专利名称：罗替戈汀用于治疗和预防帕金森叠加综合症的用途的制作方法
术语帕金森叠加综合症涵盖了一些特发性疾病，这些疾病与帕金森样症状的出现有关，但是可能在诊断和临床/病理生理学方法上与帕金森病有所区别。
帕金森叠加综合症(PPS)类疾病包括多系统萎缩(MSA)、进行性核上性麻痹(PSP)、皮质基底节神经节变性(CBGD)和具有路易小体的痴呆(DLB)。
多系统萎缩尤其包含夏-德综合症、橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA)和纹状体黑质变性(SND)(Mark等，Neurol Clin.2001，19(3)607)。
把皮克病、阿尔茨海默病和ALS患者中单侧震颤麻痹症和帕金森病以及亨廷顿舞蹈病的Westphal变型都归为PPS，这在专业文献中是不统一的，但在本发明申请中，根据Hobson等(Hobson等，CanJ Neurol Sci.2003年3月；30 Suppl 1p 2)使用的分类，这些疾病应该被认为是包含在术语PPS中。
帕金森叠加综合症所包含的疾病的共性是缺乏或迅速减小对L-多巴或多巴胺激动剂的反应并有其它症状例如小脑或锥体束征，早期或严重的痴呆以及早期的说话和吞咽紊乱(Mark 2001，supra；Gerlach等，Die Parkinson-Krankheit，Springer，Wien New York，2003)。
表1是一些帕金森叠加综合症和帕金森病(也称原发性帕金森综合症，IPS)的鉴别诊断标准概述。
表1帕金森病样运动失调的一些症状分类和鉴别诊断特征概述
SND纹状体黑质变性 OPCA橄榄体脑桥小脑萎缩CBD皮质基底节变性 PSP进行性核上性麻痹IPS原发性帕金森症状(根据以下文献进行了修改Mark MH，Lumping and splitting the Parkinson Plus syndromesdementia with Lewy bodies，multiple system atrophy，progressive supranuclear palsy，andcortical-basal ganglionic degeneration.Neurol Clin.2001 Aug；19(3)607-27和GerlachM，Reichmann H，Riederer P，Die Parkinson-Krankheit，Springer Wien New York，2003)计算机X-射线断层造影是区分IPS和PPS的重要标准。患有IPS的患者在SPECT中一直到晚期都表现出正常的多巴胺受体水平，而PPS患者则显示出突触前和突触后多巴胺能神经元的早期损耗，这与多巴胺受体密度的可识别性降低有关。PET分析证实了IPS患者中L-多巴含量L-多巴代谢的下降(Gerlach等，2003，supra)。
由于经常缺乏或缺少对L-多巴的反应，因此PPS的药物治疗是非常困难的并且普遍都是对具体个体症状的对症治疗，例如治疗低血压。
多巴胺受体激动剂一般对PPS的治疗是无效的(Mark，2001，supra)。在特别的病例中，据报道采用个别多巴胺激动剂的某些治疗是成功的，但这些作用表现出物质特异性。例如，Wenning等(Lancet，2004，3，93)报道在有六位患者的试验中，溴隐亭的治疗是成功的，而用麦角乙脲进行的对照研究则没有效果。因为已知大多数多巴胺激动剂不仅对一个多巴胺受体起作用，而是具有复杂的受体特性(Newman-Tancredi，J Pharmacol Exp Ther 2002，303，805)，所以溴隐亭有效的原因在于受体特性的特殊性或是其它未进一步特征化的物质特异性。
帕金森叠加综合症一般与黑质多巴胺能神经元变性相关(Mark，2001，supra)。因此，预期使用能抑制多巴胺能神经元进行性变性的有效神经保护剂可实现成功的治疗(Dawson和Dawson VL，NatNeurosci，2002年11月；5 Suppl1058)。
