含植物来源精油作为活性组分的抗焦虑组合物、含该组合物的抗焦虑药及其生产方法

专利名称：含植物来源精油作为活性组分的抗焦虑组合物、含该组合物的抗焦虑药及其生产方法
技术领域：
本发明涉及一种含植物来源精油作为活性组分的抗焦虑组合物，一种含该组合物的抗焦虑药及其生产方法。更详细地，本发明涉及一种含抗焦用的经皮吸收型组合物，一种含该组合物的抗焦虑药及其生产方法。
背景技术：
植物来源的精油通常都具有芳香性，其中含有多种例如萜类和醇类的化合物。为人们所熟知的是，含有多种这类化合物的芳香性成分也具有缓解紧张或镇静的功效；因此，自古以来，这些成分就在多种仪式聚会、治疗等方面得到广泛的应用。
有很多种植物都可以作为提取精油的原材料；由于具有出众的芳香性，玫瑰也被用作是生产香水的原材料。在欧洲，精油自古就用于治疗领域，并且在1930年以后，也建立了以精油为内用或外用擦剂的芳香性疗法。芳香性疗法中最常用的是从玫瑰中提取的精油(在下文中称为“玫瑰油”)。
另一方面，现代社会中，越来越多的人由于压力而罹患一些特定疾病，如焦虑性神经机能症和抑郁症。为了治疗这些疾病，人们开发了很多药物，例如抗焦虑药、抗抑郁药等。
作为这类疾病的治疗药物，常常使用苯并二氮卓类化合物。其起效的机制是改善位于中枢神经系统的γ-氨基丁酸(GABA)受体与GABA之间的亲和性以增加它们之间的结合率，从而降低神经细胞的兴奋性。
迄今为止，人们已开发出了多种用于检测抗焦虑、抗抑郁及其他疗效的动物实验系统。通过应用这些动物实验系统，能够以较理想的准确性来预测对于人的治疗效果。
本专利的发明者通过使用其中的一项动物实验系统进行检测，证实了当以高浓度(100至800mg/kg)腹腔给药后，玫瑰油将产生抗心理冲突的效果。(见非专利文献1)。
生物工业月刊(Monthly Bioindustry)，2004年1月，第58-63页，CMC出版社

发明内容
本发明要解决的问题苯并二氮卓(benzodiazepine)具有不低于100的较广的治疗范围，且比巴比妥酸和其他镇静药的治疗范围大10倍。因此，对于病人来说，服用该类药物导致呼吸抑制的风险很低。然而，药物具有使病人对外界环境刺激的反应性降低、不能迅速且恰当地作出反应的副作用。
除此之外，当病人在短时间内集中服用了具有较好相容性(compatibility)的苯并二氮卓类药物后，性格可能会发生改变，比如，变得冷漠。另外，如果长期服用苯并二氮卓类药物，病人也会对药物产生依赖性。
当产生任何一种副作用后，最好停止服用药物。然而，由于血药浓度应保持在有效浓度以上，所以口服给药将比其他的给药途径所使用的剂量更大。因此，在药物完全消除至体外之前，药物的影响还会残存。
虽然苯并二氮卓类被认为是比较安全的药物，但该类药物仍有许多副作用。因此，对于开发剂量低、疗效好、并具有高度安全性的药物仍有强烈的需求。
本发明的目的在于提供一种以植物精油为有效成分的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，含有该组合物的抗焦虑药及其生产方法。
解决问题的方法在这样的情况下，本发明的发明者发现，制成经皮吸收制剂的玫瑰油即使在剂量很低时也能够发挥良好的抵抗焦虑或抗压力效果。之后，他们就完成了本发明的研究工作。
也就是说，本发明是一种经皮吸收型抗焦虑药，其活性成分为玫瑰精油(以下称为“玫瑰油”)。由于该经皮吸收型的抗焦虑药以玫瑰油为活性成分，因此，不会产生药物依赖性以及任何因服用传统药品而引发的副作用。
以下文中所提到的玫瑰为原材料，得到了具有芳香性高的花精油(absolute)。作为花精油中的典型例子，下文将介绍奥图玫瑰精油(Rose Otto)和玫瑰精油(Rose Absolute)。
在纯品中，较常使用的是玫瑰精油。奥图玫瑰精油是通过水蒸汽蒸馏而获得的，在此过程中就除去了大多数的苯乙醇成分。相反地，由于萃取是提取玫瑰精油的方法，因此其中保留了苯乙醇成分。
本发明中经皮吸收型的抗焦虑药组分最好包含玫瑰精油、精油吸附剂，游离水除去剂，精油吸附/解吸附调节剂，发热剂(exothermic agent)，热传导抑制剂，吸附促进剂，成片基质(a base for sheet formation)和压接用薄片(a sheet for pressure bonding)。以这样的构成制备的经皮吸收型药物由于玫瑰油的缓释作用而将在长时间内发挥药效。
这里所用的精油吸附剂是疏水主链上至少含有一个亲水取代基的树脂，具体地，精油吸附剂最好为皂化值为98.0至98.5之间的聚乙烯醇类水吸附树脂。
游离水除去剂优选丙烯酸系吸水性树脂，所述吸水性树脂优选吸水容量是干燥树脂体积的400至800倍。精油吸附/解吸附调节剂最好使用表面积在200至800m2/g之间的多孔性碳。
发热剂(exothermic agent)最好采用孔径在0.1至0.8之间的沸石。最好用多糖类化合物作为热传导抑制剂。
最好以单萜类化合物作为吸附促进剂，尤其以l-薄荷醇或柠檬烯为佳。
另外，最好以皂化值在88.0左右的热塑树脂为成片基质。
另外，本发明还提供一种经皮吸收型抗焦虑药用组合物的制备方法，该方法包括以下步骤按预定重量称量玫瑰精油，将精油和精油吸附剂混合以使精油涂敷在精油吸附剂上；将对精油进行吸附和解吸附的多孔性碳加入到具有精油涂层的吸附剂中，使形成被多孔碳材料所涂敷的碳涂层颗粒；均匀搅拌预定量的碳涂层颗粒、发热剂、热传导抑制剂和成片基质，从而制备具有均一厚度的片层。然后进行加热，制备成抗焦虑药用组合物。
通过使用上述本发明的生产方法，可获得片状经皮吸收型抗焦虑药，该药物均一地含有理想含量的活性成分。将抗焦虑组合物的经皮吸收制剂切成所定大小的薄片后，其中所含的活性成分将符合不同病人的体质状况。
本发明还提供一种生产经皮吸收型抗焦虑药的方法，该方法包括以下步骤按预定重量称量玫瑰精油；将精油和精油吸附剂混合以使精油涂敷在精油吸附剂上；将对精油进行吸附和解吸附的多孔性碳加入到具有精油涂层的吸附剂中，使形成被多孔碳材料所涂敷的碳涂层颗粒；将预定量的碳涂层颗粒、发热剂(exothermic agent)、热传导抑制剂和成片基质进行混合，从而制备具有均一厚度的片层；加热以形成抗焦虑药用组合物；将经皮吸收型抗焦虑药切成预定大小的薄片后，将其夹在两片片状材料中间并将片状材料的四边进行热粘合。
通过使用上述本发明的生产方法后，涂覆于精油吸附剂表面的玫瑰精油被能够对精油进行吸附/解吸附的碳颗粒所覆盖，从而形成碳涂层颗粒。另外，碳涂层微粒与发热剂、热传导抑制剂、成片基质等一起形成片状组合物。然后用片状材料覆盖所述组合物。通过这样的结构，可生产出一种经皮吸收型药物制剂，其中，含有药效成分的玫瑰精油不与皮肤直接接触，而是长时间释放玫瑰精油。该经皮吸收型抗焦虑药没有目前的抗焦虑药的副作用，并且，还具有将该药物移开给药位置后给药即可停止的优点。
发明的效果如上所述，本发明的经皮吸收型抗焦虑药在低剂量时即可起效，且由于在使用过程中不产生特别的副作用，因此具有高度的安全性。另外，该药物的优点还在于给药部位不受限制。
除此之外，根据本发明提供的经皮吸收型抗焦虑药的生产方法，可以很方便地生产出该经皮吸收型抗焦虑药。特别地，该药物中使用精油的吸附/解吸附作为碳涂层颗粒，因此缓释效果高。
根据本发明所提供的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，可通过将抗焦虑药用组合物切成合适的大小，从而调整至每个病人所需要的药物剂量。
另外，根据本发明的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，也可通过改变碳涂层颗粒的含量来生产具有理想含量活性成分的膏药制剂。


