专利名称：由通关藤、人参和黄芪制成的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种由人参或其提取物、黄芪或其提取物、通关藤或其提取物制成的药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术：
癌症是一类严重威胁人类生命和健康的疾病。据统计数据显示，我国每年新发现的癌症病人约100万左右，而全球每年夺去大约600万人生命，并把1000万人置于死亡边缘，随着人类生存环境的日益恶化，癌症的发生率呈逐年上升趋势。世界卫生组织预测21世纪癌症将成为人类的“第一杀手”。目前现代医学对癌症的治疗主要是手术治疗配合放、化疗，手术虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝癌细胞的再生与繁殖；放、化疗虽能杀灭癌细胞，但同时也使大量的正常组织细胞受到损害，诱发胃肠反应、骨髓抑制和肝肾、心脏功能损害，使病人的身体更加虚弱，难以进一步治疗。而中医治疗癌症有悠久的历史，形成了自己独特的理论体系和治疗法则。近年来经过广大医疗工作者的工作已证实中医药治疗癌症具有突出的作用，特别是对癌症手术后的康复以及对放化疗的增效减毒方面发挥了重要的作用。
人参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根，性甘、微苦，平，归脾、肺、心经，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功效。人参是长白山区盛产的道地药材之一，以其根部入药，是著名的珍贵药材。主要含有人参多糖、人参皂苷、人参多肽及挥发油、多种氨基酸、脂肪酸及维生素、微量元素等有效成分。主要成分为人参皂苷，量约4％，目前分离得人参皂苷有Ra1～6、Rb1～3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1～3、Rh1～2、Ro等20余种。人参可全面增强机体的免疫功能，其活性成分主要是皂苷和多糖。人参皂苷对多种动物均能增强网状内皮系统对碳粒、细菌、鸡红细胞等的吞噬廓清能力，人参多糖在体外可增强小鼠NK细胞活性，人参多糖和皂苷还可使环磷酰胺所致白细胞数减少，巨噬细胞及体液免疫和细胞免疫功能抑制等恢复正常；人参皂苷和人参多糖均有抗实验性肿瘤作用，人参皂苷的抗肿瘤作用与其诱导癌细胞的再分化作用有关，人参多糖具有直接或间接的抗肿瘤活性，体外细胞毒性试验试验证明人参多糖致敏血清对人和鼠的肿瘤细胞株均有不同程度的杀伤和抑制作用，对体内移植肿瘤也可使其发生明显的出血性坏死，认为其抗肿瘤机制可能是诱生了肿瘤坏死因数TNF-N。
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。甘，温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿脱毒、排脓、敛疮生肌之功效，主要用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄，内热消渴；慢性肾炎蛋白病，糖尿病。主要含有黄芪多糖、黄芪皂苷、黄酮类、生物碱、葡萄糖醛酸及微量元素硒等成分。现药理试验表明黄芪可促进免疫功能，主要有效成分为多糖和皂苷，能显著增加血液中的白细胞总数，促进中性粒细胞及巨噬细胞的吞噬和杀菌能力，能明显促进细胞免疫，促进PHA、ConA及商陆素(PWM)等引起的淋巴细胞转化，提高恶性肿瘤病人淋巴细胞引起的大鼠局部移植物抗宿主反应。黄芪多糖能显著增强小鼠巨噬细胞功能，促进IgM形成，提高PFC的溶血能力，黄芪多糖还能显著延长氢化可的松耗竭的小鼠游泳时间，增加其肾上腺的重量，对小鼠数种缺氧模型均具显著改善作用；能使正常及虚弱小鼠抗寒生存时间延长；对辐射后小鼠的体重、血细胞数及细胞结构有明显保护作用。
通关藤为萝藦科植物通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的干燥藤茎。苦，微寒。其地方名为乌骨藤、通光散、下奶藤、大骨藤等，产于云南和贵州南部，药用藤、叶、茎含甾体苦味酯苷、多糖类、生物碱等。具有抗癌散结，止咳平喘之功效，经试验表明有抗癌作用，另外对肺炎双球菌和流感杆菌有抑制作用。还有对抗组织胺的作用，能缓解因组织胺引起的哮喘。药理研究表明通关藤具有平喘、降压及抑菌等作用，能干扰癌细胞核糖核酸及DNA的合成，阻止癌细胞分裂、繁殖，对多种恶性肿瘤均有良好疗效，尤其对肺癌、食管癌、胃癌、白血病、宫颈癌等多种恶性肿瘤有一定的疗效，亦可配合放疗、化疗和手术后治疗，对心、肝、肾及造血系统均无明显毒副作用。
现代药理学和药效学研究表明通关藤在抗肿瘤、增强免疫力方面具有很好的疗效，目前已有单一有效成分的通关藤注射液(商品名消癌平)上市，但利用人参、黄芪和通关藤的相互作用，配伍组方用于抗肿瘤的应用还未见报道。
发明内容为了满足临床需要，本发明提供了一种新的主要用于抗肿瘤的药物组合物，并提供了其制备方法。
本发明药物组合物的原料药为通关藤、人参、黄芪。经过发明人进行大量摸索总结得出，各组分在下述重量份数范围内都具有较好疗效通关藤2～100份、人参1～200份、黄芪1～200份；优选份数为通关藤10～50份、人参5～100份、黄芪5～100份；最佳份数为通关藤20份、人参40份、黄芪10份。
以上组成是按重量份作为配比的，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。
以上重量份数对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
上述药物组合物中通关藤、人参、黄芪可以用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物。适宜的溶剂是指中药提取常用的溶剂，优选水或醇，尤其是水或乙醇。提取方法可以采用中药提取的一般方法，如浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。
本发明组合物中以总酚酸为主要有效成分的通关藤提取物的制备工艺如下取通关藤药材，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加85％乙醇8倍量，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇8倍量，搅匀，在4℃放置48小时，滤过，滤液同收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.09～1.12，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的通关藤提取物中总酚酸的含量不低于20％，提取物得率为0.5～2％。
除采用上述方法外，还可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法方法一取通关藤药材，加水煎煮二次，每次2小时，每次加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.08～1.11，真空干燥即得。通过本工艺制备的通关藤提取物得率为5～8％，总酚酸的含量不低于10％。
方法二取通关藤药材，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加70％乙醇10倍量，搅匀，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加80％乙醇8倍量，搅匀，冷藏放置48小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.12，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的通关藤提取物得率为2～5％，总酚酸的含量不低于15％。
本发明组合物中以总皂苷为主要有效成分的人参提取物的制备工艺如下取人参药材，粉碎成细粒，乙醇回流提取二次，每次3小时，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2V～3V柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备得到的人参总皂苷提取物得率为0.5～2％，人参总皂苷含量不低于50％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量和不低于30％。
除采用上述方法外，也可通过文献方法制备，也可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法方法一取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取二次，每次4小时，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水稀释至相对密度为1.15～1.20，加1/2倍量水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物得率为4～5％，人参总皂苷含量不低于35％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量和不低于20％。
