专利名称：：口服共轭亚油酸及其衍生物用于增肌健体与皮肤美容的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及共轭亚油酸(CLA)及其衍生物口服用于增肌、健体、减肥和护肤美容的用途，本发明还涉及共轭亚油酸(CLA)及其衍生物用于动物保健的用途。本发明还涉及有关制剂的制备方法和其他组合物。
背景技术：
：现代社会，由于科学技术的高速发展，机械化电气化、自动化、深入到人类社会的各个领域，使得人们的体力劳动消耗量大幅度降低，包括家庭主妇们每天必不可少的家务劳动，也都被现代化的设备所取代。人们日常的体力消耗量已经下降至半个世纪之前的十分之一还不到。另一方面，随着饮食文化的飞速发展，各种美味食品花样繁多层出不穷，多数人已经不再为能否填饱肚子而发愁，品尝各种美味食品已经成为时尚，单位聚餐、朋友聚会、节假日改善伙食谈生意请客吃饭，探病送营养食品，各种因素促使着人们在不知不觉中吃进过量的食物。现代人由于体力消耗减少，又过分追加营养，造成人体能量代谢失衡，导致高粘血症、高脂血症、糖尿病、高血压、冠心病等一系列现代病。肥胖病便是这些现代病之一。二十一世纪的健康杀手——肥胖病愈来愈引起国际医学界的关注，所以有专家提出肥胖症已和吸烟、艾滋病一起成为威胁人类健康的三大严重问题。近年来，减肥成为一种时尚。但是如何才能健康有效地减肥，同时又能健美？有专家提出了一种新的减肥理念-----营养减肥！即好的减肥方法，优秀的减肥产品，才是健康减肥的唯一途径。选择好的减肥食品，通过均衡的营养，合理的膳食，达到瘦身健美的效果。营养调控减肥，一种新的理念，抛弃沉重的赘肉，重塑自我。“不腹泻、不节食、不乏力”是国际通行的健康减肥三原则。有些减肥药中掺有刺激代谢的药物(有的还是违禁药物，如安非那酮等)，通过排泄消耗人体水分和未来得及消化吸收的食物，达到减轻人体重量的目的。其危害是引起虚脱、腹痛、恶心、呕吐、电解质紊乱、营养不良等后果，虽然也能暂时减重，但减掉的不只是脂肪，还有水、矿物质和蛋白质等重要物质，而且停药后便会反弹增肥。节食减肥的实质就是过度减少能量摄入。其危害和抑制食欲一样，能引起失眠、头晕、恶心、呕吐、营养不良、免疫功能下降。可导致神经性厌食症，重者危及生命。腹泻和节食都会造成乏力。因此需要寻求一种物质，这种物质能通过改善营养分配，达到减肥的目的，并且不产生失眠、头晕、恶心、呕吐、营养不良、免疫功能下降等副作用。同时，改善营养分配的协同效果是增加肌肉组织，增强肌体整体素质，实现健美的体态。国外研究证明，体内共轭亚油酸可能通过减少脂肪沉积和增加脂肪细胞中脂肪的分解来降低身体脂肪。国外有学者指出，共轭亚油酸可能以两种不同的方式抑制脂肪细胞的形成，包括抑制其增殖和抑制其分化。Park等人(ParkY.etal.Effectofconjugatedlinoleicacidonbodycompositioninmice[J].Lipids，1997，32853-858)的实验结果证实了，共轭亚油酸降低老鼠身体脂肪的生理学上的机理包括抑制脂肪细胞中脂肪的储存以及加快骨骼肌中的β氧化和增加骨骼肌重量。West等人发现(WestD.B.Conjugatedlinoleicacidrapidlyreducesbodyfatcontentinmicewithoutaffectingenergyintake[J].Am.J.Physiol.1999；276R1172-R1179.)