图1是用气相色谱对玫瑰精油进行分析的色谱图；图2是显示样品放置在25℃下，芳香度变化的图；图3A是表示无压力情况下高架十字迷宫实验结果的图；图3B是表示有压力情况下高架十字迷宫实验结果的图；图4A是表示无压力情况下孔板实验(运动性)(hole-board test)结果的图；图4B是表示无压力情况下孔板实验(窥视小孔的次数)(head-dip)结果的图；图4C是表示无压力情况下孔板实验(站立次数)结果的图；图4D是表示无压力情况下孔板实验(行为发生潜伏时间)结果的图；图5A是表示有压力情况下孔板实验(运动性)结果的图；图5B是表示有压力情况下孔板实验(窥视小孔的次数)结果的图；图5C是表示有压力情况下孔板实验(站立次数)结果的图；图5D是表示无压力情况下孔板实验(行为发生潜伏时间)结果的图；图6A是表示当涂抹于正常皮肤时，含玫瑰油的经皮吸收型药物的经时变化的图；图6B是表示当涂抹于受损皮肤时，含玫瑰油的经皮吸收型药物的经时变化的图；
图7A是表示雄性大鼠在经皮吸收型毒性试验期间的体重变化的图；图7B是表示雌性大鼠在经皮吸收型毒性试验期间的体重变化的图；图8A是表示雄性大鼠在经皮吸收型毒性试验期间摄食量的变化的图；以及图8B是表示雌性大鼠在经皮吸收型毒性试验期间摄食量的变化的图；具体实施方式
下文详细解释本发明的内容。
以鲜玫瑰花为原材料，提取得到浸膏；由此制备成本发明中使用的玫瑰精油。提取方法如下将浸膏溶于高纯度的温乙醇中，进行再次萃取；在-20℃到-25℃下冷却再萃取所得到的物质，从而去除一些不溶性的物质(诸如蜡等)；然后将乙醇蒸干。这也可称为玫瑰原精。
这里，浸膏被定义为用纯化后的溶剂(一般为正己烷)从鲜花提取物中获取残余物得到浸膏，在室温中加以搅拌，然后在减压状态下除去用于萃取的溶剂。浸膏中除香味成分外，还含有大量的蜡。然而，几乎不含树脂成分，并且树脂成分的组成与油性树脂或类树脂有较大的不同。
用于生产玫瑰精油的玫瑰属于蔷薇科的蔷薇属植物，有100至200种分布于北半球的温带和亚寒带。其中，包括作为园林品种的亲本种的50至60种玫瑰，不过，重要的物种大约有15种左右。过去，作为古代欧洲的玫瑰花的百叶蔷薇(Rose centifolia L.)，以及大马士革玫瑰(Rose damacscena Mill.)，红玫瑰(Rosa gallicia L.)和白玫瑰(Rosa alba L.)常用作制备香水的原材料。然而，最近以百叶蔷薇(Rose centifolia L.)和大马士革玫瑰(Rosedamacscena Mill.)为制备香水的主要原材料。
其中，百叶蔷薇(Rose centifolia L.)的英语名称是西洋玫瑰(cabbage rose)。有多种玫瑰都被称为centifolia，但适合制备香水的玫瑰品种自古以来都在法国培育栽种。
另外，Rose damacscena Mill.一般都称为大马士革玫瑰，且这种玫瑰具有浓郁的芳香性并且富含芳香油组分。直到现在，这种玫瑰现在在保加利亚附近也有栽培。
当用石油醚处理在法国或摩洛哥生长的百叶蔷薇(Rose centifolia L.)时，浸膏的得率为0.24％到0.26％。从浸膏中，可以55％-65％的得率得到玫瑰原精。不仅在法国，在摩洛哥及埃及也出产这类玫瑰，并且也可从在土耳其栽培的大马士革玫瑰中获取这类组分。在这些不同的来源中，高质量的品种是在法国南部格拉斯生长的玫瑰，且以名称“我的玫瑰”(Rose de Mai)而闻名。
本发明所使用的玫瑰油就是上文中所提到的玫瑰原精，其中含有芳樟醇、β-苯乙醇、香茅醇、橙花醇、香叶醇、甲基丁香酚等，还有玫瑰氧化物、玫瑰呋喃(ロ一ズフラン)、damascone、大马酮等少量成分。
至于玫瑰原精，可能使用由香水生产商，如Ogawa&CO.有限公司所生产的市售商品。
l-薄荷醇(5-甲基-2-(1-甲乙基)环己醇)通常被称为薄荷醇(薄荷脑)。这个化合物在化学结构中有12个异构体，薄荷醇所特有的清凉香味是天然的或合成的l-薄荷醇。l-薄荷醇是无色柱状晶体或针晶，可溶于乙醇，难溶于水，并且可在室温中逐渐升华。
为了获得天然的薄荷醇，首先要冷却薄荷油，然后将析出的结晶离心分离得到薄荷脑。从香茅油的分馏组分中可以得到d-香茅醛，。将d-香茅醛转变为l-异胡薄荷醇，然后氢化从而得到合成的薄荷醇。
可使用上述两个方法中的任何一个来获取合成的薄荷醇在其中的一个方法中，可从蒎烯中获取桂叶烯(myrcene)，以其作为原材料，通过使用特定的催化剂先获取具有光学活性的香茅醛，不对称地合成薄荷醇，而不进行光学分离。另外一方面，也可以从氢化麝香草酚中获取薄荷醇混合物，通过光学分离得到薄荷醇。
本发明中经皮吸收型抗焦虑药所使用的精油吸附剂即为作为上述玫瑰精油的载体的树脂，其中，该类树脂应具有疏水性主链和一定数量的亲水性取代基，例如，最好使用皂化值在98.0至98.5之间的聚乙烯醇(PVA)系吸水性树脂。如果皂化值低于98.0，则载体表面会成胶状，并将失去作为吸附载体的功能。然而，当皂化值处于98.0到98.5的范围之间时，该表面就不会成胶状，也将保留作为吸附载体的功能。
具体地，包括Shin-Etsu波瓦尔(Poval)C-17GP，波瓦尔A(由Shin-Etsu化学有限公司生产)等。最好使用Shin-Etsu波瓦尔C-17GP或波瓦尔A。
本发明提供的经皮吸收型抗焦虑药中使用的游离水除去剂(release water remover)即用于除去在皮肤上给予经皮吸收型抗焦虑药后存在于皮肤上的水分。最好使用丙烯酸系吸水性树脂，这是因为这类树脂通常具有高性能吸水性，并且在下文所述的组合物生产过程中的加热处理时具有良好的粘着性。
