头昏、粘膜炎、口腔干燥和肾衰竭，以及便秘、神经和肌肉作用、对肾和膀胱的暂时性或永久性损伤、流感样症状、液体潴留和暂时性或永久性不育。放射疗法的副作用包括但不限于疲劳、口干和丧失食欲。生物学疗法/免疫疗法的副作用包括但不限于给药部位的皮疹或肿胀、流感样症状(诸如发烧、寒战和疲劳)、消化道问题和过敏反应。激素疗法的副作用包括但不限于恶心、生育问题、抑郁、丧失食欲、视觉问题、头痛和体重波动。本领域知道还有很多其它不良作用是患者经常遭受的，见例如《内科医师的桌面参考书》(thePhysicians′Desk Reference)，第56版，2002，其完整收入本文作为参考。
4.附图描述

图1图示了IL-12给药途径对IL-12抑制肿瘤生长的影响。
图2图示了IL-12给药途径对携带肿瘤小鼠死亡率的影响。
图3图示了IL-12给药途径对DLN中检测到的NK细胞百分率的影响(通过FACS分析测定)。
图4图示了ID和IM投递后RSV特异性抗体在肺中的水平。这个面积图显示了第3和24个小时、第1、2、3和4周由动物采集的肺组织中检测到的抗体的量。
图5图示了Balb/c模型中最佳IN投递体积和肺采集时间的确定。
图6图示了通过拆分(splitting)剂量实现的两种可能的生物利用度结果。
图7图示了肺组织裂解物中的synagis。
图8显示了synagis噬斑检验(synagis plaque assay)的结果。
图9图示了依照本发明设计的针组件(assembly)的分解透视图。
图10图示了图9实施方案的部分截面图。
图11图示了将图9实施方案安装到注射器主体上而形成的注射装置。
5.发明详述本发明提供了用于对受试者的皮肤给药一种或多种生物学活性剂(优选治疗剂)的方法，其中将生物学活性剂投递至受试者皮肤的真皮内区域。本发明部分基于发明人的意外发现，即与常规投递模式(包括皮下投递和肌肉内投递)相比，在将这些治疗剂投递至真皮内区域时，它们迅速输送至局部淋巴系统，由此提供本文公布的好处。尽管不想受限于具体的作用机制，依照本发明方法投递的治疗剂在体内通过局部淋巴系统输送，而进入全身血液体循环和深部组织环境。
本发明提供了用于投递生物学活性剂的改进方法，它格外提供了以下好处，即迅速吸收进入局部淋巴，所投递治疗剂对特定组织(即一起执行特定功能的一组或一层细胞)的靶向改进即沉积提高，全身生物利用度提高，组织生物利用度提高，待给药的预定体积的药剂的沉积提高，组织特异动力学改进，生物和药效学(PD)迅速，且生物和药物动力学(PK)迅速。本发明方法的这些好处对于投递治疗剂尤其有用。依照本发明方法的真皮内投递治疗剂将治疗剂沉积在真皮内和淋巴区域中，从而导致治疗剂迅速且在生物学上显著的集中到这些区域中。
真皮内投递的治疗剂在特定组织中具有改进的组织生物利用度，包括但不限于粘膜层、皮肤组织、淋巴组织(例如淋巴结)、粘膜组织、生殖组织、子宫颈组织、阴道组织和由不同类型组织组成且执行特定功能的身体任何部分即器官，包括但不限于肺、脾、结肠、胸腺。在有些实施方案中，组织包括与环境相互作用或可到达的任何组织，例如皮肤、粘膜组织。本发明涵盖的其它组织包括但不限于血淋巴样系统；淋巴样组织(例如上皮相关淋巴样组织和粘膜相关淋巴样组织或MALT(MALT可以进一步分成有组织的粘膜相关淋巴样组织(O-MALT)和弥散的淋巴样组织(D-MALT))；初级淋巴样组织(例如胸腺和骨髓)；次级淋巴样组织(例如淋巴结、脾、消化、呼吸、和泌尿生殖)。本领域技术人员将领会，次级MALT包括肠相关淋巴样组织(GALT)；支气管相关淋巴样组织(BALT)；和生殖泌尿系统。MALT具体包括淋巴结、脾、与上皮表面相关的组织诸如颚和鼻咽扁桃体、小肠中的派伊尔结、以及呼吸和泌尿生殖系统中的各种节结、皮肤和眼的结膜。O-MALT包括扁桃体(颚、舌、鼻因和管)的咽周淋巴样环、食管节结和贯穿整个消化道由十二指肠至肛管散布的类似淋巴样组织。
依照本发明方法投递治疗剂与将相同试剂投递至皮下(SC)或肌肉内区域相比导致组织生物利用度提高。依照本发明方法投递试剂使得组织生物利用度提高在投递治疗剂时特别有用，因为它产生有益的治疗效果，包括节省剂量、提高药物效果和降低副作用。
依照本发明方法投递的治疗剂沉积在真皮内区域中，而且首先以高生物利用度分布到给药部位的局部淋巴组织中，随后通过传播更广的淋巴投递而进入大循环。在有些实施方案中，本发明的方法对于治疗深部组织的疾病、病症或感染特别有效。
在有些实施方案中，ID投递后在特定组织中沉积的生物学活性剂的浓度是每50微克特定组织约5纳克(nanogram)药剂；每50微克特定组织10皮克(picogram)药剂；每50微克特定组织29纳克药剂；每50微克特定组织10皮克药剂至每50微克特定组织约29纳克药剂；每50微克特定组织10皮克药剂至每50微克特定组织约150纳克药剂，或每50微克特定组织10皮克药剂。
本发明涵盖用于真皮内投递生物学活性剂(特别是治疗剂)的方法，使得与通过真皮内投递以外的途径(诸如SC投递、肌肉内投递、静脉内投递和表皮投递)投递药剂相比，药剂在特定组织中具有更高的组织生物利用度。在有些实施方案中，依照本发明方法投递的生物学活性剂(特别是治疗剂)具有与静脉内投递药剂相似的生物利用度(包括组织生物利用度)。
本发明涵盖用于真皮内投递生物学活性剂(特别是治疗剂)的方法，使得与将药剂投递至深部组织区域(例如SC)相比，药剂在特定组织中具有更高的组织生物利用度。优选的是，依照本发明方法投递的生物学活性剂是为了治疗、预防、延迟发作或发展、或控制疾病而给药的治疗剂，包括但不限于癌(例如淋巴瘤、白血病、乳癌、黑素瘤、肺癌、肾癌和结肠直肠癌)、转移、肿瘤生长或感染性疾病。
本发明涵盖用于真皮内投递生物学活性剂(特别是治疗剂)的方法，使得与将药剂投递至深部组织区域(例如SC)相比，试剂具有更高的治疗功效。在有些实施方案中，依照本发明方法投递的生物学活性药剂(特别是治疗剂)具有与静脉内给药药剂相似的治疗功效。
本发明涵盖用于治疗、预防或控制疾病的方法，包括以预定剂量给药至少一种治疗剂，其中与通过其它投递途径(诸如SC、IM和IV)常规投递的药剂剂量相比，该预定剂量减少了至少一半、至少5倍、至少10倍。
在有些实施方案中，本发明涵盖在有所需要的人类受试者中治疗、预防或控制癌、癌转移或肿瘤生长的方法，包括将治疗剂投递至人类受试者皮肤的ID区域。为了治疗、预防或控制癌、癌转移或肿瘤生长而真皮内投递药剂导致与通过ID投递以外的途径(例如SC、IM、IV、表皮)投递相同药剂相比肿瘤生长更大降低。在有些实施方案中，为了治疗、预防或控制癌、癌转移或肿瘤生长而真皮内投递药剂导致与通过ID投递以外的途径投递该药剂相比人类受试者的寿命中值延长。
根据本发明的教导的直接靶向真皮内区域使得相对于这些生物学活性剂(包括治疗剂)的常规投递模式(包括皮下投递)而言，这些药剂的作用开始更迅速且生物利用度(包括组织生物利用度)更高。发明人发现，依照本发明方法投递的药剂能够通过选择性到达真皮血管和淋巴毛细管的受控真皮内给药而迅速吸收并全身分布，使得与常规给药模式(诸如皮下给药)相比，该药剂可以更加迅速的发挥它们的有益作用。
在用于本文时，投递到真皮内区域中或真皮内投递意指将生物学活性剂给药到真皮中的方式，使得药剂易于到达富含脉管的乳头状真皮，且迅速吸收到毛细血管和/或淋巴管中而成为全身生物可用的。这可以这样来实现，即将药剂置于真皮的上部区域即乳头状真皮，或者脉管较少的网状真皮的上部，使得试剂易于扩散到乳头状真皮中。生物学活性剂在乳头状真皮下面而在网状真皮中但足够高于真皮与皮下组织之间界面的这个真皮区域中的受控投递应当能够使得药剂有效(向外)移动至(未受干扰的)脉管和淋巴毛细管床(在乳头状真皮中)，在此它能够通过这些毛细管吸收进入体循环，而不会在通行过程中被任何其它皮肤组织区域扣押。在有些实施方案中，将生物学活性剂主要置于至少约0.3mm、更优选至少约0.4mm、且最优选至少约0.5mm的深度至不超过约2.5mm、更优选不超过约2.0mm、且最优选不超过约1.7mm的深度将导致药剂的迅速吸收。尽管不想受限于特定作用机制，将生物学活性剂主要置于更大深度和/或进入网状真皮的下部可能导致淋巴对药剂的吸收不够有效，因为在脉管较少的网状真皮或皮下区域中药剂将缓慢吸收。
5.1真皮内给药的方法本发明涵盖用于将本文所描述和例示的治疗性剂或物质真皮内投递至受试者皮肤的真皮内区域的方法，优选选择性和特异性靶向真皮内区域而非穿过它。在一个最优选的实施方案中，直接靶向真皮内区域。一旦制备了含有待投递治疗剂的制剂，通常将制剂转移到用于真皮内区域投递的注射装置中，例如注射器。通过特异性和选择性(优选直接)靶向真皮内区域，依照本发明的方法投递本发明的制剂提供了优于常规投递模式(包括IM和SC)的药剂的改进的治疗和临床效果。本发明的真皮内投递方法提供了好处和改进，包括但不限于改善的药物动力学，迅速吸收进入局部淋巴，对特定组织的靶向得到改进，和组织生物利用度得到改进。本发明的方法导致药物动力学得到改进，诸如进入真皮内区域的吸收得到改进。本发明的制剂可以以推注(bolus)或输注的形式投递至真皮内空间。
本发明涵盖用于真皮内投递生物学活性剂(特别是治疗剂)的方法，使得与通过真皮内投递以外的途径(诸如SC投递、肌肉内投递、静脉内投递和表皮投递)投递该药剂相比，该药剂在特定组织中具有更高的组织生物利用度。在有些实施方案中，依照本发明方法投递的生物学活性剂(特别是治疗剂)具有与静脉内投递该药剂相似的生物利用度(包括组织生物利用度)。
本发明涵盖用于真皮内投递生物学活性剂(特别是治疗剂)的方法，使得与将该药剂投递至更深组织区域(例如SC)相比，该药剂在特定组织中具有更高的组织生物利用度。优选的是，依照本发明方法投递的生物学活性剂是为了疾病的治疗、预防、延迟发作或进展或控制疾病而给药的治疗剂，所述疾病包括但不限于癌(例如淋巴瘤、白血病、乳癌、黑素瘤、肺癌、肾癌和结肠直肠癌)、转移、肿瘤生长或感染性疾病。
本发明涵盖用于真皮内投递生物学活性剂(特别是治疗剂)的方法，使得与将该药剂投递至更深组织区域(例如SC)相比，该药剂具有更高的治疗功效。在有些实施方案中，依照本发明方法投递的生物学活性剂(特别是治疗剂)具有与静脉内投递该药剂相似的治疗功效。
本发明涵盖用于治疗、预防或控制疾病的方法，包括以预定剂量给药至少一种治疗剂，其中与通过其它投递路途径(诸如SC、IM和IV)常规投递的药剂剂量相比，该预定剂量减少了至少一半、至少5倍、至少10倍。
在有些实施方案中，本发明涵盖在有所需要的人类受试者中治疗、预防或控制癌、癌转移或肿瘤生长的方法，包括将治疗剂投递至人类受试者皮肤的ID区域。为了治疗、预防或控制癌、癌转移或肿瘤生长而真皮内投递药剂导致与通过ID投递以外的途径(例如SC、IM、IV、表皮)投递相同药剂相比肿瘤生长更大降低。在有些实施方案中，为了治疗、预防或控制癌、癌转移或肿瘤生长而真皮内投递药剂导致与通过ID投递以外的途径投递药剂相比人类受试者的寿命中值延长。
依照本发明，直接真皮内给药可以使用例如基于微型针的注射和输注系统或本领域技术人员知道的精确靶向真皮内区域的任何其它手段来完成。具体的装置包括2002年1月10日公开的WO01/02178、2002年1月10日公开的WO02/02179、2002年12月17日颁发的美国专利号6,494,865、和2003年5月27日颁发的美国专利号6,569,143中公开的装置(所有这些都完整收入本文作为参考)，以及图9-11中例示的装置。基于微型套管和微型针的方法学和装置还描述于2000年6月29日提交的美国申请系列号09/606,909(其完整收入本文作为参考)。标准的钢制套管也可使用1999年10月14日提交的美国系列号417,671中描述的装置和方法(完整收入本文作为参考)而用于真皮内投递。这些方法和装置通过具有有限穿透深度(范围通常是10μm-2mm)的狭窄规格(30G或更狭窄)“微型套管”来投递药剂，这由套管的总长度或暴露在限制深度的毂(hub)部件(feature)以外的套管总长度来限定。
本发明的真皮内投递的受试者是哺乳动物，优选人。依照本发明方法投递的生物学活性剂可以通过长度通常是约300μm-约5mm的针或套管投递到真皮内区域中。优选的是，针或套管的长度是约300μm-约1mm，且出口插入受试者皮肤的深度是1mm-3mm。优选的是，使用小规格的针或套管，即30-36号，优选31-34号。针或套管的出口优选插入0.3mm(300μm)-1.5mm的深度。
依照本发明，直接真皮内给药可以使用例如精确靶向真皮内区域的基于微型针的注射和输注系统或本领域技术人员知道的任何其它手段来实现。具体的装置包括2002年1月10日公开的WO01/02178、2002年1月10日公开的WO02/02179、2002年12月17日颁发的美国专利号6,494,865和2003年5月27日颁发的美国专利号6,569,143中公开的装置(所有都完整收入本文作为参考)，以及图9-11中例示的装置。基于微型套管和微型针的方法学和装置还描述于2000年6月29日提交的美国申请系列号09/606,909(完整收入本文作为参考)。标准的钢制套管也可使用1999年10月14日提交的美国系列号417,671中描述的装置和方法(完整收入本文作为参考)而用于真皮内投递。这些方法和装置通过具有有限穿透深度(范围通常是10μm-2mm)的狭窄规格(30G或更狭窄)“微型套管”来投递药剂，这由套管的总长度或暴露在限制深度的毂部件以外的套管总长度来限定。
真皮内给药的方法包括基于微型针的注射和输注系统或精确靶向真皮内空间的任何其它手段。真皮内给药的方法不仅涵盖基于微型装置的注射手段，还涵盖其它投递方法，诸如使流体或粉末进入真皮内空间的少用针或不用针的冲击注射、芒图式真皮内注射、借助微型装置增强的离子电渗、以及流体、固体或其它剂量形式在皮肤中的直接沉积。
在一个具体的实施方案中，通过真皮内芒图式注射将本发明的制剂给药到受试者皮肤的真皮内区域中，见例如Flynn等，1994，Chest1061463-5(完整收入本文作为参考)。在一个具体的实施方案中，使用下面例示的方法将本发明的制剂投递到受试者皮肤的真皮内区域中。将制剂吸入注射器，例如配有20号针的1ml无胶乳(latex free)注射器；待注射器装满后，换成用于真皮内给药的30号针。以尽可能最浅的角度接近受试者(例如小鼠)的皮肤且针的斜面向上，并将皮肤崩紧。然后在5-10秒的时间里缓慢推动注射体积而形成典型的“水泡(bleb)”，随后缓慢拔出针。优选的是，只使用一个注射部位。更优选的是，注射体积不超过100μl，这部分是因为较大注射体积可能增加溢出而进入周围的组织空间(例如皮下空间)的事实。
本发明涵盖所有已知类型的常规注射针、套管或微型针单独或在多针阵列中使用的用途。术语“针”在用于本文时意图涵盖所有这些针样结构。当这些结构本质上是圆柱体时，术语“微型针”在用于本文时意图涵盖小于约30号的结构，通常是约31-50号。因此，术语“微型针”涵盖的非圆柱体结构将具有相当直径，而且包括金字塔形、矩形、八角形、楔形和其它几何形状。
本发明涵盖冲击式(ballistic)流体注射装置、粉末喷射式投递装置、压电、电动、电磁辅助投递装置、气体辅助投递装置，它们直接穿透皮肤而将本发明的制剂直接投递到真皮空间中的靶位。
将本发明的制剂靶向真皮内空间的实际方法并非关键，只要它穿透受试者的皮肤到达真皮内空间的期望靶深度而非穿过它。实际的最佳穿透深度将随着受试者皮肤的厚度而变化。在大多数情况中，穿透皮肤的深度是约0.5-2mm。不管具体的真皮内投递装置和方法，本发明的方法优选将本发明的制剂靶向至少0.5mm的深度至不超过2.5mm的深度，更优选不超过2.0mm，最优选不超过1.7mm。在有些实施方案中，将制剂投递至恰好在角质层下面且包含表皮和真皮上部的靶深度，例如约0.025mm至约2.5mm。为了靶向皮肤中的特定细胞，优选的靶深度取决于靶向的具体细胞和具体受试者皮肤的厚度。例如，为了靶向人类皮肤真皮空间中的郎格罕氏(Langerhan)细胞，投递将至少部分需要包含表皮组织深度，在人体中的范围通常是约0.025mm至约0.2mm。
依照本发明投递或给药的制剂包括它们在制药学可接受的稀释剂或溶剂中的溶液、悬浮液、凝胶、颗粒(诸如微型和纳米颗粒，或是悬浮或是分散)、及其原位形成载体。
