专利名称：：一种治疗肝癌、白血病的药物制剂与其生产工艺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗肝癌、白血病等恶性肿瘤的药物新制剂与其生产工艺。技术背景肝癌、白血病均是常见的恶性肿瘤，在我国发病率有逐年上升的趋势，死亡率亦高，据统计，每年死于肝癌人数在IO万以上。白血病发病率约为2.76/10万，以儿童和青年患者居多，严重影响人们的健康和生存质量。目前治疗肝癌的方法很多，但无论国内国外，均还没有找到最好的治愈方法。除早期诊断发现小肝癌(小于5cm)行手术切除辅以药物疗法效果较好以外，中晚期肝癌采用化疗、放疗及手术治疗均不理想。西药阿霉素、顺铂等对肝癌细胞有很强的杀伤作用，但临床使用毒副作用较多，利用现代科学从天然动植物中提取分离的斑蝥素、喜树碱、紫杉醇等，亦有较强的抗恶性肿瘤作用，但同样具有西药一样的骨髓抑制，胃肠道刺激等毒副反应。通过文献、光盘检索以及网页査询，目前临床治疗肝癌较好的药物，是90年代从中药中开发研制上市的莪术油、薏苡仁油(康菜特)注射剂。这两种注射剂抗癌效果虽然未能超过前述所有药物，但毒副作用少，在改善患者临床症状，提高生活质量，延长生存时间等方面，却明显优于前者。白血病的治疗，目前除骨髓移植可以延长患者生存时间以外，化疗、放疗均不理想，多数患者靠中药保守治疗以提高其生存质量。
发明内容本发明的目的在于为临床提供一种治疗肝癌、白血病等恶性肿瘤疗效确切，毒副作用小，质量稳定可控，对肿瘤细胞具有靶向性，既能抑制癌细胞增殖生长，又能起诱导分化作用的药物新制剂。本发明目的是通过以下技术方案实现的本发明精选青蒿油、甘草酸盐、维A酸三种主药或单味青蒿油或三种中的任意两种组合，与适当的药用辅料配方，制备成注射剂与口服制剂。无论单味、二味及三味主药组合配方，其用量均分别为青蒿油l15g,甘草酸盐l15g，维A酸0.52.0g，制成1000ml或1000g。药用辅料包括卵磷脂、豆磷脂、胆固醇、大豆油、维生素E、聚山梨酯80、葡萄糖、甘油、山梨醇、PVP等。因辅料品种及用量的不同，本发明制剂可以是乳剂、脂质体(多相脂质体)液体或固体制剂。制剂成品的命名复尔康+剂型名称，如复尔康注射液、复尔康口服液、复尔康冻干制剂等。本发明主药青蒿油及甘草酸盐的提取制备方法1、青蒿油的提取取青蒿切碎，装入蒸馏锅中，加68倍量水，浸泡2h，加热蒸馏23h，收集蒸馏液，重蒸馏，分离挥发油，即得。亦可采用超临界提取方法制备青蒿油。2、甘草酸盐的提取制备甘草碎成粗粉，加稀氨水湿润，用IO倍量水渗漉，渗漉液加稀H2S04酸化，滤取沉淀物，加4倍量乙醇，回流3h，滤过，滤液加氨水或20%KOH、10%NaOH乙醇液至弱碱性，放置析晶，滤取结晶，加冰醋酸加热溶解，放冷析晶，滤取晶体，干燥得甘草酸盐。具体实施例方式实施例1:a.取维生素Elg，大豆油(注射用)5g，胆固醇4g，维A酸0.5g，大豆磷脂16g，聚山梨酯8010g，加热至熔融，稍冷，加青蒿油5g，搅匀。b.取甘草酸铵2g，放入400ml沸水中搅溶，调pH57，于组织捣碎机内，以3000~6000转/分搅拌下，缓缓加入a熔融液，加完后，以8000转/分搅拌3次，每次3min，制备成稠乳液。c.取注射用葡萄糖50g，溶于500ml水中，加热至406(TC，在搅拌下加入b乳液，添水至1000ml，搅匀，于高压均质机中，以300400kg/cr^压力反复匀化3次。放出，减压滤过脱气，再用4号滤球或微孔滤膜过滤，在氮气流下灌装密封或冷冻干燥后密封，IO(TC灭菌30min即得。实施例2:a.取维生素E0.5g,注射用大豆油10g，胆固醇5g，维A酸lg，大豆磷脂20g，聚山梨酯10g，加热搅拌熔融后，稍冷，加青蒿油10g，搅匀。b.取注射用甘油25g，加入400ml水中，搅匀，预热至约60°C，于组织捣碎机内，以3000-6000转/分搅拌下，缓缓加入a液，加完后以8000转/分搅拌3次，每次3min，制备成乳液。取出，添水至1000ml，以下照实施例l高压匀化，过滤，灌装灭菌即得。实施例3:a.取大豆磷脂10g，聚山梨酯10g，溶于400ml沸水中，稍冷，于组织捣碎机内，以3000~6000转/分搅拌下，先后缓缓加入维生素Elg，青蒿油15g，加完后以8000转/分搅拌10min。b.