，与不含共轭亚油酸的对照组相比，用含共轭亚油酸混合物的食物喂养的老鼠其身体脂肪的百分比下降了70％，同时身体中水分、蛋白质和灰分的百分比显著增加。Ha等人的研究发现CLA具有抗癌作用(HaY，etal.Inhibitionofbenz[a]pyrene-inducedmouseforestomachneoplasisbyconjugateddienoicderivativesoflinoleicacid[J].CancerRes.，1990，501097-1101.)，并据此推断CLA为抗氧化剂，之后的CLA抗氧化性能测试表明，CLA具有强于VE的抗氧化性能。有人把CLA同小鼠皮肤癌角质细胞共同培养，结果表明CLA抑制TPA可以诱导产生的PEG2和AA。CLA通过调节细胞膜的磷脂成分，保护细胞膜的磷脂酶不被激活，减少花生四烯酸释放产生PEG2(LiuKL，BeluryMA.ConjugatedlinoleicacidreducesarachidonicacidcontentandPGE2synthesisinmurinekeratinocytes.Cancerletters1998；12715-22)。另有研究发现9z，lle-CLA能特异性结合真皮内过氧化物增殖体激活受体-α(PPAR-α)，促进角质细胞的分化，抑制皮肤肿瘤的癌变(ThuillierP，etal.Activatorsofperoxisomeproliferator-activatedreceptor-αpartiallyinhibitmouseskintumorpromotion.MolecularCarcinogenesis2000；29134-142.。通过测定真皮中成纤维细胞合成的I型原胶原和与其相关联的Derorin蛋白的方式来研究CLA。将CLA和EGCG的不同组合与人体真皮中成纤维细胞共同培养，结果表明，CLA和EGCG单独使用均能提高I型原胶原的含量，并且两者的联合使用具有协同作用。而I型原胶原和与其相关联的Derorin蛋白含量的提高可以平滑皱纹，修复光损伤性皮肤，表现出抗衰老的作用。CLA具有清除自由基和抗脂质过氧化作用(WO0182861Treatmentofskindamageusingconjugatedlinoleicacidandascorbylfattyacidesters)，促进皮肤胶原细胞生长，维持细胞的增殖周期，防止细胞朝衰老、分化方向发展，从而发挥抗衰老，抗炎作用。在US6551602；US2004043963；US6403064；WO0182861专利中公开了CLA在局部用组合物和皮肤美容保健中的用途，如抗皱纹，增强皮肤弹性和厚度，修复光损伤性皮肤，美白作用，以及保湿，营养，抗炎和抗过敏等。在US6300374中公开了共轭亚油酸的锌盐可治疗多种皮肤病，如湿疹、牛皮、皮炎等。这些研究或已公开的专利表明CLA外用可以营养或护理裸露皮肤，我们假设口服的CLA也可以达到皮肤部位发挥同样药理作用。基于上述考虑，本申请人通过实验意外惊人地发现口服共轭亚油酸(CLA)及其衍生物能改善营养分配、减肥增肌、增强免疫能力，同时还具有皮肤营养与美容的作用。