在其它优选的实施方案中，本发明包括在受试者的皮肤上选择注射部位，并清洁受试者皮肤上的注射部位，然后再由投递装置排出生物学活性剂(特别是治疗剂)进入受试者皮肤。另外，该方法包括用本发明的生物学活性剂(特别是治疗剂)充满投递装置。此外，该方法包括压迫皮肤，使限制物(limiter)部分贴合(engaging)受试者的皮肤，并施加压力，从而崩紧受试者的皮肤，并在注射药剂后由皮肤中抽出针套管。还有，将前尖端插入皮肤的步骤还限定为前尖端插入皮肤的深度由约1.0mm至约2.0mm，最优选插入1.5mm+0.2至0.3mm的皮肤深度。
在一个优选的实施方案中，将前尖端插入动物皮肤的步骤还限定为前尖端插入皮肤的角度通常在约15度以内垂直于皮肤，最优选在约5度以内与皮肤成90度，且相对于皮肤贴合面的固定角度取向还限定为通常是垂直的。在一个优选的实施方案中，限制物围绕针套管，且通常具有贴合皮肤表面的平坦平面。还有，投递装置包括具有筒和容纳在筒中的活塞，且活塞可以压下，从而通过针套管的前尖端由投递装置排出药剂的注射器。
在一个优选的实施方案中，由投递装置排出生物学活性剂(特别是治疗剂)还限定为用一只手握住皮下针并用另一只手的食指压活塞，以及通过用一只手握住皮下针并用另一只手的拇指压皮下针上的活塞由投递装置排出药剂，而且将前尖端插入动物皮肤的步骤还限定为用限制物压迫动物的皮肤。另外，该方法还包括将注射器的筒尖装上针组件(assembly)的步骤，其中针组件包括针套管和限制物，而且可以包括在给筒尖装上针组件之前通过除去它的帽子而暴露筒尖的步骤。或者，将针的前尖端插入受试者皮肤的步骤可以限定为用一只手握住皮下针，同时用限制物压迫动物的皮肤从而崩紧动物的皮肤，并通过用这只手的食指压下活塞来排出药剂或通过用这只手的拇指压下活塞来排出药剂。该方法还包括在将药剂注射到受试者皮肤中后由受试者的皮肤抽出针套管的前尖端。还有，该方法包括将前尖端插入优选约1.0mm至约2.0mm的皮肤深度，最优选1.5mm+0.2至0.3mm的深度。
发现真皮内给药方法的某些特征提供了临床上有用的PK/PD和剂量精确性。例如，发现将针出口置于皮肤内显著影响PK/PD参数。具有斜面的常规或标准规格针的出口具有较大的暴露高度(出口的垂直高度)。尽管可以将针尖置于真皮内区域中的所需深度，但针出口的暴露高度较大导致投递的药剂沉积在离皮肤表面更近的浅得多的深度。结果，由于皮肤自身施加的反压力和由注射或输注的流体积累积的压力，药剂趋于由皮肤流出，并渗入压力较低的皮肤区域，诸如皮下组织。也就是说，具有较大暴露高度的针出口在较大深度仍将有效密封，而具有相同暴露高度的出口在置于真皮内区域中的较浅深度时不会有效密封。通常，针出口的暴露高度是0至约1mm。暴露高度0mm的针出口没有斜面，而且位于针尖。在这种情况中，出口的深度与针的穿透深度相同。无论是由斜面或是由针侧面开口形成的针出口都具有可测量的暴露高度。可以理解，一枚针可以具有一个以上的适于将药剂投递至真皮区域的开口或出口。
还发现，通过控制注射或输注的压力，可以克服ID给药过程中施加的高反压力。通过直接将恒定压力置于液体界面上，可以实现比较恒定的投递速率，这可能使吸收最优化并获得改进的药物动力学。还可以控制投递速率和体积，从而预防在投递部位形成风块(wheal)，且预防反压力将到达真皮的装置推出皮肤和/或进入皮下区域。仅仅使用普通技术通过实验就可以确定能够获得这些效果的合适投递速率和体积。多枚针之间增加的距离容许更广的液体分布并提高投递速率或增加流体体积。
可用于执行本发明的给药方法包括通过推注(bolus)和输注两种方式对人或动物受试者投递生物学活性剂。推注剂量是在较短时间里(通常不超过约10分钟)在单个体积单位中投递的单个剂量。输注给药包括在较长时间里(通常超过约10分钟)以预定速率(可以是恒定的或可变的)给药流体。为了投递药剂，将到达真皮的装置置于受试者皮肤附近，提供被直接靶向的真皮内区域内的通路，并将药剂投递或给药到真皮内区域中，在此它们可以局部发挥作用，或者由血流吸收而全身分布。到达真皮的装置可以连接装有待投递药剂的容器。
由容器进入真皮内区域的投递的发生可以是被动的，即无需对待投递药剂施加外部压力或其它驱动手段，和/或是主动的，即施加压力或其它驱动手段。产生压力的优选手段的实例包括泵、注射器、笔(pen)、弹性体膜、气压、压电、电动、电磁或渗透抽吸或贝莱维尔(Belleville)弹簧或垫圈或其组合。如果需要，药剂的投递速率可以是受到产生压力的手段的可变控制。
在有些实施方案中，本发明涵盖通过联合投递至皮肤中的两种或多种区域或深度的优点来控制所给药的生物学活性剂的药物动力学的方法。具体而言，本发明提供了将本文所述生物学活性剂(特别是治疗剂)投递至浅SC和ID区域以实现混合PK特性的方法，即一部分与ID投递的PK相似而另一部分与SC投递的PK相似。这为生物学活性剂(特别是治疗剂)提供了快且高的峰值发作水平以及较低的延长循环水平。这些方法公开于2003年5月6日提交的美国申请系列号10/429,973(完整收入本文作为参考)。在有些实施方案中，将生物学活性剂(特别是治疗剂)投递至包括两个或多个区域的一个或多个部位。在其它实施方案中，将生物学活性剂(特别是治疗剂)投递至多个部位，每个包括一个或多个区域。
本发明的方法涵盖使用如下算法的生物学活性剂(特别是治疗剂)的受控投递，所述算法所具有的逻辑成分包括生理学模型、基于规则的模型或移动平均法、疗法的药物动力学模型、监测信号加工的算法、预测控制模型或其组合。
本发明的方法涵盖联合浅SC和ID投递来实现改进的PK结果的方法。仅仅使用其中一种投递区域或另一种不能实现这些结果。经由正确装置构造和/或给药方法的多部位沉积可以获得独特且有益的结果。根本的技术原理是微型针投递的PK结果对于所给药流体的沉积深度和模式是特异的，使得可以通过装置设计和工程或者通过诸如使ID区域过载流体等技术而机械控制该沉积。
另外，本发明包括长度小于5mm、用于皮下注射的针(微型的或其它形式的)。到达约3mm深度的浅SC投递产生与使用传统技术的深SC几乎相同的PK。从未单独采用浅SC投递的功效来产生更受控制的特性。事实上，认为先前小于5mm的深度并非在SC区域内。
混合投递(无论是通过装置设计或技术)导致二相或混合动力学特征。装置长度(1mm对2mm对3mm)30的微弱差异在PK结果中产生显著差异。使用常常假设针端位于ID区域中的针长度可以获得SC样特性。浅SC投递的PK结果比标准SC投递更加一致和统一。靶组织深度的限制格外受到针或套管出口插入的深度、出口的暴露高度(垂直高度)、给药体积和给药速率的控制。本领域技术人员无需过度实验就可以确定合适的参数。
5.1.1用于真皮内给药的装置使用本领域知道的或2002年1月10日公布的WO01/02178、2002年1月10日公布的WO02/02179、2002年12月17日颁发的美国专利号6,494,865和2003年5月27日颁发的美国专利号6,569,143(都完整收入本文作为参考)中公开的任何装置和方法来给药本发明的生物学活性剂(包括治疗剂)。
优选的是，用于依照本发明的方法进行真皮内给药的装置具有控制穿透皮肤到达真皮内空间期望深度的结构性手段。这最常见的是通过与到达真皮装置的轴(shaft)相连的加宽区域或毂来实现的，它可以采取垫片结构(backing structure)或用于安装针的平台的形式。作为到达真皮装置的微型针的长度在制作过程中易于改变，而且通常制作成长度小于2mm。微型针还是非常尖锐的，而且规格很小，从而进一步减轻注射或输注过程中的疼痛和其它感觉。它们可以作为单个的单腔微型针用于本发明，或者可以将多枚微型针装配或制作成线性阵列或二维阵列，从而提高所投递物质在指定时间里的投递速率或量。可以由针的末端、侧面、或二者射出它的物质。可以将微型针加入多种装置，诸如也可用于限制穿透深度的固定器(holder)和外壳(housing)。本发明的到达真皮的装置还可以在投递前加入装有物质的容器，或者泵或用于在压力下投递药物或其它物质的其它装置。或者，容纳真皮到达装置的装置可以外部连接这些额外组件。
真皮内给药方法包括基于微型针的注射和输注系统或精确靶向皮内空间的任何其它手段。真皮内给药方法不仅涵盖基于微型针的注射手段，还涵盖其它投递方法，诸如使流体或粉末进入真皮内空间的少用针或不用针的冲击注射、借助微型装置增强的离子电渗，以及流体、固体或其它剂量形式在皮肤中的直接沉积。
在有些实施方案中，本发明提供了包括针组件、用于进行真皮内注射的投递装置。针组件具有使之能够安装到可预先填充的容器(诸如注射器等)上的适配器(adapter)。针组件由适配器支持，而且具有前端由适配器伸出的空心体。限制物围绕针，且由适配器伸出指向针的前端。限制物具有适于贴合动物(诸如人)的皮肤的皮肤贴合面。针的前端由皮肤贴合面伸出选定距离，使得限制物限制针能够穿透动物皮肤的量或深度。
在一个具体的实施方案中，用于本发明方法的皮下针组件包括用于执行涉及将生物学活性剂(包括治疗剂)投递到受试者皮肤(优选人类受试者皮肤)中的改进方法的本发明所必需的元件，包括以下步骤提供包括针套管的投递装置，所述针套管包括前部针尖，且针套管与投递装置所含药剂进行流体交流，所述装置还包括围绕针套管的限制物部分，而限制物部分包括皮肤贴合面，针套管的针尖由限制物部分伸出，超过皮肤贴合面的距离等于约0.5mm至约3.0mm，且针套管具有相对于限制物部分皮肤贴合面的平面的固定角度取向；将针尖插入动物的皮肤并用限制物部分的皮肤贴合面贴合皮肤表面，使得限制物部分的皮肤贴合面限制针套管尖穿透进入动物皮肤的真皮层；并通过针套管尖由药物投递装置排出物质进入动物皮肤。
在一个具体的实施方案中，本发明涵盖图9-10中公开的药物投递装置，它们例示了可用于实践用于真皮内注射的本发明方法的药物投递装置的实例。图9-10中例示的装置10包括可以安装到注射器筒60上的针组件20。可以使用的其它形式的投递装置包括美国专利号5,279,586、美国专利申请系列号09/027,607和PCT申请号WO00/09135(将其内容完整收入本文作为参考)中公开的各型笔。
针组件20包括支持针套管24的毂22。限制物26容纳至少一部分毂22，使得限制物26通常围绕针套管24，正如图9中清楚看到的。
毂22的一端30能够用注射器的接受器32固定。用于容纳依照本发明真皮内投递的物质的多种注射器类型可以与设计的针组件一起使用，下文给出了数个实例。毂22的另一端优选包括限制物26内对接面(abutment surface)36嵌套接受的延伸部分34。优选在限制物26上提供多个肋条(rib)38以提供结构完整性且便于操作针组件20。
通过适当设计组件的尺寸，可以牢牢控制针24的前端或尖40与限制物26上的皮肤贴合面42之间的距离“d”。距离“d”优选在约0.5mm至约3.0mm的范围内，最优选约1.5mm±0.2mm至0.3mm。当针套管24的前端40延伸超过皮肤贴合面42的距离在该范围内时，真皮内注射得到保障，因为针不能穿透比典型的动物真皮层更深。通常，外层皮肤即表皮的厚度是50-200微米，而真皮即内部较厚的皮肤层的厚度是1.5-3.5mm。真皮层下面依次是皮下组织(有时也称为下皮层)和肌肉组织。
可以由图9清楚看到，限制物26包括开口44，针套管24的前端40由其中凸出。可以根据具体情况的需要来控制开口44与前端40之间的空间关系。在例示性实施方案中，皮肤贴合面42通常是平面的或平坦的且连续的，从而能够针对动物皮肤稳定安置针组件20。尽管没有具体例示，使得通常是平坦的皮肤贴合面42包括或是肋条形式的凸起部分或是沟槽形式的凹陷部分以增强稳定性或便于给针尖40安装针罩可能是有利的。另外，沿着限制物26侧面的肋条38可以延伸超过皮肤贴合面42的平面。
不管皮肤贴合面42的形状和轮廓，优选的实施方案包括足够的通常是平面的或平坦的、与皮肤接触以便于使得注射器相对于受试者皮肤稳定的表面区域。在最优选的安排中，皮肤贴合面42便于将注射器维持在相对于皮肤表面通常是垂直的取向，而且便于在注射过程中针对皮肤施加压力。由此，在优选的实施方案中，限制物的尺寸或外径至少是5mm。主要的尺寸将取决于应用和包装限制，但是方便的直径是小于15mm或更大，优选11-12mm。
务必注意，尽管图9和10例示了含两部件的组件(two-pieceassembly)，其中毂22与限制物26是分开的，然而用于本发明的装置不限于这种安排。由单件塑料材料整体形成毂22和限制物26是图9和10所示实例的替换方案。另外，有可能通过粘附或其它方法将毂22固定在限制物26上图10所例示的位置，使得针组件20在装配后成为单件部件。
毂22和限制物26在实际制造真皮内针方面具有优势。优选的针尺寸是小号皮下针，常常称为30号或31号针。这种小直径针给将针做得足够短从而预防过度穿透超过动物的真皮层带来了挑战。限制物26和毂22便于使用总长度比在注射过程中穿透个体组织的有效针长度大得多的针24。借助依照本文设计的针组件，制造得到了加强，因为可以在制造和装配过程中操作更长的针而仍然获得短针在完成真皮内注射方面的优点。
图11例示了针组件20固定在药物容器(诸如注射器60)上，从而形成装置10。通常是圆柱体的注射器主体62可以由塑料或玻璃制成，正如本领域所知道的。注射器主体62提供了用于在注射过程中含有待给药物质的容器64。活塞杆66的一端具有手动激活凸缘68，而另一端具有制动物70，正如本领域所知道的。活塞杆66穿过容器64的手动移动迫使容器64中的物质由针的末端40排出，正如期望的。
可以以多种已知方式将毂22固定在注射器主体62上。在一个实例中，在毂22的内部与注射器主体62出口端部分72的外部之间提供干涉配合(an interference fit)。在另一个实例中，提供了常规的Luer配合(Luer fit)布置，从而将毂22固定在注射器60的末端。可以由图9-11领会，设计的该针组件易于适应多种常规注射器类型。
本发明提供了适用于多种注射器类型的真皮内针注射器。因此，本发明在便于以经济的方式大规模的制造和装配真皮内针方面具有显著优势。
在插入针套管24之前，选择并清洁动物皮肤上的注射部位。在选择和清洁部位之后，通常以90度的角度将针套管24的前端40插入动物的皮肤，直至皮肤贴合面42接触到皮肤。皮肤贴合面42阻止针套管42穿过皮肤真皮层而将物质注入皮下层。
在将针套管42插入皮肤后，将物质注入真皮内。物质可以预先填充在注射器60中，或是早在注射前就填充并贮存其中或是仅仅在注射前填充。根据个体偏爱和注射器类型，执行注射的方法可以采取数种变化。在任何情况中，针套管42的穿透最优选不超过约1.5mm，因为皮肤贴合面42阻止任何进一步的穿透。
还有，在皮内注射给药的过程中，针套管42的前端40插入皮肤的真皮层，在注入物质的过程中产生合理量的反压力。这种反压力可以在76psi的级别。为了让使用者对注射器活塞杆66施加所必需的最小量的力就达到这个压力，优选小内径的注射器筒60，诸如0.183″(4.65mm)或更小。由此，本发明的方法包括选择用于注射的注射器，在由注射器排出物质进行注射时内其径宽度足以产生足以克服真皮层反压力的力量。
另外，因为真皮内注射通常以小体积待注射物质进行，即不超过0.5ml的级别，优选约0.1ml，所以优选小内径的注射器筒60，从而将可能导致注射完成后制动物70与注射器肩部之间捕获的浪费物质的死区(dead space)降至最小。还有，因为物质的体积小，0.1ml的级别，所以优选内径小的注射器筒，从而将插入制动物的过程中物质水平与制动物70之间的气体顶部空间降至最小。另外，小内径增强了检查和显现注射器筒中物质体积的能力。
5.2依照本发明方法治疗病症本发明涵盖为了预防、治疗或改善与疾病、病症或感染有关的一种或多种症状通过将药剂投递至受试者皮肤的ID区域而对动物，优选哺乳动物，最优选人施用一种或多种治疗剂。本发明的方法对于治疗或预防淋巴系统的疾病或病症、原发性或转移性肿瘤疾病(即癌)、和感染性疾病特别有用。可以如本领域知道的或如本文描述的以制药学可接受组合物或制剂提供治疗剂。
本发明涵盖在有所需要的受试者中治疗、预防或控制疾病或病症的方法，所述方法包括对所述受试者将治疗有效量或预防有效量的一种或多种治疗剂给药至受试者皮肤的真皮内区域。
本发明提供了通过将治疗剂投递至受试者的真皮内区域，使得与常规投递途径(例如IM、IV或SC)相比，该治疗剂更加有效，而在受试者中治疗或预防疾病的方法。
在有些实施方案中，本发明还涵盖用于在受试者中治疗或预防感染性疾病的方法，包括给药治疗或预防有效量的一种或多种与传染物或其细胞受体相结合的治疗剂。可以通过本发明分子治疗或预防的感染性疾病是由传染物引起的，包括但不限于病毒、细菌、真菌和原生动物。
