专利名称：：癌症疫苗的制作方法
技术领域：
：本发明主要涉及癌症诊断，预后，治疗和预防的领域。更具体地，本发明涉及诊断，治疗和预防肺癌的方法。特别地，本发明的方面关注于诊断，治疗和预防小细胞肺癌的方法。本发明提供了使用核酸和/或蛋白(其在胂瘤细胞中是差异表达的)以及针对所述蛋白的免疫特异性抗体治疗，诊断和/或预防所述癌症的方法。
背景技术：
：癌症的主要特征在于来源于给定的正常组织的异常细胞数目的增加，这些异常细胞对邻近组织的侵入，以及恶性肿瘤细胞淋巴或血源性传播至局部淋巴结或远离的位置(转移)。临床数据和分子生物学研究表明，癌症是一个多步骤的过程，它起始于微小的癌前改变，这种癌前改变可能在一定条件下发展为肿瘤形成。癌变前异常细胞生长由增生，组织转化，或极其特别地，发育不良(对于这些异常生长条件的评述，参见Robbins&Angell，19176,BasicPathology,2dEd.，W.B.SaundersCo.，Philadelphia,pp.68-79)例证。肿瘤性转化病变可能克隆性地进展并发展渐增的生长能力，转移和异质性，尤其是在其中肿瘤性转化细胞逃脱宿主免疫监视的条件下(Roitt，I.，Brostoff,J.andKale,D.，1993，Immunology3rded.，Mosby，St.Louis,pps.17.1-17.12)。在美国，2003年癌症流行病学估计超过1，300，000个新病例以及超过550，000个死亡病例(Jemaletal，2003，CACancerJ.Clin.，53,5-26)。在美国，肺癌是最普通的癌症之一，2003年其大约有1"，000个新病例以及157，000个死亡病例(Jemaletal.，2003，CACancerJ.Clin.53，5-26)。肺癌一般被分类为小细胞肺癌(SCLC)或非小细胞肺癌(NSCLC)。SCLC占全部肺癌的大约20%而NSCLC占剩余的大约80%。NSCLC进一步分为腺癌(AC)(所有病例的大约30-35%)，鳞状细胞癌(SCC)(所有病例的大约30%)和大细胞癌(LCC)(所有病例的10%)。其他的NSCLC亚型，在文献中未被清楚地定义，包括腺鳞癌(ASCC)和细支气管肺泡癌(BAC)。肺癌是全世界癌症死亡的主要原因，更准确地说，NSCLC占所有疾病案例的大约80%(CancerFactsandFigures,2002，AmericanCancerSociety,Atlanta,p.11.)。NSCLC有4种主要的类型，包括腺癌，鳞状细胞癌，细支气管肺泡癌和大细胞癌。基于细胞形态学，腺癌和鳞状细胞癌是NSCLC的最普通的类型(Travisetal.，1996，LungCancerPrinciplesandPractice,Lippincott-Raven，NewYork:pps.361-395)。腺癌的特征在于其在肺中更外周的位置，并且通常在K-ras癌基因中具有突变(Gazdaretal.，1994，AnticancerRes.14:261-267)。鳞状细胞癌一般位于更中心且常常携带p53基因突变(Niklinskaetal.，2001，FoliaHistochem.Cytobiol.39:147-148)。肺癌是癌症病人中的头号杀手，对于其不存在充分的治疗，在欧洲相当于所有癌症死亡病例的大约五分之一(IARC)。人口增长的负担或许在美国最近的研究中得到最好的说明，这些研究表明在1960年和1990年之间，妇女中死于肺癌的人数比同期乳腺癌的死亡人数增加超过400%。目前关于肺癌的不同类型的不存在充分的治疗方案。通过常规治疗，对于SCLC的亚型中位存活时间为局限期疾病15个月，广泛期疾病9个月，而长期存活非常低。成功治疗和根除肺癌的主要障碍在于晚期的诊断，高转移性特性，对化学疗法的抗性以及外科手术移除所有癌症细胞的不可能性。原则上，癌症疫苗是治疗一般癌症和特别是肺癌的最有前景的方法。在开发成功的疫苗中，主要的障碍是缺乏靶定的癌症特异抗原以及缺乏评价基于这些靶标的免疫疗法的工具。另外的一个问题是上述的肺癌的异质性。与许多其他类型的癌症相比，最近十年期间，肺癌治疗尚未导致存活率的显著提高，显示仅14%的总体5年存活(HauraEB.2001，CancerControl;8:326-336)。(www,medscape.com/viewarticle/409059)\;CrawfordJ.(www.medscape.com/viewarticle/429347—1)。迄今，特别地通过细分为SCLC和NSCLC来指导治疗方案的决策。不同于其他类型的肺癌，SCLC对化学疗法敏感。在大约75%的SCLC病例中，可以注意到对化学疗法的初始响应，在所有病例的大约35%中有临床上的完全响应(JohnsonDH，etal.，1987;AmJMedSci293:377-389)。但是不幸的是，在大部分病例中发生恶化，导致仅5-10%的3年存活率，和大约1%的5年存活率(MinnaJD，etal.1985,Cancerofthelung.In:Cancer.Principlesandpracticeofoncology2nded);在SCLC内，可以在典型和变异SCLC之间进行临床上的相应细分。变异类型的SCLC似乎甚至对化学疗法和放射疗法更不敏感。因此，患有变异类型的SCLC的病人的中位存活时间比患有典型类型的SCLC的病人的中位存活时间显著更短(RadicePA，etal.1982，Cancer;50:2894-2902)。还观察到对于患有组合的SCLC的病人比患有典型的SCLC的病人更差的预后(HirschFRetal，1983，Cancer;52:2144-2150)。大约75%至80%的病例具有NSCLC组织学，且大部分病人具有局部晚期疾病(III期)或转移疾病(IV期)。重要的是，针对明显定位的疾病经历有疗效的外科切除的病人具有在50%和80%之间的存活率，暗示着需要更好的全身性疗法以治疗潜伏微转移疾病。在NSCLC中，用化学疗法的治疗一般是不成功的(MinnaJD，etal.1985，Cancerofthelung.In:Cancer.Principlesandpracticeofoncology;2nded.)。因此，除了对于真实定位疾病的外科治疗的高治愈率外，患有NSCLC的病人的预后是严酷的(MulshineJL，etal.1986.，JClinOncol;4:1704-1715)。但是，在一小部分病人中，可以观察到对化学疗法的响应。部分地，这些病例可能代表着其中发生SCLC的NSCLC，因为在肺癌中这样的异质性成分是很普通的(参见上文)。从这些数据中，可能显然的是备选的治疗方式对这些病人是很关键的。本发明的主要目标是为肺癌的生物学和抗原性开发一个新的模型，并为肺癌疫苗疗法开发一个新的理念。该方法的目的在于把标的发现一对于SCLC和NSCLC特异的抗原和免疫策略。已在人肺癌中鉴定了大量的肿瘤相关抗原，并将这些抗原用作普通肺癌疫苗的靶标。这些抗原包括癌胚抗原(CEA)，人上皮勦蛋白MUC-1，癌-睾丸抗原NY-ES0-1和神经节苷酯Fuc-GMl(HauraEB.2001，CancerControl,8:326-336;www.ffledscape.com/viewarticle/409059)。几十年前，已经尝试具有失活的肿瘤细胞的肿瘤病人的疫苗，但没有很多的成效。将热灭活的分枝菌作为佐剂与自体胂瘤细胞一起肺瘤内注射至SCLC病变处取得了一定的成效。NSCLC可以在一些病人中激发特异的体液和细胞抗肿瘤免疫反应(SalgiaR，etal.2003;Jclin0ncol;21:624—630.)。基于血清学的克隆策略已鉴定了多种肿瘤相关抗原，包括elF4G，醛缩酶，膜联蛋白XI,Rip-1，和NY-LU-12。对自体肺癌细胞的体液反应可能与延长的存活相关。类似地，基于T细胞的克隆策略已揭示了NSCLC中的不同耙标，包括Her2/neu，SART-1，SART-2，KIAA0156,ART-l,ART-4，亲环蛋白B，突变的延伸因子2,苹果酸酶和ct-辅肌动蛋白-4。对NSCLC的细胞毒性T淋巴细胞反应的发展也可能与延长的存活有关。在临床实践中，各种亚型的癌症的确诊是重要的，因为疗法选择，预后，和治疗反应的可能性全部广泛依赖于诊断而变化。精确的预后，或无远处转移存活的确定可以允许肿瘤学家设计佐剂化学疗法的施用，对于具有较差预后的病人给予更强烈的治疗。另外，对不良预后的精确预测将极大地影响新肺癌疗法的临床试验，因为可以根据预后对潜在的研究病人进行分级。可以将试验限制在具有不良预后的病人，从而使之更容易辨别实验性疗法是否有效。迄今，尚未鉴定出令人满意的仅基于临床信息进行预后的预测因子。因此，提供特异的方法和试剂用于诊断，分期，预后，监控和治疗癌症(包括肺癌)将是有益的。提供鉴定具有发生肺癌和其他类型的癌症的易感体质的个体(其从而是预防疗法的合适受试者)的方法也是有益的。发明概述本申请发明人使用差异表达方法，鉴定并表征了NCAM-180及其变体，该基因的表达与肺癌和其他类型的癌症相关。本申请发明人的发现使得利用NCAM-180分子及其变体治疗，预防和诊断癌症(包括但不限于肺癌)成为可能，尤其是在神经和神经内分泌癌症的治疗，预防和i貪断中。新的NCAM-180在癌组织和细胞系中具有上调的表达模式，例如，被显示和描述的肺癌组织和细胞系。Exonl8-MUM(NCAM-180的片段，保留全长野生型NCAM-180基因的至少一个功能特征)也被显示和描述。使用该基因，基因产物，和该基因或基因产物(NCAM-180及其变体，cDNA，RNA,和/或蛋白)的拮抗剂或激动剂作为癌症的it断、药物篩选和治疗的靶标的方法也被显示和描述。还公开了基因或基因产物或其衍生物作为抗癌症的疫苗的用途。在一个实施方案中，提供了使用NCAM-180蛋白(例如SEQIDNO:4)，其片段，特别是Exonl8-MUM(例如SEQIDN0:2和6)及其变体，或编码所述蛋白的核酸治疗，预防和i貪断肺癌的方法。提供了NCAM-180基因cDNA或其变体的分离的核苷酸序列。特别地，本文提供了人NCAM-180及其Exonl8-MUM片段的分离的cDNA序列(SEQIDNO:1，3和5)。还提供了由SEQIDNO:1，3和5编码的分离的氨基酸序列(其为标示的SEQIDNO:2，4和6)。本发明进一步涉及关于受试动物中癌症的诊断评价和预后的方法。优选，该受试者是哺乳动物，更优选受试者是人。在一个优选的实施方案中，本发明涉及关于肺癌的诊断评价和预后的方法。例如，本发明的核酸分子可以用作诊断性杂交探针或用作引物进行诊断性PCR分析以检测NCAM-180基因的异常表达。NCAM-180或其变体的抗体或其他结合伴倡可以在诊断试验中使用，以检测体液，细胞或组织活检中NCAM-180的存在。在特定的实施方案中，可以测量血清或细胞NCAM-180及其变体以检测或对肺癌分型，例如腺癌，鳞状细胞癌，细支气管肺泡癌或大细胞癌；特别是检测或对SCLC分型。