方法二取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次为8、8倍量，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液加1/2倍量水饱和正丁醇提取3次减压浓缩，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物得率为3～5％，人参总皂苷含量为不低于40％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量和不少于20％。
本发明组合物中以多糖为主要有效成分的人参提取物的制备工艺如下取生晒参，切碎，用75％乙醇，回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。通过本工艺制备的人参多糖提取物中人参多糖的含量不低于50％，提取物得率为0.5～2％。
除采用上述方法外，也可通过文献方法(如CN200410000209)制备，还可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法方法一取人参，切碎，加水回流提取3次，每次2小时，第一次加水10倍量，二、三次为8、8倍量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.6～1.24，过大孔树脂柱，收集流出液，减压浓缩至稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参提取物，得率为4～6％，人参多糖的含量不低于40％。
方法二取人参，切碎，用80％乙醇，回流提取3小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5小时，加水10倍量，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.20，过大孔树脂，流出液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物，得率为2～4％，人参多糖含量不低于45％。
本发明组合物中以总皂苷为主要有效成分的黄芪提取物的制备工艺加下取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，第一次加水10倍量，二、三次均为8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，先用2倍体积的水冲柱，再用4倍体积的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪总皂苷提取物得率为0.5～2％，总皂苷含量不低于50％，黄芪甲苷含量不低于2.0％。
除采用上述方法外，也可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法方法一取黄芪，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为60％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为3～5％，总皂苷含量不低于30％，黄芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黄芪，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理1次使含乙醇量为60％，冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，并减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为2～4％，总皂苷含量为不低于40％，黄芪甲苷含量不低于1％。
本发明组合物中以多糖为主要有效成分的黄芪提取物的制备工艺加下取黄芪药材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。通过本工艺制备的黄芪提取物中黄芪总多糖的含量不低于50％，提取物得率为0.5～2％。
除采用上述方法外，也可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法方法一取黄芪药材，加水回流提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.23，加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，沉淀加水溶解，滤过，再加乙醇使含醇量达85％，静置24小时，滤过，收集沉淀，真空干燥即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为2～4％，黄芪多糖含量不低于40％。
方法二取黄芪药材，加10倍量80％乙醇提取4小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，每次2小时，每次加水10倍量，提取液合并，过滤，滤液加乙醇使含醇量达85％，过滤，滤液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的黄芪提取物得率为3～4％，黄芪多糖含量不低于35％。
本发明组合物除可用上述的药材为原料制得外，还可由通关藤、人参、黄芪的提取物直接投料制成，其主要有效成分分别为通关藤总酚酸、人参多糖或皂苷、黄芪多糖或皂苷，其中的通关藤提取物含通关藤总酚酸不低于20％；人参提取物含人参多糖最好不低于50％，或者含人参总皂苷最好不低于50％，其中的人参皂苷Re和人参皂苷Rg1的总含量不低于30％；黄芪提取物含黄芪多糖最好不低于50％，或者含黄芪总皂苷最好不低于50％，黄芪总皂苷中黄芪甲苷含量不低于2.0％。按照提取物相对于药材的得率计算，本发明组合物可以有以下4种不同配比，按重量份数比分别为配比1通关藤提取物1～200份、人参多糖1～400份、黄芪多糖1～400份，优选份数为5～100份、2～200份、2～200份，最优份数为10～40份、10～100份、10～100份；配比2通关藤提取物1～200份、人参皂苷1～400份、黄芪多糖1～400份，优选份数为5～100份、2～200份、2～200份，最优份数为10～40份、10～100份、10～100份；配比3通关藤提取物1～200份、人参多糖1～400份、黄芪皂苷1～400份，优选份数为5～100份、2～200份、2～200份，最优份数为10～40份、10～100份、10～100份；配比4通关藤提取物1～200份、人参皂苷1～400份、黄芪皂苷1～400份，优选份数为5～100份、2～200份、2～200份，最优份数为10～40份、10～100份、10～100份。
上述不同配比的组合物，总提取物中主要有效成分的总含量最好不低于50％。
上述药物组合物，可以制成任一临床上或药学上可接受的剂型，如注射剂、口服常释剂型、缓释控释剂型、颗粒剂、丸剂、口服液体剂、滴眼剂、滴鼻剂、滴耳剂、吸入剂、栓剂、软膏剂等。本发明药物组合物优选剂型为注射剂或口服制剂。
本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入吐温-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸纳、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。
上述药物组合物，具有抗肝损害、抗感染、抗肿瘤、解毒、抗菌和增强机体免疫力等作用。
本发明的优点在于1.提供了一种新的抗癌中药复方，满足了临床急需。
2.对通关藤、人参和黄芪的相互作用和配伍组方进行了药理学研究，结果表明本发明组合物对气虚型大鼠肝肿瘤有明显的抑制作用并可显著延长大鼠的生存天数，对SGC-7901胃癌细胞的生长也有明显的抑制作用，可明显降低小鼠U14腹水癌细胞体积和数目，且其作用与单用通关藤、人参和黄芪相比效果极为显著(p＜0.01)，表明通关藤、人参和黄芪三者有协同增效的作用。同时，三者配伍用药可以减轻化学用药后剧烈的毒副反应，提高了病人的生存质量。
3.通过本发明组合物不同配比对小鼠S180肿瘤生长抑制作用的药效学研究，筛选出了本发明组合物的优选配比。
4.本发明组合物既可由通关藤、人参和黄芪药材投料制得，也可由通关藤提取物、人参提取物和黄芪提取物直接投料，满足了大生产的需要。
5.对本发明组合物提取物主要有效成分的含量和总含量分别进行了限定，便于控制产品的质量。
6.对本发明组合物进行了急性毒性试验，结果表明本发明组合物毒性小，安全范围大。
7.对本发明药物组合物进行的稳定性试验结果表明各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全。