依照本发明的真皮内投递生物学活性剂格外提供了以下好处，即迅速吸收进入局部淋巴，所投递药剂对特定组织的靶向和沉积提高，且系统和组织生物利用度提高。这些好处对于投递诸如抗肿瘤剂、抗体和抗生素等治疗剂尤其有用。依照本发明方法的真皮内投递药剂将药剂沉积在真皮内和淋巴区域以及深部组织中，导致药剂迅速且在生物学上显著的集中到这些区域和组织中。
通过真皮内投递将各种治疗剂药物实体直接靶向淋巴，实现了有益的治疗效果，包括节省剂量、提高药物效果、降低副作用、降低转移潜力和延长生存期。本发明提供了用于治疗疾病的改进方法，即本发明的投递方法使得治疗剂既全身又局部沉积。结果，通过提高敏感性、所投递治疗剂的药剂沉积量、组织生物利用度、更快的开始作用和更快的清除，本发明提供了用于治疗疾病(诸如癌)的改进方法。本发明提供了为了治疗疾病(特别是癌)给药至少一种治疗剂的方法，包括以受控速率、体积和压力将药剂投递至受试者皮肤的真皮内区域，使得药剂沉积在ID区域中并由淋巴脉管系统吸收。
通过提高敏感性、所投递治疗剂的药剂沉积量、组织生物利用度、更快的开始作用和更快的清除，本发明还提供了用于治疗定位于身体特定组织和器官的疾病的改进方法，诸如那些组织和器官的感染，例如呼吸道感染。本发明提供了为了治疗疾病(特别是感染)给药至少一种治疗剂的方法，包括以受控速率、体积和压力将药剂投递至受试者皮肤的真皮内区域，使得药剂沉积在真皮区域中并由淋巴脉管系统吸收。
在一个具体的实施方案中，本发明提供了用于投递抗肿瘤剂、化学治疗剂、抗体、抗血管发生剂、抗炎剂、免疫治疗剂等的改进方法，其临床功效和治疗效果得到提高。原发性癌损伤的常规疗法通常通过手术切除原发块、局部放射治疗杀死肿瘤组织、或全身给药抗肿瘤药物杀死肿瘤来完成。前两种方法具有在范围上更加局部且在可用于治疗时能够潜在的将对非靶器官的伤害降至最低的优点。相反，因为这种治疗是局部的，所以影响已经脱离原发肿瘤并定位于其它组织的转移细胞的能力有限。全身性抗肿瘤剂疗法具有影响弥散的肿瘤细胞以及原发肿瘤的能力，但是这种全身投递增加了伤害健康器官、组织、和系统的能力。
依照本发明真皮内投递治疗剂(诸如抗体和抗肿瘤剂)能够直接到达真皮的静脉和淋巴两种网络，并提供独特的全身药物动力学效果。通过到达靶(诸如肿瘤)附近的这些网络，就可能实现治疗好处。首先，相对于不利事件的全身毒性局部作用将得到增强，因为真皮内投递的抗肿瘤剂在物理上置于肿瘤的附近，导致剂量减少和副作用降低。同样，因为肿瘤主要利用全身脉管系统进行转移输送，所以真皮内投递的抗肿瘤剂能够靶向这些脱离细胞，并降低转移的能力。真皮内给药的抗肿瘤剂还可以通过淋巴网络的介导到达免疫细胞，影响免疫细胞的成熟和抗癌细胞(T、B、NK、巨噬细胞等)到达肿瘤部位的输送。另外，真皮内投递的抗肿瘤剂将导致全身性分布，以与许多当前疗法相似的方式提供到达广泛弥散的部位和器官的额外好处。本发明提供了增强生物学活性剂在特定组织中的生物利用度的改进方法，包括但不限于淋巴、粘膜、肺、脾、胸腺或结肠组织。依照本发明的真皮内投递生物学活性剂格外提供了以下好处，即迅速吸收进入局部淋巴，所投递药剂对特定组织的靶向和沉积提高，且全身和组织生物利用度提高。这些好处对于投递诸如抗肿瘤剂、抗体和抗生素等治疗剂尤其有用。依照本发明方法的真皮内投递药剂将药剂沉积在真皮内和淋巴区域以及深部组织中，导致药剂迅速且在生物学上显著的集中到这些区域和组织中。
真皮内疗法可能对某些癌类型具有更大好处。外围的癌或高度局限于、存在于或与目的脉管系统相关的癌可以享有这类疗法的最大好处。享有异常好处的具体的癌包括但不限于黑素瘤和其它皮肤癌(肉瘤等)、淋巴瘤或淋巴组织的其它癌、乳癌或外周软组织或皮下空间的其它癌、与淋巴有联系的脾癌、以及白血病或脉管系统的其它癌。最小限度的药物运输机制(脑、脊柱等)对深深位于身体、器官、或特权(privileged)生物空间中的癌的作用可能也有好处。具体而言，依照本发明的真皮内投递的抗肿瘤剂还可用于治疗肺癌。
真皮内投递抗肿瘤剂的增强效果对具有不同生物学作用机制的药剂而言可能是不同的。胞毒性药物可能在全身分布前显示更多的初始肿瘤定位和杀伤，从而增强靶组织杀伤并将副作用降至最低。然而，胞毒性药物必需是保护给药部位的组织免于在给药后立即死亡或坏死的制剂。将胞毒剂包裹到保护周围组织的短效的脂质体、颗粒或其它载体中可以增强真皮内给药的好处。起始针对肿瘤的宿主应答或刺激受抑制的应答的药物由于应答在肿瘤附近的定位将具有潜在更大的好处。影响免疫系统的药物即趋化因子、细胞因子和其它免疫强化剂(IL-12的实例是最好的例子)经由这种投递途径将有可能具有异常好处。使用掺入了靶向肿瘤的化学制品的药物(例如肿瘤特异性抗体、靶向肿瘤表面标志物的受体、和与肿瘤特异性受体相结合的标志物)将可能享有最大好处，因为它们在物理上和化学上都靶向肿瘤细胞。这类药物包括但不限于治疗性抗体，携带胞毒剂的颗粒或携带肿瘤特异靶向标志物的其它药物，或者是与肿瘤相结合从而通过内在生物学机制(例如细胞免疫应答或由补体介导的抗肿瘤应答)发动攻击的其它药剂。
本发明的方法还包括与肿瘤细胞一起施用抗肿瘤剂，由此提供针对未来肿瘤攻击的疫苗效果。
通过提高所投递治疗剂的药剂沉积量、组织生物利用度、更快的开始作用、和更快的清除，本发明提供了治疗疾病(例如癌)的改进方法。本发明提供了为了治疗疾病(特别是癌)给药至少一种治疗剂的方法，包括以受控速率、体积和压力将药剂投递至受试者皮肤的ID区域，使得药剂沉积在ID区域中并由淋巴脉管系统吸收。
可以通过本发明的方法和组合物治疗的癌和相关病症包括但不限于以下白血病，包括但不限于急性白血病，急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病，诸如成髓细胞、前髓细胞、髓单核细胞、单核细胞、红白血病白血病和骨髓异常增生综合征，慢性白血病，诸如但不限于慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病；真性红细胞增多；淋巴瘤，诸如但不限于何杰金氏(Hodgkin)病、非何杰金氏病；多发性骨髓瘤，诸如但不限于郁结性多发性骨髓瘤、非分泌型骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤；瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrm’s)巨球蛋白血症；意义未确定的单克隆丙种球蛋白病；良性单克隆丙种球蛋白病；重链病；骨和结缔组织肉瘤，诸如但不限于骨肉瘤、硬骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因氏(Ewing’s)肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨的纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、卡波西(Kaposi)肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤；脑肿瘤，包括但不限于神经胶质瘤、星细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质肿瘤(nonglial tumor)、听神经鞘瘤、颅咽管瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、松果体瘤、成松果体细胞瘤、原发性脑淋巴瘤；乳癌，包括但不限于腺癌、小叶(小细胞)癌、导管内癌、髓样乳癌、粘蛋白性乳癌(mucinous breast cancer)、管乳癌(tubular breast cancer)、乳头乳癌(papillary breast cancer)、佩吉特氏(Paget)病和炎性乳癌；肾上腺癌，包括但不限于嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌；甲状腺癌，诸如但不限于乳头或滤泡甲状腺癌(papillary or follicularthyroid cancer)、髓样甲状腺癌和间变的甲状腺癌(anaplasticthyroid cancer)；胰癌，包括但不限于胰岛素瘤、胃泌素瘤、高血糖素瘤、血管活性肠肽肿瘤(vipoma)、生长激素抑制素分泌性肿瘤、和类癌瘤或胰岛细胞瘤；垂体癌，包括但不限于库欣氏(Cushing’s)病、催乳素分泌性肿瘤、肢端肥大症和diabetes insipius；眼癌，包括但不限于眼黑素瘤(诸如虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤和cilliarybody melanoma)和成视网膜细胞瘤；阴道癌，包括但不限于鳞状细胞癌、腺癌和黑素瘤；外阴癌，包括但不限于鳞状细胞癌、黑素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤、和佩吉特氏(Paget’s)病；宫颈癌(cervicalcancer)，包括但不限于鳞状细胞癌和腺癌；子宫癌(uterine cancer)，包括但不限于子宫内膜癌和子宫肉瘤；卵巢癌，包括但不限于卵巢上皮癌、交界瘤、胚细胞瘤和基质瘤；食道癌，包括但不限于鳞状上皮癌、腺癌、腺样囊性癌(adenoid cyctic carcinoma)、粘液表皮样癌、腺鳞癌、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌和燕麦形细胞(小细胞)癌；胃癌，包括但不限于腺癌、真菌样生长(息肉状)、溃疡、表面传播、广泛传播、恶性淋巴瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和癌肉瘤；结肠癌；直肠癌；肝癌，包括但不限于肝细胞癌和肝胚细胞瘤(hepatoblastoma)；胆囊癌，包括但不限于腺癌；胆管癌，包括但不限于滤泡性(pappillary)、节结性和弥散性；肺癌，包括但不限于非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(表皮样癌)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌；睾丸癌，包括但不限于生殖细胞瘤、精原细胞瘤、间变的(anaplastic)、经典的(典型的)、精母细胞性(spermatocytic)、非精原细胞瘤、胚胎癌、畸胎瘤、绒毛膜癌(卵黄囊瘤)；前列腺癌，包括但不限于腺癌、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤；penal cancers；口腔癌，包括但不限于鳞状细胞癌；基底癌；唾液腺癌，包括但不限于腺癌、粘液表皮样癌和腺样囊性癌(adenoidcystic carcinoma)；咽癌，包括但不限于鳞状细胞癌和疣；皮肤癌，包括但不限于基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤、表面传播黑素瘤、结节性黑素瘤、恶性雀斑样黑素瘤、肢端着色斑性黑素瘤；肾癌，包括但不限于肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或子宫uterer)；维尔姆斯氏(Wilms’s)肿瘤；膀胱癌，包括但不限于移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤。另外，癌包括粘液肉瘤、成骨肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管内皮瘤、间皮瘤、滑膜瘤、成血管细胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌和乳头状腺癌(这些病症的综述见Fishman等，1985，Medicine，第2版，J.B.Lippincott公司，Philadelphia；和Murphy等，1997，Informed DecisionsTheComplete Book of Cancer Diagnosis，Trea tment，and Recovery，Viking Penguin，Penguin Books.U.S.A.，Inc.，美国)。
因此，本发明的方法和组合物还可用于治疗或预防多种癌或其它异常增殖性疾病，包括但不限于癌，包括膀胱、乳房、结肠、肾、肝、肺、卵巢、胰腺、胃、前列腺、子宫颈、甲状腺和皮肤的癌；鳞状细胞癌；淋巴谱系的造血肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、Burketts淋巴瘤；骨髓谱系的造血肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病和前髓细胞白血病；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其它肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、成神经细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其它肿瘤，包括黑素瘤、xenoderma pegmentosum、角化棘皮瘤(keratoactanthoma)、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎癌。还设想，由凋亡失常引起的癌也将通过本发明的方法和组合物来治疗。这些癌可以包括但不限于滤泡性淋巴瘤、p53突变的癌、依赖激素的乳房、前列腺和卵巢肿瘤、以及癌前损伤诸如家族性腺瘤息肉和骨髓发育不良综合征。在具体的实施方案中，通过本发明的方法和组合物治疗或预防卵巢、膀胱、乳房、结肠、肺、皮肤、胰腺或子宫中恶性或增殖异常性变化(诸如化生和发育异常)或过度增殖性病症。在其它具体实施方案中，通过本发明的方法和组合物治疗或预防肉瘤、黑素瘤或白血病。
本发明还涵盖用于在受试者中治疗或预防感染性疾病的方法，包括将治疗或预防有效量的一种或多种药剂给药至受试者皮肤的ID。可以通过本发明的分子治疗或预防的感染性疾病是由包括但不限于病毒、细菌、真菌、原生动物和病毒等传染物引起的感染性疾病。
可以使用本发明的方法治疗或预防的病毒性疾病包括但不限于由甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、水痘病毒、腺病毒、I型单纯疱疹病毒(HSV-I)、II型单纯疱疹病毒(HSV-II)、牛疫、鼻病毒、艾柯病毒、轮状病毒、呼吸道合胞病毒、乳头瘤病毒、乳多空病毒、巨细胞病毒、棘状病毒(echinovirus)、虫媒病毒、huntavirus、柯萨奇病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒、天花、埃-巴二氏病毒、I型人免疫缺陷病毒(HIV-I)、II型人免疫缺陷病毒(HIV-II)和诸如Viral miningitis、脑炎、登革热或天花等病毒病的物质引起的疾病。
在有些实施方案中，本发明涵盖用于治疗或预防呼吸道疾病或病症(特别是呼吸道感染，病毒性和细菌性)的方法，包括将有效量的治疗剂给药至需要治疗的受试者的真皮内区域。本发明涵盖治疗或预防上呼吸道(例如鼻、耳、鼻窦和咽喉)和下呼吸道(例如气管、支气管和肺)的呼吸道感染的方法。引起上呼吸道感染的病毒的实例包括鼻病毒和流感病毒A和B。下呼吸道病毒感染的实例有副流感病毒感染(“PIV”)、呼吸道合胞病毒(“RSV”)和细支气管炎。引起下呼吸道感染的细菌的实例包括引起肺炎球菌性肺炎(pneumonococcalpneumonia)的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)和引起结核的肺结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)。由真菌引起的呼吸道感染包括全身性念珠菌病、芽生菌病、隐球菌病(crytococcosis)、球孢子菌病和曲霉病。呼吸道感染可以是原发性或继发性感染。