在经皮吸收型制剂应用于皮肤表面的某一区域时，丙烯酸系吸水性树脂将吸附该区域所生成的水分，且在该类树脂中不仅是一种特定的树脂具有这类功能。所使用的吸水性树脂最好能吸附400倍至800倍自身体积的水分。如果吸水能力低于400倍自身体积，则树脂无法吸附所有生成的水分；不过吸水能力也没有必要高于800倍。该类树脂的例子包括Sanfresh(Sanyo化工公司)、Aquakeep(Sumitomo Seika化学有限公司的注册商标)及其类似商品。其中，最好使用破碎状(fractured form)的Sanfresh，因为与球状颗粒型Aquakeep相比，该种树脂具有更好的粘看性。
在本发明中，经皮吸收型抗焦虑药所使用的精油吸附解吸附调节剂即一种多孔性碳材料，该多孔性碳在上文所述的玫瑰精油表面上形成了一层薄层，从而可以对精油的吸附和解吸附进行调解，例如，能吸附多种分子的活性炭。最好使用表面积为200到1000m2/g的活性炭；这是因为，使用该类活性炭，则每份质量所需吸附的精油量较少，从而不难对精油进行解吸附。应用表面积为400到800m2/g的活性炭尤佳。
在本发明中，上述细粒活性炭可使用市售商品。比如，Shirasagi P(武田制药株式会社)等产品。其中，最好使用Shirasagi P，这是因为其吸附区域不太大且价格合理。
本发明中，经皮吸收型抗焦虑药所采用的发热剂(exothermic agent)即一种可吸附空气中的水分并产生吸附热的材料。吸附水分的过程中将产生热能，通过利用所述热能，已吸附在载体吸附剂上的精油被解吸附。具体地，可例举沸石。
在本发明中，经皮吸收型抗焦虑药所采用的沸石是孔径为0.1到0.8nm的合成材料；因为它可以提供合适的吸附能及解吸附能。使用孔径为0.3到0.4nm的沸石尤佳。只要孔径符合标准，可使用市场上购买的沸石，如Zeolum(Tosoh集团)等。
本发明中，经皮吸收型抗焦虑药所采用的热传导抑制剂是一种抑制热量传导的化合物，所述热量是在游离水吸附到游离水吸附剂上的过程中生成的。热传导抑制剂的实例即一些多糖化合物，如壳聚糖和纤维素等。
当药物制剂中含有色素时，如果使用壳聚糖作为热传导抑制剂，有一个优点就是壳聚糖可以用作为该色素的载体。为了抑制热量的传导，也可以使用纤维素及其类似物来代替壳聚糖。
本发明中，经皮吸收型抗焦虑药所采用的吸附促进剂即用来促进制剂中精油吸收的单萜类化合物。可作为吸附促进剂的包括l-薄荷醇及其它萜类化合物，以及市售品。其中，l-薄荷醇具有可去除残留在皮肤上的游离水分、然后为精油的经皮吸收提供条件的优点。
本发明中，经皮吸收型抗焦虑药所采用的成片基质为使上述抗焦虑药组合物形成片状的基质，最好使用皂化值大约为88.0左右的热塑树脂。为了制备经皮吸收型抗焦虑药，抗焦虑组合物须经过加热处理。这时，优选树脂优选具有这样的特性即使在低温(如180℃)下进行粘合时，树脂既不会从碳涂层微粒中释放玫瑰油，也不会阻塞树脂微粒的空隙。
具体地，例如，优选使用Gohselan L-0301(注册商标，日本合成化学株式会社)，这是因为该类产品在180℃左右的低温情况下也有良好的粘合性。
本发明的经皮吸收型抗焦虑药可以通过将精油、精油吸附剂、游离水分除水剂(thereleased water remover)、精油吸附/解吸附调节剂、发热剂、热传导抑制剂、吸附促进剂和成片基质按照以下步骤进行混合而制得。其生产方法如下所述。
首先，称取需要量的精油，然后在尺寸合适的容器中使其与PVP混合以对PVP颗粒的表面进行包被。随后，按需对活性炭进行称重，加入混合物中；活性炭将覆盖在精油涂层的PVP表面，从而制得炭涂层颗粒A。
然后，称取薄荷醇。由于薄荷醇是固体，因此将所称重的薄荷醇称为颗粒B。
混合微粒A和微粒B，然后继续加入热传导抑制剂和成片基质进行混合，从而制备均质混合物。之后，将两片压接用薄片夹在混合物两面，加热制得本发明的经皮吸收型抗焦虑药的片状组合物。
将混合物夹在压接用薄片中间之后，最好将夹好的混合物加热至160℃～200℃，180℃尤佳。通过在上述温度范围后加热该混合物，成片基质和树脂将相互粘合，并且两者之间保持一定的间隔。本发明所提供的经皮吸收型抗焦虑药在皮肤表面进行给药，这些间隔对于从炭涂层颗粒释放到皮肤表面的在玫瑰油分子起到岛屿(isle)的作用，玫瑰油分子通过这些间隔被释放到皮肤上并且被经皮吸收。另外，当加热混合物至一个较高的温度(如230℃)时，由于树脂熔化，因此树脂间的空隙将被阻塞，所以上述的玫瑰油分子无法释放到皮肤表面上。
最好采用Kasenshi纸张(基本重量为18到20克)作为压接用薄片(sheet for contactbonding)。应用该纸张有一个优点，即，碳涂层颗粒的压接比率较高。
和组合物压接的薄片由两片片层材料夹在中间，该片层材料由大小合适的无纺布料制成；随后，将片层的四边进行热封合，从而制备本发明的经皮吸收型抗焦虑药。
片层材料最好选自纸、纺织布和无纺布。其中，由于具有良好的渗透性，因此无纺布更佳。经皮吸收型抗焦虑药所含的玫瑰油以气态释放，玫瑰油将在成片基质颗粒之间的空隙间流动，从布料中渗透出去。
如上所述，制备得到本发明中的抗焦虑药组合物和抗焦虑药。
实施例通过以下实施例对本发明进行详细描述。然而，本发明并不仅限于这些实施例。
(实施例1)(1)试剂在生产经皮吸收型抗焦虑药组合物以及经皮吸收型抗焦虑药的过程中，需要使用以下试剂。
(1-1)精油从Ogawa&CO有限公司购得的玫瑰油(Rose de MaiAbsolute)和l-薄荷醇。
(1-2)其他试剂PVP、Shin-Etsu波瓦尔C-17GP购自Shin-Estu化学有限公司，Goselan L-3031购自日本合成化学株式会社。丙烯酸系吸水树脂Sunfresh(注册商标)购自Sanyo化工公司。活性炭，Shirasagi P购自武田制药株式会社。沸石Zeolum(注册商标)购自Tosoh公司。壳聚糖，Koyo壳聚糖购自Koyo化学有限公司。
(实施例2)经皮吸收型抗焦虑药组合物和经皮吸收型抗焦虑药的制备(2-1)碳涂层微粒的制备根据下文表1中的配方制备涂层颗粒。需要注意的是，在制备药物制剂的过程中(制剂的名称从ANX-A到ANX-C)，应该对每份试剂加以控制，以便含有1.1mg的通过使用表1所示量的碳涂层颗粒。
表1