8.通关藤、人参和黄芪临床用药疗效确切，三者合并用药后用药量减少，具有广阔的应用前景。
以下试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括本发明药物组合物的药效学试验，本发明药物组合物以下简称组合物。以下试验例中通关藤根据实施例1制得通关藤提取物，人参根据实施例2制得人参总皂苷和和人参多糖，黄芪根据实施例3制得黄芪总皂苷和黄芪多糖。通关藤提取物、人参多糖和黄芪多糖组合物简称TRH1组，通关藤提取物、人参皂苷和黄芪多糖组合物简称TRH2组，通关藤提取物、人参多糖和黄芪皂苷组合物简称TRH3组，通关藤提取物、人参皂苷和黄芪皂苷组合物简称TRH4组。
试验例1 药效学试验—组合物对小鼠S180肿瘤生长抑制作用供试品 对照组氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)通关藤组消癌平注射液(通化神源药业有限公司)2ml相当于通关藤药材10g。
人参总皂苷组人参总皂苷注射液，自制，2ml相当于人参药材1g。
人参多糖组人参多糖注射液，自制，2ml相当于人参药材4g。
黄芪总皂苷组黄芪总皂苷注射液，自制，2ml相当于黄芪药材3g。
黄芪多糖组黄芪多糖注射液，自制，2ml相当于黄芪药材4g组合物组
TRH1组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方1的制备)；TRH2组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方2的制备)；TRH3组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方3的制备)；TRH4组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方4的制备)。
受试动物 健康小鼠260只，体重16～20g，雌雄各半，每组10只。
瘤株 小鼠S180试验方法 取接种传代小鼠S180，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠S180瘤匀浆液，再以生理盐水1∶3稀释，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小时称重，小鼠每日灌胃给药一次，给药容积相同(0.5ml/只)，共7天。停药次日处死小鼠，称体重并细心剥离皮下瘤块，于EM50电子天平称取瘤重，并计算抑瘤率。
表1 组合物对小鼠S180肿瘤生长抑制作用(x±s，n＝10)
注与生理盐水对照组相比*p＜0.05，**p＜0.01；与通关藤组相比，#p＜0.01
试验结果与结论 由表1结果可以看出，与生理盐水对照组相比TRH1(通关藤提取物+人参多糖+黄芪多糖)组、TRH2(通关藤提取物+人参皂苷+黄芪多糖)组、TRH3(通关藤提取物+人参多糖+黄芪皂苷)组、TRH4(通关藤提取物+人参皂苷+黄芪皂苷)组、消癌平注射液对小鼠S180瘤体均有显著抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)，人参总皂苷组、人参多糖组、黄芪皂苷组和黄芪多糖组虽然对小鼠S180瘤体也有抑制作用，但效果不明显。与通关藤组相比，组合物中通关藤、人参、黄芪的配比在(1～5g)∶(0.5～10g)∶(0.5～10g)时作用差异极为显著(p＜0.01)，其中通关藤2g∶人参4g∶黄芪1g时效果最好。
试验例2 组合物对气虚型大鼠肝肿瘤抑制作用供试品 对照组氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)通关藤组消癌平注射液(通化神源药业有限公司)2ml相当于通关藤药材10g组合物组TRH1组、TRH2组、TRH3组、TRH4组，自制，制备方法分别参见实施例5水针剂处方1、2、3、4的制备。
受试动物 大鼠140只，体重150～180g，每组10只，制成气虚模型。
方法 取大鼠作W256的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a×b2)/2＝V(肿瘤体积)。分离胃、十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远程，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃、十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按试验分组分别注入受试药物，术后拔管结扎胃、十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续饲养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积。
表2 组合物对大鼠肝肿瘤的影响(x±s，n＝10)
注与生理盐水对照组相比*p＜0.05，**p＜0.01；与通关藤组相比，#p＜0.01
按上述方法，再进行试验，观察大鼠存活天数。
表3 大鼠存活天数比较
注与生理盐水对照组相比*p＜0.05，**p＜0.01；与通关藤组相比，#p＜0.01试验结果与结论 由表2结果可以看出，与生理盐水对照组相比给药后各组肝肿瘤体积明显降低，体积变化率增大(p＜0.05，p＜0.01)；表3结果表明给药后存活天数变长(p＜0.05，p＜0.01)。且TRH1(通关藤提取物+人参多糖+黄芪多糖)组、TRH2(通关藤提取物+人参皂苷+黄芪多糖)组、TRH3(通关藤提取物+人参多糖+黄芪皂苷)组、TRH4(通关藤提取物+人参皂苷+黄芪皂苷)组效果均显著优于通关藤组(p＜0.01)，提示三药有协同增效的作用。
试验例3 组合物对SGC-7901胃癌细胞的生长抑制作用供试品 对照组氯化钠注射液，山东华信制药有限公司通关藤组消癌平注射液(通化神源药业有限公司)2ml相当于通关藤药材10g组合物组TRH1组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方1的制备)；TRH2组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方2的制备)；TRH3组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方3的制备)；TRH4组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方4的制备)。
细胞 人胃癌细胞株SGC-7901细胞培养 取对数生长期SGC-7901细胞，以0.25％的胰蛋白酶消化后用PBS(pH7.2)洗涤3次，在用含体积份数为10.00％的小牛血清RPMI-1640培养液将细胞终浓度调至2×108/L，接种到96孔或6孔板中。随机分为对照组加等剂量的无血清的RPMI-1640培养液；通关藤组终浓度为10mmol/L；TRH1、TRH2、TRH3、TRH4组终浓度均为10mmol/L。
方法 选择对数生长期胃癌细胞，调整细胞数为2×108/L接种于96孔培养板，每孔100ul，另设不加细胞的培养液为本底，24h后，试验组分别给予终浓度为通关藤组400mg/ml，TRH1、TRH2、TRH3、TRH4组500mg/ml，未加药物的细胞作为空白对照。每个浓度设6个复孔，于24、48、72和96小时后，每孔分别加入5g/L的MTT20ul，37℃孵育4h，弃上清，每孔加入150ulDMSO，振荡，使结晶溶解。平板摇床微振荡20min后，用酶标仪在波长490nm处测每孔吸光度(A)重复3次，计算细胞生长抑制率(％)＝〔1-(药物组-本底值)/(对照组A-本底值)〕×100.00％表4 组合物对SGC-7901胃癌细胞的生长抑制作用
注与生理盐水对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01；与通关藤组相比，#p＜0.01试验结果与结论 由表4结果可知，与生理盐水对照组相比通关藤组和TRH1(通关藤提取物+人参多糖+黄芪多糖)组、TRH2(通关藤提取物+人参皂苷+黄芪多糖)组、TRH3(通关藤提取物+人参多糖+黄芪皂苷)组、TRH4(通关藤提取物+人参皂苷+黄芪皂苷)各组注射液对SGC-7901胃癌细胞的生长均有抑制作用，而TRH1、TRH2、TRH3、TRH4注射液组与通关藤组相比作用更为显著(p＜0.01)，提示三药有协同增效的作用。
试验例4 组合物对小鼠U14腹水癌细胞增殖的影响供试品 对照组氯化钠注射液，山东华信制药有限公司通关藤组消癌平注射液(通化神源药业有限公司)2ml相当于通关藤药材10g组合物组TRH1组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方1的制备)；TRH2组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方2的制备)；TRH3组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方3的制备)；TRH4组自制(制备方法参见实施例5水针剂处方4的制备)。