本发明提供了用于预防、控制、治疗或改善由任何病毒感染引起的或与其有关的呼吸道疾病或病症的方法，所述方法包括依照本发明的方法给药有效量的一种或多种治疗剂。引起病毒感染的病毒实例包括但不限于逆转录病毒(例如I和II型嗜人T淋巴细胞病毒(humanT-cell lymphotrophic virus type I and II)(HTLV)和人免疫缺陷病毒(HIV))、疱疹病毒(例如I和II型单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒、HHV6-HHV8和巨细胞病毒)、沙粒病毒(例如拉沙热病毒)、副粘病毒(例如麻疹病毒、人呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、hMPV和肺炎病毒)、腺病毒、布尼亚病毒(bunyaviruses)(例如汉坦病毒)、冠状病毒、丝状病毒(filoviruses)(例如埃博拉(Ebola)病毒)、黄病毒(例如丙型肝炎病毒(HCV)、黄热病病毒和日本脑炎病毒)、嗜肝DNA病毒(hepadnavirus)(例如乙型肝炎病毒(HBV))、正粘液病毒(orthomyoviruses)(例如流感病毒A、B、C和PIV)、乳多空病毒(例如乳头瘤病毒)、小核糖核酸病毒(例如鼻病毒、肠病毒和甲型肝炎病毒)、痘病毒、呼肠孤病毒(例如轮状病毒)、披膜病毒(例如风疹病毒)和棒状病毒(例如狂犬病病毒)。针对病毒感染的生物学应答包括但不限于抗体水平升高、T细胞的增殖和/或浸润升高、B细胞的增殖和/或浸润升高、上皮细胞增生和生成粘蛋白。本发明还提供了预防、治疗、控制或改善病毒性呼吸道感染的方法，诸如普通感冒、病毒性咽炎、病毒性喉炎、病毒性哮吼、病毒性支气管炎、流感、副流感病毒病(“PIV”)(例如哮吼、细支气管炎、支气管炎、肺炎)和呼吸道合胞病毒(“RSV”)、肺炎后病毒(metapneumavirus)和腺病毒病(例如发热性呼吸道疾病、哮吼、支气管炎、肺炎)，所述方法包括给药有效量的一种或多种治疗剂。
在优选的实施方案中，本发明涵盖用于治疗疾病或病症(特别是呼吸道疾病)的方法，包括在鼻内(IN)和全身投递之间拆分用于该病的治疗剂的标准剂量。本领域技术人员能够通过常规实验确定拆分剂量的最佳比率。在IN/IM投递的情况中，优选5/95与30/70之间的比率。发明人发现这导致治疗剂(例如抗体)在组织(例如肺)中的立即水平与在体外中和高滴度病毒的浓度一致。另外，拆分剂量不会导致必需在给药后维持数周的预防剂浓度发生可检测的损失。
可以使用与本发明方法有关的发明的方法治疗或预防的细菌性疾病是由包括但不限于分支杆菌立克次氏体、支原体、奈瑟氏菌、肺炎链球菌、布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)(莱姆(Lyme)病)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus antracis)(炭疽)、破伤风、链球菌、葡萄球菌、分支杆菌、破伤风、pertissus、霍乱、鼠疫、diptheria、衣原体、金黄色葡萄球菌和军团菌等细菌引起的细菌性疾病。
可以使用与本发明方法有关的发明的方法治疗或预防原生动物病是由包括但不限于利什曼虫、kokzidioa、锥虫或疟疾(malaria)等原生动物引起的原生动物病。
可以使用与本发明方法有关的发明的方法治疗或预防的寄生虫病是由包括但不限于衣原体和立克次氏体等寄生虫引起的寄生虫病。
5.3将要依照本发明给药的药剂本发明涵盖用于治疗、预防或控制疾病或病症的生物学活性剂，特别是治疗剂。可用于本发明方法的生物学活性剂的实例包括但不限于免疫球蛋白(例如多特异性Ig、单链Ig、Ig片段)、蛋白质、肽(例如肽受体、PNA、选择蛋白、结合蛋白(麦芽糖结合蛋白、葡萄糖结合蛋白))、核苷酸、核酸(例如PNA、RNA、修饰的RNA/DNA、适体(aptamers))、受体(例如乙酰胆碱受体)、酶(例如葡萄糖氧化酶、HIV蛋白酶和逆转录酶)、碳水化合物(例如NCAM、唾液酸)、细胞(例如胰岛素和葡萄糖响应性细胞)、噬菌体(例如丝状噬菌体)、病毒(例如HIV)、化学特异剂(Chemospecific agents)(例如Cyptands、冠醚、Boronates)。
本发明提供了用于给药抗肿瘤剂的方法。这些抗肿瘤剂包括多种试药剂，包括细胞因子、血管发生抑制剂、经典的抗癌剂和治疗性抗体。可以依照本发明使用的细胞因子、免疫调控剂和激素包括但不限于干扰素、白细胞介素(IL-1、-2、-4、-6、-8、-12)和细胞生长因子。
可以用于本发明的方法和组合物的血管发生抑制剂包括但不限于制管张素(纤溶酶原片段)；抗血管发生的抗凝血酶III；Angiozyme；ABT-627；Bay 12-9566；氟草胺(Benefin)；贝伐单抗(Bevacizumab)；BMS-275291；由软骨衍生的抑制剂(CDI)；CAICD59补体片段；CEP-7055；Col 3；Combretastatin A-4；Endostatin(胶原蛋白XVIII片段)；纤连蛋白片段；Gro-β；Halofuginone；肝素酶；肝素己糖类片段；HMV833；人绒毛膜促性腺激素(hCG)；IM-862；干扰素α/β/γ；干扰素可诱导的蛋白质(IP-10)；白介素-12；Kringle 5(纤溶酶原片段)；Marimastat；金属蛋白酶抑制剂(TIMP)；2-甲氧基雌二醇；MMI 270(CGS 27023A)；MoAb IMC-1C11；Neovastat；NM-3；PanzemPI-88；胎盘核糖核酸酶抑制物；纤溶酶原激活剂抑制剂；血小板因子-4(PF4)；Prinomastat；催乳素16kD片段；增殖蛋白相关蛋白(PRP)；PTK 787/ZK 222594；类维生素A；Solimastat；角鲨胺；SS 3304；SU 5416；SU 6668；SU 11248；四氢皮质醇-S；四硫代钼酸盐；酞胺哌啶酮；血小板反应蛋白-1(Thrombospondin-1)(TSP-1)；TNP-470；转化生长因子-β(TGF-b)；血管抑制素；Vasostatin(钙网织蛋白片段)ZD 6126；ZD 6474；法呢基转移酶抑制剂(FTI)；和双膦酸盐(bisphosphonate)。
可以依照本发明的方法使用的其它抗癌剂包括但不限于阿西维辛(acivicin)；阿克拉霉素；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素(aldesleukin)；六甲蜜胺；安波霉素(ambomycin)；醋酸双氢胺蒽醌；氨鲁米特；安吖啶；阿那曲唑(anastrozole)；茴霉素；天冬酰胺酶；曲林菌素；氮杂胞苷；氮替派；含氮霉素；巴马司他；苄替派；比卡他胺(bicalutamide)；盐酸比山群；bisnafidedimesylate；bizelesin；硫酸博来霉素；布喹那钠(brequinarsodium)；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡普睾酮(calusterone)；卡醋胺(caracemide)；卡贝替姆(carbetimer)；卡铂；卡莫司汀；盐酸洋红霉素；卡折来新(carzelesin)；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗里霉素；顺铂；克拉屈滨；crisnatol mesylate；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；放线菌素D；盐酸柔红霉素；地西他滨(decitabine)；右奥马铂；地扎胍宁；甲磺酸地扎胍宁；地吖醌；多西他赛(docetaxel)；阿霉素；盐酸阿霉素；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸甲雄烷酮；偶氮霉素；依达曲沙；盐酸艾氟鸟氨酸；依沙芦星；恩洛铂；苯环丙炔酯；双环氧哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸去羟阿霉素；雌氮芥；雌氮芥磷酸钠；依他硝唑(etanidazole)；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法罗唑唑；法扎拉滨(fazarabine)；芬维A胺(fenretinide)；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮(fosquidone)；福司曲星钠(fostriecin sodium)；吉西他滨；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸依达比星；异环磷酰胺；伊莫福新；白介素(包括重组白介素12或rIL12)；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-Ia；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸伊立替康(irinotecan hydrochloride)；醋酸兰瑞肽(lanreotide acetate)；来曲唑(letrozole)；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑(liarozole hydrochloride)；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马丙考；美坦生；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸甲烯雌醇；美法仑；美诺立尔(menogaril)；巯嘌呤；甲氨喋呤；甲氨喋呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌(meturedepa)；米丁度胺(mitindomide)；mitocarcin；丝裂红素；米林霉素；丝裂马菌素；丝裂霉素；丝裂帕菌素；米托坦(mitotane)；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；噻氨酯达唑；诺加霉素；奥马铂(ormaplatin)；亚磺酰吡啶；紫杉醇；天门冬酰胺酶；培利霉素(peliomycin)；戊氮芥；硫酸培来霉素；perfostamide；哌酰溴烷；嗪消安；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素(plicamycin)；普洛美坦(plomestane)；卟菲尔钠(porfimer sodium)；泊非霉素；松龙苯芥；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋喃菌素；异戊烯腺苷；洛太米特；沙芬戈(safingol)；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦(simtrazene)；sparfosate sodium；稀疏霉素；盐酸螺旋锗；螺旋氮芥；螺铂；链黑菌素；链脲霉素；sulofenur；太利苏霉素；替可加兰钠(tecogalan sodium)；呋氟啶；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊昔；环氧三嗪酮；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；赛替哌；噻唑呋林(tiazofurin)；替拉扎明；柠檬酸托米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨(triciribine phosphate)；曲美沙特；曲美沙特葡萄糖醛酸酯；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；尿烷亚胺；伐普肽(vapreotide)；维替洛芬(verteporfin)；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定(vinepidinesulfate)；硫酸长春甘酯；硫酸长春罗新；酒石酸维诺剂滨；硫酸长春罗定；硫酸长春利定；伏罗唑；折尼拉汀；新制癌素；盐酸佐柔比星。其它抗癌药物包括但不限于20-表-1，25二羟基维生素D3；5-炔基尿嘧啶；阿比特龙(abiraterone)；阿克拉霉素；acylfulvene；adecypenol；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨巴司丁；amidox；氨磷汀；氨基乙酰丙酸；氨柔比星(amrubicin)；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑(anastrozole)；andrographolide；血管发生抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯；抗背部化形态发生蛋白-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)；抗雄激素(前列腺癌)；抗雌激素；antineoplaston；反义寡核苷酸；aphidicolin glycinate；凋亡基因调控物；凋亡调节物；脱嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；asulacrine；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin 1；axinastatin 2；axinastatin 3；阿扎西隆；azatoxin；重氮酪氨酸(azatyrosine)；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；苯佐利定(benzochlorins)；苯甲酰十字孢碱(benzoylstaurosporine)；β-内酰胺衍生物；β-alethine；β-clamycin B；白桦脂酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺(bicalutamide)；比山群；bisaziridinylspermine；双奈法德(bisnafide)；bistrateneA；比折来新；breflate；溴匹立明；布度钛(budotitane)；buthioninesulfoximine；钙泊三醇；calphostin C；喜树碱衍生物；金丝雀痘IL-2；卡培他滨(capecitabine)；氨甲酰-氨基-三唑；羧基氨基三唑；CaRestM3；CARN 700；由软骨衍生的抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；澳粟精胺；杀菌肽B；西曲瑞克(cetrorelix)；chlorlns；氯喹啉磺胺；西卡前列素(cicaprost)；顺卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；collismycin A；collismycin B；考布他汀A4(combretastatin A4)；考布他汀类似物；conagenin；crambescidin816；克立那托(crisnatol)；cryptophycin 8；cryptophycin A衍生物；curacin A；cyclopentanthraquinones；cycloplatam；cypemycin；cytarabine阿糖胞苷酯；溶细胞因子；磷酸己烷雌酚；达昔单抗；地西他滨；脱氢代代宁B；地洛瑞林(deslorelin)；地塞米松；dexifosfamide；右丙亚胺；dexverapamil；地吖醌；代代宁B(didemnin B)；didox；diethylnorspermine；二氢-5-氮胞苷；9-二氢紫杉醇；dioxamycin；联苯螺氮芥；多西他赛；二十二烷醇；多拉司琼(dolasetron)；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；duocarmycinSA；ebselen；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄烯；乙嘧替氟；表柔比星；爱普列特；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法唑；法扎拉滨；芬维A胺；非尔司啶；非那甾胺；flavopiridol；氟卓斯汀(flezelastine)；fluasterone；氟达拉滨；盐酸fluorodaunorunicin；福酚美克(forfenimex)；福美坦；福司曲星(fostriecin)；福莫司汀；texaphyrin钆；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制物；吉西他滨；谷胱甘肽抑制物；hepsulfam；heregulin；hexamethylene