罗替伐汀[(-)-5，6，7，8-四氢-6-[丙基[2-(2-噻吩基)乙基]氨基]-1-萘酚]是现有技术已知的多巴胺激动剂和症状性帕金森病的治疗剂。
例如，WO 02/089777记载了经皮给予帕金森患者罗替伐汀和与之相关的UPDRS(统一的帕金森病评定量表)得分的改善，这也被其它作者所记载(Metman等，Clin Neuropharmacol，2001，24(3)163；Mucke HA，Rotigotin Schwarz Pharma.IDrugs.2003年9月；6(9)894；The Parkinson Study Group，Arch Neurol，200360(12)1721)。
UPDRS得分是诊断和治疗帕金森病患者的重要工具(Fahn S，Elton RL，UPDRS发展委员会的成员(1987)统一的帕金森病评定量表，见Fahn，S，CD Marsden，DB Calne，M Goldstein(编著)Recent Developments In Parkinson’s Disease Vol II. MacmillanHealthcare Information，Florham Park (NJ)，第153-163页，293-304页)。然而，UPDRS得分仅能确定活性物质对帕金森病症状的效果。它不能直接表明一种活性物质是否会影响症状根源性多巴胺能的细胞破坏。
然而，细胞凋亡的过程尤其是在多巴胺能神经元破坏时在帕金森叠加综合症的发病机理中发挥了重要作用(Lev等，ProgNeuropsychopharmacol Biol Psychiatry 2003；27(2)245；Michel等，Rev Neurol(Paris)，2002；158 Spec no 1第24页)。此外，各种其它的神经变性过程也应对帕金森病和帕金森叠加综合症的发生有决定性影响(Hirsch等，Ann N Y Acad Sci.2003；991214)。
因此就渴望得到能阻止或甚至逆转多巴胺能细胞破坏的神经保护物质(Vila等，Nat Rev Neuroscl.2003；4(5)365)。在此，MPTP模型适用于预测所需的神经保护性能(Dawson，2002，supra；EberhardtO，Schulz JB，Toxicol Lett.2003，139(2-3)135)。
现在，实验性研究已经令人惊奇地揭示了到目前为止仅用于原发性帕金森病的症状治疗的罗替伐汀具有神经保护性能。罗替伐汀在急性和亚急性MPTP模型中均令人惊奇地显示了所希望的药理学性质(表2，
图1和2)。研究结果进一步显示，罗替伐汀能防止细胞凋亡过程。
例如，罗替伐汀在小鼠帕金森模型中显示了神经保护作用在快速给予会在人和猴子中引起帕金森症状的MPTP后，一方面测定急性期变性神经元的数目，另一方面通过测定终神经末稍多巴胺转运体的密度确定亚急性期纹状体的功能完整性。两种情况均可表明罗替戈汀具有神经保护作用一方面，在给予罗替戈汀后，中脑中退化神经元的数目在下降(表2)，另一方面，纹状体多巴胺能神经分布几乎被完全保持或重建(图1和2)。
表2MPTP小鼠模型中严重退化的神经元数目，以一次性给药罗替戈汀进行治疗与否的FluoroJade染色显示
对猴子也进行了罗替戈汀的神经保护作用的试验性研究。
所用的模型反映了灵长类多巴胺能细胞破坏的渐进过程，其中在几天内给猴子(猕猴)注射亚阈值毒性剂量的MPTP。约2周后在模型中显示出了帕金森症状。一旦达到特定的损伤程度，就每天以制剂形式注射罗替戈汀，其在24小时内形成持续的血药水平。一旦对照组的运动活性下降到特定程度(约5天后)就停止注射MPTP。每天均对动物的行为进行评价。开始应用MPTP六周后，停止注射罗替戈汀，并对动物不进行治疗而进一步观察两周。据观察，经治疗的动物运动活性得到显著改善，在随后的洗除期也如此。
在罗替戈汀施用末期和洗除结束时，分别处死一组动物，并从组织学和生化学方面研究基底神经节的状况。纹状体神经末稍的密度比未接受治疗的动物明显高许多。前脑啡肽原即基底神经节“间接通路”中完整交联的一种指示剂的含量在给予治疗后和洗除期后都显示出正常化的趋势。