发明内容本发明的目的是将共轭亚油酸(CLA)及其衍生物口服用于增肌、健体、减肥、皮肤营养与护肤美容的用途，尤其用于增肌健体(健美)的用途。本发明还涉及共轭亚油酸(CLA)及其衍生物用于动物保健的用途。本发明还涉及有关制剂的制备方法和其他组合物。实际上，本发明涉及共轭亚油酸(CLA)及其衍生物在制备用于增肌健体和护肤营养、美容用途的口服制剂的应用；如上所述的应用，共轭亚油酸(CLA)及其衍生物口服进入皮肤与肌肉组织，促进其新陈代谢，清除或置换黑色素，达到美白嫩肤之效；或增加肌糖原、肌球蛋白、肌动蛋白和肌红蛋白的含量，促进肌肉细胞生成，达到增加肌肉体积和肌纤维强度的功效；如上所述的制剂，其制剂包括片剂、软胶囊、冲剂、颗粒剂、胶囊剂和丸剂；如上所述的制剂，制剂含有任选的一种或多种常用的具抗氧化生理活性物质；如上所述的CLA及其衍生物，其中CLA包含一种或多种9，11-10，12-和11，13-十八碳二烯酸的顺式和反式形式异构体；CLA衍生物为CLA的乙酯、甘油三酯，钙盐、锌盐以及其他可能的衍生物或盐；如上所述的CLA及其衍生物，其特征在于共轭亚油酸(CLA)及其衍生物的用量为0.01-20％(W/W)；如上所述的制剂，常用的具抗氧化生理活性物质为维生素E或TBHQ或茶多酚或硒(Se)；如上所述的制剂，常用的具抗氧化生理活性物质，除了保护CLA及其衍生物发挥正常生理功能外，还起着协同清除体内自由基的作用，特别针对肌肉增加，肌体活动增强后产生更多的自由基状况，达到清洁肌体内环境的功效。本发明采用了细胞实验和动物实验来研究共轭亚油酸(CLA)及其衍生物减脂增肌，健美体态和营养皮肤的作用。细胞实验采用小鼠3T3-L1脂肪前体细胞。3T3-L1细胞株是小鼠胚胎来源、具有纤维母细胞形态的前脂肪细胞，是目前国际上公认的研究成脂过程的细胞株。在分化诱导刺激下，3T3-L1前体脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞。本研究利用脂肪前体细胞体外培养实验，脂肪前体细胞在加入分化诱导剂的培养液中培养分化。实验设2个试验组，对照组和CLA组。对照组培养液中不加入其他物质培养；CLA组则在培养液中加入CLA(浓度呈梯度变化)，培养至第八天时进行形态学观察，与对照组来比较。结果比较对照组，CLA组的细胞明显多呈纤维状，散见细小油滴，表明对3T3-L1脂肪前体细胞的增殖以及向脂肪细胞的分化有一定抑制作用，提示共轭亚油酸(CLA)具有潜在的减肥、降脂作用。动物实验主要研究了共轭亚油酸(CLA)及其衍生物改善肌体肌肉组成和促进营养物质再分配，实现结实肌肉和肌体肌肉分布均匀的减肥健美的作用，同时还研究了实验动物的皮肤状态。CLA组试验动物明显优于对照组皮肤光泽度好，较少出现因皮肤疾病所致的不正常斑点或肤色。共轭亚油酸(CLA)及其衍生物这些优点，是目前市场上热销的减肥产品所无法比拟的。实验设2个试验组空白对照组与共轭亚油酸钙(共轭亚油酸钙为共轭亚油酸钙盐的存在形式，简称CLA-Ca)组，每个试验组均设2个重复组，每个重复组设5头猪，共20头试验猪(2♀，3♂/重复)。试验猪在试验前均测定体重，确保每个重复组间试验猪体重、体型差异检验不显著。预试期5天，正式试验期64天。CLA-Ca粉按6.7‰的剂量(折合纯CLA-Ca5.0‰)直接添加到对应试验组猪的粉状饲料中，搅拌均匀，每天连续饲喂。生产性能指标测定实验阶段始末记录的猪个体称重，记录每重复组的采食量、计算平均日增重、料肉比、日采食量。