bisacetamide；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；伊决孟酮(idramantone)；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑吖啶酮；咪喹莫特；免疫兴奋肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制物；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘阿霉素；4-甘薯醇(ipomeanol，4-)；伊罗普拉；伊索拉定；isobengazole；isohomohalicondrin B；伊他司琼；jasplakinolide；kahalalide F；lamellarin-N triacetate；兰瑞肽(lanreotide)；leinamycin；利诺司啶；硫酸香菇多糖；leptolstatin；来曲唑(letrozole)；白血病抑制因子；白细胞α-干扰素；亮丙瑞林+雌激素+孕酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑(liarozole)；线性多胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂(lobaplatin)；蚯蚓磷脂(lombricine)；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛伐他汀；洛索立宾；勒托替康；lutetium texaphyrin；lysofylline；溶解肽；美坦新；mannostatin A；马立马司他；马丙考；maspin；基质分解素抑制物；基质金属蛋白酶抑制物；美诺立尔(menogaril)；merbarone；美替瑞林(meterelin)；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制物；米非司酮；米替福星；米英司定；错配双链RNA；丙米腙；二溴卫予醇；丝裂霉素类似物；胺硝萘酞胺；mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素(saporin)；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司丁；单克隆抗体，人绒毛膜促性腺激素；单磷酸脂A+myobacterium细胞壁sk；单哌潘生丁；多药抗性基因抑制物；基于多发性肿瘤抑制基因1的疗法；芥子抗癌剂；mycaperoxide B；分枝杆菌细胞壁提取物；myriaporone；N-乙酰地那林(N-acetyldinaline)；N-取代苯酰胺；那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭(nartograstim)；奈达铂(nedaplatin)；奈莫柔比星；奈立膦酸(neridronic acid)；中性内肽酶；尼鲁米特(nilutamide)；nisamycin；一氧化氮调控物；一氧化二氮抗氧化剂；nitrullyn；06-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮(onapristone)；奥丹西隆；oracin；口服细胞因子诱导物；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂(oxaliplatin)；oxaunomycin；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；palmitoylrhizoxin；帕米磷酸；人参三醇；帕诺米芬；parabactin；帕折普汀；天门冬酰胺酶；peldesine；戊聚糖多硫酸钠；喷司他丁；pentrozole；perflubron；培磷酰胺；perillyl alcohol；phenazinomycin；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；溶链菌；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克辛(piritrexim)；placetin A；placetin B；纤溶酶原激活剂抑制剂；铂复合物；铂化合物；铂三胺复合物；卟菲尔钠(porfimer sodium)；泊非霉素；泼尼松；丙基二吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制物；基于蛋白A的免疫调控物；蛋白激酶C抑制物；微藻的蛋白激酶C抑制物；蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制物；嘌呤核苷磷酸化酶抑制物；紫红素；吡唑啉吖啶；pyridoxylated血红蛋白聚氧乙烯缀合物；raf拮抗剂；雷替曲赛(raltitrexed)；雷莫司琼(ramosetron)；ras法呢基蛋白质转移酶抑制物；ras抑制物；fas-GAP抑制物；脱甲基化瑞替普汀(retelliptine demethylated)；铼Re 186etidronate；rhizoxin；核酶；RII维A胺(retinamide)；洛太米特；rohitukine；胞壁酰基二肽；罗喹美克(roquinimex)；rubiginoneB1；ruboxyl；safingol；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙拉斯；Sdi 1模拟物；司莫司汀；衰老衍生的抑制物1；有义寡核苷酸；信号转导抑制物；信号转导调控物；单链抗原结合蛋白；西索菲兰；sobuzoxane；borocaptate钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；sonermin；sparfosic acid；穗霉素D；螺旋氮芥；splenopentin；spongistatin 1；角鲨胺；干细胞抑制物；干细胞分裂抑制物；stipiamide；基质溶素抑制物；sulfinosine；强效血管活性肠肽拮抗剂；suradista；苏拉明；swainsonine；合成糖胺聚糖；他莫司汀(tallimustine)；它莫西芬methiodide；牛磺莫司汀；他扎罗汀(tazarotene)；tecogalan钠；呋氟啶；tellurapyrylium；端粒酶抑制物；替莫泊芬(temoporfin)；替莫唑胺(temozolomide)；替尼泊苷；tetrachlorodecaoxide；tetrazomine；thaliblastine；噻可拉林(thiocoraline)；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新(thymalfasin)；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南(thymotrinan)；促甲状腺素；tin ethyl etiopurpurin；替拉扎明(tirapazamine)；二氯环戊二烯钛；topsentin；托米芬；全能干细胞因子；翻译抑制物；维A酸；三乙酰尿苷；曲西立滨(triciribine)；曲美沙特；曲普瑞林(triptorelin)；托吡西隆；turosteride；酪氨酸激酶抑制物；tyrphostins；UBC抑制物；乌苯美司；泌尿生殖窦衍生的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽(vapreotide)；variolin B；载体系统，红血球基因疗法；维拉雷琐(velaresol)；veramine；verdins；维替泊芬(verteporfin)；维诺利滨；vinxaltine；vitaxin；伏罗唑；扎诺特隆(zanoterone)；折尼拉汀；zilascorb；和新制癌素stimalamer。优选的其它抗癌药物有5-氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸。
可以依照本发明的方法给药的抗肿瘤剂的其它实例包括治疗性抗体，包括但不限于ZENAPAX(daclizumab)(Roche Pharmaceuticals，瑞士)，它是用于预防急性肾同种异体移植排斥的免疫抑制性人源化抗CD25单克隆抗体；PANOREXTM，它是鼠源抗17-IA细胞表面抗原的IgG2a抗体(Glaxo Wellcome/Centocor)；BEC2，它是鼠源抗独特型(GD3表位)IgG抗体(ImClone System)；IMC-C225，它是嵌合抗EGFRIgG抗体(ImClone System)；VITAXINTM，它是人源化抗αVβ3整合素抗体(Applied Molecular Evolution/MedImmune)；Smart M195，它是人源化抗CD33IgG抗体(Protein Design Lab/Kanebo)；LYMPHOCIDETM，它是人源化抗CD22IgG抗体(Immunomedics)；ICM3，它是人源化抗ICAM3抗体(ICOS Pharm)；IDEC-114，它是灵长类化抗CD80抗体(IDEC Pharm/Mitsubishi)；IDEC-131，它是人源化抗CD40L抗体(IDEC/Eisai)；IDEC-151，它是灵长类化抗CD4抗体(IDEC)；IDEC-152，它是灵长类化抗CD23抗体(IDEC/Seikagaku)；SMART抗CD3，它是人源化抗CD3IgG抗体(Protein Design Lab)；5G1.1，它是人源化抗补体因子5(C5)抗体(Alexion Pharm)；D2E7，它是人源化抗TNF-α抗体(CAT/BASF)；CDP870，它是人源化抗TNF-αFab片段(Celltech)；IDEC-151，它是灵长类化抗CD4IgG1抗体(IDECPharm/SmithKline Beecham)；MDX-CD4，它是人抗CD4IgG抗体(Medarex/Eisai/Genmab)；CDP571，它是人源化抗TNF-αIgG4抗体(Celltech)；LDP-02，它是人源化抗α4β7抗体(LeukoSite/Genentech)；Or thoClone OKT4A，它是人源化抗CD4IgG抗体(Or tho Biotech)；ANTOVATM，它是人源化抗CD40L IgG抗体(Biogen)；ANTEGRENTM，它是人源化抗VLA-4IgG抗体(Elan)；和CAT-152，它是人抗TGF-β2抗体(Cambridge Ab Tech)。
可用于本发明的特别优选的生物学活性剂是治疗性抗体。本发明涵盖单克隆抗体、多特异性抗体、人源抗体、鼠源抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、多克隆抗体、骆驼化抗体(camelizedantibodies)、单链Fv(scFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab′)片段、以二硫键相连的双特异性Fv(sdFv)、内在化抗体(intrabodies)和抗独特型(抗Id)抗体(包括例如针对本发明抗体的抗Id和抗抗Id抗体)以及本文公开的和本领域知道的任何治疗性抗体的表位结合片段。本发明所涵盖的治疗性抗体包括但不限于HERCEPTIN(Trastuzumab)(Genentech，CA)，它是用于治疗转移性乳癌患者的人源化抗HER2单克隆抗体；REOPRO(abciximab)(Centocor)，它是用于预防凝块形成的抗血小板上糖蛋白IIb/IIIa受体的抗体；ZENAPAX(daclizumab)(Roche Pharmaceuticals，瑞士)，它是用于预防急性肾同种异体移植排斥的免疫抑制性人源化抗CD25单克隆抗体；PANOREXTM，它是鼠源抗17-IA细胞表面抗原的IgG2a抗体(GlaxoWellcome/Centocor)；BEC2，它是鼠源抗独特型(GD3表位)IgG抗体(ImClone System)；IMC-C225，它是嵌合抗EGFR IgG抗体(ImCloneSystem)；VITAXINTM，它是人源化抗αVβ3整合素抗体(AppliedMolecular Evolution/MedImmune)；Campath 1H/LDP-03，它是人源化抗CD52 IgG1抗体(Leukosite)；Smart M195，它是人源化抗CD33IgG抗体(Protein Design Lab/Kanebo)；RITUXANTM，它是嵌合抗CD20IgG1抗体(IDEC Pharm/Genentech，Roche/Zettyaku)；LYMPHOCIDETM，它是人源化抗CD22 IgG抗体(Immunomedics)；ICM3，它是人源化抗ICAM3抗体(ICOS Pharm)；IDEC-114，它是灵长类化抗CD80抗体(IDECPharm/Mitsubishi)；ZEVALINTM，它是放射性标记的鼠源抗CD20抗体(IDEC/Schering AG)；IDEC-131，它是人源化抗CD40L抗体(IDEC/Eisai)；IDEC-151，它是灵长类化抗CD4抗体(IDEC)；IDEC-152，它是灵长类化抗CD23抗体(IDEC/Seikagaku)；SMART抗CD3，它是人源化抗CD3 IgG抗体(Protein Design Lab)；5G1.1，它是人源化抗补体因子5(C5)抗体(Alexion Pharm)；D2E7，它是人源化抗TNF-α抗体(CAT/BASF)；CDP870，它是人源化抗TNF-αFab片段(Celltech)；IDEC-151，它是灵长类化抗CD4 IgG1抗体(IDECPharm/SmithKline Beecham)；MDX-CD4，它是人源抗CD4 IgG抗体(Medarex/Eisai/Genmab)；CDP571，它是人源化抗TNF-αIgG4抗体(Celltech)；LDP-02，它是人源化抗α4β7抗体(LeukoSite/Genentech)；OrthoClone OKT4A，它是人源化抗CD4 IgG抗体(Ortho Biotech)；ANTOVATM，它是人源化抗CD40L IgG抗体(Biogen)；ANTEGRENTM，它是人源化抗VLA-4 IgG抗体(Elan)；和CAT-152，它是人抗TGF-β2抗体(Cambridge Ab Tech)。本领域技术人员将领会，本文公布的抗体可以在预防或治疗上用于预防或延迟疾病状态(例如癌、肿瘤生长、癌转移、或感染性疾病)的发作或进展。
在有些实施方案中，本发明涵盖对呼吸道病原体(例如副流感、流感A、流感B、衣原体、或腺病毒)特异的抗体。在优选的实施方案中，本发明完全涵盖鼠源RSV特异抗体(RSV48)、人源化palivizumab或其嵌合衍生物。
下面的表1列出了可以依照本发明使用的抗体的其它实例。
表1可以依照本发明使用的用于癌症治疗的单克隆抗体
<p>实施例14使用下面组成的唇膏基质
一起混合物质8-10，并且将物质13和14分散在混合物中。将得到的浆料通过三辊碾压机数次。
在此期间，熔化物质1-6并且一起均匀地搅拌，然后将物质7、11和12在其中搅拌。
然后将两种混合物一起混合，同时加热，直至获得均质的分散物。
然后将热的料体倒入唇膏的模具中，冷却。
在此获得在日光下具有优良坚牢度的强烈鲜红色和非常好的光泽的唇膏。