另外，提出了用于治疗癌症(包括肺癌)的方法。这些方法包括施用能够调节NCAM-180及其变体的水平(包括在受试者中调节NCAM-180基因表达和/或NCAM-180基因产物活性的水平)的组合物。受试者可以是任何动物，优选是哺乳动物，更优选是人。本发明还提供了用于预防癌症的方法，其中将NCAM-180或其片段，特别是Exonl8_MUM或其能够在哺乳动物中诱导体液或细胞免疫反应的片段，以有效量施用于受试者以引发受试者中的免疫反应。Exonl8-MUM片段进一步表征为它们包含5个至30个的氨基酸，特别是9个至15个的氨基酸且包含选自PAASNLSSSVLAN(SEQIDNO:2的AA101-113),VLSPSAPAGVG(SEQIDNO:2的AA117-127)，LAAAAAPATEAPQ(SEQIDNO:2的AA153-165)，KGPDPEPTQPGA(SEQIDNO:2的AA174-185)和DF画EGNFK(SEQIDNO:2的AA216-225)的表位。受试者可以是任何动物，优选是哺乳动物，更优选是人。本发明还提供了通过将编码NCAM-180或其变体，特别是编码Exonl8-MUM或其能够在哺乳动物中诱导体液或细胞免疫反应的片段的核酸序列，施用给受试者以便NCAM-180或变体的表达导致产生有效量的这些多肽以引发免疫反应来治疗或预防癌症的方法。免疫反应可以是体液的，细胞的，或两者的组合。在一个优选的实施方案中，本发明还提供了免疫的方法以赋予抵抗癌症发生的保护。本发明还提供了通过提供治疗量的反义核酸分子来治疗癌症的方法。反义分子是其为NCAM-180基因序列的全部或部分的互补序列的核酸分子，因此，其可以与NCAM-180基因及其变体，尤其是与Exonl8-MUM(NCAM-180的片段)杂交。因此，反义分子的杂交可以减少或抑制NCAM-180的表达。在一个优选的实施方案中，该方法用于治疗肺癌。本发明还包括用于评估病人是否患有肺癌或其他类型的癌症的试剂盒。该试剂盒包含用于评估NCAM-180或变体，包括其片段(例如Exonl8-MUM或其能够在哺乳动物中诱导体液或细胞免疫反应的片段)的表达水平的试剂。在另一个方面，该试剂盒包含抗体，其中抗体特异性结合相应于NCAM-180及其变体，尤其是Exonl8-MUM或其能够在哺乳动物中诱导体液或细胞免疫反应的片段的蛋白。该试剂盒还可包含多种抗体，其中多数特异性结合NCAM-180及其变体的不同表位，尤其是结合Exonl8-MUM片段，所述Exonl8-MUM片段包含5个至30个的氨基酸，特别是9个至15个的氨基酸且包含选自PAASNLSSSVLAN(SEQIDNO:2的AA101—113),VLSPSAPAGVG(SEQIDNO:2的AA117—127),LAAAAAPATEAPQ(SEQIDNO:2的AA153-165)，KGPDPEPTQPGA(SEQIDNO:2的AA174-185)和DF腦EGNFK(SEQIDNO:2的AA216-225)的表位。在一个可选择的实施方案中，该试剂盒包含核酸(例如寡核苷酸)探针。该探针特异性结合转录的相应于NCAM-180基因产物及其变体的多核苷酸。该试剂盒还可包含多种探针，其中各探针特异性结合转录的多核苷酸，所述多核苷酸相应于从NCAM-180基因及其变体转录的mRNA序列的不同区域，特别是相应于编码Exonl8—MUM(NCAM-180的片段)的核酸序列。在一个更具体的实施方案中，探针本质上由编码本发明的多肽的15-50，18-35，15-24,18-30，18-21或21-24个核苷酸的序列或其互补序列组成。在一个更进一步的实施方案中，提供了用于诊断用途的试剂盒，其包括在PCR中使用的能够扩增NCAM-180cDNA及其变体的引物，还包括相应的cDNA和/或基因以及标准量的NCAM-180c腿。因此，本发明提供了在受试者中诊断癌症的方法，其包括在来源于所述受试者的样本中检测或测量NCAM-180产物或其变体(包括其片段，例如Exonl8一MUM)，其中所述NCAM-180产物是(a)相应于SEQIDN0:1，3或5之一的RNA,或来源于其的核酸；(b)包含SEQIDN0:2，4或6之一的蛋白；(c)含有在高严格条件下与SEQIDN0:1，3或5之一或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白质；(d)使用NBLAST算法所确定的，与SEQIDNO:1，3或5之一或其互补序列至少90°/。同源的核酸，或由其编码的蛋白，其中，与非癌样本或为非癌样本预先确定的标准值相比，NCAM-180产物及其变体提供的水平表明受试者中癌症的存在。在一个前述的诊断方法的实施方案中，受试者是人，在另一个实施方案中，癌症是肺癌。在另一个实施方案中，样本是组织样本，多数细胞或体液。本发明进一步提供了在受试者中治疗癌症的方法，包括给受试者施用适量的化合物，该化合物减少NCAM-180产物及其变体(包括片段例如Exonl8-MUM和如上文中定义的其他片段)的水平和/或拮抗NCAM-180产物及其变体(包括片段例如Exonl8-MUM和如上文中定义的其他片段)的活性，其中所述NCAM-180产物是(a)相应于SEQIDNO:1,3或5之一的RNA,或来源于其的核酸；(b)包含SEQIDNO:2，4或6之一的蛋白；(c)含有在高严格条件下与SEQIDN0:1，3或5之一或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白质；(d)使用NBLAST算法所确定的，与SEQIDNO:1，3或5之一或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白。在一个实施方案中，其表达被降低的基因产物是由包含与SEQIDN0:1，3或5之一具有至少90%序列同一性的核苷酸序列的核酸编码的蛋白质。在另一个实施方案中，所述化合物降低了相应于SEQIDN0:1，3或5之一的RNA的表达。拮抗剂可以是(i)蛋白质；(ii)多肽；(iii)分子量小于2000道尔顿的有机分子；(iv)分子量小于2000道尔顿的无机分子；(v)与所述RNA结合并抑制所述RNA的翻译的反义寡核苷酸分子；(vi)耙向所述RNA并抑制所述RNA的翻译的核酶分子；(vii)特异性或选择性结合NCAM-180产物及其如本文定义的变体的抗体；(viii)与NCAM-180基因及其变体的启动子形成三螺旋的双链寡核苷酸，其中所述NCAM-180基因是使用NBLAST算法所确定的与SEQIDN0:1，3或5之一或其互补序列至少80%同源的核酸；或(ix)与L基因启动子形成三螺旋的双链寡核苷酸，其中所述NCAM-180基因是使用NBLAST算法所确定的与SEQIDNO:1，3或5之一或其互补序列至少80%同源的核酸。其中化合物是NCAM-180拮抗剂抗体，所述抗体免疫特异性结合包含SEQIDNO:2，4或6之一的氨基酸序列的蛋白质，并从而减少或已知根据本发明的蛋白的活性。本发明进一步提供对受试者进行抵抗癌症的预防接种的方法，包括给受试者施用引发针对NCAM-180基因产物的免疫反应的分子，其中所述NCAM-180基因产物是(a)相应于SEQIDNO:1或3之一的RNA，或来源于其的核酸；(b)包含SEQIDNO:2或6之一的蛋白；(c)含有在高严格条件下与SEQIDNO:1或3之一或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白质；(d)使用NBLAST算法所确定的与SEQIDNO:l或3之一或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白。在一个实施方案中，免疫反应是细胞免疫反应。在另一个实施方案中，免疫反应是体液免疫反应。在又一个实施方案中，免疫反应是细胞和体液免疫反应。本发明还进一步提供了用于预防或延迟癌症发作的疫苗制剂，包含(I)免疫原性量的NCAM-180产物，其中所述NCAM-180产物是(a)相应于SEQIDNO:1，3或5之一的RM，或来源于其的核酸；(b)包含SEQIDNO:2，4或6之一或SEQIDNO:2，4或6之一的片段的蛋白质，其中所述片段能够在哺乳动物中诱导体液或细胞反应，特别是在哺乳动物中的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应；(c)含有在高严格条件下与SEQIDNO:1，3或5之一或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所迷可杂交的序列编码的序列的蛋白质；(d)使用NBLAST算法所确定的与SEQIDNO:1,3或5之一或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；和(n)药学上可接受的赋形剂。在一个具体的实施方案中，能够在哺乳动物中诱导体液或细胞反应的片段包含SEQIDNO:2，4或6任一项的5个至30个氨基酸，尤其是9个至15个氨基酸，且包含选自PAASNLSSSVLAN(SEQIDNO:2的AA101-113)，VLSPSAPAGVG(SEQIDNO:2的AA117-127)，LAAAAAPATEAPQ(SEQIDNO:2的AA153-165)，KGPDPEPTQPGA(SEQIDNO:2的AA174-185)和DF膽EG醒(SEQIDNO:2的AA216-225)的表位。本发明还进一步提供药物组合物，其包含特异性或选择性结合本质上由SEQIDN0:2，4或6之一组成的蛋白的抗体；和药学上可接受的载体。在又一个实施方案中，药物组合物包含特异性或选择性结合SEQIDNO:2，4或6之一的片段的抗体，其中所述片段包含SEQIDNO:2，4或6任一项的5个至30个氨基酸，更特别地包含9个至15个氨基酸。本发明进一步提供了宿主细胞，其包含有效连接至启动子的、编码本发明多肽的核酸，和通过在其中所述核酸分子被表达的条件下培养宿主细胞来表达这些多肽及其变体的方法。因此本发明的一个目标是提供所述宿主细胞在用于在受试者中治疗或预防癌症的方法中的用途，包括给受试者施用(I)一定量的表达免疫原性量的NCAM-180产物的宿主细胞，其中所述NCAM-180产物是(a)相应于SEQIDNO:1，3或5之一的RNA，或来源于其的核酸；(b)包含SEQIDNO:2，4或6之一或SEQIDNO:2，4或6的片段的蛋白质，其中所述片段能够在哺乳动物中诱导体液或细胞反应，特别是如上文所定义的CTL反应；(c)含有在高严格条件下与SEQIDNO:l,3或5之一或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白质；(d)使用NBLAST算法所确定的与SEQIDNO:1,3或5之一或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；和任选地(II)药学上可接受的赋形剂。