受试动物 小鼠140只，体重22～28g，随即分为5组，每组10只癌株 U14腹水癌细胞株方法 小鼠腹腔一次接种1×107细胞/只，于接种后第3天随机分成5组，即对照组、通关藤组、RHT1三个剂量组、RHT2三个剂量组、RHT3三个剂量组、RHT4三个剂量组，并开始腹腔注射给药或等体积的生理盐水0.2ml只，每天一次，连续3天。于给药第3天9小时、4天9小时、5天9小时分别将动物放血处死.剪开腹腔以生理盐水冲洗收集腹水癌细胞洗液约5ml左右。以1200转/分低温离心洗涤二次，计癌细胞体积；然后用冷生理盐水定容至5rrd。取20ul稀释进行癌细胞计数。
表5 组合物对小鼠U14腹水癌细胞增殖的影响
结果及结论由表5结果可知，与生理盐水对照组相比给药后各组小鼠的癌细胞体积和数量均降低。表明TRH1(通关藤提取物+人参多糖+黄芪多糖)组、TRH2(通关藤提取物+人参皂苷+黄芪多糖)组、TRH3(通关藤提取物+人参多糖+黄芪皂苷)组、TRH4(通关藤提取物+人参皂苷+黄芪皂苷)组、三个剂量组和通关藤组均能抑制小鼠U14腹水癌细胞的增殖，而TRH1、TRH2、TRH3、TRH4组疗消明显优于单用通关藤，提示三药有协同增效的作用。
试验例5 小鼠注射给药急性毒性试验(1)试验方法供试品组合物注射液，来源于实施例5，规格2ml。
受试动物小鼠，每组雌雄各60只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。
给药途径静脉注射、腹腔注射。
观察专案死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死剂量。
(2)试验结果按照急性毒性试验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行日最大给药量试验。给药剂量尾静脉注射0.1ml/10g，腹腔注射0.1ml/10g，一日2次。
死亡数未出现死亡。
一般状态未见异常变化。
体重于给药前1天，给药日，给药后2、4、6、8、10、12、14天测量；未见异常变化。
剖检心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。
(3)结论本实验中未出现死亡，组合物注射液对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量为0.2ml/10g，相当于70kg体重人日最大用量10ml的140倍。表明本品低毒，安全性高。
试验例6 组合物注射液稳定性试验供试品TRH注射液，来源于实施例5，规格2ml。
考察项目性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量；并在加速试验6个月和长期试验期末增加无菌和热原检查。
1、影响因素试验强光照射试验取供试品，置照度为4500Lx的光照箱内放置10天。
高温试验取供试品，分别置于40℃、60℃条件下放置10天。
低温试验取供试品，在4℃冰箱中放置10天。
上述试验，分别于第5、10天取样测定。比较性状后测试各项指标，并将结果与0天比较。
结果光照4500Lx条件下放置10天，除有关物质略有升高外，其它各项指标均无明显变化。高温60℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。高温40℃、低温4℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。
2、加速试验方法置温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在试验期间分别于第1个月、2个月、3个月、6个月末取样，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在6个月末增加无菌和热原检查。
结果温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，除有关物质略有增加，标示含量略有下降外，其它各项指标均无明显变化，加速试验6个月末，热原、无菌检查均符合规定。
3、长期试验方法置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在18个月末增加无菌和热原检查。
结果温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月，各项指标均无明显变化，长期试验18个月末，热原、无菌检查均符合规定。
结论由上述考察结果得出结论，各项试验中，组合物注射液均比较稳定。
综上所述，本发明提供的通关藤、人参与黄芪组合物具有协同增效作用，明显优于通关藤、人参或黄芪单独给药的药效。对组合物注射液进行的稳定性试验结果表明，本发明提供的组合物制成的注射剂的各项指标均比较稳定，可以用于放大生产。
具体实施方式以下通过实施例来进一步阐述本发明药物组合物的制备方法，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。
以下实施例4～6中的通关藤提取物、人参多糖、人参总皂苷和黄芪多糖、黄芪总皂苷来源于实施例1、2、3中通关藤提取物、人参多糖、人参总皂苷和黄芪多糖、黄芪总皂苷三批提取物中的第三批。以下实施例7～11中的通关藤提取物、人参多糖、人参总皂苷和黄芪多糖、黄芪总皂苷来源于实施例1、2、3中通关藤提取物、人参多糖、人参总皂苷和黄芪多糖、黄芪总皂苷三批提取物中的第一批。
实施例1 通关藤提取物的制备取通关藤药材30kg，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加85％乙醇8倍量，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇8倍量，搅匀，在4℃放置48小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.09～1.12，喷雾干燥，即得。
分别制备三批提取物，提取物得率和含量见下表6。
通关藤提取物的含量测定对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品50mg，加乙醇25ml，摇匀，取2ml，加乙醇至25ml，摇匀，即得。
测定法 精密吸取供试品溶液、对照品溶液、乙醇各2ml，分别置25ml具塞刻度试管中，加无水乙醇至5ml，再分别精密加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml、0.5％铁氰化钾-1％三氯化铁(1∶1)混合溶液2ml，摇匀，暗处放置5分钟，加0.1mol/L盐酸溶液至25ml，摇匀，暗处放置20分钟，以上述乙醇管为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，分别在764nm的波长处测定吸收度，计算，即得。
通关藤提取物的鉴别取本品50mg，加水20ml使溶解，加浓氨试液1ml，用氯仿振摇洗涤2次，每次20ml，弃去氯仿层，水层再用正丁醇振摇洗涤2次，每次15ml，弃去正丁醇层，取水层浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，放置，取上清液作为供试品溶液。另取通关藤对照药材2g，加水50ml，浸泡放置24小时，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿—丙酮—甲酸(15∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
表6 三批通关藤提取物得率和含量测定结果
实施例2 人参提取物的制备人参总皂苷的制备取人参药材40kg，粉碎成细粒，加8倍量乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2V～3V柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
分别制得三批人参总皂苷提取物，提取物得率和含量见下表7。
人参总皂苷的含量测定对照品溶液制备取人参皂甙Rg1对照品约10mg，经60℃真空干燥2小时，精密称定，置100ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml含Rg1对照品0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液制备精密称取本品50mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 精密量取供试品溶液和对照品溶液各1ml，分别置10ml具塞试管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保温15分钟，冷却至室温，加冰醋酸5ml，摇匀；同时作空白对照。照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VB)，在560nm波长处测定吸收度，计算，即得。