以ANX-A为例。按表1所示的量称取玫瑰油，然后放入500ml的透明玻璃密闭容器中。往容器中加入PVA(Shin-Etsu波瓦尔C-17GP)，在室温下和玫瑰油混合，制得以精油涂层的颗粒。随后，按照表1所示的量将活性炭加入容器中，然后混合。如上所述，制得碳涂层颗粒；在室温中放入密封的容器中进行保存，如可放入一个有磨口瓶塞的玻璃容器中。(2-2)抗焦虑药经皮吸收型组合物的制备如上述(2-1)，制得三种碳涂层颗粒，将碳涂层颗粒和下述表2所示量的基质相混合，制成经皮吸收型抗焦虑药组合物。
表2


如下混合上述碳涂层颗粒和基质。
首先，依次加入Sanfresh(Sanyo化工有限公司)、Zeolum(沸石，Tohsoh集团)、l-薄荷醇(Ogawa&CO有限公司)以及Koyo壳聚糖(Koyo有限公司)，混合，从而制得基质。随后，对按上述(2-1)制得的碳涂层颗粒1-3根据表2所列的量进行称重，和基质混合。之后，加入Koyo壳聚糖、Shiarasagi P和Gohselan，然后混合。需要注意的是，在进行热压接时(contact bonding)，组合物中精油的损失率可估计为20％，从而可以对质量进行计算。
这里，需要把含基质和碳涂层颗粒的混合物在热压接用薄片上以均匀的厚度铺开，然后将另一张热压接用薄片放在其上，将混合物夹在中间。将夹好的混合物在加热状态下进行压接，从而制成片状抗焦虑药组合物。例如，可以合适的大小将片状组合物切割成几片，无纺布材料也切成可以覆盖住薄片的合适尺寸，夹在薄片两边。然后，将无纺布料的四侧进行加热封合，制成本发明的经皮吸收型抗焦虑药。根据顺序先后，将每个配方依次命名为ANX-A至ANX-C。
含ANX-A至ANX-C组合物的薄片大小都为2cm×4cm。ANX-A的薄片内含有1.4mg的玫瑰油，ANX-B的薄片内有1.05mg的玫瑰油，ANX-C内有0.87mg玫瑰油。
(实施例3)对玫瑰油组合物进行分析以气相色谱法(GC)和气-质联用(GC-MS)对玫瑰油中的挥发性成分进行分析。(3-1)气相色谱法(GLC)在以下条件下进行气相色谱(GLC)分析气相色谱(GLC)HITACHI G-3000(日立有限公司)
色谱柱TC-WAX Bonded(内径为60m×0.32mm)柱温40℃至220℃(升温速率为3℃/分钟)进样口温度250℃载气氦气(0.8kg/cm2)FID氢气1.4kg/cm2空气1.1kg/cm2为了对成分进行鉴别，以相似的方式将内标苯乙醇和纤维素进样，并分别测量其保留时间。根据保留时间，可以对玫瑰油中所含有的成分进行确认。
图1即气相色谱图。如图1所示，保留时间41.943分钟时的色谱峰为香茅醇，48.176分钟的色谱峰为苯乙醇。
(3-2)高效液相色谱(HPLC)高效液相色谱的色谱条件如下色谱柱Wakosil 5C18φ4.0×250mm(和光纯药株式会社)YMC Pack ODS-Aφ20.0×250mm(Yamamura化学有限公司)泵PU980Intelligent HPLC泵(JASCO公司)检测器UV-970Intelligent UV/VIS实验器(JASCO公司)色谱自动记录器SIC色谱自动记录器12(Showa Denko K.K.)梯度设备LG-980-02 Trenary梯度设备(JASCO集团)HPLC的实验结果也表明，图1中41.943分钟的色谱峰为香茅醇，48.176分钟的色谱峰为苯乙醇。
(实施例4)经皮吸收型抗焦虑药组合物的缓释实验以芳香颗粒量为指标，对经皮吸收型抗焦虑药的挥发性成分的释放进行检测。
例如，使用经皮吸收型的抗焦虑药和上述4片实施例2中所生产的药物。用便携式气味监测器OD-85(RIKENKIKI有限公司)在0小时，3小时，6小时，12小时和24小时对芳香性颗粒的量进行2分钟的测定。实验室内的室温为25℃，湿度为30±10％。结果示于表3和图2。
表3