活体测膘分级采用B超仪分别于实验阶段的始末在动物试验现场进行活体测膘分级，检测项目包括B超测量背膘厚、眼肌面积，估算胴体瘦肉率。试验结束后，空白组、CLA-Ca组每栏挑选体型中等猪各2头(♀，♂各1头)，共8头，空腹24h后屠宰，按GB8467-87《瘦肉型猪性能测定技术规程》方法进行，测定眼肌面积、背膘厚、肌间脂肪、计算胴体瘦肉率。分割左侧胴体瘦肉、脂肪、皮、骨称重；测定屠宰后45分钟在第13～14肋间测背最长肌的pH值，进行肉色和大理石纹级别评定。实验结果见表1-3结果详见表1-3表1CLA钙对肥育猪增重效果及饲料转化效率的影响表2CLA钙对屠体性状的影响表3CLA钙对胴体性状的影响以上实验表明(1)皮肤状态和肉品质评价试验组皮肤白净红润，被毛整洁发亮，较少出现因皮肤疾病造成的红疹、斑块等异常皮肤现象，显示出CLA对皮肤状态的改进功能；肉品质评价方面，试验组的肉色评分比对照组提高了。(2)身体整体体型和肌肉状态评价体型上，试验组育肥猪身型长，背平直，腹部肌肉结实收缩，臀部肌肉浑圆结实且分布均匀，活动状态强。屠宰分割后可见，试验组育肥猪肌纤维的增粗和纵裂增殖使肌肉的体积增大、重量增加，其表现为肌肉形态得到了改变，故身体整体体型得到良性发展。(3)对增重效果及饲料转化效率的影响与对照组比较，试验组的日增重，平均日采食量和料重比都降低了。(4)屠宰率、胴体性状试验组的后腿比例、胴体瘦肉率、胴体眼肌面积和B超眼肌面积提高了，平均膘厚、B超膘厚和皮脂相对重比对照组下降了。试验组的瘦肉率显著高于对照组。人呼吸氧气进入体内，有一部份转化为活性自由基，会导致细胞衰老，皱纹增多，记忆力减退，削弱免疫系统。因此，摄入抗氧化剂能有效清除活性自由基，延缓机体和皮肤衰老。本发明采用了连苯三酚自氧化法研究共轭亚油酸(CLA)及其衍生物的抗氧化作用。将连苯三酚用稀盐酸配成6mmol/L的溶液。将0.02％的样品加入到4.1mL的pH8.2缓冲液中，混合均匀。取0.1mL的连苯三酚液加到上述混合液中，在紫外分光光度仪上采用时间程序在320nm处连续测量300s，连苯三酚自氧化速率用每分钟其自氧化产物在波长320nm处的吸光度增加量表示。样品对连苯三酚自氧化速率的百分抑制率由式(1-1)计算。结果见表4。式中，为对照组连苯三酚自氧化速率；为加入样品时的连苯三酚自氧化速率。实验结果见表4表4CLA及其乙酯对超氧阴离子的抑制率<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="422">样品抑制率(％)CLACLA乙酯维生素E24.3221.637.21</table></tables>上述结果表明在连苯三酚自氧化体系试验中，相同浓度下本发明的CLA和CLA乙酯具有比维生素E更强的清除超氧阴离子的作用，是一种有效的抗氧化剂。本发明所述的共轭亚油酸(CLA)及其衍生物口服用于减肥增肌和护肤美容的用途，将30例肥胖病人(自愿者)随机分为两组，一组分天服用4.5gCLA，另一组只服不含任何成分的安慰剂。试食3个月后，测定发现，受试者在食用CLA后，腰围、腹围、臀围显著减小，尤以腰围、腹围更明显，人体皮下脂肪厚度也明显减少。统计结果表明，安慰组体重下降率为0％；共轭亚油酸组体重下降率为100％，平均体重下降了12.5％，同时体脂比例显著减少，肌肉比例明显增加，说明受试产品具有减肥与增加肌肉的作用。