取葡萄糖或山梨醇50g或甘油25g，溶于500ml水中，预热至6(TC，加入a液，添水至1000ml，搅匀，以下照实施例l高压匀化，过滤，灌装灭菌即得。本发明复尔康注射液药效学试验如下实验例一复尔康对荷肝癌(H22)小鼠肿瘤的试验报告1试验目的观察复尔康对荷H22(S型)小鼠有无体内抗肿瘤作用，为开发复尔康提供实验依据。2试验材料2.1受试物复尔康注射液，由泸州医学院冯文宇教授提供，批号050629。2.2实验动物昆明小鼠、SPF级动物，由重庆市中药研究院实验动物研究室提供。合格证号SCXK(渝)20020004。3实验环境在一级标准动物实验室进行，设施合格证号SYXK(渝)200200024试验方法无菌条件下，取接种1012天之实体瘤，按l:5匀浆，调整瘤细胞数为107个/ml，接种于小舉右腋皮下，0.2ml/只，每只小鼠接种瘤细胞数量为2X106，次日随机分7组，即复尔康25ml/kg、12.5ml/kg、6.25ml/kg三个剂量组，辅料25ml/kg组，康莱特25ml/kg组，环磷酰胺25mg/kg组及对照组。用药组及辅料组每组10只，每天尾静脉给药一次，连续给药10天，对照组给予相应体积生理盐水。末次给药后停药一天。脱颈处死动物、称体重、剖瘤称重，按公式计算肿瘤抑制率。加生n^(对照组平均瘤重一药物组平均瘤重)inn抑制率=-对照组平均瘤重-"00疗效判断标准肿瘤抑制率大于30%，连续重复2次(共3次)，经统计学处理有明显差异者为有抗肿瘤作用。5试验结果见表l表l复尔康对H22(S型)小鼠肿瘤生长的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表l可见复尔康注射液各剂量组静脉注射(iv)对荷H22小鼠实体瘤有明显的抑制作用。连续重复2次(共3次)，结果基本相似。6结论试验结果表明，在本试验条件下，复尔康注射液对荷H22小鼠实体瘤有明显的抑制作用。实验例二复尔康对荷肝癌(H22)腹水瘤小鼠的试验报告1试验目的观察复尔康对荷H22(A型)小鼠有无体内抗肿瘤作用，为开发复尔康提供实验依据。2实验材料2.1受试物复尔康注射液，由泸州医学院冯文宇教授提供，批号050629。2.2实验动物昆明小鼠、SPF级动物，由重庆市中药研究院实验动物研究室提供。合格证号SCXK(渝)20020004。2.3阳性对照药环磷酰胺注射剂，批号05090721。3实验环境在一级标准动物实验室进行，设施合格证号SYXK(渝)20020002。4试验方法无菌条件下，取接种7-8天之腹水瘤按1:IO稀释，调整瘤细胞数为1(f个/ml，接种于小鼠腹腔，0.2ml/只，每只小鼠接种肿瘤细胞数量为2X106，次日随机分为六个组，即复尔康25ml、12.5ml、6.25ml/kg三个剂量组，辅料25ml/kg组，环磷酰胺50mg/kg组及对照组；对照组20只动物，其余各组10只。用药组及辅料组每天腹腔给药一次，连续给药10天，对照组给予相同体积生理盐水。停药后观察记录动物死亡情况，超过4周者按4周计算，按公式计算生命延长率f^WK，—(药物组平均生存天数一对照组平均生存天数)謹对照组平均生存天数x1UU疗效判断标准生命延长率大于50%，连续重复2次(共3次)，经统计学处理有明显差异者为有抗肿瘤作用。5试验结果见表l表1对荷H22(A型)小鼠生命延长率的影响组另lj体重(g)动物数平均存活天数士SD生命延长率(％)P值对照组20.902012.35土2.35复尔康25ml/kg20.701022.50±5.8282.19PO.01复尔康12.5ml/kg20.701020.40±5.6465.18P<0.01复尔康6.25ml/kg20.601018.60±3.7550.61PO.01辅料25ml/kg20.701012.10±0.99环磷酰胺50mg/kg20.801022.60±4.3583.00PO.01由表1可见，复尔康注射液各剂量组腹腔注射(ip)对荷H22(A型)肿瘤小鼠生命有明显延长作用。连续重复2次(共3次)，结果基本相似。6结论试验结果表明，复尔康注射液各剂量组腹腔注射对荷H22(A型)肿瘤小鼠生命有明显延长作用。实验例三复尔康注射液对肺癌A549和白血病CEM-C7细胞株的体外抑制作用1材料1.1药物复尔康注射液，由泸州医学院药物研究所提供，批号060313。