如表3和图2所示，从测量开始后3小时，芳香性颗粒的数量急剧下降，到6小时时达到最低值。然而，之后缓慢地上升。24小时时，结果表明，芳香性颗粒仍在持续释放。
在数量实验结束之后，l-薄荷醇香味最强烈，不过3小时之后香味变得微弱。因此，认为l-薄荷醇的大部分在3小时内被释放出来，在6小时之后释放量增加的挥发性成分是玫瑰油中成分。
(实施例5)在高架十字迷宫实验中的抗焦虑测试高架十字迷宫实验是药物抗焦虑效果的评价系统之一，应用该实验来评价对小鼠的抗焦虑疗效。
在高架十字迷宫实验中，所使用的设备中有一个由两条无墙通道交叉所形成的路口；记录在一段时间内进入该路线的小鼠数量以及小鼠在那里探寻路线所花的时间。正常的小鼠几乎不会进入该无墙通道，并且它们会花费大多数的时间探寻有墙的道路。
另一方面，试验结果表明，服用了抗焦虑药物的小鼠会进入无墙道路，且在无墙道路的探寻时间明显增加。。因此，记录在一段时间内进入路线的小鼠的数量和探寻道路所花的时间，以此为指标可评价ANX-C的抗焦虑疗效。
(5-1)实验方法(1)实验动物在本实验中所使用的是5到6周龄的雄性ICR小鼠。
(2)高架十字迷宫实验使用自动高架十字迷宫设备。将小鼠置于迷宫中央，使它的头部直接面对着无墙道路的方向，然后通过录像监测器连续5分钟观察小鼠的行为。测量小鼠探寻无墙道路的次数，和小鼠位于无墙道路中的时间；当小鼠的四肢进入无墙道路时即可认为小鼠进入了道路。对于有墙道路的实验方法也是类似的。
通过下列公式(1)和(2)对所得到的结果数据进行评价。
进入无墙道路的次数所占的百分比(％)＝进入无墙道路次数/进入有墙和无墙道路总次数×100...............(1)在无墙道路中的停留时间的百分比(％)＝在无墙道路中的停留时间/在有墙和无墙道路中停留的总时间×100...............(2)
(3)给药将小鼠分为2组。用剃须刀剃去给药组小鼠(n＝11)后背上的毛，然后将根据实施例1生产的含玫瑰油的经皮吸收型抗焦虑药(ANX-C)的四角粘合在小鼠后背24小时。如上所述，以相似的方法给予安慰剂。
给药后，为了避免药物从小鼠后背上脱落，所有的小鼠都必须分别关在单个鼠笼中。
(4)数据统计对变量进行一元分析，然后应用t-检验，进行具有统计学意义的显著差异分析。和安慰剂组相比，显著性水平＜0.05，即可判断为存在显著性差异。统计结果示于图3A和3B。
(5-2)结论在图3中，空心柱代表的是安慰剂组，其他的柱状物代表的是实验组。如图3A所示，在安慰剂组和实验组之间，进入无墙道路的次数所占的百分比并没有显著性差异。
另一方面，如图3B所示，在安慰剂组和实验组之间，小鼠在无墙道路中的停留时间所占的百分比具有显著性差异。这就表明，ANX-C具有抗焦虑疗效。
(实施例6)通过孔板实验(hole-board test)考察药物的抗焦虑疗效和抗应激疗效孔板实验(hole-board test)是评估小鼠情绪状态的方法之一。在实验中，所采用的设备是灰色的丙烯酸板，大小为50cm×50cm×50cm，且在离盒子中心等距离处的底板上有四个孔。
当将小鼠放入设备中时，小鼠就会表现出各种搜索行为，如，自发运动，站立和窥视小孔(head-dip)。
给予抗焦虑药之后并不会引起自发运动和运动距离发生改变，只是引起窥视小孔次数的增加。相反，当给予致焦虑药物之后，抑制了小鼠窥视小洞的行为，由此可知，给药引起了小鼠情绪状态的变化。
当将约束压力施加于小鼠身上时，可以观察到小鼠窥视小洞的行为受到抑制，这与给与致焦虑药后的情况相似。然而，预先给予地西泮(安定)则使情绪的变化得以改善。
如上所述，在试验方法中，可通过以窥视小孔(head-dip)的行为作为指标，评估药物是否具有抗焦虑作用或抗压力作用。因此，应用孔板实验系统可研究ANX-C的抗焦虑或抗压力疗效。
(6-1)实验方法(1)实验动物采用5到6周龄的雄性ICR小鼠。
(2)对于情绪变化进行评估应用自动孔板实验设备，通过录像监视器连续5分钟观察小鼠在设备中的行为。作为情绪状态变化的指标的探寻行动包括运动行为、站立行动的次数、窥视小孔的次数及其行为发生潜伏时间的时间。根据这些指标，可评估情绪状态的变化。
为了研究施加压力刺激所引起的的情绪性变化，以上述项目为指标，在施加压力刺激和无压力刺激的情况下进行实验。压力刺激的施加是通过将小鼠束缚在容积为50ml的塑料圆柱管中30分钟。