本发明与现有产品相比具有如下的优点共轭亚油酸(CLA)及其衍生物口服进入皮肤与肌肉组织，促进其新陈代谢，清除或置换黑色素，达到美白嫩肤之效；或增加肌糖原、肌球蛋白、肌动蛋白和肌红蛋白的含量，促进肌肉细胞生成，达到增加肌肉体积和肌纤维强度的功效。具体实施方式下面将描述本发明的几个具体实施方式，但本发明的内容完全不局限于此。实施例1CLA功能调和油(1)取5gCLA与芝麻油、橄榄油或葵花子油混合均匀，配成100g调和油，分装后得成品。食用方式直接作为食用油加入沙拉或其他生、熟食品的调味佐品中。实施例2含共轭亚油酸及其衍生物的功能型食品(1)CLA巧克力取1gCLA与可可浆、可可粉、可可脂、奶粉、食用油脂、砂糖、乳化剂及香料按一定比例混合均匀得100g，用旋转磨辊使其微粒化，并用精磨机精磨后，再用旋转磨辊加工成粉末细片状，过60目的筛，最后用成型机压榨机成型。(2)CLA-Ca糖果将白砂糖放入铝锅中，加水少许，煎熬至挑起即成丝状而不粘时，将温度降至40℃，加入5gCLA钙粉，配成100g，熄火。将糖倒在表面涂过食用油的搪瓷盘中，待稍冷，用刀将糖割成小块即可。(3)制备含CLA的西点糖粉取10gCLA与西点糖粉混合得100g，搅拌，研碎，过60目筛，分装，即得成品。实施例3含共轭亚油酸及其衍生物的营养补品(1)含CLA-Ca的合剂取3gCLA-Ca粉与蔗糖、肌苷、儿茶酚、苯甲酸钠按一定比例混合，用100mL蒸馏水溶解，充分搅拌，使之完全溶解。分装于易拉罐中，即得。服用方法加入牛奶或其他运动型饮料和食品中食用。(2)制备含CLA的泡腾片取5gCLA和枸橼酸、富马酸、碳酸氢钠按一定比例混合均匀，用乙醇制成软材，过60目筛，制粒，所得颗粒于60℃干燥，整粒，加入低取代羟丙基纤维素，硬脂酸镁充分混合均匀得100g，以12mm浅凹冲压片，即得。服用方法加入牛奶或其他运动型饮料和食品中食用。实施例4含共轭亚油酸及其衍生物的保健品和药品原料(1)制备含CLA钙盐的硬胶囊剂取5gCLA钙盐，与维生素E、蔗糖、淀粉按一定比例混合配成100g，粉碎后，过100目筛，装入硬胶囊，即得。(2)制备含CLA的软胶囊剂将明胶、甘油、蒸馏水按40∶12∶48的比例混合配成胶液，将胶液和CLA分别通过滴丸机双孔，按不同速度滴出，在冷却的液体石蜡中进行凝固，三者的用量比例为1.12∶0.9∶0.86。所得的胶丸于20℃左右干燥，即得。服用方法口服，温开水或牛奶送服。(3)共轭亚油酸微囊剂取3gCLA与乙基纤维素，淀粉，滑石粉，硬脂酸甘油，维生素E等按一定比例溶于100ml乙醇中，混合均匀，于喷雾干燥机中喷雾干燥，即得。使用方法作为药物和食品生产原料用。(4)制备含CLA的口腔速溶片取5gCLA与多糖、明胶、多肽，滑石粉，乙醇、着色剂等按一定比例配成混悬液，定量分装于一定模具中，冷冻成固态，再减压升温，通过升华作用除去水分，得到高孔隙率的固体制剂100g。服用方法不需水送服，在口内遇到唾液迅速溶解。(5)制备含CLA的口含片将乳糖、糖粉、17％淀粉浆按一定比例混合均匀，过60目筛，湿颗粒放干燥箱内干燥(60℃-80℃)，得空白颗粒。取5gCLA与空白颗粒混合得100g，用压片机压制成片，即得。服用方法舌下含服。