因此本发明的一个目标是提供对受试者进行抵抗癌症的预防接种的方法，所述方法包括给受试者施用适量的表达免疫原性量的NCAM-180产物的宿主细胞，其中所述NCAM-180产物如上文所定义，包括Exonl8-MUM片段和能够在哺乳动物中诱导CTL反应的片段；和任选地(11)药学上可接受的赋形剂。在一个具体的实施方案中，NCAM-180产物选自U)相应于SEQIDN0:1，3或5之一的RNA，或来源于其的核酸；(b)包含SEQIDN0:2，4或6之一的蛋白；(c)含有在高严格条件下与SEQIDN0:1，3或5之一或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包舍由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白质；(d)使用NBLAST算法所确定的与SEQIDNO:1,3或5之一或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白。受试者可以是任何动物，优选是哺乳动物，更优选是人。本发明的这些和其他方面在本文中更详细地进行描述。序列描述SEQIDN0:l是人Exonl8—MUM的核普酸序列。SEQIDN0:2是人Exonl8-MUM的氨基酸序列。SEQIDNO:3是人NCAM-180的核苷酸序列。SEQIDNO:4是人NCAM-180的氨基酸序列。SEQIDN0:5是人Exonl8-MUM的片段的核苷酸序列。SEQIDN0:6是由SEQIDNO:5编码的人Exonl8_MUM的片段的氨基酸序列。附图简迷图1:差异表达PCR的原理的图示。对于引物组A，正向引物设计在外显子17中，反向引物在外显子19中。对于引物组B，正向和反向引物都设计在Exonl8—MUM中。表达NCAM-l40的细胞的PCR扩增，用引物组A生成180bp的PCR产物，用引物组B无扩增子。表达NCAM-180的细胞用引物组B产生600bp的PCR扩增子。表达NCAM-l"和NCAM-180的细胞用2种引物组均产生PCR产物。图2:在来源于来自神经内分泌肿瘤的细胞系(SH-SYSY和CCI)的细胞培养物中和在来源于小细胞肺癌的细胞系(H69，H82，GLC-1，GLC1-M13)中作为NCAM-180部分的Exonl8-MUM的过表达。表达Exonl8-MUM的细胞在MUM特异PCR中产生604bp的PCR产物。表达NCAM-140剪接变异体的细胞在外显子17-19PCR扩增反应中具有180bp的产物。高表达标记为(++)，中等表达(+)，低表达(-+)，不可检测表达(-)。图3:在A中产生并在Ni-螯合物柱上纯化的纯化的截短的(图A)和全长的(图B)His-NCAM-Exonl8-MUM蛋白。图4:在体外用Exonl8-MUM重叠9肽库再刺激后测量的CTL反应。用Exonl8-MUM蛋白和/或DM免疫小鼠。分离脾，收获脾细胞且将其接种于96孔培养板。随后，用Exonl8—MUM重叠9肽库进行体外再刺激。用流式细胞术测量每10S个CD8+T细胞中IFN-y分泌细胞的数目。IPP-不相关的肽-用与NCAMExonl8-MUM蛋白区域不相关的肽进行的再刺激。各组免疫反应进行2次。用于初次的试剂由在/之前代表，用于加强的试剂由在/之后代表。使用的佐剂是Abisco-lOO。A:PBS/PBSB:佐剂/佐剂c:佐剂中的Exonl8-mum蛋白/佐剂中的Exonl8-mum蛋白D:Exonl8-MUM蛋白/Exonl8-MUM蛋白E:空pCI载体/空pCI载体F:Exonl8一MUMpCI/Exonl8-MUMpCIG:Exonl8-MUMpCI/佐剂中的Exonl8-MUM蛋白图5:在Exonl8-MUM蛋白免疫的小鼠中测量细胞毒性T细胞反应。用单独的9肽体外再刺激小鼠脾细胞。使用基于FACS的读出器测量包含细胞内IFN-y的CD8阳性T细胞的数目。图6:A在Exonl8-MUMDNA免疫的小鼠中测量细胞毒性T细胞反应。用单独的9肽体外再刺激小鼠脾细胞。使用基于FACS的读出器测量包含细胞内IFN-y的cd8阳性T细胞的数目。b预测的分值H-2db单体型。图7:由NCAMExonl8-MUM蛋白ELISA测量的体液反应。用截短的Exonl8-MUM蛋白和/或截短的Exonl8-MUMDNA免疫小鼠。使小鼠流血，分离血清并用緩沖液稀释1/200。用Exonl8-MUM蛋白包被ELISA平板，并使用HRP缀合的抗小鼠IgG进行结合抗体的检测。在450nm测量0D。图8:由NCAMExonl8-MUM蛋白ELISA测量的体液反应。用截短的Exonl8-MUM蛋白免疫小鼠。使小鼠(总共50只，每组5只)流血，分离血清并用緩冲液稀释(范围1/50-1/135.000)。分别用全长Exonl8—MUM蛋白A和截短的Exonl8-MUM蛋白B包被ELISA平板。使用HRP缀合的抗小鼠IgG进行结合抗体的检测。在450nm测量0D。图9:用由MUM杂交瘤MUMI21B2产生的单克隆抗体(IgM)染色的HCT-116(NCAM-阴性)，H82(NCAMExonl8—MUM阳性)和H69(NCAMExonl8-MUM阳性)细胞的荧光显微镜检查。AlexaFluor488标记的山羊抗小鼠ji链二抗(Invitrogen)用作二抗以检测结合的抗体。图10:用由MUM杂交瘤MUMI21B2产生的单克隆抗体(IgM)(稀释度1/2000)染色的表达NCAMExonl8-MUM的H69细胞的共聚焦显微术图像。AlexaFl丽488标记的山羊抗小鼠|i链二抗(Invitrogen)用作二抗以检测结合的抗体。发明详述对下列定义进行阐述以阐明本发明的方面特异性的或选择性的在反应中使用的核酸，例如在杂交反应中使用的探针，在PCR中使用的引物，或在药物制剂中存在的核酸，如果它与指定目标杂交或反应比它与可选择的物质杂交或反应更频繁，更快速，或更长的持续时间，则被称为"选择性的，，。类似地，多肽，如果它与指定目标(例如配体，半抗原，底物，抗体或其他多肽)结合比它与可选择的物质结合更频繁，更快速，或更长的持续时间，则被称为"选择性的，，。抗体，如果它通过至少一个抗原识别位点与指定目标结合比它与可选择的物质结合更频繁，更快速，或更长的持续时间，则被称为"选择性的"。一个标记，如果它主要地在特定细胞或组织类型(特别是对于目的生物样本)中或上表达，则它对特定细胞或组织类型是选择性的。变体多核苷酸或多肽的变体，如本文所使用的术语，是分别与参照多核苷酸或多肽不同的多核苷酸或多肽。变体多核普酸通常是有限的，从而参照和变体的核苷酸序列整体上是紧密相关的，并且在许多区域是相同的。变体的核苷酸序列中的变化可能是沉默的。即，它们可能不改变由该多核苷酸编码的氨基酸序列。当改变限制在这种类型的沉默变化时，变体将编码具有与参照相同的氨基酸序列的多肽。可选择地，变体的核苷酸序列中的变化可能改变由参照多核苷酸编码的多肽的氨基酸序列。这样的核苷酸变化可能导致由参照序列编码的多肽中氨基酸替换，增加，缺失，融合，和截短。变体多肽通常是有限的，从而参照和变体的序列整体上是紧密相似的，并且在许多区域是相同的。例如，变体和参照多肽可能在氨基酸序列中因一个或多个替换，增加，缺失，融合和截短(其可以在任何组合中存在或不存在)而不同。相当或相应在核酸之间，"相应"意指与核酸的特定序列或序列的部分同源或互补。在核酸和多肽之间，"相应"指肽的氨基酸按顺序来源于核酸或其互补序列的序列或序列的部分。在多肽(或肽与多肽)之间，"相应"指第一条多肽(或肽)的氨基酸按顺序来源于第二条多肽的序列或序列的部分。NCAM-180基因如本文所使用的，除非另有陈述，指本文发现的在某些癌症(例如，肺癌)及其亚类中上调的新NCAM剪接变体。NCAM-180产物或NCAM-180基因产物如本文所使用的，除非另有陈述，NCAM-180产物是相应于SEQIDN0:1，3或5之一的RNA，或来源于其的核酸；包含SEQIDNO:2，4或6之一的蛋白；含有在高严格条件下与SEQIDNO:1，3或5之一或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白质；使用NBLAST算法所确定的与SEQIDNO:1，3或5之一或其互补序列至少90%同源的核酸；与SEQIDNO:1或任意前述的蛋白或核酸的片段或衍生物，特别是Exonl8-MUM(NCAM-180的片段，下文也称为MUM蛋白或NCAM-MUM，由SEQIDNO:3或SEQIDNO:5的任一项编码)之一至少90%同源的核酸；在一个进一步的实施方案中，所述NCAM-180或Exonl8_MUM的片段特征在于它包含5个至30个氨基酸，更特别地9个至15个氨基酸，并且包含选自PAASNLSSSVLAN(SEQIDNO:2的AA101-113),VLSPSAPAGVG(SEQIDNO:2的AA117-127),LAAAAAPATEAPQ(SEQIDNO:2的AA153-165),KGPDPEPTQPGA(SEQIDNO:2的AA174-185)和DF画EGNFK(SEQIDNO:2的AA216-225)的表位。控制元件如本文所使用的，全部意指启动子区域，多聚腺苷酸化信号，转录终止序列，上游调控结构域，复制起点，内部核糖体进入位点("IRES")，增强子，等等，其全部为受体细胞中编码序列的复制，转录和翻译作准备。并非需要所有的这些控制元件，只要选择的编码序列能够在适当的宿主细胞中复制，转录和翻译。启动子区域以其通常的意义在本文中使用，意指包含DM调控序列的核苷酸区域，其中调控序列来源于能够结合RNA聚合酶并起始下游(3'-方向)编码序列的转录的基因。有效连接如在本文中使用的，意指元件的排列，其中所述组分被配置使得能够进行它们通常的功能。因此，有效连接至编码序列的控制元件能够实现编码序列的表达。控制元件不需要与编码序列相连，只要它们能起作用以指导编码序列的表达。外源的如本文中使用的，术语外源的意指得自或起源于外部的那些。当在基因或蛋白的外源表达的上下文中使用时，该术语意指在通常不表达该基因或蛋白的细胞或組织中被表达的基因或蛋白。当在核酸序列的上下文中使用时，例如，该术语还可以用于意指被有效连接的2个或多个核酸序列(在天然状态下通常不是有效连接的)的关联。治疗癌症或肿瘤如在本文中使用的，术语在哺乳动物中"治疗癌症或肿瘤"或"治疗癌症或胂瘤"意指在哺乳动物中减轻癌症或肺瘤的症状，纠正潜在的癌症或肿瘤的分子或生理的紊乱，减少癌症或肿瘤的病理或有害的生理结果的频率或严重性的一个或多个。举例来说(而非通过限制)，癌症或肿瘤的有害的生理结杲可以包括不受控制的增殖，其他组织的转移和侵入，以及免疫反应的抑制。