抗炎剂的非限制性实例包括非类固醇类抗炎药物(NSAID)、类固醇类抗炎药物、β-激动剂、抗胆碱能药剂(anticholingeric agent)和甲基黄嘌呤。NSAID的实例包括但不限于阿司匹林、布洛芬、塞来考昔(celecoxib)(CELEBREXTM)、双氯芬酸(VOLTARENTM)、依托度酸(LODINETM)、非诺罗芬(NALFONTM)、吲哚美辛(INDOCINTM)、酮咯酸(ketoralac)(TORADOLTM)、丙嗪(DAYPROTM)、萘丁美酮(RELAFENTM)、苏灵大(CLINORILTM)、托美丁(TOLECTINTM)、罗非考昔(rofecoxib)(VIOXXTM)、萘普生(ALEVETM、NAPROSYNTM)、酮洛芬(ACTRONTM)、和萘丁美酮(RELAFENTM)。这些NSAID通过抑制环加氧酶(例如COX-1和/或COX-2)来发挥功能。类固醇类抗炎药物的实例包括但不限于糖皮质激素、地塞米松(DECADRONTM)、可的松、氢化可的松、泼尼松(DELTASONETM)、泼尼松龙、氟羟强的松龙、柳氮磺胺吡啶和eicosanoid(诸如前列腺素、血栓烷和白细胞三烯)。
免疫调控剂的实例包括但不限于甲氨喋呤、ENBREL、REMICADETM、leflunomide、环磷酰胺、环孢霉素A、和大环内酯抗生素(例如FK506(藤霉素))、甲泼尼龙(MP)、皮质激素、类固醇、mycophenolatemofetil、雷怕霉素(sirolimus)、咪唑立宾、deoxyspergualin、brequinar、malononitriloamindes(例如leflunamide)、T细胞受体调控物和细胞因子受体调控物、皮质激素、细胞因子激动剂、细胞因子拮抗剂和细胞因子抑制剂。
抗生素的实例包括但不限于大环内酯(例如妥布霉素(Tobi))、头孢菌素(例如头孢立新(Keflex)、头孢雷定(Velosef)、头孢呋辛(Ceftin)、头孢罗齐(cefprozil)(Cefzil)、头孢克洛(Ceclor)、头孢克肟(Suprax)或头孢羟氨苄(Duricef))、甲红霉素(例如甲红霉素(Biaxin))、红霉素(例如红霉素(EMycin))、青霉素(例如青霉素V(V-Cillin K或Pen Vee K))或quinolone(例如氧氟沙星(Floxin)、环丙氟沙星(Cipro)或诺氟沙星(Noroxin))、氨基糖苷抗生素(例如安普霉素、阿贝卡星、班贝霉素、丁胺菌素、地贝卡星、新霉素、十一烯酸酯、硫酸奈替米星、巴龙霉素、核糖霉素、西索米星和状观霉素)、amphenicol抗生素(例如azidamfenicol、氯霉素、florfenicol和甲砜氯霉素)、袢霉素抗生素(例如利福酰胺和利福平)、碳头孢烯类(例如氯拉卡比)、碳青霉烯类(例如biapenem和亚胺培南)、头孢菌素类(例如头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢羟唑、头孢曲秦、头孢西酮、cefozopran、头孢咪唑、头孢匹胺和头孢匹罗)、头孢霉素类(例如头孢拉宗、头孢氰唑和头孢米诺)、单环酰胺菌素类(例如氨曲南、卡芦莫南和tigemonam)、氧头孢烯类(例如夫洛莫西和拉氧头孢)、青霉素类(例如氮脒青霉素、匹伏氮脒青霉素、阿莫西林、巴氨西林、苄青霉素酸、苄青霉素钠、依匹西林、苯苄青霉素、氟氯西林、青霉素G双酯、青霉素G二乙氨乙酯氢碘化物、苯明西林、青霉素0、青霉素V、苄星青霉素V、青霉素V hydrabamine、青哌环素和phencihicillin钾)、林肯酰胺类(例如克林达霉素和林可霉素)、amphomycin、枯草杆菌肽、卷曲霉素、粘菌素、持久杀菌素、结放线菌素N、四环素类(例如阿哌环素、氯四环素、氯莫环素和地美环素)、2，4-二氨基嘧啶(例如溴莫普林)、硝基呋喃类(例如呋喃他酮和呋噻咪唑氯化物)、喹诺酮类及其类似物(例如西诺沙星、克林沙星、氟甲喹和grepagloxacin)、磺胺类(例如乙酰磺胺甲氧吡嗪、苄磺胺、诺丙磺胺、酞磺胺醋酰、偶氮磺胺和磺胺乙胞嘧啶)、砜类(例如麝酚砜、葡萄糖胺苯砜钠和苯丙砜)、环丝氨酸、莫匹罗星、氯霉素、红霉素、青霉素、链霉素、万古霉素、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲基异唑和薯球蛋白。
抗病毒剂的实例包括但不限于蛋白酶抑制物、核苷逆转录酶抑制物、非核苷逆转录酶抑制物和核苷类似物、叠氮胸苷、阿昔洛韦、gangcyclovir、阿糖腺苷、碘苷、三氟尿苷和利巴韦林以及磷甲酸(foscarnet)、金刚烷胺、金刚乙胺、沙奎那韦、印地那韦、安泼那韦、罗匹那韦、利托那韦、α-干扰素、阿德福韦(adefovir)、clevadine、恩替卡韦(entecavir)和pleconaril、利巴韦林、金刚乙胺、金刚烷胺、神经氨酸酶抑制物和许多脂质衍生药物、天然脂肪酸、磷脂或二十二碳六烯酸(DHA)。
可用于本发明的其它治疗剂包括但不限于α-1抗胰蛋白酶、抗血管发生剂、反义、布托啡诺、降钙素和类似物、西利酶、COX-II抑制物、皮肤病学药剂、二氢麦角胺、多巴胺激动剂和拮抗剂、Enkephalins和其它阿片样肽、表皮生长因子、促红细胞生成素和类似物、促卵泡激素、G-CSF、高血糖素、GM-CSF、格雷西隆、生长激素和类似物(包括生长激素释放激素)、生长激素拮抗剂、水蛭素和水蛭素类似物诸如水蛭肽、IgE遏制物、胰岛素、胰岛素调理素和类似物、胰岛素样生长因子、干扰素、白介素、促黄体素、促黄体素释放激素和类似物、肝素、低分子量肝素和其它天然的、修饰的或合成的葡糖胺聚糖、M-CSF、甲氧氯普胺、咪达唑仑、单克隆抗体、PEG化抗体、PEG化蛋白质或用亲水性或疏水性聚合物或其它官能基修饰的任何蛋白质、融合蛋白、单链抗体片段或它与附着蛋白质、高分子、或其它官能基的任何组合、麻醉性镇痛药、尼古丁、非类固醇类抗炎剂、寡糖、奥坦西隆、甲状旁腺激素和类似物、甲状旁腺激素拮抗剂、前列腺素拮抗剂、前列腺素类、重组可溶性受体、东茛菪碱、血清素激动剂和拮抗剂、Sildenafil、特布他林、溶栓剂、组织型纤溶酶原激活剂、TNF和TNF拮抗剂、含有或不含载体/佐剂的疫苗，包括预防剂和治疗性抗原(包括但不限于亚基蛋白质、肽、和多糖、多糖缀合物、类毒素、基于基因的疫苗、活体减毒的、重配的、灭活的、全细胞、病毒和细菌载体)，其与下列有关成瘾、关节炎、霍乱、可卡因成瘾、白喉、破伤风、HIB、莱姆病、脑膜炎球菌、麻疹、腮腺炎、风疹、水痘、黄热病、呼吸道合胞病毒、蜱传播日本脑炎、肺炎球菌、链球菌、伤寒、流感、肝炎(包括甲型、乙型、丙型、和戊型肝炎)、中耳炎、狂犬病、脊髓灰质炎、HIV、副流感、轮状病毒、埃巴二氏病毒、CMV、衣原体、非典型嗜血杆菌(non-typeable haemophilus)、moraxellacatarrhalis、人乳头瘤病毒、结核病(包括BCG)、淋病(gonorrhoea)、哮喘、动脉粥样硬化、疟疾、大肠杆菌、阿尔茨海默氏(Alzheimer)病、幽门螺旋杆菌、沙门氏菌、糖尿病、癌症、单纯疱疹、人乳头瘤等，包括所有主要治疗剂的其它物质，诸如用于普通感冒的药剂、抗成瘾药、抗过敏药、镇吐药、减肥药(anti-obesity)、抗骨质疏松药、抗感染药、止痛药、麻醉剂、减食欲剂、抗关节炎药、止喘药、抗惊厥剂、抗抑郁药、抗糖尿病药、抗组胺类、消炎药、抗偏头痛制剂、抗晕药、止恶心药、抗肿瘤剂、抗帕金森氏症药、止痒剂、抗精神病药、退热剂、抗胆碱能剂、苯并二氮杂类拮抗剂、血管扩张剂(包括全面的、冠状动脉的、周围的和脑的)、骨刺激剂、中枢神经系统兴奋药、激素、安眠药、免疫抑制剂、肌肉弛缓剂、副交感神经阻滞药、拟副交感神经药、前列腺素、蛋白质、肽、多肽和其它高分子、精神兴奋药、镇静药、和性功能减退和安定剂。
5.3.1组合物本发明涵盖以溶液形式、颗粒形式或其混合物包含一种或多种生物学活性剂(特别是治疗剂)的组合物(或制剂)。本发明方法中所使用的组合物可以由任何物种获得，或者通过本领域技术人员知道的任何重组DNA技术生成。包含一种或多种生物学活性剂的组合物可以来自不同的动物物种，包括但不限于猪、牛、绵羊、马等。可以通过标准的重组DNA技术来修饰这些药剂的化学状态，从而生成不同结合状态的不同化学配方的药剂。
待投递或给药的生物学活性剂的形式包括它们在制药学可接受稀释剂或溶剂中的溶液、乳液、悬浮液、凝胶、颗粒(诸如微型和纳米颗粒，或是悬浮或是分散)、以及原位形成载体。本发明的组合物可以采取适于真皮内投递的任何形式。在一个实施方案中，本发明的真皮内组合物采取流动可注射介质的形式，即可以在注射器或笔中注射的低粘度组合物。流动可注射介质可以是液体。或者，流动可注射介质是其中悬浮了颗粒物的液体，使得介质保持其流动性，从而可注入和注射，例如能够在注射器中给药。
在有些实施方案中，本发明的制剂包含治疗有效量的药剂以及一种或多种其它添加剂。可用于本发明制剂的添加剂包括例如润湿剂、乳化剂、改变胰岛素四级结构的物质或pH缓冲剂。本发明的制剂可以包含一种或多种其它赋形剂，诸如糖和多元醇。制药学可接受载体、稀释剂和其它赋形剂的其它实例见Remington′s PharmaceuticalSciences，Mack出版公司，N.J.，当前版本(都完整收入本文作为参考)。
待投递或给药的治疗剂的形式包括它们在制药学可接受稀释剂或溶剂中的溶液、乳液、悬浮液、凝胶、颗粒(诸如微型和纳米颗粒，或是悬浮或是分散)、以及原位形成载体质。本发明的制剂可以采取适于真皮内投递的任何形式。在一个实施方案中，本发明的真皮内制剂采取流动可注射介质的形式，即可以在注射器或胰岛素笔中注射的低粘度制剂。流动可注射介质可以是液体。或者，流动可注射介质是其中悬浮了颗粒物的液体，使得介质保持其流动性，从而可注入和注射，例如能够在注射器中给药。
本发明的真皮内制剂可以制备成单位剂量形式。每瓶单位剂量可以含有0.1-0.5ml制剂。在有些实施方案中，本发明的真皮内制剂的单位剂量形式可以含有50μl-100μl、50μl-200μl、或50μl-500μl。如果需要，可以通过向每个药瓶中添加无菌稀释剂将这些制剂调整至期望浓度。依照本发明方法给药的制剂不能大量(in volumes)施用，否则真皮内空间可能超载，导致分配到一个或多个其它区域，诸如SC区域。
本发明方法中所使用的治疗剂可以是液体或粉末形式。在具体的实施方案中，在鼻内给药制剂时，液体形式将包含治疗剂(例如抗体)，将以液滴或雾化形式给药。
治疗剂的粉末形式将包括通过本领域知道的多种方法制备的粉末，例如冻干、喷干、或喷射冷冻干燥(SFD)方法，例如美国申请号10/299,012中所述(将其完整收入本文作为参考)。
药剂的粉末形式可以纯粹包含治疗剂，或者可以包含一种或多种其它成分。一般而言，最初可以使用多种常规液体将目的治疗剂配制成液体制剂。优选的是，液体是水性的液体，诸如例如(例如可注射级水)或多种常规缓冲液(含有或不含盐)。缓冲液通常选择使选择的蛋白质或其它类型的治疗剂稳定的pH，而且通常是本领域技术人员可确定的。一般而言，这在生理学pH范围内，尽管有些蛋白质在更宽的pH范围中也是稳定的，例如酸性pH。由此，初始液体制剂的优选pH范围是约1-约10，特别优选约3-约8，尤其优选约5-约7。本领域技术人员将领会，可以采用极其多种合适的缓冲液。合适的缓冲液包括但不限于醋酸钠、柠檬酸钠、琥珀酸钠、碳酸氢铵钠和碳酸钠缓冲液。一般而言，使用缓冲剂的摩尔浓度是约1mM-约2M，优选约2mM-约1M，尤其优选约10mM-约0.5M，特别优选50-200mM。一般而言，如果液体溶液中存在盐，那么所用盐的摩尔浓度是约1mM-约2M，优选约2mM-约1M，尤其优选约10mM-约0.5M，特别优选50-200mM。合适的盐包括但不限于NaCl。
液体制剂可以采取多种形式，例如溶液、悬浮液、乳液(诸如油/水或水/油/水乳液)、浆或胶体。
任选的是，液体制剂可以包含一种或多种常规制药学可接受赋形剂。“赋形剂”通常指为了增强活性药物成分(API)的制剂的功效而添加的化合物或物质。实例包括例如为了确保或提高蛋白质在喷射冷冻干燥过程中或在喷射冷冻空气干燥过程中的稳定性以及此后粉末产品的长期稳定性和流动性而添加的冷冻保护剂(cryoprotectants)和lyoprotectants。合适的保护剂通常是较为自由流动的颗粒固体，不会在与水接触后变浓或聚合，在被患者吸入后或以其它方式进入患者体内后基本上无害，而且不会与治疗剂以改变其生物学活性的方式发生显著相互作用。合适的赋形剂包括但不限于蛋白质，诸如人和牛血清清蛋白、明胶、免疫球蛋白；碳水化合物，包括单糖(例如半乳糖、D-甘露糖、山梨糖等)、二糖(例如乳糖、海藻糖、蔗糖等)、环糊精和多糖(例如棉子糖、麦芽糊精、葡聚糖等)；氨基酸，诸如谷氨酸一钠、甘氨酸、丙氨酸、精氨酸或组氨酸，以及疏水性氨基酸，例如色氨酸、酪氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等；甲胺，诸如甜菜碱；赋形剂盐，诸如硫酸镁；多元醇，诸如三羟基或高级糖醇，例如甘油(glycerin)、赤藓糖醇、甘油(glycerol)、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇；丙二醇；聚乙二醇；Pluronics；表面活性剂；及其组合。优选的赋形剂包括例如海藻糖、蔗糖和甘露醇。常常使用另一类赋形剂即粘膜粘着剂(mucoadhesive)来增加API与粘膜表面的接触。粘膜粘着剂的实例包括例如壳聚糖、硫酸皮肤素、软骨素和果胶。另外，可以向适于本文公布的SFD方法的液体制剂中添加改进API溶解性的常规助溶剂。
一般而言，在使用粘膜粘着剂时，它们的用量范围是约1-95wt％，优选约1-50wt％，尤其优选约5-50wt％，特别优选约5-20％。一般而言，冷冻保护剂的使用浓度在约5wt％和约95wt％之间。
可以将本发明的干粉与填充剂(bulking agent)或载体混合，用于降低治疗剂在对患者投递的粉剂中的浓度；即可能希望每个单位剂量的物质体积较大。填充剂还可以用于改进粉剂的操作特征。合适的填充剂通常是结晶(以避免水的吸收)，包括但不限于乳糖和甘露醇。因此，如果添加诸如乳糖等填充剂，添加目的治疗剂与填充剂的比率可以变化，优选由约99∶1至约1∶99，更优选由约1∶5至约5∶1，尤其优选约1∶10至约1∶20。
本发明涵盖如本文公布的真皮内给药本发明的组合物并联合其它投递途径，包括例如皮下-真皮内界面、鼻内(IN)、肠胃外给药(例如肌肉内、腹膜内、静脉内和皮下)、硬膜外和粘膜(例如鼻内和口腔路径)、肿瘤内、肿瘤外、局部和表皮。可以通过任何常规途径来施用组合物，例如通过输注或推注、通过上皮或粘膜皮肤衬的吸收(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)，而且可以与其它生物学活性剂一起给药。给药可以是全身的或局部的。另外，还可以采用肺部给药，例如通过使用吸入器或喷雾器，以及含有雾化剂的制剂。见例如美国专利号6,019,968；5,985,320；5,985,309；5,934,272；5,874,064；5,855,913；5,290,540；和4,880,078；以及PCT公布号WO92/19244；WO97/32572；WO97/44013；WO98/31346；和WO99/66903(每一篇都完整收入本文作为参考)。
5.3.2治疗效用的鉴定优选在用于人类前在体外、在细胞培养物系统中和在动物模型生物体(诸如啮齿类动物模型系统)中对期望的治疗活性测试本发明组合物、预防剂或治疗剂的数个方面。例如，可用于确定是否需要给药特定组合物的测定法包括细胞培养测定法，其中培养患者的组织样品，暴露或以其它方式接触本发明的制药学组合物，并观察这种组合物对组织样品的作用。组织样品可以通过活组织检查由患者采集。这种测试能够为每位患者个体鉴定治疗上最有效的预防性或治疗性分子。在多个具体的实施方案中，可以使用涉及自身免疫或炎性病症的代表性细胞或细胞类型(例如T细胞)来进行体外测定法，以确定本发明的药物组合物对这些细胞类型是否具有期望效果。
可以在用于人类前在合适的动物模型系统中测试预防剂和/或治疗剂的组合。这些动物模型系统包括但不限于大鼠、小鼠、鸡、牛、猴、猪、狗、兔等。可以采用本领域众所周知的任何动物模型。在本发明的一个具体实施方案中，在小鼠模型系统中测试了预防剂和/或治疗剂的组合。合适的模型系统得到广泛使用，而且是本领域技术人员所熟知的。预防剂和/或治疗剂可以重复给药。流程的数个方面可以变化。所述方面包括给药预防剂和/或治疗剂的时间方案，以及是分开还是作为混合物施用这些试剂。
可以通过标准药学程序在细胞培养物或实验动物中测定本发明预防性和/或治疗性方案的毒性和功效，例如测定LD50(50％群体致死剂量)和ED50(50％群体治疗有效剂量)。毒害与治疗效果之间的剂量比率即治疗指数，它可以表述为比率LD50/ED50。优选具有较大治疗指数的预防剂和/或治疗剂。尽管可以使用具有有毒副作用的预防剂和/或治疗剂，然而必须小心设计将这些药剂靶向患病组织部位的投递系统，从而将对未受感染细胞的潜在损伤降至最低，由此降低副作用。