结果表明，罗替戈汀的神经保护潜力也能在多巴胺能细胞破坏的灵长类模型中得以证明。因此，我们能够假设在人类中也有抗细胞凋亡的神经保护作用。
因此，罗替戈汀为治疗提供了一种活性物质，其以理想的方式适于制备在患有帕金森叠加综合症的患者中治疗和/或预防多巴胺能神经元损耗的药物制剂，因为除去其神经保护作用外，罗替戈汀的多巴胺能作用也是有益的。
与罗替戈汀以前的仅限于对帕金森病患者的单纯症状性多巴胺能治疗的用途相比，作为其新的应用领域包括对帕金森叠加综合症患者进行治疗，而且包括对以下患者进行治疗这些患者对没有神经保护作用的L-多巴或多巴胺激动剂治疗没有反应或反应不足。
因此，本发明的一个主题就是罗替戈汀、其盐和前药作为预防和/或治疗帕金森叠加综合症药物的用途，其中术语帕金森叠加综合症包括以下疾病多系统萎缩、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、具有路易小体的痴呆、皮克病、单侧震颤麻痹症、阿尔茨海默病患者和ALS患者的帕金森病以及亨廷顿舞蹈病的Westphal变型。因此，用罗替戈汀治疗的疾病优选选自以下疾病多系统萎缩、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性和弥漫性路易小体型痴呆。
本发明的另一个主题是通过给予治疗充足量的罗替戈汀、其盐和/或前药或通过给予包含罗替戈汀或其盐和/或前药的药物来治疗帕金森叠加综合症患者的方法。
在本专利申请中，罗替戈汀的“前药”尤其被理解为在人体特别是血浆中或以治疗有效量通过皮肤或粘膜时断裂、转化或代谢以形成罗替戈汀的化合物。
罗替戈汀具有以下结构式 因此，罗替戈汀的前药尤其是酚羟基衍生物，特别是酯，例如芳基羰基酯、烷基羰基酯或环烷基羰基酯，尤其是分别具有不超过6个碳原子的烷基羰基酯和环烷基羰基酯；碳酸酯；氨基甲酸酯；缩醛；缩酮；酰氧基烷基酯；磷酸酯；膦酸酯；硫酸酯；磺酸酯；硫代羰基酯；氧硫代羰基酯；硫代氨基甲酸酯；醚和甲硅烷基醚。
术语“烷基羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(O)-烷基结合的化合物。烷基羰基酯形式上由酚羟基与链烷酸例如醋酸、丙酸、丁酸、异丁酸或戊酸酯化而形成。
术语“环烷基羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(O)-环烷基键接的化合物。
术语“芳基羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(O)-芳基键接的化合物。
术语“碳酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(O)-O-R基团键接的化合物。
术语“氨基甲酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(O)-NRR1、-C(O)-NH-R1或-C(O)-NH2基团键接的化合物。
术语“缩醛”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-CH(OR)R1基团键接的化合物。
术语“缩酮”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(OR)R1R2基团键接的化合物。
术语“酰氧基烷基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-CHR-O-C(O)-R1或-CH2-O-C(O)-R1基团键接的化合物。
术语“磷酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-P(O2H)OR基团键接的化合物。
术语“膦酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-P(O2H)R基团键接的化合物。
术语“硫酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-S(O)2OR基团键接的化合物。