免疫学上特异性的对于本发明的抗体，术语"免疫学上特异性的"意指结合目的蛋白(例如Exonl8一MUM蛋白)的一个或多个表位的抗体，但其在包含抗原性生物学分子的混合群体的样本中基本上不识别和结合其他分子。本质上由……组成术语"本质上由……组成"，当涉及具体的核苷酸或氨基酸时，指具有给定的SEQIDN0:的性质的序列。例如，当在涉及氨基酸序列中使用时，该短语包括序列本身和不影响该序列基本和新的特征的分子修饰。这样的氨基酸序列展示与给定的SEQIDNO:的序列80%的序列同源性或更高，即85%,90%,95%,97%,98%,99%或更高。特别地，这样的氨基酸序列展示与给定的SEQIDN0:的序列80%的序列同一性或更高，即85%,90%，95%，97%,98%，99%或更高。拮抗剂如本文中使用的，能够减少NCAM-180或其变体的水平和/或活性的化合物在本文中可以称为NCAM-180拮抗剂。激动剂如本文中使用的，能够增加NCAM-180或其变体的水平和/或活性的化合物在本文中可以称为NCAM-180激动剂。NCAM-180活性如本文中使用的，术语"NCAM-180活性"，"NCAM-180产物活性，，，或"NCAM-180介导的活性"意指与NCAM-180和/或NCAM-180产物的表达相关的活性。这样的活性包括，但不限于与NCAM-180表达水平变化相关的细胞增殖，细胞游动性，细胞分化，和/或细胞粘着的变化。如本文中使用的，术语"提高的，，，"过表达的"，"上调的"，或"增加的"意指NCAM-180转录物和/或蛋白的表达，与表达基线水平的NCAM-180的对照组织的那些相比，增加大约2倍或更高。核酸如在本发明的方法中使用的核酸包括DNA(包括基因组和cDM)和RNA。当根据本发明的核酸包括RNA时，涉及的在附加的列表中展示的序列应理解为涉及的RM等价物，用U替换T。本发明的核酸可以是单链或双链的。本发明的单链核酸包括反义核酸。因此，应理解的是，涉及的SEQIDNO:1或包含SEQIDNO:1的序列或其片段包括互补序列，除非上下文明显与之相反。上述情况也适用于SEQIDNO:3或5。通常，根据本发明的核酸提供为分离物，以分离和/或纯化的形式，或游离的或基本上游离的材料(天然与其结合的)，例如，侧翼于人基因组的游离或基本上游离的核酸，除了可能用于表达的一个或多个调控序列。核酸可以是全部或部分合成的，且可以包括基因组DNA，c腿或RNA。本发明还提供核酸，所述核酸是编码本发明的多肽的核酸的片段。在一方面，本发明提供核酸引物或探针，所述核酸引物或探针本质上由编码本发明的多肽的序列或其互补序列的15-50，例如15-35,18-35，15-24，18-30，18-21或21-24个核苷酸组成。术语"本质上由……组成"意指不包括任何附加的5，或3，核酸序列的核酸。但是在本发明的另一方面，可以在3，但优选5，末端将如上文定义的本质上由15-30个核苷酸组成的本发明的核酸连接至短的(例如，4-15个，例如4-10个核香酸)附加序列(它们天然不连接至附加序列)。这样的附加序列优选是连接体，其包含限制性内切酶识别位点，以在本发明的核酸用作例如PCR引物时利于克隆。核酸杂交。"选择性的"，其意味着就编码其他嘌呤受体的序列而言，尤其是就除了腺嘌呤受体以外的受体而言，是选择性的。通过实验或计算可以确定序列选择性杂交的能力。例如，一种计算引物Tm值的方法是参考用于计算同源靶序列的引物的Tm值的公式。该公式是Tm("C)=2(A+T)+4(G+C)—5。这提供了在3xSSC和0.1%SDS(其中SSC是O.15MNaCl，0.015M柠檬酸钠，pH7)的条件下的Tm值。该公式通常适用于长度达50个核香酸的引物。在本发明，该公式可以用作计算关于来自编码本发明的多肽的序列的特异序列的引物额定的Tm值的算法。该Tm值可以与为人和大鼠的GPCR序列计算的Tm值比较，基于与这些其他序列的任何部分匹配的最大数目。用于引物与靶序列杂交的合适的条件也可以用实验方法测定。合适的实验条件包括在固体支持物上、在低严格杂交条件(例如6xSSC，55°C)下将候选引物与编码本发明的多肽的核酸和编码其他腺嘌呤受体的核酸杂交，在减少的SSC和/或更高的温度下洗涤，例如在O.2xSSC，45°C，以及逐渐地增加杂交温度以确定允许引物与编码本发明的多肽的核酸杂交、但不与编码其他噪呤受体的核酸杂交的杂交条件。本发明的核酸，特别是探针，可以携带显示性标记。合适的标记包括放射性同位素如"P或35S，荧光标记，酶标记，或其他蛋白标记如生物素。这些标记可以添加至本发明的多核苷酸或引物并且可以通过使用本身已知的技术进行检测。本发明的引物可以由合成的核酸组成，例如具有修饰的主链结构以在细胞中提高核酸的稳定性的那些。大量的不同类型的对寡核苷酸的修饰在本领域中是已知的。这些修饰包括曱基膦酸酯和疏代磷酸酯主链，在分子的3，和/或5，末端添加吖啶或聚赖氨酸链。为了本发明，应理解的是本文所述的多核苷酸可以通过本领域中可用的任何方法进行修饰。可以进行这样的修饰以提高本发明的多核苷酸的体内活性或使用期限。基于本文所述的核酸序列的反义序列也包含在本发明的范围内，优选以寡核苷酸的形式，特别是稳定的寡核苷酸，或核酶。可以设计反义寡核苷酸使之与核酸的互补序列，mRNA前体或成熟的mRNA杂交，干扰由给定的耙DNA序列编码的多肽的产生，从而减少或完全阻止其表达。可以设计核酶使之切割由本发明的编码NCAM-180的核酸序列编码的mRNA，理想地在对如上文定义的NCAM-180基因特异的靶序列(包括根据SEQIDNO:1，3或5的序列)上切割。反义序歹寸的构建及其<吏用在PeymanandUlman，ChemicalReviews,90:543-584，(1990)，Crooke，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.;32:329-376，(1992)和ZamecnikandStephenson,P.N.A.S，75:280-284，(1974)中得到描述。核酶的构建及其使用在例如GibsonandShillitoe，MolecularBiotechnology7(2):125-137，(1997)中得到描述。本发明的NCAM-180的cDNA序列可以用标准的PCR(聚合酶链式反应)克隆技术进行克隆。这包括制作针对SEQIDNO:1的相对链的5，末端及3，末端的一对引物，使引物与从哺乳动物细胞获得的mRNA或cDNA接触，在致使所需的区域扩增的条件下进行聚合酶链式反应，分离扩增的片段(例如通过在琼脂糖凝胶上纯化反应混合物)以及回收扩增的DNA。可以设计引物使之包含合适的限制性内切酶识别位点，以便扩增的DM可以克隆入合适的克隆栽体。上述情况也适用于SEQIDNO:3或5。可以通过很多方法获得并非与SEQIDNO:1，3或5的序列100%同源但编码SEQIDNO:2，4或6或本发明的其它多肽的多核苷酸。例如，可以进行SEQIDN0:1，3或5的序列的定向诱变。当例如序列需要沉默密码子变化以使密码子偏爱性对其中表达该多核苷酸序列的特定的宿主细胞最优化时，这是有用的。可能需要其它的序列改变以引入限制性内切酶识别位点，或改变由该多核苷酸编码的多肽的性质或功能。可能需要另外的改变以代表特定的编码变化(需要这种变化来提供，例如，保守性替代)。本发明的核酸可以在5，或3，末端包含附加序列。例如，可以将合成的或天然的5，前导序列附于编码本发明的多肽的核酸。附加序列还可以包括本发明的核酸在特定的宿主细胞中转录所需的5，或3，非翻译区。另外，其它动物，特别是哺乳动物(例如猴或兔)，更特别地灵长类动物(包括猴)，可以获得NCAM-180的同源物并在本发明的方法中使用。通过制作或获得来自分割的细胞或组织的cDNA文库或来自其它动物种类的基因组DNA文库，并且用包含SEQIDN0:1，3或5的全部或部分的探针在中等或高严格条件(例如0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠，在从大约50。C至大约601C)下探查这些文库可以获得这些序列。本发明进一步延伸至包含编码本发明的多肽的序列且其中编码序列被分割为2个或多个(优选不超过5个，例如4个或3个)外显子的分离的DNA序列。这样的外显子序列可以是天然的并从基因组克隆获得或合成的。可以在包含编码本发明的多肽的核酸(其序列被一个或多个外显子序列打断)的小基因序列的构建中使用外显子序列。可以使用来自任何真核来源的异源外显子来构建小基因。多肽本发明的方法中使用的分离的多肽是如上文定义的那些，以分离的形式，其和天然与其结合的材料是游离或基本上游离的，例如在细胞中发现的与其结合的其他多肽。当然，多肽可以用稀释剂或佐剂进行配制并为了实用目的而进行分离一例如如果用于包被微量滴定板以在免疫测定中使用，多肽通常可以与明胶或其它载体混合。多肽可以是糖基化的，天然地或通过异源真核细胞系统，或它们可以是(例如如果通过在原核细胞中表达而产生)未糖基化的。多肽可以是磷酸化和/或乙酰化的。本发明的多肽还可以是基本上纯化的形式，在这种情况下它通常将包含在制剂中的多肽，其中制剂中超过90%，例如95%，98%或99%的多肽是本发明的多肽。本发明的多肽可以例如通过添加组氨酸残基以协助其纯化或通过添加信号序列以促进其从细胞分泌来进行修饰。在一个实施方案中，本发明涉及融合蛋白，其包含本发明的NCAM-180多肽，片段或衍生物以及作为融合伴侣的异源蛋白或蛋白的部分。本发明的蛋白和融合蛋白可以进行化学缀合，但优选在异源表达系统中作为重组融合蛋白表达。融合伴侣可以是免疫学融合伴侣(其可以协助提供T辅助表位，或作为表达增强子)。因此免疫学融合蛋白可以通过与活化信号(通过大量的对外源蛋白或肽特异的T细胞)的分泌相联系的旁观辅助效应起作用，从而增强对NCAM-180蛋白的免疫性诱导。优选地，选择异源伴侣以在大部分人中被T细胞识别。表达增强子将允许待产生的NCAM-180蛋白水平的提高(与天然重组蛋白相比)，且包括辅助初期蛋白折叠的伴侣，特别是HSP70或HSP60家族和所述热休克蛋白的C末端结构域(已知其与底物蛋白和免疫原性肽相互作用)。优选地，融合伴侣是免疫学融合蛋白和表达增强子伴倡。因此，本发明提供连接至融合伴倡的，根据本发明的NCAM-180的融合蛋白，片段或衍生物。在一个进一步的实施方案中，融合伴侣选自来自流感病毒的非结构蛋白，NS1(血凝素)或HSP70或HSP60家族的C末端结构域。免疫学融合伴倡的另外的例子在EP804156中提供。具有与SEQIDNO:2，SEQIDNO:4或SEQIDNO:6至少50%，例如60%，70%,80%,90%，95%或98%序列同一性的多肽是其分别为SEQIDNO:2，SEQIDNO:4或SEQIDNO:6的氨基酸序列变体，等位基因，衍生物或突变体的多肽，并且由本发明提供。