阿霉素，批号051019，生产厂浙江海正药业股份有限公司。1.2细胞株A549(肺癌)和CEM-C7(T细胞白血病)细胞株(购于上海细胞所)，由本实验室保存。1.3试剂RPMI-1640培养基，美国Gibco公司产品；青霉素、链霉素，华北制药有限公司产品；小牛血清，兰州中美合资民海生物公司产品；胰蛋白酶，美国Gibco公司产品；台盼蓝，美国Sigma公司产品；其它试剂均为国产分析纯。1.4仪器及设备C02培养箱，日本SANYO公司产品；倒置相差显微镜，德国Olympus公司产品；超净工作台,苏州安泰空气技术有限公司；全自动酶标仪，BIO—RAD产品，Modd550(microplatereader);2方法试验分为空白对照组(不含细胞的完全培养基)，阴性对照组(未经药物处理的A549及CEM-C7细胞)，实验组(共12个浓度梯度)，每组3个复孔。阳性对照组阿霉素，与实验组对应分为2个浓度梯度。取对数生长期细胞，RPMI-1640培养液悬浮并调整浓度为lxl()S个/ml，每孔lOOpl。即每孔1"04个细胞接种在96孔板中，5%C02、饱和湿度37'C培养。待24小时后细胞完全贴壁，实验组加入RPMI-1640完全培养基稀释的复尔康注射液至终浓度分别为0.00037、0.000735、0.00147、0.00294、0.0059、0.0117、0.0235、0.047、0.094、0.1875、0.375、0.75(jg/ml，阳性对照组加入RPMI-1640完全培养基稀释的阿霉素，浓度与实验组对应。阴性对照组再加入完全培养基，培养48小时，于实验终止前4小时加入MTT贮存液20川/L，继续于5%C02、饱和湿度37'C孵箱中孵育至实验终止，吸弃上清，每孔加入二甲基亚砜(DMSO)10(^1。于10分钟内在全自动酶标仪上室温避光振荡混匀并于490nm波长测定各孔的OD值，按公式:GI(生长抑制率)=1-(药物组OD值/对照组OD值)xlOO。/。计算各组的生长抑制率。用Bliss法计算IC50值。3结果共做了三次MTT，结果见表l-6表1第一次实验复尔康对肿瘤细胞A549和CEM-C7的作用(5土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2第二次实验复尔康对肿瘤细胞A549和CEM-C7的作用(5Z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3第三次实验复尔康对肿瘤细胞A549和CEM-C7的作用(5±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表4第一次实验阿霉素对肿瘤细胞A549和CEM-C7的作用(5土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表6第三次实验阿霉素对肿瘤细胞A549和CEM-C7的作用(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>4结论在本实验条件下，复尔康注射液对肿瘤细胞A549的抑制作用实验的三次IC50分别为0.1446±0.0187〃g/ml，0.1431±0.466/<g/ml，0.1644±0.0221〃g/ml。而对肿瘤细胞CEM-C7的IC50则为0.0391士0.0057pg/ml，0.0239±0.0201//g/ml，0.0499士0.0072z/g/ml。表明复尔康注射液对肿瘤细胞A549(肺癌)及CEM-C7细胞(白血病)均有显著性的抑制作用。实验例四复尔康对小鼠白血病P388的治疗作用1试验目的观察复尔康对荷白血病P388小鼠有无体内抗肿瘤作用，为开发复尔康提供实验依据。2实验材料2.1受试物复尔康注射液，由泸州医学院冯文宇教授提供，批号061017。复尔康注射液辅料溶液，由泸州医学院冯文宇教授提供，批号061025。2.2实验动物昆明种小鼠、SPF级动物，由重庆市中药研究院实验动物研究室提供。合格证号SCXK(渝)20020004。2.3阳性对照药顺铂注射液,规格6ml:30mg，批号060701。生产厂云南个旧生物药业有限公司2.4瘤株小鼠白血病P388，引种于重庆医科大学(由华西医科大学肿瘤研究所建株)。