术语“磺酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-S(O)2R基团键接的化合物。
术语“硫代羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(＝S)-R基团键接的化合物。
术语“氧硫代羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(＝S)-O-R基团键接的化合物。
术语“硫代氨基甲酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-C(＝S)-N-RR1、-C(＝S)-NH-R1或-C(＝S)-NH2基团键接的化合物。
术语“醚”包括其中罗替戈汀的氧原子均与-R基团键接的化合物。
在前药的以上定义中，R、R1、R2均独立地选自氢、烷基、环烷基或芳基，优选C1-6烷基、C3-10环烷基和苯基。
“烷基”可以是支链或非支链烷基，其优选具有1到10个碳原子，尤其优选1到6个C原子。烷基也可以被一个或多个取代基例如卤素另外取代。
“环烷基”是一种烷基，其可仅由单纯的成环C原子构成或可以任选地带有其它支链C原子。优选的链长是3-10个C原子，特别优选4-8或4-6个C原子。
“芳基”优选苯基。苯基能任选在一个或多个位置上被例如烷氧基、烷基、卤素或硝基额外取代。
通过将罗替戈汀与相应的反应前体物，例如酰氯、酸酐、氨基甲酰氯、磺酰氯等反应进行制备，这是临床化学领域的技术人员已知的并可以在有关的专业文献中找到。文献的实例包括BundgaardDesignof Prodrugs，Elsevier，Amsterdam，1985；Higuchi和StellaPro-drugsas novel drug delivery systems in American Chemical Society，Washington DC，1975；SloanProdrugs-Topical and Ocular DrugDelivery，EdM.Dekker，1992；RocheDesign of biopharmaceuticalproperties through prodrugs and analogs，Washington，DC，1977。
罗替戈汀外消旋物的各种前药(N-0437)和相应的制备规程以及研究方法均有所记载，例如Den Haas等，Naunyn-Schmiedeberg′s ArchPharmacol 1990，342，655；Den Haas等，Naunyn-Schmiedeberg ArchPharmacol 1990，341，186和Den Haas等，J Pharm Pharmacol 1991，43.11。
罗替戈汀衍生物作为前药的基本适应性可通过在确定条件下用酶合剂、细胞匀浆或含酶的细胞部分孵育相应的化合物并证明能形成足量罗替戈汀来确定。适宜的酶混合物例如包含在由Gentest公司，Woburn，Ma，USA制造的S 9肝制剂中(实施例5)。或者，为了显示前药独立于肝的代谢形成活性成分，可以用新鲜血液或血浆甚至是皮下组织匀浆进行孵育。经皮施用需要在离体皮肤上进行体外渗透试验。
在医学模型中，适应性和潜在效力的最终证明通过测定在血浆中由前药形成的罗替戈汀来完成在体内，前药应该释放足够的罗替戈汀以达到罗替戈汀的治疗有效稳态血药浓度，如临床或临床前研究已知的那样。在这方面，有效浓度通常是罗替戈汀的浓度为0.01到50ng/mL，优选0.05ng到20ng/mL且特别优选0.1到10ng/mL血浆。
罗替戈汀是5，6，7，8-四氢-6-[丙基[2-(2-噻吩基)乙基]氨基]-1-萘酚的(S)-对映体。这意味着根据本发明，药物中(R)-对映体的含量低。在药物中，基于罗替戈汀的总量，(R)-对映体的存在量优选＜10摩尔％，特别优选＜2摩尔％，并且非常特别优选＜1摩尔％。