例如这样的多肽可以因一个或多个的一个或多个(例如1个至20个，例如2，3，4，或5个至10个)氨基酸的增加，替换，缺失和插入而具有与在SEQIDN0:2，SEQIDNO:4或SEQIDNO:6中给定的序列不同的氨基酸序列。可以使用对参照序列(例如本发明的SEQIDNO:2,SEQIDNO:4或SEQIDNO:6)与询问序列进行比较的商业可获得的算法计算多肽序列的百分比同一性。评估同一性的进一步的详细情况在下文中描述。当确定询问序列具有与SEQIDNO:2,SEQIDNO:4或SEQIDNO:6的序列至少50%,优选至少60%,70%，80°/。，90%，95%或98°/。的序列同一性且所述序列是保留NCAM-180蛋白活性的多肽的序列时，这样的多肽组成本发明的一部分。根据本发明的多肽可以例如在通过从编码的核酸表达而产生之后进行分离和/或纯化(例如利用抗体)。分离和/或纯化的多肽可以在组合物的制剂中4吏用，其可以包含至少一种添加的组分，例如药物组合物包括药学可接受的赋形剂，介质或载体。根据本发明的多肽可以用作免疫原或者用于获得特异的抗体。在多肽的纯化和其他操作，诊断筛选和治疗情境中抗体是有用的。本发明的多肽可以用展示性标记进行标记。展示性标记可以是允许多肽被检测的任何合适的标记。合适的标记包括放射性同位素，例如"51，荧光染料，酶，抗体，多核苷酸和连接体例如生物素。本发明的标记的多肽可以在诊断过程例如免疫测定中使用以确定样本中本发明的多肽的数量。本发明的多肽或标记的多肽还可以利用标准方法在的免疫反应性。本发明的多肽或标记的多肽或其片段还可以固定至固相，例如免疫测定孔或量尺的表面。这样的标记的和/或固定的多肽可以在合适的容器中与合适的试剂，对照，说明书等等一起封装入试剂盒中。这样的多肽和试剂盒可以在抗体对在样本中存在的这些多肽或其活性部分或片段的检测(通过免疫测定)的方法中使用。免疫测定法在本领域中是公知的，通常包括(a)提供包含可被抗所述蛋白的抗体结合的表位的多肽；(b)将生物学样本与所述多肽在允许形成抗体-抗原复合物的条件下温育；和(c)确定是否形成包含所述多肽的抗体-抗原复合物。序列同一性核苷酸和多肽序列的百分比同一性。可以用下列程序(由NationalCenterforBiotechnologyInformation提供)确定同源性/同一性BLAST,带空位的BLAST,BLASTN和PSI-BLAST,其可以使用默认参数。GAP算法(GeneticsComputerGroup,Madison,WI)使用Needleman和Wunsch算法以比对两条完整的序列，其4吏匹配的数目最大化并使空位的数目最小化。通常，所使用的默认的参数是空位产生罚分-12且空位延伸罚分=4。用于确定核酸序列或其部分与询问序列之间的最佳的整体匹配的另一个方法使用基于Brutlag等人的算法的FASTDB计算机程序(Comp.App.Biosci.，6;237-245(1990))。该程序提供了整体序列比对。所述整体序列比对的结果是百分比同一性。在DM序列的FASTDB研究中使用以计算百分比同一性的合适参数是矩阵-百，k-元组-4，错配罚分-1，结合罚分=30,随机组长度-0，截止分值-1，空位罚分=5,空位大小罚分-O.05，以及窗口大小-500或询问序列的核苷酸碱基长度，无论哪个更短。计算氨基酸比对的百分比同一性和相似性的合适的参数是矩阵-PAM150，k-元组-2，错配罚分-1，结合罚分-20,随机组长度-0,截止分值=1，空位罚分=5，空位大小罚分-O.05,以及窗口大小=500或询问序列的核苷酸碱基长度，无论哪个更短。载体本发明的核苷酸序列可以整合入载体，特别是表达载体。可以使用载体在兼容的宿主细胞中复制核酸。因此在一个进一步的实施方案中，本发明提供了通过将本发明的多核苷酸导入可复制的载体，将该载体导入兼容的宿主细胞，以及使该宿主细胞在致使该栽体复制的条件下生长来制作本发明的多核苷酸。载体可以从宿主细胞中回收。合适的宿主细胞在下文中连同表达载体一起进行描述。优选地，本发明载体中的多核苷酸有效连接至能够为编码序列在宿主细胞中的表达作准备的控制序列，即，该载体是表达载体。术语"有效连接，，意指并置，其中所述组分处于允许其以其预期的方式起作用的关系中。"有效连接"至编码序列的控制序列以这样,编庙达。可以选择或构建合适的栽体，其包含适当的调节序列，包括启动子序列，终止子片段，多聚腺苷化作用序列，增强子序列，标记基因和其他适当的序列。载体可以是适当的质粒，病毒的例如噬菌体，噬菌粒或杆状病毒的，粘粒，YACs，BACs，或PACs。栽体包括基因治疗载体，例如基于腺病毒，腺伴随病毒，反转录病毒(例如HIV或MLV)或ct病毒载体的载体。载体可以装备有复制起点，任选地用于所述多核苷酸的表达的启动子和任选地启动子的调节子。载体可以包含一个或多个选择标记基因，例如在细菌质粒情况下的氨爷青霉素抗性基因或用于哺乳动物载体的新霉素抗性基因。载体可以在体外使用，例如用于产生RNA或用于转染或转化宿主细胞。载体还可以适合于体内使用，例如在基因治疗的方法中。在多种不同宿主细胞中用于多肽的克隆和表达的系统是公知的。合适的宿主细胞包括细菌，真核细胞如哺乳动物和酵母，以及杆状病毒系统。本领域可获得的用于表达异源多肽的哺乳动物细胞系包括中国仓鼠卵巢细胞，HeLa细胞，幼仓鼠肾细胞，COS细胞和许多其他细胞。可以选择启动子和其它表达调节信号以使之与宿主细胞(为其设计表达载体)兼容。例如，酵母启动子包括酿酒酵母(S.cerevisiae)GAL4和ADH启动子，裂殖酵母(S.pombe)nmt1和adh启动子。哺乳动物启动子包括金属硫蛋白启动子(其可以响应重金属如镉而被诱导)。可以使用病毒启动子如SV40大T抗原启动子或腺病毒启动子。所有这些启动子在本领域中是易于获得的。栽体可以包含其他序列例如启动子或增强子以驱动插入的核酸、核酸序列的表达，以便多肽作为融合蛋白和/或核酸编码的分泌信号产生，从而在宿主细胞中产生的多肽从细胞中分泌。在基因治疗中使用的用于产生本发明的多肽的载体包括携带本发明的小基因序列的栽体。关于其他详细情况参见，例如,MolecularCloning:aLaboratoryManual:2ndedition,Sambrooketal.，1989，ColdSpringHarborLaboratoryPress。用于操作核酸的许多已知的才支术和方法，例如核酸构建体的制备，诱变，测序，将DNA导入细胞和基因表达，以及蛋白质分析在CurrentProtocolsinMolecularBiology,Ausubeletal.eds.，JohnWiley&Sons,1992中被详细描述。载体可以如上文所述转化入合适的宿主细胞以提供本发明的多肽的表达。因此，在另一个方面，本发明提供了用于制备根据本发明的多肽的方法，其包括在提供含编码多肽的编码序列的栽体的表达的条件下培养如上所述的用表达载体转化或转染的宿主细胞，以及回收表达的多肽。多肽可以在体外系统中进行表达，例如网织红细胞裂解液。本发明的进一步的实施方案提供了用载体(用于本发明的多核苷酸的复制和表达)转化或转染的宿主细胞。选择细胞以使之与所述载体兼容，这些细胞可以例如是细菌，酵母，昆虫或哺乳动物。可以在用于基因表达的条件下培养宿主细胞，以便产生编码的多肽。如果多肽与合适的信号前导肽一起表达，那么它可以从细胞分泌到培养基中。表达生产后，多肽可以从宿主细胞和/或培养基进行分离和/或纯化，视情况而定，随后根据需要进行使用，例如以组合物的制剂，其可以包含一种或多种附加成分，例如包含一种或多种药学可接受的赋形剂，介质或载体的药物组合物。根据本发明的多核苷酸可以以反义方向如上文所述插入至载体中，以提供反义RNA或核酶的产生。诊断方法在一个优选的实施方案中，本发明涉及评估NCAM-180基因表达的定量和定性方面的方法。在一个实施例中，由本发明提供的NCAM-180基因或基因产物表达的提高预示着受试者中癌症的存在或所述受试者中癌症转移的危险性的存在。本领域中公知的技术，例如定量或半定量RT-PCR或RNA印迹分析，可以用于测量NCAM-180的表达水平。NCAM-180基因表达水平的测量可以包括测量天然存在的NCAM-180转录物及其变体以及其非天然存在的变体。但是，受试者中癌症的诊断和/或预后优选地直接检测天然存在的NCAM-180基因产物及其变体。因此，本发明涉及通过测量NCAM-180基因在受试者中的表达来诊断和/或预后受试者中的癌症的方法。例如，由NCAM-180核酸序列(例如SEQIDNO:l,3或5)编码的mRNA水平的提高。用于检测病人样本或其他合适的细胞来源中的NCAM-180核酸分子的诊断方法，可以涉及特异基因序列的扩增，例如，通过PCR(参见Mullis，K.B.，1987，美国专利号4，683,202)，随后用本领域技术人员公知的技术(如，例如，上文列出的那些)分析扩增的分子。通过利用例如这些的分析技术，扩增的序列可以与对照样本中的水平作比较。癌症的诊断和/或预后适合于检测受试者中天然存在的NCAM-180多肽。可以用本领域已知的任何方法检测NCAM-180多肽。待分析的组织或细胞类型通常包括已知的，或可疑的，表达NCAM-180基因的那些，如，例如，癌细胞包括肺癌细胞，卵巢癌细胞，皮肤癌细胞，淋巴癌细胞，及其转移形式。本文使用的蛋白分离方法可以，例如,是如在HarlowandLane(Harlow，E.andLane，D.，1988，Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork)中描述的那些。分离的细胞可以来源于细胞培养物或病人。优选的用于检测NCAM-180基因产物或其保守性变体或其肽片段(特别是Exonl8-MUM)的诊断方法可以涉及，例如免疫测定，其中通过其与选择性抗体的相互作用来检测NCAM-180基因产物或其变体，包括肽片段例如Exonl8-MUM。例如，抗体，或抗体的片段可以用于定量或定性地检测NCAM-180编码的多肽或其天然存在的变体或其肽片段的存在。在本发明中有用的抗体(或其片段)可以另外地在组织学上使用，如在免疫荧光或免疫电镜中，用于原位检测NCAM-180基因产物或其保守性变体或其肽片段。原位检测可以伴随从受试者取下組织学样本，例如石蜡包埋的組织(如肺组织)切片，并对其应用本发明的带标记的抗体。抗体(或片段)优选地通过将带标记的抗体(或片段)置于生物学样本上进行应用。由于NCAM-180片段Exonl8—MUM似乎主要地作为胞内蛋白表达，因此可能需要将抗体导入细胞内，例如，通过使细胞膜可穿透。某些NCAM-180免疫原性多肽也可在细胞表面表达，因此细胞可以通过应用特异性或选择性针对胞外NCAM-180多肽或其片段的抗体直接进行标记。通过使用这些方法，不仅可以确定NCAM-180基因产物或其天然存在的变体或肽片段的存在，而且可以确定其在所检查的组织中的分布。通过使用本发明的方法，那些普通技术人员将易于认识到可以对大量组织学方法中的任何一种(例如染色方法)进行改良以实现这样的原位检测。