(3)给药在无压力状态下，将小鼠分为2组；剃去给药组小鼠(n＝12)后背上的毛，并在实验开始24小时之前将实施例1中生产的经皮吸收型抗焦虑药(ANX-C)黏附在小鼠的后背上。
如上所述，以相似的方式剃去给安慰剂组小鼠(n＝12)后背上的毛。先生产出与ANX-C基本相同但不含玫瑰油的经皮吸收型制剂(PNX)。然后在实验开始24小时前就将药物黏附在小鼠的后背上。为了避免药物从小鼠后背上脱落，所有的小鼠在给药后都必须分别关在单个鼠笼中。
在施加压力的情况下，将小鼠分为3组，对于给药组(n＝10)和给安慰剂组(n＝8)进行与无压力实验相似的处理。需要注意的是，对照组中的小鼠并不服用任何药物，且也不给予压力刺激。为了在实验过程中药物不从小鼠的后背上脱落，因此，在将药物黏附后须把小鼠分别单独安置。
(4)数据统计在考察显著性差异的过程中，先将数据进行变量的一元分析，然后再进行t-检验。在无压力的情况下，将所获得的结果与给安慰剂组的数据相比，显著性水平不高于5％判定为存在显著性差异。在有压力实验情况下，将所获得的结果与给安慰剂组的数据相比，显著性水平不高于5％判定为存在显著性差异。
(6-2)结果图4A到4D表示的是从无压力状态下所获取的数据，图5A到5D表示的是有压力状态下所获取的数据。
在图4A到4C中，空心柱表示的是安慰剂组，其他的柱状物则表示给药组。如图4B所示，在给ANX-C组中，窥视小孔的次数有明显的上升。在图4D中，并没有显著性差异，但是可以看到窥视小孔的行为发生潜伏时间有缩短的倾向。其他项目，如运动性和站立次数在每组中都没有发生变化(见图4A和4C)。
如上所述，ANX-C并不影响自发运动或站立现象，但是激发了窥视小孔，由此说明，ANX-C具有抗焦虑疗效。
如图5B所示，给予30分钟的压力后，与对照组相比，安慰剂组或ANX-C给药组中窥视小孔的次数都急剧下降。这时，与安慰剂组相比，ANX-C给药组中窥视小孔的次数明显增加。另外，与对照组相比，安慰剂组或给ANX-C组中窥视小孔的行为发生潜伏时间显著延长。然而，ANX-C给药组的时间延长率明显低于安慰剂组。
关于运动行为，对照组和安慰剂组之间没有显著差异。关于站立行为，安慰剂组和ANX-C给药组都趋于下降，但没有表现出显著差异(见图5A和图5C)。
如上所述，在安慰剂组中，窥视小孔的次数明显被抑制了；不过和不受压力的对照组相比，在ANX-C组中该次数有明显的恢复。并且，行为发生潜伏时间也有所减少。因此，可以说明，ANX-C除了有抗焦虑疗效外还有抗压力疗效。
(实施例7)ANX-C对皮肤的一次刺激实验本实验适用于GLP部门条例中的一条名称为《有关进行药物安全性非临床监测标准的部门条例》(1997年3月26日，劳工、福利和卫生部的第21条部门条例)。并且应以化妆品的安全性指导方针2001和化妆品及类似药品生产批准申请指南(第4版)作为本实验的指导方针。
(7-1)实验动物等(1)实验动物从Saitama实验动物有限公司购得常规型的雌性日本白兔(2.16-2.36kg，11周龄)。在7天中对这些兔子进行适应性喂养，然后将其应用于下列试验。在开始给药时，除了对照组的动物外，其他的兔子体重都在2.27至2.42kg范围内。
(2)实验样品在制备样品的过程中使用了上述ANX-C。对照品以与ANX-A相似的方式进行制备，其中不含本发明所提供的组合物。
(7-2)试验方法和结果(1)试验部位的形成给药前，先用剃须刀(THRIVE动物剪型号6000AD，Daito电器有限公司)将兔子左右后背的毛都剃去。剃好后，一边作为正常皮肤加以应用；另一边作为受损皮肤，在不伤及真皮的情况下用18G的针在角质层上磨成3条突出的平行线。
(2)试验样品的给药方法按如上所述制得的ANX-A和对照品分别贴在试验部位，然后使用非全身性粘性膏药进行24小时的阻塞试验(BLENDERM，注册商标，3M公司)。
为了改善黏附性能，用粘性海绵状膏药(商标名Microform，3M公司)和伸展性膏药(商标名Silkytex，Alcare有限公司)对BLENDERM的外侧进行固定。
(3)对刺激物的强度和标准进行确定根据下列表3中的Draize’s判断标准在3个时间点(附上样品和安慰剂之后的1小时、24小时和48小时)上，判定红斑、结痂和浮肿的形成。
表4