罗替戈汀及其前药在药物中能以游离碱或生理学上可接受的盐的形式例如盐酸盐形式存在。
“生理学上可接受的盐”包括罗替戈汀与有机或无机酸例如HCl形成的无毒加成盐。
存在适于给予罗替戈汀及其前药的各种给药方法，本领域技术人员能根据患者需要、状况和年龄，所需剂量以及所希望的施用间隔进行选择和调整。
给予罗替戈汀的优选方法是经皮给予。给药形式原则上选自例如软膏、糊剂、喷雾剂、膜剂、膏药或离子电渗疗法装置。
在这方面优选的是，罗替戈汀以膏药的形式施用于患者的皮肤上，其中活性物质优选存在于粘性聚合物(例如自黏性粘附聚硅氧烷)基质中。适宜的经皮制剂实例可以在WO 99/49852、WO 02/89777、WO 02/89778、WO 04/58247、WO 04/12730、WO 04/12721或WO04/50083中找到。这类给药形式使得可以建立广泛恒定的血药水平，并从而在整个施用间隔内产生恒定的多巴胺能刺激(WO 02/89778；Metman，Clinical Neuropharmacol 24，2001，163)。
相反，如果需要皮下或肌内贮库(depot)形式的药物，那么罗替戈汀就可例如以盐结晶如结晶盐酸盐的形式被混悬于疏水、无水介质中并被注入，如WO 02/15903所述，或者也能以微囊、微粒或基于可生物降解聚合物的植入剂形式给予，例如WO 02/38646所述。
给予罗替戈汀及其前药的其它可能形式有经粘膜制剂，例如舌下或鼻腔喷雾剂，直肠制剂或经肺给予的气雾剂。
罗替戈汀的适宜剂量为0.05到约50mg/天，其中优选给予的日剂量为0.1到40mg，特别是0.2到20mg/天。在这方面，剂量可以是逐渐增加的，这意味着治疗能任选以低剂量开始，然后提高到维持剂量。
对本领域技术人员来说显而易见的是，剂量间隔可以根据施用量、施用方法和患者的日需求而变化。这样，经皮施用形式可以例如每一日、三日或七日给予一次，而皮下或肌内贮库可以例如一、二或四周的周期注射。
在神经保护药物形式中，除了罗替戈汀外，还可存在能防止多巴胺能细胞损耗进程的其它活性物质。
其实例包括具有抗细胞凋亡作用的物质(米诺环素、FK-506、环孢菌素A、zVAD)和神经营养因子，例如神经胶质细胞衍生的神经营养因子(GDNF)。
在联合制剂中，用于各种情况的活性物质的释放能在很大范围内同时或顺续进行。顺续给药能通过例如药物形式如口服片剂来实现，其具有两个不同的层，每层对于不同的药物活性成分都有不同的释放性质。根据本发明，包含罗替戈汀制剂的联合制剂还能是所谓“部分药盒”的形式，其中彼此分离的制剂中存在被给予的抗细胞凋亡活性物质，其随后被同时给予或在时间上以渐进的方式给予。
对本领域技术人员来说显而易见的是，在本发明的上下文中，不同的给药形式和施用方案都是可能的，所有这些都是本发明的目的。
实施例第一实施例罗替戈汀膏药将1.8g罗替戈汀(游离碱)溶解在2.4g乙醇中并加入到0.4gKollidon 90F(溶解于1g乙醇中)中。把这个混合物加入到74％硅酮聚合物(8.9g BioPSA 7-4201+8.9g BIO-PSA 7-4301[Dow Corning])的庚烷溶液中。加入2.65g石油醚后，以700转/分搅拌该混合物1小时以获得均质分散体。在聚脂上成层后，于50℃下干燥。膏药的最终重量为50g/cm2。
第二实施例罗替戈汀贮库混悬液(a)在Duran烧瓶中称入1411.2g Miglyol 812。把14.4g Imwitor 312加入到Miglyol中，然后在搅拌下加热30分钟至80℃。将澄清溶液冷却到室温并过滤。
(b)将1188g(a)中制备的溶液转入到玻璃实验室反应器中，加入12g罗替戈汀HCl并用Ultraturrax在氮气中以10000转/分匀化10分钟。使用Ultraturrax(2000转/分)将该混悬液装入到棕玻璃瓶中。