由细胞培养试验和动物研究获得的数据可用于制定用于人类的预防剂和/或治疗剂剂量范围。这些药剂的剂量优选处于包含ED50且没有毒性或只有少许毒性的循环浓度范围内。剂量可以根据所采用的剂量形式和所采用的给药途径而在此范围内变化。对于本发明方法中所使用的任何药剂，最初可以由细胞培养试验估算治疗有效剂量。可以在动物模型中制定达到循环血浆浓度范围的剂量，所述范围包括在细胞培养中测定的IC50(即所测化合物达到对症状的半值最大抑制时的浓度)。这些信息可用于更加精确的测定在人体中有用的剂量。可以通过例如高效液相层析来测量血浆中的水平。
还可以使用用于研究癌症的多种实验动物模型来测定依照本发明使用的疗法的抗癌活性，诸如SCID小鼠模型或携带人异种移植物的转基因小鼠或裸鼠，诸如仓鼠、兔等本领域知道的和Relevance of TumorModels for Anticancer Drug Development，1999，Fiebig和Burger编；Contributions to Oncology，1999，Karger；The Nude Mouse inOncology Research，1991，Boven和Winograd编；以及Anticancer DrugDevelopment Guide，1997，Teicher编(完整收入本文作为参考)中描述的动物模型。
可以使用肿瘤或恶性细胞系的细胞来筛选治疗性试剂和方法。本领域的许多标准测定法可用于评估这些存活和/或生长情况；例如可以通过测量3H-胸苷掺入、直接细胞计数、检测已知基因(诸如原癌基因，例如fos，myc)或细胞周期标志物的转录水平的变化来测定细胞增殖；可以通过台盼蓝染色来评估细胞的存活能力；可以通过目测形态学变化、生长减缓、和/或在软琼脂中形成集落或在三维基底膜或胞外基质制备物中形成管状网络来评估分化情况；等等。
另外，可以使用本领域技术人员知道的任何测定法来评估本文公开的联合疗法用于治疗或预防癌、炎性病症或自身免疫病的预防性和/或治疗性功效。
6.实施例6.1投递途径对IL-12抗肿瘤活性的影响(使用100ng剂量)6.1.1流程给C57BL/6J小鼠(Charles Rivers Labs公司)在右前肋SC接种1×106个B16F10黑素瘤细胞(ATCC)。接种肿瘤后一周(第7天)，将小鼠随机化，并且用溶于50μl PBS溶液的100ng rmIL-12(R&amp;D Systems)进行治疗，通过或是肿瘤接种部位附近的ID或SC注射，或是IP注射(n＝25/条件)。ID对照的额外条件单独使用50μl PBS溶液进行。ID治疗是使用34G，1mm针依照修改后的芒图法给药的。SC和IP给药是使用标准25G×3/4″针施行的。治疗隔天进行直至第13天，合计4剂。第7、11、14、18、21、25和28天采集肿瘤测量结果，单位mm2(长度×宽度)。第0、14、21和28天采集血样用于IL-12和IFN-γ分析。第14和24天每个条件取5只动物采集引流淋巴结和脾组织样品用于CD49b(NK)细胞的FACS分析。每个条件由10只预先选定的、未曾用于血液采集或FACS分析的动物采集死亡率数据。死亡率是通过肿瘤大小大于400mm2引起的自然死亡或安乐死测定的。使用t检验Two-Sample AssumingUnequal Variances计算统计学数据。见例如Brunda，M.，1993，J.Exp.Med.1781223-1230；和Leonard等，1997，Blood 902541-2548(都收入本文作为参考)。
6.1.2FACS分析每个治疗组取5只小鼠切除右侧表面腹股沟引流淋巴结(DLN)和脾，将DLN置于装有冷的HBSS(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)的培养皿中，而将脾置于10ml冷的红细胞裂解缓冲液(0.16M NH4Cl和10mM KHCO3，Sigma，St.Louis，MO)中。通过机械破坏将每份DLN和脾处理成单细胞悬浮液。对由此得到的细胞溶液的1∶20稀释液进行细胞计数。将细胞以1500rpm于4℃离心15分钟。吸出上清液，将细胞用5ml HBSS缓冲液清洗一次，并使用相同条件再次离心。吸出上清液，并将细胞以2-4×108个细胞/ml的密度重悬于Pharmingen染色缓冲液(Pharmingen，BD Biosciences，San Jose，CA)用于流式染色。将大约1×107个重悬细胞(25μl)加到96孔板的孔中。向孔中的细胞加入染色混合液(25μl)并通过吹打混匀。根据需要，混合液含有下列已标记抗体的组合(每种在Pharmingen染色缓冲液中的浓度是0.01mg/ml)FITC-CD49b(Pan-NK细胞，克隆DX5，Pharmingen，BD Biosciences，San Jose，CA)；PE-CD19(Pan B细胞，克隆1D3，Pharmingen，BD Biosciences，San Jose，CA)；CY5PE-B220(粒细胞和单核细胞，克隆RA3-6B2，Pharmingen，BD Biosciences，San Jose，CA)；APC-CD4(T辅助细胞，克隆RM4-5，Pharmingen，BDBiosciences，San Jose，CA)；和APC-CY7-CD8(T细胞毒性细胞，克隆BC-CD8a，Biocarta，San Diego，CA)。将细胞/染色混合物在黑暗中于4℃保温1小时。用150μl FacsFlow缓冲液(Pharmingen，BDBiosciences，San Jose，CA)清洗孔，并以1500rpm于4℃离心5分钟。吸出上清液，并再次清洗。将经过清洗的细胞重悬于1ml冷的FacsFlow缓冲液中，并在黑暗中置于冰上直至使用FACS Vantage SE进行流式细胞术分析。细胞分析的设计排除了B细胞，并量化CD4+细胞、CD8+细胞和CD49b+(NK)细胞。见例如Cordaro，T.，2002，J.Immunology 168651-660；Fogler等，1998，J.Immonology 1616014-6021；Gao等，2003，J.Exp.Med.198(3)433-442；Harada等，1998，Int.J.Cancer 75400-405；Jenne等，2000，Cancer Research 604446-4452；以及Pa rk等，2003，J.Immunology 1701197-1201(都收入本文作为参考)。
6.1.3肿瘤生长如图1所示，只有ID投递的IL-12显示对抑制肿瘤生长的显著作用。第18天在ID给药条件中看到了优于IP投递的肿瘤大小显著(p＜0.0002)缩小。还看到了优于ID投递PBS(p＜0.0000005)和SC(p＜0.00003)条件的类似效果。显著的趋势持续至研究结束即第28天。
这项研究中的IL-12剂量比文献中公布的有效IP剂量低2-10倍。见例如Tannenbaum等，1996，J.Immunology 156693-699；和Tsung等，1997，J.Immunology 1583359-3365。这可能就是这项研究中IP服用IL-12缺乏响应的原因。这显示了优于其它已发表治疗方法的剂量节省效应。直接靶向淋巴的较低剂量将意味着降低费用，而且很可能降低副作用。
6.1.4死亡率如图2所示，第28天，通过ID投递接受IL-12的组(10只中7只存活)的死亡率低于通过IP(10只中3只存活)或SC(10只中3只存活)投递接受IL-12的其它组。而且，通过ID投递接受IL-12的组的死亡率还低于通过ID投递(10只中3只存活)只接受PBS的组。由此，ID投递IL-12在第28天显示的存活率与通过其它途径的投递或对照相比大200％。
6.1.5NK细胞计数IFN-γ认为是IL-12投递的疗效作用。已经证明，IL-12增加由NK和T细胞生成的IFN-γ，并促进NK细胞的增殖和分化。由此，NK细胞增多指示IL-12疗法的效果增强。不限于具体的理论，NK细胞增多可以是由下列各项引起的NK细胞增殖或分化增强；IFN-γ生成和释放增强；对肿瘤增殖部位的靶向更好；免疫调控过程经由淋巴吸收途径的有效靶向的效果更好；和/或上述各项的组合。
如图3所示，在IL-12治疗方案的一天后(第14天)，ID投递组的类如木瓜蛋白酶、葡糖淀粉酶；遮光剂；色素；着色剂以及具有防龋功效的提供氟离子的盐，如氟化钠、氟化钾、氟化锡如氟化亚锡。在另一个实施方案中，增白组合物包含一种或多种脱敏剂，如硝酸钾、柠檬酸、柠檬酸盐、氯化锶等。在一个实施方案中，牙齿增白组合物具有以下一般配方
条本发明的增白组合物可以是用常规的溶剂铸塑方法制作的一层条的形式。在本文中有用的条包括聚合物、天然和合成的织物材料、非织物材料、金属薄片、纸、橡胶和它们的组合。优选条材料基本不溶于水。合适的聚合物包括聚乙烯、乙酸乙基乙烯酯(ethylvinylacetate)、聚酯、乙基乙烯醇(ethylvinyl alcohol)、氟塑料和它们的组合。在各个实施方案中，条材料通常厚度小于约1mm(毫米)，任选小于约0.05mm，任选约0.001mm至约0.03mm。条的形状是能覆盖需要的口腔表面的任何形状和大小。在一个实施方案中，条材料的长度为约2cm(厘米)至约12厘米，在另一个实施方案中为约4cm至约9cm。条材料的宽度也取决于待覆盖的口腔表面积。条的宽度通常为约0.5cm至约4cm，在一个实施方案中为约1cm至约2cm。条材料可包括任选充满本发明组合物的浅袋。在本文中有用的条公开于2003年2月4日公布的Rajaiah等的美国专利第6,514,484号。例如，在一些实施方案中，通过溶剂铸塑法制作条，将胶
表2第28天的t检验数据
6.2ID和IP投递对IL-12抗肿瘤活性的影响给C57BL小鼠皮下(SC)接种1×106个B16F10黑素瘤细胞(ATCC公司)。接种后7天在携带肿瘤的一侧以两个水平(10和100ng)通过腹膜内(IP)或真皮内(ID)给药以IL-12注射启动治疗。隔天重复IL-12给药，合计4次治疗。作为对照，在携带肿瘤的一侧ID注射相同体积的完全介质(PBS)。还与血清和组织样品(n＝15/条件)一起运行真阴性对照。第7、11、14、18和21天测量体重和肿瘤大小。还每隔一星期采集血样用于IL-12分析。用数字卡钳测量成直角的两个肿瘤直径，并将平均肿瘤大小对接种肿瘤细胞后的天数作图。
6.2.1ID和IP投递IL-12对肿瘤大小的影响(10ng剂量)治疗后的第一次测量即第11天，ID(77mm2)给药条件的生长速率与IP(68mm2)给药条件相似。第14天，ID治疗小鼠的肿瘤由先前的测量结果增大了56％至120mm2，而IP治疗小鼠的肿瘤增大了63％至113mm2。两个治疗组显示与PBS治疗组相似的肿瘤大小，后者在第11和14天的平均肿瘤大小分别为74mm2和126mm2(增大了70％)。然而，第18天，ID治疗小鼠的肿瘤缩小了6％(112mm2)，而IP治疗小鼠的肿瘤增大了82％(206mm2)。第21天，ID条件增大了121％至250mm2，而IP条件增大了27％至262mm2。第21天，ID和IP条件的平均肿瘤大小与PBS给药动物(259mm2)相似。只在第18天10ng的IL-12剂量中看到了ID投递优于IP的优势。IL-12注射在第13天结束，如果以更宽或更大频率的给药方案给予治疗，优势可能会更加显著。
6.2.2ID和IP投递IL-12对肿瘤大小的影响(100ng剂量)在治疗后的第一次测量时即第11天，在ID(54mm2)中看到了相对于IP(70mm2)给药条件的平均生长速率减小。第14天，ID治疗小鼠的肿瘤由先前的测量结果增加了39％至75mm2，而IP治疗小鼠的肿瘤增加了80％至126mm2。只有ID治疗组显示比PBS治疗组小的肿瘤大小和生长速率，后者在第11和14天的平均肿瘤大小分别是74mm2和126mm2(70％)。到了第21天，ID条件增加了89％至142mm2，而IP条件增加了139％至302mm2。对于100ng剂量的IL-12而言，ID条件的平均肿瘤生长速率相对于IP减小，而ID的最终平均肿瘤大小比IP小47％。
ID治疗组与IP治疗组之间肿瘤大小的差异说明可以ID给药比IP低的剂量而达到相同或更好的全身应答-节省剂量并提高功效。减少注射量还应当降低在较高剂量中看到的副作用的数量和严重性。肿瘤负荷减小可能还意味着转移活性降低和存活率升高。
6.3ID投递部位对IL-12抗肿瘤活性的影响给C57BL小鼠皮下(SC)接种1×106个B16F10黑素瘤细胞(ATCC公司)。接种后7天作为携带肿瘤一侧的ID剂量或对侧的剂量给予100ngIL-12注射启动治疗。隔天重复IL-12给药，合计4次治疗。作为对照，在携带肿瘤的一侧ID注射相同体积的完全介质(PBS)。还与血清和组织样品(n＝15/条件)一起运行真阴性对照。第7、11、14、18和21天测量体重和肿瘤大小。还每隔一星期采集血样用于IL-12分析。第14和24天采集引流淋巴结和脾样品用于分析T细胞、B细胞和NK细胞，并进行GP100FACS分析。用数字卡钳测量成直角的两个肿瘤直径，并将平均肿瘤大小对接种肿瘤细胞后的天数作图。
6.3.1结果第18天，肿瘤附近ID给药条件与对侧ID给药之间首次出现了肿瘤大小的显著差异。由第14天每个条件的75mm2，进行对侧注射(IDcs)的肿瘤增加了91％至143mm2，而进行肿瘤侧注射(IDts)的肿瘤只增加了68％至126mm2。到第21天，IDcs又增加了29％，而IDts只增加了14％至142mm2。两种ID条件都具有优于PBS处理动物的显著改进，其中后者在第21天的平均肿瘤大小是259mm2。IDts条件的最终肿瘤大小比IDcs小23％，证明了靶向直接与肿瘤有关的淋巴的优势。
在肿瘤注射部位附近真皮内给药100ng IL-12注射在总体肿瘤生长方面具有最大降低。不限于具体的理论，这证明了ID注射比其它条件更加有效的靶向肿瘤引流淋巴结(涉及肿瘤输送、转移和免疫应答的系统)的能力。对侧进行的ID注射IL-12不如在肿瘤附近给药有效，但是要比IP条件好。不限于具体的理论，这可能是由于通过直接靶向淋巴但是没有到达直接涉及肿瘤的淋巴仍然实现了免疫应答。
6.4使用ID投递靶向肺组织通过测量RSV特异单克隆抗体48(RSV MAB 48)的组织和循环水平比较了肌肉内(IM)和ID投递途径。RSV MAB 48是通过用纯化的RSV融合蛋白免疫Balb/c小鼠而生成的。采集致敏的(primed)B细胞，并通过PEG法与653骨髓瘤系融合。本领域普通技术人员可以使用本领域众所周知的技术获得其它合适的单克隆抗体。
采集肺组织并测定抗体的存在情况。在注射后3小时、24小时、7、14、21和28天采集肺样品。为了完成预定的取样，研究分六个阶段进行。每个组织采集时间和路途指定两个重复或两只动物，从而为每个时间点的采样提供两份样品。
6.4.1详细流程6.4.1.1制备用于ELISA的肺组织裂解物收获肺，在0.9％NaCl中漂洗，于-20℃冷冻，并在Vacutainer(5ml)中保存于-20℃直至检验。裂解前，将组织融化，并用Hanks氏平衡盐溶液(4ml)和移液器彻底漂洗，由肺组织表面除去任何残余血液。然后由管中吸出Hank s氏平衡盐溶液并丢弃。向每批肺中加入1mlCHO 2x裂解缓冲液(含1mM苯甲基磺酰氟、0.25M Tris(羟甲基)氨基甲烷盐酸pH用pH/mV/温度计和氢氧化钠颗粒调至8.0、0.05M氯化钠、0.5％NonidetP40替代液、0.5％脱氧胆酸钠)。将Vacutainer保持稳定，降下变速匀浆器进入肺溶液，使得刀片位于肺块顶部。将变速匀浆器开动约20-30秒，完全破坏肺组织。小心避免过度匀浆或产生可能降解抗体的热量。将匀浆后的肺组织溶液转移到FalconBlueMaxTM15ml聚苯乙烯塑料锥形管中用于超声处理。将材料在冰上超声处理3次约30秒。然后将匀浆、超声后的肺组织悬浮液转移到微型离心管中，并在Marathon Micro H Fisher Scientific微型离心机中离心15分钟。然后，移出上清液并保存于-20℃直至蛋白质和抗体检验。丢弃沉淀。
6.4.1.2测定标准总蛋白质的测定是使用BCA(bicinchoninic acid)试剂(Pierce，产品目录#23225)进行的。