根据以上标准，在贴上样品和安慰剂之后的1小时和48小时两个时间点判断红斑的严重程度、结痂的形成和水肿的形成。对反应强度进行评分，分数的平均值即一次刺激的指标(P.I.I)。
根据表5所列的评价标准确定一次刺激物的性能。
表5

(4)判断结果表6和表7分别表示了一次刺激指标的评分，以及在单个动物评分的基础上的评级。图6A和6B即移开试验样品或安慰剂1小时后皮肤反应的照片。
表6

*移开贴片后的时间表7

*移开贴片后的时间如表6所示，试验开始后，使用实验试剂48小时之后，在正常皮肤和受损皮肤上都没有观察到任何红斑、结痂和浮肿的生成。
如表7所示，在敷药后开始对经时变化进行个别观察，在1小时、24小时或48小时的时间点上都没有观察到任何变化。另外，也没有观察到红斑、结痂以及浮肿的形成。
(实施例8)在21天的重复给药过程中对于ANX-A对大鼠的经皮吸收毒性进行检测本试验适用于部门条例中的一条名称为《有关进行药物安全性非临床监测标准的部门条例》(1997年3月26日，劳工、福利和卫生部的第21条部门条例)、应用或进口药物所须进行的毒性实验指导方针(1989年9月11日，药物评价1所制定的第24条通告)、化妆品及类似药品生产批准申请指南(第4版)、化妆品安全性指导方针(2001年)和OECD化学品实验指导方针(TG410，1981年5月12日实施)。
(8-1)动物等(1)试验动物从日本SLC公司购得16只雄性及雌性SlcWister SPF大鼠(8周龄)。饲养6天后，开始动物试验。在开始饲养时，雄性大鼠的体重为170至188g，雌性大鼠的体重为120至139g。开始给药时，除了对照组，雄性大鼠的体重为213到231g，雌性大鼠为146至164g。
将2～3只雄性或雌性大鼠分别单独放在一个笼子中，不限量提供水(自来水)和鼠粮(丸状MF，Oriental Yeast有限公司生产)。
(2)实验制剂使用上述的ANX-A作为实验制剂。对照组以和ANX-A相似的方法进行制备，但在制备过程中并不使用本发明中的片状组合物。
将上述的雄性大鼠分为对照组(n＝5)和试验组(n＝5)，雌性大鼠也以相似的方法进行分组。根据以下方法，进行21天的经皮吸收型给药。
(3)试验方法(1)试验样品和对照品给药位点的形成及其给药在给药前用剃须刀(THRIVE动物剪型号6000AD，Daito电器有限公司生产)剃去大鼠后背的毛。然后隔几天就为动物剃毛。
将试验样品直接敷在给药位点上，然后用粘性膏药(Dermapore，Alcare有限公司生产)进行24小时的阻塞附着试验。将对照品也直接敷在给药位点上，然后用Dermapore进行24小时的阻塞性附着试验。
(2)试验项目给予试验制剂21天的试验组与对照组将进行以下步骤(A)称量体重，(B)摄食量测定，(C)病理学测试，(D)血液学测试，凝血时间测试，以及生化测试。
(A)对体重进行称量在试验开始的当天就用精确天平(PB3001，Mettler-Toredo K.)对动物进行称重，然后每周两次在上午为动物称重(上午9:19至10:03)。
(B)摄食量测定用精确天平(PB3001，Mettler-Toredo K.)每周一次在上午(上午8:30至9:27)对所有笼子中的鼠粮进行称量。
(C)病理学试验在最后一次给药后的翌日(停止喂食16小时后)为大鼠腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg，i.p Dynabot有限公司)进行麻醉，然后放血处死。
随后，对于所有动物的体表、口部、颅骨内部、胸腔、腹腔及其内容物进行肉眼观察。取出肝脏、肾脏、肾上腺、卵巢和睾丸，用电子天平称重。其中，对肾脏、卵巢和睾丸进行成对称重。
在病理学检测中，将解剖取出来的所有动物的肝脏、肾脏、肾上腺、卵巢和睾丸按传统的方法包埋在石蜡中制成切片，然后用苏木精-曙红(HE)染色，在显微镜下进行检查。
(D)血液学测试，凝血时间测试和生化测试在上述(C)中进行放血处死时，保留一部分血液样品进行血液学测试和生化测试。在戊巴比妥的麻醉状态下进行剖腹手术，将用于采血的带硅树脂试管的针头插入腹主动脉中，从自然流出的血液中采血。进行表8和9列出的检测项目。
表8