人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量测定色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水(22∶78)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。
供试品溶液的制备 取本品0.2g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇30ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法 分别精密吸取对照品和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
人参总皂苷的鉴别取本品0.5g，加水0.5ml搅拌润湿，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Re、Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
表7 三批人参总皂苷提取物得率和含量测定结果
人参多糖的制备取生晒参10kg，切碎，用75％乙醇，回流提取4°小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。
分别制得三批人参多糖提取物，提取物得滤和含量见下表8。
人参多糖的含量测定对照品溶液的制备 精密称取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸约100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 精密量取对照品溶液、供试品溶液和水各1ml，分别精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加热30分钟，放冷，再分别精密加入0.125％咔唑无水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加热10分钟，放冷至室温，照分光光度法试验，在530nm波长处测定吸收度，计算，即得。
人参多糖的鉴别(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节PH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
表8 人参多糖提取物得率和含量测定结果
实施例3 黄芪提取物的制备黄芪总皂苷的制备取黄芪40kg，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，用注射用水稀释至每1ml相当于原药材1g，冷藏放置12小时，滤过，滤液减压浓缩、真空干燥，即得。
分别制得三批黄芪总皂苷提取物，提取物得率和含量结果见下表9。
黄芪总皂苷鉴别试验鉴别试验一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。
鉴别试验二 取本品0.01g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液加0.3％氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙脂15ml振摇提取，分取乙酸乙脂液，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙脂1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇(10∶1)作为展开剂，展开，取出，凉干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
黄芪总皂苷含量测定总皂苷的含量测定对照品溶液的制备 精密称取于105℃干燥至恒重的黄芪甲苷对照品约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芪甲苷干品0.1mg)。
供试品溶液的制备 取本品0.1g，精密称定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次10ml，弃去水液，正丁醇至水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 精密量取对照品溶液、供试品溶液各1ml，置25ml钠氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鲜配制的5％香草醛—冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中显色15分钟，取出，立即置冰浴中冷却至室温，加入8ml冰醋酸，摇匀，在538nm波长处测定吸光度，计算，即得。
黄芪甲苷的含量测定色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈—水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。
对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品0.04g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得。
表9 三批黄芪总皂苷提取物含量和得率
黄芪多糖的制备取黄芪药材30kg，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小时，提取液弃去，取药渣加水提取二次，提取液合并，浓缩至提取液体积与生药材的比例为1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量达到70％，过滤，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗涤，再用适量水溶解，过滤，滤液过大孔树脂，用水洗脱，收集水洗液，将水洗液浓缩至药液体积与药材比例为1∶2.5，加入乙醇使含醇量达到70％，得沉淀，将沉淀用95％乙醇和丙酮洗涤脱水，减压干燥(60℃)，即得。
分别制得三批黄芪多糖提取物，提取物得率和含量结果见下表10。
表10 三批黄芪多糖提取物含量和得率
黄芪多糖含量测定标准溶液的制备 称取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。
标准曲线绘制 精密量取标准溶液0.1ml～0.6ml共6份，分别置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，铝片0.3g，碳酸氢钠0.15g，混合蒸馏，收集182℃馏分，配制成5％水溶液)1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温，另以2.0ml水同上平行操作作为空白对照，在490nm波长处测定吸收值，计算回归方程。
测定方法 取黄芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法自“加水至2.0ml”起，依法测定吸收值，依回归方程计算多糖的含量。
黄芪多糖的鉴别(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节PH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。
(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显紫红色环。
实施例4 本发明组合物粉针剂的制备处方
处方1通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参多糖 75.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖 18.7g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯8050g甘露醇200g无菌注射用水 加至2000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为50.47％。
处方2通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 78.8g(相当于人参4kg)黄芪多糖 18.7g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯8050g甘露醇200g无菌注射用水 加至2000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为50.04％。