用于NCAM-180编码的多肽或其保守性变体或其肽片段，特别是Exonl8_MUM的免疫测定通常将包括在特异性或选择性结合NCAM-180基因产物的抗体(例如，可检测的能够鉴定NCAM-180多肽或其保守性变体或肽片段的标记抗体)的存在下，接触样本，如生物学液体，组织或組织提取物，新鲜收获的细胞，或已在细胞培养物中温育的细胞的裂解液，并通过大量的本领域公知的技术的任何一种(例如，蛋白质印迹分析，ELISA，FACS)检测结合的抗体。可使生物学样本与固相支持物或载体(如硝酸纤维素)，或其他能够固定细胞，细胞颗粒或可溶性蛋白的固体支持物接触并固定在其上。用合适的緩沖液清洗支持物，随后用封闭试剂和选择性或特异性结合NCAM-180编码的多肽的抗体对其进行处理。用緩冲液清洗固相支持物两次以去除未结合的抗体。在固体支持物上结合的标记的数量可以通过常规方法检测。可选择地，选择性或特异性结合NCAM-180编码的多肽的抗体是固定化的，并且生物学样本包含"固相支持物或栽体"意指任何能够结合抗原或抗体的支持物。公知的支持物或载体包括玻璃，聚苯乙烯，聚丙烯，聚乙烯，葡聚糖，尼龙，硝酸纤维素，天然或经修饰的纤维素，聚丙烯酰胺，和磁石。对本发明来说，载体的性质可以是某种程度上可溶的或不可溶的。支持物材料实际上可以具有任何可能的结构形态，只要偶联的分子能够结合抗原或抗体。因此，支持物形态可以是球形的，如珠子，或圆柱形的，如试管的内表面，或棒体的外表面。可选择地，表面可以是扁平的如薄片，测试条，等等。优选的支持物包括聚苯乙烯珠子。本领域那些技术人员将知道许多其他合适的用于结合抗体或抗原的载体，或将能够通过常规实验确定同样的事物。抗NCAM-180抗体可以通过将其连接至酶并在酶免疫测定(EIA)(Voller，A.，"TheEnzymeLinkedImmunosorbentAssay(ELISA)",1978,DiagnosticHorizons2:1，MicrobiologicalAssociatesQuarterlyPublication，Walkersvi1le，MD;Voller，A.etal.，1978，J.Clin.Pathol.31:507-520;Butler，J.E.，1981，Meth.E4Zy7n01.73:482;Maggio，E.(ed.)，1980，Enzymelmmunoassay，CRCPress,BocaRaton,FL;Ishikawa，E.etal.，(eds.),1981,EnzymeImmunoassay,KgakuShoin，Tokyo)中使用带标记的抗体而被可检测地标记。结合至抗体的酶将与合适的底物反应，优选异硫氰酸荧光素，罗丹明，藻红蛋白，藻蓝蛋白，别藻蓝蛋白，邻苯二曱醛和荧光胺。抗体还可以通过使用荧光发射金属如152Eu，或其他镧系金属而被可检测地标记。这些金属通过使用金属鳌合基团如二乙三氨五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)附着至抗体。通常使用的荧光色素是荧光素，德克萨斯红(TexasRed)或其他荧光色素如AlexaFluor系列。抗体还可以通过将其偶联至化学发光的化合物而被可检测地标记。化学发光标记的抗体的存在通过在化学反应期间发出的冷光来进行检测。特别有用的化学发光标记化合物的例子是鲁米诺(luminol)，异鲁米诺(isoluminol)，theromatic吖咬酯，咪唑，吖咬盐和草同样地，生物发光化合物可以用于标记本发明的抗体。生物发光是一种在生物学系统中发现化学发光，其中催化蛋白提高了化学发光反应的效率。生物发光蛋白的存在通过检测发光进行确定。用于标记的重要的生物发光化合物是萤光素，萤光素酶和水母发光蛋白。在各种实施方案中，本发明提供了利用NCAM-180-特异的或NCAM-180-选择性的抗体测量NCAM-180多肽的方法以及这些测量在临床应用中的用途。本发明的NCAM-180多肽的测量对于在受试者中对肺癌或其他癌症进行检测和/或分期，对于群体中肺癌和其他癌症的筛查，对于受试者的生理状况的鉴别诊断，以及对于监控对受试者的治疗性疗法的效果是有价值的。本发明还为对肺癌和其他癌症进行检测，诊断，或分期，或通过测量NCAM-180多肽的表达水平监控肺癌和其他癌症的治疗作准备。除了NCAM-180多肽，还可以测量至少一种其他标记，例如受体或分化抗原。例如，选自，例如但不限于，癌胚抗原(CEA)，CA15-3，CA549，CAM26，M29，CA27.29和MCA的血清标记可以与NCAM-180多肽结合一起进行测量以对肺癌和其他癌症进行检测，诊断，分期或监控其治疗。在另一个实施方案中，预后指标是在彼此相关的不同标记水平中观察到的变化，而不是在任一时刻出现的标记的绝对水平。这些测量可以帮助预测治疗结果以及评价和监控受试者的整体疾病状态。疫苗接种方法
技术领域：
：本发明还涉及基于作为肿瘤相关抗原(TAA)的NCAM-180，其表位，模拟表位，特异或抗独特型抗体的疫苗的用途，用于制备药物，以及试剂盒(用于抵抗癌症的预防性和/或治疗性自动免疫接种)。肿瘤相关抗原(TAA)通常是开发用于预防和/或治疗癌症的免疫治疗性药剂的基础。TAA是允许与良性组织相关的分化的结构并因此被当作是特异抗体的诊断性和治疗性应用的靶标。TAA通常在肿瘤细胞的质膜上表达，但也可以是胞内蛋白，包括核，胞质和跨膜蛋白。针对TAA的抗体的直接治疗性应用基于被动免疫疗法，即特异的抗体是以合适的量全身性(或局部性，例如进入流向组织的静脉)施用给癌症病人并且仅当其在有机体中的浓度对此足够高时才具有治疗作用。这些药剂的生物学半衰期依赖于其结构，范围从几个小时至数天。因此，必须提供重复应用。但是当使用异种抗体(例如鼠科单克隆抗体，MAB)时，这将导致不期望的免疫反应，其可以中和可能的治疗活性并可能导致危险的副作用(过敏性反应)。因此，这样的免疫治疗药剂只能施用有限时间。用于癌症免疫疗法的不同方法基于癌症病人的免疫系统的选择性激活以对抗恶性肿瘤细胞。这通过极其多样化癌症疫苗进行尝试。在它们之中有具有辐射处理的或其他失活的(不增殖的)自体或同种异瘤细胞的混合物，分离的TAAs或借助化学或分子生物学方法制备的来源于其的TAAs的疫苗，最近还有具有编码TAA或来源于其的结构的DNA的疫苗，等等。一种可选择的方法是基于用于免疫接种抵抗癌症的抗独特型抗体的使用。合适的抗独特型抗体可以在免疫学上模拟TAA。作为外源蛋白(例如鼠科抗体，山羊抗体等等)，它们在免疫接种后在人体中诱导强免疫反应-与合适的人肺瘤抗原(其有自身结构，通常仅有很小的免疫原性)不同。因此，抗独特型抗体可以用作肺瘤抗原的免疫原性替代物用于免疫接种。与被动免疫疗法不同，通过使用抗肿瘤抗体，原则上非常少量的合适的疫苗可以满足特异癌症主动免疫疗法的需要以致持续数月或甚至数年诱导免疫性，当其变弱时，其可以通过加强免疫进行增强。此外，在主动免疫接种中，可以诱导体液和细胞免疫，其相互作用可以产生有效的保护作用。总之，迄今为止，抗体或其衍生物在癌症免疫疗法中的使用实质上基于2个原则-使用针对TAA的抗体或其衍生物的被动疗法。在这种情况下，肿瘤细胞相对特异地被破坏。(ImmunologyToday(2000)，21:403-410;Curr.Opin.Immunol.(1997)，9:717)。-分别使用细胞，TAA，或抗体，或其衍生物的主动免疫接种(疫苗接种)，其针对抗体(具有针对TAA的特异性)的独特型。主动疫苗接种触发抵抗TAA的免疫反应。因此该免疫反应也针对相应的肺瘤细胞(Ann.Med.(1999)，31:66;Immunobiol.(1999)，201:1)。本发明现在的目标是提供基于作为肿瘤相关抗原(TAA)的NCAM-180,其表位，模拟表位，特异或抗独特型抗体的疫苗，用于制备用于抵抗癌症的预防性和/或治疗性主动免疫接种的药物，任选地与化学疗法结合。优选地，TAA选自如本文所述的肽或蛋白，特别是如上文所述的NCAM-180或Exonl8—MUM。在一个进一步的实验方案中，TAA选自本质上由SEQIDNO:2，SEQIDNO:4，SEQIDNO:6组成的分离的蛋白；或所述分离的蛋白的片段，其中所述片段能够在哺乳动物中诱导体液或细胞免疫反应并且包含选自下列的表位PAASNLSSSVLAN(SEQIDNO:2的AA101-113)，VLSPSAPAGVG(SEQIDNO:2的AA117-127)，LAAAAAPATEAPQ(SEQIDNO:2的AA153-165)，KGPDPEPTQPGA(SEQIDNO:2的AA174-185)和DFKMDEGNFK(SEQIDNO:2的AA216-225)。根据本发明在疫苗中使用的TAAs优选地诱导针对肿瘤细胞的功能性免疫反应。这样做时，不仅其细胞分裂期间的肿瘤细胞，而且静态中的肿瘤细胞(例如，最近所展示的肿瘤干细胞)，都会被攻击，以有效治疗"微小残留病"，或降低转移潜能。根据本发明，优选地，将治疗或可以治疗上皮癌，如乳腺癌，胃肠癌，前列腺癌，胰腺癌，卵巢癌和肺癌，例如SCLC("小细胞肺癌")和NSCLC("非小细胞肺癌")。在一个具体的实施方案中，根据本发明，在疫苗中分别提供或模仿了至少2种相同或不同的NCAM-180TAA表位。因此，通过主动免疫接种，可以产生许多具有针对相同分子但针对不同NCAM-l80结合位点的特异性的抗体。疫苗还可以包含糖基化的抗体，特别是如果糖基化本身也能够模拟TAA的碳水化合物表位的表位。这种抗体可以特别好地模拟细胞肿瘤抗原，并因此，它导致期望的抑制上皮肿瘤细胞的免疫反应。根据本发明，疫苗可以用于主动免疫接种，并因此，它可以仅以少量进行施用。因此预期没有特别的副作用，具体地没有发热，没有葡萄糖水平的上升，即使根据本发明所使用的免疫原性活性物质来源于非人物种，例如鼠科抗体。但是，推测与鼠科和人组分结合的重组的，嵌合的以及人源化的或人活性物质特别适于施用给人。另一方面，活性物质中的鼠科部分因其是外源的，可以额外激发人体中的免疫反应。虽然，根据本发明所使用的疫苗天然地可以包含来源于天然抗体的活性物质，其可能从有机体或病人中分离，但是通常使用优选地选自抗体片段，缀合物或同源物，以及复合物和吸附物的抗体衍生物。在任何情况下，优选抗体衍生物包含至少部分的Fab片段，优选地与至少部分的F(ab，)2-片段，和/或部分的铰链区和/或入或k抗体的Fc-部分一起。另外，如本发明所定义的，在疫苗中还可以使用单链抗体衍生物，如所谓的单链抗体。优选地，使用免疫球蛋白类型的抗体，如IgG，IgM,或IgA。特别优选地，使用IgG2a-抗体，因为IgG2a抗体展示特别好的补体激活，导致疫苗免疫原性的提高。另外，这还具有进一步减少疫苗中抗体的含量的优点。根据本发明，优选地还使用包含针对肿瘤相关抗原的抗体或抗体衍生物(即abl)的疫苗。抗体的特异性优选地选自上述TAAs的组中，特别是选自NCAM-180或Exonl8-MUM的组。特别优选使用的疫苗包含特异性结合抗体的抗体。