表9

(4)结论(A)称重图7A和图7B表示对照组和试验组中每个雄性和雌性动物的体重变化。到了第三天，与性别无关，实验组显示出减轻体重的趋势，不过之后，它们显示出体重增加的趋势。表10所示的是整个实验期间(21天)所观察到的总体状态的变化。
(表10)

*表格中的次数表示的是没有异常的动物数量。
(B)摄食量测定表8A和8B按每个雄性和雌性组别显示了结果。如表8A和8B所示，和对照组相比，实验组的摄食量并没有下降。
(C)病理学检测对对照组和实验组的动物的体表、口腔、胸腔、腹腔和淋巴结进行观察，结果如表11所示。
(表11)

*表格中的次数表示的是没有异常的动物只数。
如表11所示，肉眼没有观察到体表、口腔、颅内部位、胸腔、腹腔和淋巴结的任何变化。
接着，从对照组和实验组的每只动物体内取出肝脏、肾脏、肾上腺、卵巢和睾丸，进行肉眼观察。用电子天平对这些器官进行称重，检查是否有质量变化。表12和13表示的是检测结果。
(表12)

(表13)

如表12所示，给药组和对照组相比，无论雌性组或雄性组，其任一器官中都没有表现出病态。如表13所示，在取出的肝脏、肾脏、肾上腺、卵巢和睾丸中没有观察到明显的变化。
表14至17表示的是对照组和试验组的血液学实验和生化实验结果，也分为雄性组和雌性组。
(表14)

(表15)


如表14和表15所示，可以发现，对照组和给样品组之间在血液学实验中没有明显差异。
(表16)


(表17)


如表16和17所示，对照组和给样品组在生化实验的结果中没有明显的差异。
因此，由于本发明的抗焦虑药物只有极其低的刺激性，且不会引发透皮毒性，因此可以说明本发明的抗焦虑药物具有高度的安全性。
工业实用性如上所述，本发明的抗焦虑药物在药物领域可安全、有效地使用。特别是，由于药物能有效地释放到目标器官，因此该药物可有助于降低副作用，如依赖性等。
权利要求
1.经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，以玫瑰精油为活性成分。
2.如权利要求1所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，包括玫瑰精油、精油吸附剂、游离水除去剂、精油吸附/解吸附调节剂、发热剂、热传导抑制剂、吸附促进剂、成片基质以及压接用薄片。
3.如权利要求2所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述精油吸附剂是皂化值为98.0到98.5的聚乙烯醇系吸水性树脂。
4.如权利要求2所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述游离水除去剂是丙烯酸系吸水性树脂。
5.如权利要求4所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述丙烯酸系树脂以吸水性树脂的体积为基准，可吸附400至800倍自身体积的水分。
6.如权利要求2所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述精油吸附/解吸附调节剂是表面积为200至800m2/g的多孔碳材料。
7.如权利要求2所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述发热剂是孔径为0.1至0.8nm的沸石。
8.如权利要求2所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述热传导抑制剂为多糖类化合物。
9.如权利要求2所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述吸收促进剂为单萜类化合物。
10.如权利要求9所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述单萜类化合物是l-薄荷醇或柠檬烯。
11.如权利要求2所述的经皮吸收型抗焦虑药用组合物，其特征在于，所述成片基质是皂化值为约88.0的热塑树脂。
12.一种经皮吸收型抗焦虑药，其特征在于，含有如权利要求1至11中任一项所述的抗焦虑药用组合物。
13.一种生产经皮吸收型抗焦虑药用组合物的方法，包括以下步骤称取预定量的玫瑰精油；将所述玫瑰精油与精油吸附剂混合，使在精油吸附剂上形成精油涂层；在具有精油涂层的吸附剂中加入用于吸附和解吸附精油的多孔性碳材料，以形成被多孔性碳材料所涂覆的碳涂层颗粒；均匀混合预定量的碳涂层颗粒、发热剂、热传导抑制剂以及成片基质，以制成具有均匀厚度的层，和对其进行加热，以形成抗焦虑药药用组合物。
14.一种生产经皮吸收型抗焦虑药的方法，包括以下步骤称取预定量的玫瑰精油；将所述玫瑰精油与精油吸附剂混合，使在精油吸附剂上形成玫瑰精油涂层；在具有精油涂层的吸附剂中加入用于吸附和解吸附精油的多孔性碳材料，以形成被多孔性碳材料所涂覆的碳涂层颗粒；均匀混合预定量的碳涂层颗粒、发热剂、热传导抑制剂以及成片基质，以制成具有均匀厚度的层，然后对其进行加热，以形成抗焦虑药药用组合物；所述抗焦虑药用组合物为经皮吸收型，将其切割成预定尺寸的片并夹在两张片状材料中间；然后对所述片状材料的四边进行热粘合处理。
全文摘要
本发明提供了一种经皮吸收型抗焦虑药，其活性成分为从植物中提取的精油；和该类抗焦虑组合物，及其生产方法。经皮吸收型的抗焦虑药包括作为活性成分的玫瑰精油，精油吸附剂、游离水除去剂、精油吸附/解吸附调节剂、发热剂、热传导抑制剂、吸附促进剂、成片基质和用于压接的薄片。同时本发明也提供了抗焦虑药和抗焦虑组合物的生产方法。
文档编号A61K9/70GK1997380SQ20058002092
公开日2007年7月11日 申请日期2005年6月13日 优先权日2004年6月23日
发明者刈田毅 申请人:自然工艺株式会社