处方3通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参多糖 75.kg(相当于人参4kg)黄芪皂苷 5.4g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯8050g甘露醇200g无菌注射用水 加至2000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为53.38％。
处方4通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 78.8g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 5.4g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯8050g甘露醇200g无菌注射用水 加至2000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为51.42％。
制备工艺1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将通关藤提取物、人参多糖、黄芪多糖，或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪多糖，或者将通关藤提取物、人参多糖、黄芪皂苷，或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪皂苷，和甘露醇加入配液量30％无菌注射用水中加热搅拌溶解完全。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.22um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例5 本发明组合物水针剂的制备处方处方1通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参多糖 75.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖 18.7g(相当于黄芪1kg)丙二醇500ml注射用水 加至2000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为50.47％。
处方2通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 78.8g(相当于人参4kg)黄芪多糖 18.7g(相当于黄芪1kg)丙二醇500ml注射用水 加至2000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为50.04％。
处方3通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参多糖 75.6g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 5.4g(相当于黄芪1kg)丙二醇500ml注射用水 加至2000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为53.38％。
处方4通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 78.8g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 5.4g(相当于黄芪1kg)丙二醇500ml注射用水 加至2000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为51.42％。
制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将通关藤提取物、人参多糖和黄芪多糖加入配液量20％的注射用水和丙二醇中加热搅拌溶解完全；或者将通关藤提取物、人参皂苷和黄芪多糖加入配液量20％的注射用水和丙二醇中加热搅拌溶解完全；或者将通关藤提取物、人参多糖和黄芪皂苷加入配液量20％的注射用水和丙二醇中加热搅拌溶解完全；或者将通关藤提取物、人参皂苷和黄芪皂苷加入配液量20％的注射用水和丙二醇中加热搅拌溶解完全。
3)补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例6 本发明组合物输液的制备氯化钠输液处方处方1通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参多糖 75.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖 18.7g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯 8050g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为50.47％。
处方2通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 78.8g(相当于人参4kg)黄芪多糖 18.7g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯 8050g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为50.04％。
处方3通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参多糖 75.6g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 5.4g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯80 50g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为53.38％。
处方4通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 78.8g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 5.4g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯80 50g氯化钠 900g注射用水 加至100000ml共制备 1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为51.42％。
制备工艺1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将通关藤提取物、人参多糖、黄芪多糖加入配液量20％注射用水加热搅拌溶解完全，将氯化钠用配液量20％的注射用水溶解完全，聚山梨酯80加20％的无菌注射用水后制成水溶液；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪多糖加入配液量20％注射用水加热搅拌溶解完全，将氯化钠用配液量20％的注射用水溶解完全，聚山梨酯80加20％的无菌注射用水后制成水溶液；或者将通关藤提取物、人参多糖、黄芪皂苷加入配液量20％注射用水加热搅拌溶解完全，将氯化钠用配液量20％的注射用水溶解完全，聚山梨酯80加20％的无菌注射用水后制成水溶液；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪皂苷加入配液量20％注射用水加热搅拌溶解完全，将氯化钠用配液量20％的注射用水溶解完全，聚山梨酯80加20％的无菌注射用水后制成水溶液。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
葡萄糖输液处方
处方1通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参多糖 75.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖 18.7g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为50.47％。
处方2通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 78.8g(相当于人参4kg)黄芪多糖 18.7g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为50.04％。
处方3通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参多糖 75.6g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 5.4g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为53.38％。