因此，肿瘤疫苗包含特别是用于主动免疫接种的抗独特型抗体(即ab2)。根据本发明，所使用的抗独特型抗体优选地再次识别针对TAA的抗体的独特型。如此，已在抗独特型抗体的互补位上形成TAA表位，作为TAA模拟物。此处，优选的选择也来自上文指出的TAAs的组。根据本发明，所使用的疫苗有利地以合适的制剂提供。优选地这些制剂具有药学可接受的载体。这包括，例如，辅助物质，緩冲液，盐分，防腐剂。疫苗可以，例如，用于癌症相关状况(例如癌症病人的转移形成和微小残留病)的预防和治疗。在这种情况下，抗原呈递细胞在体内或离体被特异地调节，以特异地产生针对TAA和肿瘤细胞的免疫反应。因此，在主动免疫接种的情况下，提供包含免疫原性活性物质(在大部分情况下仅以低浓度，例如范围从O.Ol[mu]g到10mg的免疫原性量)的疫苗制剂也是本发明的一个目的。依赖于TAA，其表位，模拟表位，特异或抗独特型抗体的性质，依赖于外源物种的序列或衍生物的用途，还依赖于各自所使用的助剂或佐剂，可以选择合适的免疫原性剂量，例如范围从O.01[mu]g至750[mu]g,优选从100[mu]g至500[mu]g。但是，贮藏疫苗(其将在长期的时间段里被递送至有机体)还可以包含高得多的抗体量，例如从至少lmg直至超过10mg。该浓度取决于液体或悬浮疫苗的施用量。疫苗通常在易于使用的注射器中分别以浓缩溶液或悬浮液提供，所述注射器体积为0.01至1ml，优选0.1至0.75ml。对于如上文所述的被动免疫接种，本发明进一步提供了包含TAA特异抗体(范围从lmg至10gr，优选从10mg至1gr)的疫苗制剂。根据本发明，所使用的疫苗优选地在药学可接受的载体(其适合于皮下，肌内或真皮内或透过皮肤施用)中呈递免疫原或抗体。另外的施用方式是通过粘膜途径，例如通过鼻或口施用进行疫苗接种。如果使用固体作为疫苗制剂的助剂，例如施用抗体与助剂的吸附物或悬浮混合物。在具体的实施方案中，疫苗分别作为含水溶剂中的溶液或液体疫苗进行施用。优选地，在合适的易于使用的注射器中提供肿瘤疫苗的一个或多个疫苗单位。由于与TAA相比，抗体相对稳定，因此基于抗体或其衍生物的疫苗具有基本的优点，即它们可以作为稳定储存的溶液或悬浮液以易于使用的形式投放到市场。但是，防腐剂(例如硫柳汞或其他具有提高的耐受性的防腐剂)的成分不是必需的，但可以在制剂中提供以在储存温度(从冰箱温度直至室温)下保持更长的有效期。但是，根据本发明所使用的疫苗也可以以冷冻或冻干的形式提供，在需要时其可以分别解冻，或重构。在任何情况下，已证明通过在疫苗制剂中使用佐剂来增加根据本发明所使用的活性物质的免疫原性是合适的。优选地，对此合适的疫苗佐剂是氢氧化铝(铝胶)或磷酸铝，还有生长因子，淋巴因子，细胞因子，例如IL-2，IL-12，GM-CSF，A干扰素或补体因子，例如C3d,此外脂质体制剂，以及具有另外的抗原(免疫系统已针对其产生强烈的免疫反应，如破伤风类毒素，细菌毒素，如假单胞菌外毒素和脂质A的衍生物)的制剂。允许药物被施用而没有任何副作用的佐剂是优选的。术语副作用包括，例如，增加的葡萄糖水平或发烧；在施用部位局部红化或轻微肿胀不被认为是特异的副作用，而是表明免疫反应正在进行。为了配置疫苗，还可以进一步使用已知的用于缀合疫苗组分或使疫苗组分变性的方法，以进一步增加活性物质的免疫原性。根据本发明使用的疫苗的具体实施方案进一步包括疫苗接种抗原，特别是附加的抗独特型抗体，以及免疫原性抗体与同时施用的各种抗体的混合物。当与化学疗法相结合时，优选地在化学疗法初期使用根据本发明的疫苗。优选地，化学疗法在1至2周内开始。由于实践的原因，与化学疗法同时或在化学疗法期间的疫苗接种也是优选的。病人已在进行临床治疗，其他的治疗方法也易于实施。如果免疫疗法在化学疗法的第一天或在前2-3天起作用，那么免疫系统可以在早期的时间点被激活，甚至在机体受到化学疗法有害影响之前。事实上，化学疗法确实具有副作用，例如削弱的免疫系统，其使得病人日益易受感染。正因为这个原因，令人惊讶的是可以在化学疗法之前或期间立即成功地使用免疫疗法。因此，可以观察到，接种肿瘤疫苗后的免疫反应可以在第一天，在化学疗法初期之前的几个小时，以与没有化学疗法处理相同的程度被诱导。在任何情况下，不管有没有化学疗法，免疫球蛋白和接种的抗原特异的抗体的血清含量都持续增加。甚至有迹象表明特异的免疫反应被化学疗法提高。根据本发明的疫苗施用方式优选地不仅包括在化学疗法范围内的初次接种，还包括在特定时间间隔(其由于实践的原因可以等于化学疗法的间隔)的几次加强接种。在化学疗法之后，数月和数年的长期免疫疗法也是合适的方式。优选地，初次接种和之后的加强接种都用相同的疫苗进行作用。与佐剂或减轻的化学疗法组合是优选的。与单一疗法或联合疗法(polytherapy)组合是可能的。由于作用的不同机制，优选地疫苗与综合化学疗法组合。用于化学疗法的优选试剂是烷基化药物制剂。因此，例如包含紫杉烷，蒽环类抗生素或铂的药剂是优选的。根据本发明可以组合用于各种癌症治疗的所有常规制剂。化学疗法药剂通常是静脉内或经口施用。施用化学疗法药剂的经口形式还可以与根据本发明的疫苗的经口形式一起施用(作为联合制剂)。基本上可以为治疗性和预防性治疗进行由本发明定义的疫苗接种。这样的预防性疫苗接种特别地-虽然不是全部地-针对被诊断患有癌症的病人和具有小(单一静息细胞，小转移)转移但当前没有疾病的迹象的病人。在这样的情况下，疫苗是预防性疫苗，因为其诱导可能有益于抵抗癌症将来爆发的免疫反应。在一个优选的实施方案中，根据本发明所使用的疫苗分别包含NCAM-180基因产物或针对该基因产物的抗体，或相应的抗独特型抗体。适合于发明方法的配制疫苗的方法是已知的-可以从天然和合成来源获得NCAM-180TAA，其衍生物，表位或模拟物。抗体组分还可以用化学法合成，然后与表位结构结合，或普通地合成。在抗体载体分子的化学合成中，可以在特定位点引入反应基团以能够控制与表位偶联的程度以及结合的类型和位置。-免疫原性NCAM-18GTAA，其表位，模拟物或抗体还可以作为重组分子通过遗传工程方法制备。通过改变编码天然分子的遗传工程核酸，例如，可以产生合适的衍生物。重组基因产物的糖基化与相应的肺瘤相关多糖结构也可以通过在细胞中产生而被影响，所述细胞已被遗传修饰以致其将因此糖基化蛋白。这样的细胞可以是天然分离物(细胞克隆)，也可以由针对所需的糖基化进行的合适的篩选发现。然而，细胞也可以进行修饰以便其表达所期望的糖基化所需的相应的酶，从而特别地在重组多肽或蛋白上发现所需的糖基化(Glycoconj.J.(1999)，16:81)。但是，分别酶促地产生或改变蛋白的糖基化模式也是可能的(Clin.Chem.Lab.Med.(1998)，36:373)。-根据本发明的具体的实施方案，根据本发明使用的疫苗包含作为NCAM-180TAA前体的核酸分子，其中核酸分子编码如本发明定义的NCAM-180基因产物。获得的DNA疫苗如基于蛋白的肺瘤疫苗进行施用。本发明还涉及适合于癌症相关状况的预防性和/或治疗性处理的试剂盒。该试剂盒包含a)基于NCAM-180肺瘤相关抗原，其表位，模拟表位，特异或抗独特型抗体的疫苗，和任选地b)用于化学疗法的药剂。根据本发明的试剂盒的组分的选择以及其组合如上述进行。优选地，该试剂盒进一步包含合适的应用装置，如，例如注射器，输液设备等等。如果疫苗以冻干的形式提供，该试剂盒将进一步包含合适的重构溶液，其任选地包含特定的稳定剂或重构加速剂。进一步优选的试剂盒包含数个单位的根据本发明使用的疫苗，其将用于初次接种以及一次或多次，优选直至3次的加强接种。但是，加强接种的次数还可以更高，对于此，提供单独包含数个疫苗单位、而不与化学疗法药剂组合的试剂盒。任选地，频率的范围为l至12次/年，特别优选地，4至8次/年。剂量可以保持相等或可以减少。加强接种可以以有规律的间隔进行，原则上终生。合适的间隔范围为大约6至24个月，并且可以通过检查诱导的CTL反应的滴定度来确定(一旦诱导的CTL反应的滴定度显著下降，就应立刻进行加强)。通过参考以下的实验细节可以更好地理解本发明，但是本领域技发明二示例性说明:另外，整篇中4中，引用,了许多出版刊物:这些公开的出版刊物在此以参考文献的形式并入本申请，以更充分地描述本发明所属领域的情况。实施例以下实施例举例说明本发明。根据这些实施例，本领域技术人员可以想到其他实施方案。在不同细胞系中研究NCAM-180(Exonl8—MUM)的差异表达的实验使用本领域已知的方法，在不同癌细胞系和健康对照中评价NCAM-180的差异表达。所述方法包括-RNA提取和纟艮据标准方法合成cDNA;和-PCR扩增以根据图1中所述的原理评价Exon19—MUM的表达。在来自神经内分泌瘤的细胞培养物(SH-SYSY和CCI)中发现作为NCAM-180部分的NCAMExonl8-MUM的表达，更特别地在小细胞肺癌(SCLC)细胞系中发现其过表达(图2)。其他细胞系的结果总结在表l中。表l:癌细胞系和健康对照中Exonl8-MUM(NCAM-180)的差异表达。符号高表达(++)，正常表达(+)，低表达(+/_)，不表达(一)。<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>A.NCAMExonl8-MUM克隆设计PCR引物。从H69细胞的cDNA中获得完整的Exonl8-MUM核苷酸序列(816nt)(SEQIDNO.1)和Exonl8-MUM的截短形式的核苷酸序列(369ntXSEQIDNO.5)。这些细胞显示出过表达Exonl8-MUM。正向和反向引物均包含用于亚克隆入pRSET(蛋白产生)和pCI(DNA免疫)载体的限制性酶切位点。NCAMExonl8-MUM编码DNA，全长和截短的Exonl8-MUM,均成功地克隆入參pRSET(Invitrogen)，用于蛋白产生的构建体，在E.coli中得到带His标签的具有以下蛋白序列(SEQIDNO.2)的重组蛋白；(截短版本以斜体字展示-SEQIDNO.6)1lpadttatvedmlpsvttvttnsdtitetfataqnsptsetttltssiap51patatpdsnsvpagqatpskgpsasapspapasapkvaplvdlsdtptst101paasnJsssvJanggav^spsapagvgeas大appas^ptpapvptptgaa■252spJaaaaapateapgakqeatJcgpc(peptqpgaakspaeastsJasjo/cseaasi^spsc7gedjfA77deg"i7A:tpdidlakdvfaalgspapaagasg251qapelapstadssvspapakt參巡(Promega)，用于DNA免疫的构建体。B.NCAMExonl8-MUM蛋白产生和纯化用编码Exonl8—MUM的表达构建体(pRSET，Invitrogen)转化细菌。