第三实施例亚急性MPTP模型为了引起中毒，给小鼠施用80mg/kg神经毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢-吡啶(MPTP)(每份20mg/kg，间隔2小时给予，图1和2中的组3-6)，致使约50-60％的黑质神经元变性(图1和2中组3中的最大变性)。罗替戈汀以每天0.3、1或3mg/kg的剂量作为所谓的“缓释制剂”分别给予7天(参见实施例2)(图1和2中的组4-6)。用MPTP处理的动物组(组3)被给予罗替戈汀-赋形剂溶液(参见没有罗替戈汀HCl的实施例2)并作为参照。对照组为组1、2和7，其中组1没有给予任何处理，组2用MPTP和罗替戈汀的赋形剂溶液处理，组7仅给予罗替戈汀。在第8天处死动物，除去脑并冷冻。冷冻切片用位于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中的100pm[125I]PE21([125I]-(E)-N(3-碘丙-2-烯基)-2β-羧甲基-3β-(4’-甲苯基)-去甲莨菪烷)孵育，以便对仍然存在于纹状体中的多巴胺转运体数量进行标记，该转运体是功能神经末稍数量的指示剂。罗替戈汀改善了神经元及其神经末稍的存活率，这与剂量相关。这是物质具有神经保护性能的明确证据(图1和2)。
第四实施例急性MPTP模型(包括细胞凋亡)为了引起中毒，给小鼠施用80mg/kg神经毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢-吡啶(MPTP)(每份20mg/kg，间隔2小时给予)，致使约50-60％的黑质神经元变性。约16小时前，分别加入剂量为0.3、1或3mg/kg的罗替戈汀作为所谓的“缓释制剂”(参见实施例2)。扩散和吸收潜伏期导致当加入MPTP时，罗替戈汀是任选提供的。仅给予赋形剂溶液(参见没有罗替戈汀HCl的实施例2)的动物作为对照。24小时后处死动物并固定脑。脑切片用FluoroJade染色以识别变性细胞。使用酪氨酸羟化酶的免疫组织化学标记来识别多巴胺能神经元。酪氨酸羟化酶染色不能识别被处理和未被处理动物之间的差别；FluoroJade染色显示了大量变性神经元；然而，神经元还不能被完全除去(这说明与酪氨酸羟化酶染色间不存在任何差异)；这表明发生了细胞凋亡性细胞破坏，而且在测定时尚未完成(凋亡细胞尚未被完全溶解或吞噬)。施用罗替戈汀后，变性神经元的数目约降低50％，这进一步确证了物质的神经保护性(表2)。
第五实施例前药在体外转化为活性物质从人、猴子、狗、大鼠或小鼠的肝细胞匀浆中通过差示离心得到包含基本代谢酶的微粒体部分；或者，也可获得细胞质部分。将亚细胞部分以能获得含有确定蛋白含量的溶液的方式混悬在缓冲液中。加入1μm被测前药后，于37℃下孵育60分钟。然后通过HPLC/UV或HPLC/MS对罗替戈汀进行定量，并与用量相关联。为了进行更详细的分析，还研究了浓度系列和时序。
权利要求
1.罗替戈汀、其盐和前药用于制备预防和/或治疗帕金森叠加综合症的药物的用途。
2.根据权利要求1的用途，其中帕金森叠加综合症选自多系统萎缩、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性和弥漫性路易小体型痴呆。
3.根据前述权利要求之一的用途，其中帕金森叠加综合症的特征是对L-多巴没有反应。
4.根据前述权利要求之一的用途，其中将药物设计成用于胃肠外、经皮或经粘膜给予。
5.根据前述权利要求之一的用途，其中罗替戈汀以每天0.05-50mg的剂量给予。
6.根据前述权利要求之一的用途，其中前药是罗替戈丁酚羟基的醚、酯、硫代羰基酯、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、碳酸酯、缩醛、缩酮、酰氧基烷基酯、氧硫代羰基酯、磷酸酯、膦酸酯、硫酸酯、磺酸酯或甲硅烷基醚。
7.根据权利要求6的用途，其中前药是具有不超过6个碳原子的烷基羰基酯。
全文摘要
本发明涉及罗替戈汀、其盐和前药作为预防和/或治疗帕金森叠加综合症药物的用途。
文档编号A61P25/00GK1960724SQ200580009165
公开日2007年5月9日 申请日期2005年3月22日 优先权日2004年3月24日
发明者D·舍勒 申请人:施瓦茨制药有限公司