处方4通关藤提取物 23.4g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 78.8g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 5.4g(相当于黄芪1kg)聚山梨酯8050g氯化钠900g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为51.42％。
制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将通关藤提取物、人参多糖、黄芪多糖和聚山梨酯80加入配液量20％注射用水中加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪多糖和聚山梨酯80加入配液量20％注射用水中加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟；或者将通关藤提取物、人参多糖、黄芪皂苷和聚山梨酯80加入配液量20％注射用水中加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪皂苷和聚山梨酯80加入配液量20％注射用水中加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例7 本发明组合物片剂的制备处方处方1通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖48.4g(相当于人参4kg)黄芪多糖5.5g(相当于黄芪1kg)预胶化淀粉 40.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g羧甲淀粉钠 12.0g共制备 1000片注总提取物中主要有效成分的总含量为52.31％。
处方2通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷19.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖5.5g(相当于黄芪1kg)预胶化淀粉 40.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g羧甲淀粉钠 12.0g共制备 1000片注总提取物中主要有效成分的总含量为50.23％。
处方3通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖48.4g(相当于人参4kg)黄芪皂苷20.2g(相当于黄芪1kg)预胶化淀粉 40.0g微晶纤维素 40.0g
2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 2.0g羧甲淀粉钠 12.0g共制备 1000片注总提取物中主要有效成分的总含量为55.61％。
处方4通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 19.6g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 20.2g(相当于黄芪1kg)预胶化淀粉 40.0g微晶纤维素 40.0g2％HPMC水溶液适量硬脂酸镁 2.0g羧甲淀粉钠 12.0g共制备 1000瓶注总提取物中主要有效成分的总含量为50.31％。
制备工艺1)将通关藤提取物、人参多糖、人参总皂苷和黄芪多糖、黄芪总皂苷粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将通关藤提取物、人参多糖、黄芪多糖、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪多糖、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤提取物、人参多糖、黄芪皂苷、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪皂苷、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例8 本发明组合物胶囊剂的制备处方
处方1通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖48.4g(相当于人参4kg)黄芪多糖5.5g(相当于黄芪1kg)淀粉20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g共制备 1000粒注总提取物中主要有效成分的总含量为52.31％。
处方2通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷19.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖5.5g(相当于黄芪1kg)淀粉20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g共制备 1000粒注总提取物中主要有效成分的总含量为50.23％。
处方3通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖48.4g(相当于人参4kg)黄芪皂苷20.2g(相当于黄芪1kg)淀粉20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g共制备 1000粒注总提取物中主要有效成分的总含量为55.61％。
处方4通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷19.6g(相当于人参4kg)黄芪皂苷20.2g(相当于黄芪1kg)淀粉20.0g微晶纤维素 60.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁2.0g共制备 1000粒注总提取物中主要有效成分的总含量为50.31％。
制备工艺1)将通关藤提取物、人参多糖、人参总皂苷和黄芪多糖、黄芪总皂苷粉碎过100目筛备用。。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将通关藤取物、人参多糖、黄芪多糖、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤取物、人参皂苷、黄芪多糖、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤取物、人参多糖、黄芪皂苷、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤取物、人参皂苷、黄芪皂苷、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例9 本发明组合物颗粒剂的制备处方处方1通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖 48.4g(相当于人参4kg)黄芪多糖 5.5g(相当于黄芪1kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液适量共制备 1000包注总提取物中主要有效成分的总含量为52.31％。
处方2通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 19.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖 5.5g(相当于黄芪1kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液适量共制备 1000包注总提取物中主要有效成分的总含量为50.23％。
处方3通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖 48.4g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 20.2g(相当于黄芪1kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液适量共制备 1000包注总提取物中主要有效成分的总含量为55.61％。
处方4通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 19.6g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 20.2g(相当于黄芪1kg)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液适量共制备 1000包注总提取物中主要有效成分的总含量为50.31％。