测定标准物是如下产生的由未治疗棉鼠(未接受抗体)采集肺组织，如上所述裂解，将回收的总体分成5管，并向4管掺入已知数量(分别是300μg/ml、30μg/ml、3μg/ml和300ng/ml)的RSV MAB 48。剩余的那管不添加MAB作为阴性对照。将每个掺料样品和零值对照材料用ELISA加样缓冲液稀释，产生由1∶102至1∶105的对数稀释物。
6.4.1.3ELISA测定将Zymed兔抗小鼠IgG2a储液(500μg/ml，产品目录号61-0200，批号20168583)用碳酸盐包被缓冲液(Sigma)稀释至3μg/ml。用100μl3μg/ml Zymed兔抗小鼠IgG2a碳酸盐溶液包被96孔板的孔(只是内部的60个)，覆盖并在CO2温箱中静置1小时。由孔中丢弃包被液，并将板在纸巾上拍击以除去残余的包被液。用250μl含5％奶粉的PBS/吐温20(Sigma P3563)封闭非特异位点。用石蜡膜覆盖板，并在CO2温箱中保温2小时(37℃)。丢弃封闭液，并将板用PBS/吐温20清洗3次，然后在纸巾上拍击以除去残余的清洗液。将样品和RSV 48.4.1对照(一抗)适当稀释以符合标准曲线。标准曲线由300ng/100μl孔、100ng/100μl孔、30ng/100μl孔、10ng/100μl孔、3ng/100μl孔、1ng/100μl孔、0.3ng/100μl孔的RSV MAB 48以及空白组成。将样品在含0.5％奶粉的PBS/吐温20中稀释，每个稀释度2个重复且每个孔100μl。然后将板在CO2温箱中保温1小时。
丢弃一抗溶液，将板用PBS/吐温20清洗3次，并在纸巾上拍击以除去残余的清洗液。然后向每个孔中加入100μl HRP缀合物(山羊抗小鼠缀合物集合)。为了制备HRP缀合物集合，向30ml含0.5％w/v奶粉的PBS/吐温20溶液中加入2μl抗IgG2a(Southern Biotech)和4μl抗IgG(Sigma)。向每个孔中加入100μl溶液。将覆盖的板在CO2温箱中保温1小时(37℃)。然后丢弃二抗溶液，将板用PBS/吐温20清洗4次，并在纸巾上拍击以除去残余的清洗液。向每个孔中加入100μl TMB(SigmaT8665)底物，并在黑暗中显色30分钟。向每个孔中加入200μl 0.5MH2SO4，并读取450nm的吸光度。
通过对原始的OD值运行(微软Excel中的)预报功能来测定抗体的实际重量。预报功能由现有数值计算或预测未来数值。例如，对指定x值的预测值是y值。已知的数值是现有的x值和y值，通过线性回归预测新的数值。
6.4.1.4模型抗体这项单一途径ID对IM研究中所使用的抗体(RSV MAB 48)是鼠源IgG2a。RSV MAB 48识别融合蛋白，而且在组织培养物实验中显示阻断感染。在腹水中扩增该抗体，用Zymed蛋白A柱纯化，在1/10PBS中透析以尽可能多的除去赋形剂而不损害抗体的溶解性。
6.4.1.5剂量每只动物以15mg/kg体重接受注射。考虑到赋形剂几乎占到一半的重量，棉鼠实际接受的抗体剂量是约7.5mg/kg。
IM和ID注射的样品的计算显示如下棉鼠体重＝98.9克；为了以15mg/kg施用75μl抗体溶液，需要1.48mg/75μl的浓度；为了包括注射损耗，取3.94mg溶于200μl，并给药75μl。
6.4.1.6投递装置和方法使用30G BD针进行IM和ID注射。IM注射如下进行夹紧(pinching)后腿肌肉，产生深度；将针倾斜一定角度使得斜面能够埋入肌肉，投递IM注射体积，且在肌肉中可触知。ID注射如下进行以尽可能浅的角度进入，然后在注射前翻转斜面向上，产生“水泡”。
6.4.2结果根据注射后3小时、24小时、7、14、21和28天对肺组织的测定结果，在第一次检验时即注射后3小时(图4)在由ID施药动物获得的肺组织中观察到了器官抗体相对于IM施药动物的升高。最后一次观察到这种升高的时间点是注射后21天。注射后28天，在ID和IM施药动物之间没有观察到器官抗体水平的差异。
注射后3小时记录到最大差异百分率，此时ID投药动物显示它们肺中的抗体比IM投药动物高350％。合计六个时间点的所有测定结果的总体升高是约18％(ID施药动物的约57ng对IM施药动物的约48ng)。另外，3小时ID样品指示肺中抗体的开始作用更快，而且1周ID样品指示肺中抗体的较高的峰值水平(Cmax)更高。
这些数据证明ID投递能够在靶组织(肺)中达到更高的抗体水平，而无需提高抗体的给药数量。因此，与肌肉内途径相比，真皮内投递实现相似水平的保护所需要的抗体更少。除了成本优势以外，如果在肺中维持靶trough值所需要的物质减少，那么引发不良副作用(诸如人抗小鼠抗体(HAMA))的风险降低。不限于具体的理论，生物利用度的提高可能是因为注射所针对的组织部位促进活性化合物的更好吸收和/或将药物的不利降解降至最低。
6.5折分(split)剂量双途径研究6.5.1实验设计在棉鼠中进行的内部(in-house)初步生物利用度研究证明了直接鼻内施用抗体能够在肺组织中产生较高的峰值水平。这一观察结果导致了拆分剂量双途径策略的形成，它用于既获得治疗性抗体水平又获得预防性抗体水平。这项研究是在Balb/c小鼠(组n＝5)中进行的。
首先进行了一系列预备实验以确定最佳的IN投递体积和随后的采样时间。如6.4节所述进行肺材料的采集，只是时间不同。由于这项研究中的动物接受了不同的RSV特异单抗(Palivizumab)，因此肺检验的ELISA与6.4节所述方法不同。在这些初步实验中，各组Balb/c小鼠以15mg/kg体重分三个IN服药体积接受Synagis Palivizumab。给药后1、3和5小时采集肺组织。每个测试和对照组使用5只小鼠。收集由每只动物采集的所有肺组织，在裂解缓冲液中匀浆，通过离心澄清，并将上清液加到ELISA板中，其中已经固定了RSV-FP肽。合并测试或对照组中的肺匀浆物用于测定。
6.5.2ELISA流程使用下面的例示性ELISA流程进行ELISA1.由冰箱中取出1mg/ml RSV F 64聚物肽原液。将储液用碳酸盐包被缓冲液(Sigma)稀释至10μg/ml；2.用100μl 10μg/ml RSV FP 64聚物包被96孔板的孔(只是内部的60个)。覆盖并在CO2温箱中静置1小时；3.将包被液由孔中丢弃至水槽中，并将板在纸巾上拍击以除去残余的包被液。用250μl含5％奶粉的PBS/吐温20(Sigma P3563)封闭非特异位点。用石蜡膜覆盖板，并在CO2温箱中保温2小时(37℃)；4.将封闭液丢弃到水槽中，并将板用PBS/吐温20清洗3次。将板在纸巾上拍击以除去残余的清洗液；5.稀释样品以符合标准曲线。为了绘制标准曲线，使用300ng/100μl(孔)、100ng/孔、30ng/孔、10ng/孔、3ng/孔、1ng/孔、0.3ng/孔的Palivizumab，以及空白。将样品在含0.5％奶粉的PBS/吐温20中稀释。每个稀释度进行2个重复。向每个孔中加入100μl。将板在CO2温箱中保温1小时；6.将一抗溶液丢弃到水槽中，并将板用PBS/吐温20清洗3次。将板在纸巾上拍击以除去残余的清洗液；7.向每个孔中加入100μl HRP缀合物(山羊抗人Ig)。为了制备HRP缀合物工作储液，向30ml含0.5％w/v奶粉的PBS/吐温20溶液中加入2μl抗人Ig(Promega)。旋涡震荡并向每个孔中加入100μl。将覆盖的板在CO2温箱中保温1小时(37℃)；8.将二抗溶液丢弃到水槽中，并将板用PBS/吐温20清洗4次。将板在纸巾上拍击以除去残余的清洗液；
9.向每个孔中加入100μl TMB(Sigma T8665)底物，并在黑暗中显色30分钟；并10.向每个孔中加入200μl 0.5M H2SO4，并读取450nm的吸光度。
通过对原始OD值运行(微软Excel中的)预报功能来测定抗体的实际重量。
6.5.3投递装置和方法IM注射再次使用30G BD针(再次订购#305106)进行。通过夹紧后腿肌肉以产生深度来准备IM注射部位。将针倾斜一定角度使得斜面能够适当埋入肌肉。投递注射体积且在肌肉中可触知。
IN给药用安装了一次性吸头的P200 Ranin移液器施用。
6.5.4结果图5显示了与鼻内服药体积的增加一致的肺抗体浓度的稳定增加。IN投递的抗体较效。然而，在100μl组中检测到的抗体峰值浓度至少比任何其它投递途径记录的水平高2倍。这些发现与来自棉鼠研究的早前观察结果一致。尽管IN投递的抗体被迅速清除，然而在这项研究所涉及的抗体浓度和器官体积，具有正常亲和力的抗体只需要存在几分钟的时间。
利用上述发现，将IM投递的Palivizumab的生物利用度与在IN和IM途径之间拆分的剂量进行比较。Balb/c(n＝5)小鼠以15mg/kg体重接受Synagis Palivizumab。所有的IM和IN注射体积都是75μl。给药后1小时采集肺组织，并在1周后再次采集肺组织。收集由每只动物采集的所有肺组织，在裂解缓冲液中匀浆，并通过离心澄清，正如上文6.4节所述。对所有澄清的匀浆物进行BCA蛋白质检验，从而能够在相等的蛋白质基础上比较测试和对照组织。合并来自各个组的澄清肺组织匀浆物，并加到经RSV-FP肽包被的ELISA板的孔中。图6提供了期望和非期望结果的实例。
图7显示了拆分剂量15％IN/85％IM产生立即实质水平的肺抗体，而且1周时必需存在的预防性水平没有任何降低。先前已经确定了1周时抗体的竞争性水平是1个月时持久水平的可靠指标。在由IN/IM组采集的肺组织中发现的抗体量与在体外检验中中和感染的抗体浓度一致。相反，标准IM给药在1小时时并不产生可检测量的抗体。IM和IN/IM组的肺抗体水平在1周时是相当的。图8显示了6μg/ml的抗体浓度能够在体外阻断大量病毒。
6.5.4.1给药后一小时如图4所示，拆分剂量双途径投递策略导致Synagis Palivizimab在肺组织中的治疗浓度大于6μg/ml澄清肺组织匀浆。相反，标准IM投递Synagis Palivizimab并未导致肺匀浆中任何可检测的抗体。
6.5.4.2给药后一周拆分途径投递策略导致Synagis Palivizimab在肺组织中的浓度大于100ng/ml澄清肺组织匀浆(标准IM投递通常达到的预防性抗体水平)。
双途径策略在肺组织中达到了抗体的治疗水平，而未遭遇较长期预防水平的损失。这都是用标准的FDA批准剂量实现的。可以在相同的时间、以相同的拆分剂量双途径方式给予RSV病特异抗病毒药和消炎药。
6.6病毒攻击在进一步的研究中，发明人证明了15％的IN投递的标准Palivizumab剂量能够消退已有的感染。用1.3×105个噬斑形成单位对小鼠进行攻击。感染后三小时，测试组用单个剂量的Palivizumab(约2.25mg/Kg)进行IN治疗，而对照组接受盐水。感染后三天，采集肺组织并匀浆。将得到的匀浆物分配到Hep-2单层上，并对培养物监测存活病毒的迹象。由每只动物回收得到的总匀浆物体积是约1.5-2ml，而置于每个测试孔中的量是100μl。下表显示了Synagis IN消退了感染，没有观测到噬斑形成单位。
权利要求
1.用于在有所需要的人类受试者中治疗癌症的方法，包括将至少一种治疗剂投递至人类受试者皮肤的真皮内区域，其中与通过真皮内投递以外的途径投递该治疗剂相比，该治疗剂导致肿瘤生长的更大降低。
2.用于在人类受试者中治疗癌症的方法，包括将至少一种治疗剂投递至人类受试者皮肤的真皮内区域，其中与通过真皮内投递以外的其它途径投递该治疗剂相比，该治疗剂导致人类受试者寿命中值的延长。
3.权利要求1或2的方法，其中所述的真皮内投递以外的途径是皮下投递。
4.权利要求1或2的方法，其中所述的真皮内投递以外的途径是肌肉内投递。
5.权利要求1或2的方法，其中所述的真皮内投递以外的途径是静脉内投递。
6.权利要求1或2的方法，其中所述的真皮内投递以外的途径是表皮投递。
7.权利要求1或2的方法，其中癌症选自下组淋巴瘤、白血病、乳癌、黑素瘤、肺癌、肾癌和结肠直肠癌。
8.用于对人类受试者给药至少一种治疗剂的方法，包括将治疗剂投递至人类受试者皮肤的真皮内区域，使得与通过真皮内投递以外的其它途径投递该治疗剂相比，该治疗剂在特定组织中具有更高的组织生物利用度。
9.权利要求8的方法，其中给药治疗剂是为了治疗选自下组的疾病癌、癌转移、肿瘤生长或感染性疾病。
10.为了预防疾病对人类受试者给药至少一种治疗剂的方法，包括将该治疗剂投递至人类受试者皮肤的真皮内区域，使得与通过真皮内投递以外的其它途径投递该治疗剂相比，该治疗剂在特定组织中具有更高的组织生物利用度。
11.权利要求10的方法，其中预防的疾病选自下组癌、癌转移、肿瘤生长或感染性疾病。
12.为了延迟疾病状态的发作或进展对人类受试者给药至少一种治疗剂的方法，包括将治疗剂投递至人类受试者皮肤的真皮内区域，使得与通过真皮内投递以外的其它途径投递该治疗剂相比，该治疗剂在特定组织中具有更高的组织生物利用度。
13.权利要求12的方法，其中疾病状态选自下组癌、癌转移、肿瘤生长或感染性疾病。
14.权利要求1、2、8、10或12的方法，其中治疗剂选自下组抗癌剂、抗肿瘤剂和化学治疗剂。
15.权利要求1、2、8、10或12的方法，其中治疗剂选自下组抗体、疫苗和细胞疗法。
16.权利要求15的方法，其中抗体选自下组预防性抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人抗体、嵌合抗体或抗体片段。
17.权利要求1、2、8、10或12的方法，其中治疗剂选自下组血管发生抑制剂、细胞因子或趋化因子。
18.权利要求17的方法，其中细胞因子是白介素或干扰素。
19.权利要求18的方法，其中白介素是白介素-12。
20.权利要求1、2、8、10或12的方法，其中通过针或套管投递治疗剂。
21.权利要求1、2、8、10或12的方法，其中将针或套管的出口插入至约300um-约3mm的深度。
22.权利要求1、2、8、10或12的方法，其中针或套管的规格是30-36号。
23.权利要求1、2、8、10或12的方法，其中针或套管的规格是31-34号。
24.权利要求1、2、8、10或12的方法，其中使用出口暴露高度0-1mm的至少一个小号空心针投递治疗剂，将所述出口插入皮肤至0.3mm-2mm的深度，使得物质投递发生在0.3mm-2mm的深度。
25.权利要求8、10或12的方法，其中特定组织选自下组淋巴组织、粘膜组织、淋巴结、皮肤组织、生殖组织、子宫颈组织、阴道组织、肺、脾、结肠、胸腺、骨髓、血淋巴样组织和淋巴样组织。
26.权利要求25的方法，其中淋巴样组织选自上皮相关淋巴样组织、粘膜相关淋巴样组织、初级淋巴样组织、次级淋巴样组织。
27.权利要求8、10或12的方法，其中每50μg特定组织中积累了约10pg-约30ng治疗剂。
28.权利要求8、10或12的方法，其中每50μg特定组织中积累了约10pg-约15μg治疗剂。
29.权利要求8、10或12的方法，其中每50μg特定组织中积累了约1cg-约30ng治疗剂。
30.用于在有所需要的人类受试者中治疗癌症的方法，包括以预先选定的剂量将至少一种治疗剂投递至人类受试者皮肤的真皮内区域，其中与通过真皮内投递以外的其它途径投递的剂量相比，该预先选定的剂量减少了至少一半。
31.权利要求30的方法，其中该治疗剂是白介素-12。
32.用于在有所需要的人类受试者中治疗癌症的方法，包括将至少一种治疗剂投递至人类受试者皮肤的真皮内区域，使得与通过真皮内投递以外的其它途径投递相同治疗剂相比，该治疗剂开始作用更快。
33.权利要求32的方法，其中的治疗剂是白介素-12。
全文摘要
本发明涉及用于将一种或多种生物学活性剂(特别是治疗剂)投递至受试者皮肤的真皮内区域的方法和装置。本发明提供了通过真皮内投递到达淋巴脉管系统来投递生物学活性剂(诸如治疗剂)的改进方法。可以依照本发明投递的治疗剂包括但不限于抗肿瘤剂、化学治疗剂、抗体、抗生素、抗血管发生剂、抗炎剂和免疫治疗剂。依照本发明投递的治疗剂具有改进的生物利用度，包括改进的全身分布和改进的特定组织投递。相对于其它药物投递方法(包括腹膜内、肌肉内和皮下投递)，依照本发明方法投递的治疗剂具有改进的临床功效和治疗效果。本发明的方法提供了优于常规药物投递方法的好处和改进，包括节省剂量、提高药物效果、降低副作用、降低转移潜力和延长生存期。
文档编号A61K45/00GK1867337SQ200480029970
公开日2006年11月22日 申请日期2004年6月14日 优先权日2003年8月26日
发明者R·J·佩蒂斯, A·哈维, R·坎普贝尔, J·米克兹塔, J·布里廷汉姆 申请人:贝克顿·迪金森公司