(6)制备含CLA的微囊将乙基纤维素(EC)溶于丙酮中，再加入2gCLA和0.7g滑石粉，搅拌，所得混悬液加入到含有司盘的液体石蜡中，将体系温度逐渐升至35℃，保温搅拌，升温至57℃，搅拌，减压抽滤，所得固体物用正己烷洗涤3次，抽干，干燥，制得100g微囊。(7)制备含CLA乙酯的营养液取2gCLA乙酯与蜂蜜、蔗糖酯、维生素E、硒、蛋白糖、脱氢乙酸钠按一定比例混合，加水至100ml，搅拌均匀，均质，然后装瓶、封口、灭菌后，得成品。实施例5含有共轭亚油酸及其衍生物动物食粮和饲料(1)直接添加入动物食粮和饲料取5gCLA钙粉与95g狗粮或猪饲料混合，搅拌均匀，即得。(2)生产宠物食粮的原料添加剂取0.05gCLA与鸡胸肉、山梨糖醇、红曲米素、维生素E、山梨酸钾、糖精钠、亚硝酸钠按一定比例混合配成100g，将混合物控水去油、冷冻切片、烘干、包装，即得。(3)生产动物饲料的原料添加剂将玉米、豆粕、麸皮，剔除杂质，90℃烘18h，按10∶3∶2的比例进行粗混合，用球蘑机粉碎并通过80目筛，取筛粉95g与5gCLA钙粉混合均匀，分装于洗净棕色瓶中，充氮气，封口后，用1.5兆拉德的剂量进行同位素钴60照射，以便长期保存。权利要求1.共轭亚油酸(CLA)及其衍生物在制备用于增肌健体和护肤营养、美容用途的口服制剂的应用。2.根据权利要求1所述的应用，共轭亚油酸(CLA)及其衍生物口服进入皮肤与肌肉组织，促进其新陈代谢，清除或置换黑色素，达到美白嫩肤之效；或增加肌糖原、肌球蛋白、肌动蛋白和肌红蛋白的含量，促进肌肉细胞生成，达到增加肌肉体积和肌纤维强度的功效。3.根据权利要求1所述的制剂，其制剂包括片剂、软胶囊、冲剂、颗粒剂、胶囊剂和丸剂。4.根据权利要求2或3所述的制剂，制剂含有任选的一种或多种常用的具抗氧化生理活性物质。5.根据权利要求1所述的CLA及其衍生物，其中CLA包含一种或多种9，11-10，12-和11，13-十八碳二烯酸的顺式和反式形式异构体；CLA衍生物为CLA的乙酯、甘油三酯，钙盐、锌盐以及其他可能的衍生物或盐。6.根据权利要求1或5的CLA及其衍生物，其特征在于共轭亚油酸(CLA)及其衍生物的用量为0.01-20％(W/W)。7.根据权利要求4的所述的制剂，常用的具抗氧化生理活性物质为维生素E或TBHQ或茶多酚或硒(Se)。8.根据权利要求7的所述的制剂，常用的具抗氧化生理活性物质，除了保护CLA及其衍生物发挥正常生理功能外，还起着协同清除体内自由基的作用，特别针对肌肉增加，肌体活动增强后产生更多的自由基状况，达到清洁肌体内环境的功效。全文摘要本发明涉及共轭亚油酸(CLA)及其衍生物口服用于增肌健体(健美)、减肥、皮肤营养与皮肤美容的用途，还涉及共轭亚油酸(CLA)及其衍生物用于动物保健的用途。本发明涉及共轭亚油酸(CLA)及其衍生物在制备用于增肌健体和护肤营养、美容用途的口服制剂的应用；制剂包括片剂、软胶囊、冲剂、颗粒剂、胶囊剂和丸剂。本发明的优点是共轭亚油酸(CLA)及其衍生物口服进入皮肤与肌肉组织，促进其新陈代谢，清除或置换黑色素，达到美白嫩肤之效；或增加肌糖原、肌球蛋白、肌动蛋白和肌红蛋白的含量，促进肌肉细胞生成，达到增加肌肉体积和肌纤维强度的功效。文档编号A61P39/00GK1850065SQ200510034419公开日2006年10月25日申请日期2005年4月23日优先权日2005年4月23日发明者杨得坡,曾晓晖,何国瑞申请人:中山市尤利卡天然药物有限公司