制备工艺1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将通关藤提取物、人参多糖、人参总皂苷和黄芪多糖、黄芪总皂苷粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将通关藤提取物、人参多糖、黄芪多糖与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪多糖与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤提取物、人参多糖、黄芪皂苷与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪皂苷与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
8)包装，成品全检，包装入库。
实施例10 本发明组合物软胶囊剂的制备处方处方1通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖 48.4g(相当于人参4kg)黄芪多糖5.5g(相当于黄芪1kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂 500g蜂蜡 500g共制备 1000粒注总提取物中主要有效成分的总含量为52.31％。
处方2通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷19.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖5.5g(相当于黄芪1kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蜡500g共制备 1000粒注总提取物中主要有效成分的总含量为50.23％。
处方3通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷48.4g(相当于人参4kg)黄芪多糖20.2g(相当于黄芪1kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蜡500g共制备 1000粒注总提取物中主要有效成分的总含量为55.61％。
处方4通关藤提取物40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷19.6g(相当于人参4kg)黄芪皂苷20.2g(相当于黄芪1kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蜡500g共制备 1000粒注总提取物中主要有效成分的总含量为50.31％。
制备工艺1)将处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷，2)加入通关藤提取物、人参多糖、黄芪多糖研匀，压制成软胶囊即可；或者加入通关藤提取物、人参皂苷、黄芪多糖研匀，压制成软胶囊即可；或者加入通关藤提取物、人参多糖、黄芪皂苷研匀，压制成软胶囊即可；或者加入通关藤提取物、人参皂苷、黄芪皂苷研匀，压制成软胶囊即可。
实施例11 本发明组合物口服液的制备处方处方1通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖 48.4g(相当于人参4kg)黄芪多糖 5.5g(相当于黄芪1kg)尼泊金甲酯 1.0g甜菊甙 10g纯化水 加至10000ml共制备 1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为52.31％。
处方2通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 19.6g(相当于人参4kg)黄芪多糖 5.5g(相当于黄芪1kg)尼泊金甲酯 1.0g甜菊甙 10g纯化水 加至10000ml共制备 1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为50.23％。
处方3通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参多糖 48.4g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 20.2g(相当于黄芪1kg)尼泊金甲酯1.0g甜菊甙10g纯化水加至10000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为55.61％。
处方4通关藤提取物 40.2g(相当于通关藤2kg)人参皂苷 19.6g(相当于人参4kg)黄芪皂苷 20.2g(相当于黄芪1kg)尼泊金甲酯1.0g甜菊甙10g纯化水加至10000ml共制备1000支注总提取物中主要有效成分的总含量为50.31％。
制备工艺1)将通关藤提取物、人参多糖、黄芪多糖加入配液量50％的纯化水中加热搅拌溶解完全；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪多糖加入配液量50％的纯化水中加热搅拌溶解完全；或者将通关藤提取物、人参多糖、黄芪皂苷加入配液量50％的纯化水中加热搅拌溶解完全；或者将通关藤提取物、人参皂苷、黄芪皂苷加入配液量50％的纯化水中加热搅拌溶解完全；2)将尼泊金甲酯和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，补加纯化水水至全量。
4)过0.8um的微孔滤膜过滤。
5)半成品化验。
6)灌装。成品全检，包装入库。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于，该组合物由下列原料药制成通关藤2～100份，人参1～200份，黄芪1～200份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于其重量份数为通关藤10～50份、人参5～100份、黄芪5～100份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于其重量份数为通关藤20份、人参40份、黄芪10份。
4.如权利要求1～3所述的任一药物组合物的制备方法，其中的原料药可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。
5.如权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，总提取物中所含的主要有效成分为通关藤总酚酸、人参多糖或总皂苷、黄芪多糖或总皂苷。
6.如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，总提取物中的主要有效成分的总含量不低于50％。
7.如权利要求1所述的药物组合物，该组合物还可以由下列原料药制成通关藤、人参、黄芪的提取物，其主要有效成分分别为通关藤总酚酸、人参多糖或总皂苷、黄芪多糖或总皂苷；其重量配比为以总酚酸为主要有效成分的通关藤提取物1～200份、人参多糖1～400份、黄芪多糖1～400份；或者为以总酚酸为主要有效成分的通关藤提取物1～200份、人参皂苷1～400份、黄芪多糖1～400份；或者为以总酚酸为主要有效成分的通关藤提取物1～200份、人参多糖1～400份、黄芪皂苷1～400份；或者为以总酚酸为主要有效成分的通关藤提取物1～200份、人参皂苷1～400份、黄芪皂苷1～400份。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于所述的通关藤提取物含通关藤总酚酸不低于20％；人参提取物含人参多糖不低于50％或者含人参总皂苷不低于50％，人参总皂苷中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量不低于30％；黄芪提取物含黄芪多糖不低于50％或者含黄芪总皂苷不低于50％，黄芪总皂苷中黄芪甲苷含量不低于2.0％。
9.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述的各提取物中的主要有效成分的总含量不低于总提取物重量的50％。
10.如权利要求1、2、3、7、8、9所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
11.如权利要求10所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物可以制成注射剂或口服制剂。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种药物组合物及其制备方法和用途，包括通关藤或其提取物、人参或其提取物、黄芪或其提取物，其重量份数为通关藤2～100份或其提取物1～200份、人参1～200份或其提取物1～400份、黄芪1～200份或其提取物1～400份；该药物组合物可以原药材或提取物投料制成各种药学上可接受的剂型，优选注射剂和口服制剂；具有抗肿瘤、抗肝损害、抗感染、解毒、抗菌和增强机体免疫力等作用。
文档编号A61K31/27GK1954839SQ20051010435
公开日2007年5月2日 申请日期2005年10月26日 优先权日2005年10月26日
发明者黄振华 申请人:黄振华