3实验环境在一级标准动物实验室进行，设施合格证号SYXK(渝)200200024试验方法无菌条件下，取接种于小鼠7天的P388白血病腹水，按l:15稀释，调整白血病细胞数为107个/1111,接种于小鼠腹腔，0.2ml/只、每只小鼠接种白血病细胞数量为2X106，次日随机分6组复尔康40ml、20ml、10ml/kg三个剂量组，辅料40ml/kg组、顺铂组及对照组。复尔康各剂量组、辅料组及顺铂组每组IO只小鼠，对照组20只。复尔康各剂量组、辅料组每天腹腔给药一次，连续给药10天，顺铂组隔日给药一次(共5次)，对照组给予相同体积生理盐水。停药后观察记录动物死亡情况，超过30天按30天计算，按公式计算生命延长率小az工j^糸—(药物组平均生存天数一对照组平均生存天数),生命延长率--对照组平均生存天数-Xl00疗效判断标准生命延长率大于50%，连续重复2次(共3次)，经统计学处理有明显差异者为有抗肿瘤作用。5试验结果见表l表1、复尔康对荷白血病P388小鼠生命延长率的影响组别体重(g)动物数平均存活天数土SD生命延长率(％)P值对照组18.552012.75±0.79复尔康40ml/kg18.501020.60±2.0161.57P<0.01复尔康20ml/kg18.401019.20±3.7050.59P<0.01复尔康10ml/kg18.501014.20±0.9211.37P<0.01辅料40ml/kg18.601012.50±0.97顺铂2mg/kg18,501021.10±2.0865.49P<0.01注P值为各组与对照组相比表1结果表明，复尔康注射液40ml/kg、20ml/kg组对荷白血病P388小鼠具有明显的生命延长作用。连续重复2次(共3次)，结果基本相似。6结论试验结果表明，腹腔注射复尔康注射液40ml/kg、20ml/kg组对荷白血病P388小鼠具有明显的生命延长作用。权利要求1、一种治疗肝癌、白血病的药物制剂与其生产工艺，其特征在于它是由青蒿油、甘草酸盐、维A酸三种主药或单味青蒿油或三种中的任意两种组合，与适当的药用辅料配方，制成的注射剂与口服制剂。无论单味、二味及三味主药组合配方，其用量均分别为青蒿油l~15g，甘草酸盐l15g，维A酸0.52.0g，制成1000ml或1000g。2、权利要求1所述的甘草酸盐，可以是甘草酸的铵、钾、钠盐；权利要求1所述的药用辅料包括卵磷脂、豆磷脂、胆固醇、大豆油、维生素E、聚山梨酯80、葡萄糖、甘油、山梨醇、PVP等。3、根据权利要求1所述的治疗肝癌、白血病的药物制剂，因辅料品种及用量的不同，制剂成品可以是乳剂、脂质体液体或固体制剂。4、根据权利要求1所述的治疗肝癌、白血病药物制剂的生产工艺-a.取维生素Elg，注射用大豆油5g，胆固醇4g，维A酸0.5g，大豆磷脂或卵磷脂16g，聚山梨酯8010g,混合加热搅拌熔融，稍冷，加入青蒿油5g，搅匀。b.取甘草酸铵5g，放入400ml沸水中搅溶，调pH57，于组织捣碎机内，以3000-6000转/min搅拌下，缓缓加入a熔融液，加完后以8000转/min搅拌3次，每次3min，制备成稠乳液。c.取注射用葡萄糖50g或甘油25g,溶于500ml水中，加热至30~60°C，在搅拌下加入b稠乳液，添水至1000ml，搅匀，于高压均质机内，以30(K400kg/cmS压力匀化3次，放出，减压滤过脱气，再用4号滤球或微孔滤膜过滤，在氮气流下灌注密封或冷冻干燥后密封，100。C灭菌30min即得。以上生产工艺采用的是熔融法加二歩匀乳法，本发明制备工艺尚可采用薄膜分散法、超声波分散法等。全文摘要本发明公开了一种治疗肝癌、白血病的药物制剂与其生产工艺。其特点是这种药物制剂是用青蒿油、甘草酸盐、维A酸三种主药或单味青蒿油或其中的任意两种组合，与适当的药用辅料配方，制备成可供临床使用的药物剂型。本发明药物制剂，经药效学试验证明对肿瘤细胞具有靶向性，能明显抑制肝癌、肺癌及白血病细胞的增殖生长，显著延长荷肝癌、白血病小鼠生存期的作用。本发明药物制剂，尚具有质量稳定可控，毒副作用小，疗效可靠的特点。制剂成品名为复尔康+剂型名，如复尔康注射液，复尔康口服液等。文档编号A61K31/704GK101120958SQ200710048608公开日2008年2月13日申请日期2007年3月13日优先权日2007年3月13日发明者冯文宇申请人:泸州医学院