我们使用编码截短的NCAMExonl8—MUM蛋白(在上述NCAMExonl8-MUM蛋白序列中以斜体字标记)的pRSET构建体和编码全长NCAMExonl8-MUM蛋白序列的pRSET构建体。根据生产商的说明进行转化。2种形式的蛋白均作为带His标签的蛋白表达，并且根据标准方法在Ni螯合的柱子上进行纯化。用300mM的咪唑将带His标签的蛋白从柱子上洗脱下来，然后用针对PBS的标准透析使洗脱的蛋白溶液复性。NCAMExonl8-MUM蛋白产物的纯度示于图3A和B中。發证斧为凝逸戎^^和^7^/^M差厥产浙种^瘦j#渗游W奖發Cl.NCAMExonl8-MUM免疫诱导细胞内免疫反应基于差异表达PCR,NCAMExonl8-MUM剪切变体被确定为肺癌免疫疗法的靶标。如上所述，对于这个新抗原，制备了DNA和重组蛋白。使用上述方法，在E.coli中产生截短的MUM蛋白，进行纯化并随后用于Balb/c小鼠的免疫。Cl.l用Exonl8-MUM蛋白和/或Exonl8-MUMDNA进行免疫以及用重叠9肽库体外再刺激在第一种类型的实验中，预致敏一些小鼠，下文中也称为被免疫的，使用溶于PBS中的截短的Exonl8一MUM蛋白，有或者没有佐剂(如Abisco-lOO),并且一些小鼠用Exonl8-MUM编码DNA进行免疫。此外，将使用Exonl8-MUM蛋白的免疫与Exonl8-MUMDNA免疫组合。在第21天，这些不同的组如下所示进行加强说明—Exonl8—MUM蛋白在表格中称为MUM蛋白。-Exonl8—MUM腿在表格中称为MUMDNA。-使用的佐剂是Abisco-lOO。免疫t=oPBSPCI空栽体Abisco佐剂MUM蛋白于AMsco中MUM蛋白w/o佐剂MUMDNAMUMDM对于蛋白免疫，我们使用參10jug溶于PBS中的重组Exonl8_MUM蛋白，任选地用12jugAbisco-100配制。对于DNA免疫，我们使用*2x50pgExonl8-MUMDNA(在pCI载体中)(50pg注射入2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>4BALB/c雌性4BALB/c雌性4BALB/c雌性4BALB/c雌性4BALB/c雌性4BALB/c雌性4BALB/c雌性加强t=21天PBSPCI空载体Abisco佐剂MUM蛋白于Abisco中MUM蛋白w/o佐剂MUM腿MUM蛋白于Abisco中条后肢的每一条的胫骨前肌)Balb/c小鼠(每组n=4)在第0天进行免疫，在第21天进行加强。在第一次免疫后30天，分离小鼠脾，制备小鼠脾细胞悬浮液，并1.5106细胞/孔的密度接种。体外再刺激在371C进行4小时。(5%0)2)。用覆盖截短的MUM蛋白的全长氨基酸序列的重叠9肽库进行再刺激。总共使用了45个重叠肽。对于所有的免疫小鼠，我们在105CD8阳性细胞中计算了含有胞内IFN-y的细胞的数目，如流式细胞术所确定的(图4组A-G)。我们的数据显示，在Exonl8—MUM蛋白免疫和加强的动物中有少数的含有胞内IFN-y的CD8阳性T细胞，代表着有限的CTL反应(图4组D)。用溶于Abisco-100佐剂中的Exonl8-MUM蛋白免疫的小鼠明显完全不诱导CTL反应(图4组C)。对于Exonl8—MUMDNA免疫的小鼠，我们发现，当与pCI载体单独免疫的小鼠(作为对照免疫进行)相比，截短的Exonl8-MUM编码DNA的肌内注射明显地诱导MUM特异细胞毒性T细胞反应(图4组F和G)。我们在总数为105的CD8阳性T细胞中发现727个含有胞内IFN-y的细胞(0.7%)。我们的数据甚至暗示，对于用Exonl8-MUMDNA免疫且用Exonl8-MUM蛋白与Abisco-lOO加强的小鼠，含有胞内IFN-y的CD8阳性T细胞的数目有轻微的增加(887个含有胞内ifn-y的细胞/105cd8阳性t细胞，0.9%)。对于所有的脾，用不相关的肽库(IPP)进行体外再刺激，作为阴性对照。此处，覆盖不同于Exonl8-MUM序列的NCAM区域(如例如NCAM蛋白的NCAM外显子7pi8区域)的肽库作为对照。在本发明实施例中，IPP由覆盖76个氨基酸序列(NCAM蛋白的NCAM外显子7pi8区域)的17个重叠肽组成(9肽，5个氨基酸重叠)。对于重组Exonl8一MUM蛋白免疫的动物，以及Exonl8一MUMDNA免疫的动物，在用该IPP再刺激的基础上均未发现了含有胞内IFN-y的CD8阳性T细胞。由于来自被免疫的动物T细胞不能用IPP再刺激，我们推断，MUM免疫诱导MUM特异T细胞。基于该实验，我们推断，使用重组Exonl8-MUM蛋白和Exonl8-MUM编码DNA的免疫诱导MUM特异的T细胞反应。Exonl8-MUM蛋白免疫仅导致有限数目的含有胞内IFN-y的CD8阳性T细胞，而4吏用Exonl8-MUM编码DNA的免疫诱导显著的细胞内MUM特异的免疫反应。基于这些实验的结果，我们推断*使用Exonl8一MUMDNA的免疫诱导显著的MUM特异细胞毒性T细胞反应。*单独的截短的Exonl8-MUM蛋白具有免疫原性，且诱导MUM特异的CTL反应，如用MUM相关重叠9肽库进行再刺激所确定的。C1.2用Exonl8-MUM蛋白和/或Exonl8-MUMDNA免疫，用重叠9肽库体外再刺激在下一个类型的实验中，我们使用覆盖截短的Exonl8-MUM蛋白序列的单独的9肽(9肽，5个氨基酸重叠)而非如上文所述的9肽库进行体外再刺激。用单独的9肽进行体外再刺激，以描绘Exonl8_MUM蛋白序列上的CTL表位的详细图语。在每个实验中使用11只动物，1只阴性对照小鼠和2组小鼠(每组5只动物)，所述2组小鼠每组如下所示在第O天进行免疫并如下所示在第21天进行加强组l:l只小鼠，用100pgpCI空载体进行免疫和加强组2:5只小鼠，用100jugMUMDNA进行免疫和加强组3:5只小鼠，用210jugNCAM18MUM蛋白进行免疫和加强。我们进行了9个实验，每个实验11只动物。45只动物用截短的Exonl8_MUM蛋白免疫，45只动物用截短的Exonl8_MUMDNA免疫，9只动物用pCI空载体免疫。在每个实验中，小鼠在加强后12-14天被处死。切离脾，制备脾细胞悬浮液，将其接种于多孔96板，并用单独的NCAMExonl8-MUM9肽进行体外再刺激。在每个实验中，就体外再刺激测试5条肽，实验重复9次，总共测试了45条肽。这个表位图镨的建立允许我们在截短的Exonl8-MUM蛋白中定位最好的CTL表位。用总数为45的、覆盖截短的Exonl8-MUM蛋白的AA序列的MUM重叠9肽进行体外再刺激(表2)。表2:NCAMExonl8-MUM蛋白重叠9肽序列<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>对于每一条多肽，以5倍进行再刺激。对细胞进行渗透，固定并使用荧光标记抗体对胞内IFN-Y和表面表达的CD8进行染色。通过FACS分析测定每1()5个CD8阳性细胞中含有胞内IFN-Y的细胞的数目。结杲示于图5中。我们发现，使用截短的Exonl8-MUM蛋白的免疫诱导MUM特异的细胞毒性T细胞，如通过使用肽26-27,肽30-32，肽40-42，肽45-47和肽55-58进行体外再刺激所显示的(图5)。有意思的是，这些数据显示，截短的MUM重組蛋白的一些特殊的区域是潜在的CTL表位。此外，这些数据证实，即使没有Abisco-100，截短的MUM蛋白也具有高免疫原性，如在第一次免疫实验中所发现的。另外，还用NCAMExonl8-MUM质粒DNA对小鼠进行免疫。如图6A中所示，DNA免疫诱导高MUM特异的CTL反应。用肽25-28,肽30-32,肽40-44，肽45-47，肽52-54，肽62和肽65进行的体外再刺激清楚的显示，MUM特异的细胞毒性T细胞在用Exonl8-MUMDNA免疫动物的基础上被诱导。当与来自蛋白免疫的小鼠的CTL表位相比时，肽26-27，30-32，40-42，45-47和肽65也在DNA免疫的动物中发现。这些数据表明，针对一些表位，在用DNA和蛋白免疫的动物中均诱导细胞毒性T细胞。下一步，比较在Exonl8-MUMDNA和Exonl8_MUM蛋白免疫中发现的CTL表位与用SYPHEITI软件预测的CTL表位。使用该软件，针对Balb/c小鼠的H2-D^单倍型、MHC单倍型，对所有的9肽进行分值预测。对在体外再刺激中所使用的所有9肽预测了分值，这些分值示于图6B中。被预测为潜在的CTL表位的一些肽(其意味着这些肽具有体外再刺激相应于体内诱导的细胞毒性T细胞的潜能)在我们实验的小鼠中得到确证。我们的数据表明，用肽31,53和56中的任一个对从Exonl8-MUM免疫的小鼠分离的淋巴细胞进行的体外再刺激有效地导致这些小鼠体内预致敏的CD8阳性T细胞的再刺激。D.NCAMExonl8一MUMELISA如下进行NCAMExonl8-MUMELISA。ELISA平板用带His标签的NCAMExonl8-MUM蛋白(全长或截短的)进行包被并用脱脂奶粉(2%)进行封闭。添加NCAMExonl8-MUM蛋白免疫的小鼠的一系列稀释血清。在免疫的基础上诱导的MUM特异的抗体在包被的平板上特异地与Exonl8-MUM蛋白结合。抗体的特异性通过检测抗体与用带His标签的阴性对照蛋白(其也是在E.coli中产生)包被的平板的结合得到证实。结合的抗体用辣根过氧化物酶缀合的抗小鼠Ig抗体进行检测。该缀合的酶氧化3，3，，5,5，-四甲基联苯胺(TMB)底物。用1^04终止反应并根据标准方法在450nm处测量氧化产物的0D值。"丄nA扁nra/!瘦渗爭脊濕i瘦X^我们在用NCAMExonl8-MUM蛋白和/或Exonl8-MUM质粒DNA免疫的Balb/c小鼠的血清中测量了抗体的滴定度。用溶于PBS或Abisco-100佐剂中的截短的Exonl8_MUM蛋白免疫的动物均显示出抗MUM特异的血清抗体滴定度，如图7组C和D中所示(深色柱)。当用带His标签的阴性对照蛋白(其也在E.coli中产生)包被的平板进行ELISA时，显示没有血清抗体的结合(图7组C和D(灰色柱))。这些数据表明，在被免疫的动物中没有产生抗组氨酸的抗体或针对E.coli连接蛋白的抗体。用编码NCAMExonl8_MUMDNA的质粒进行的免疫不诱导血清抗体滴定度。仅当DNA免疫的小鼠用配制的NCAMExonl8-MUM蛋白进行加强时，才发现抗MUM抗体的明显"^秀导(图7组F和G)。我们的数据清楚的表明，用截短的NCAMExonl8—MUM蛋白对小鼠进行的免疫诱导显著的MUM特异的体液免疫反应。D2.基于ELISA，全长Exonl8—MUM蛋白对截短的Exonl8—MUM蛋白测定用截短的Exonl8-MUM蛋白免疫的小鼠的血清抗体滴定度。从用截短的Exonl8-MUM蛋白免疫的总共45只动物和用空pCI栽体免疫的5只小鼠获得血清。对比在ELISA平板(用全长Exonl8-MUM和截短的Exonl8-MUM重组蛋白包被)上检测的体液免疫反应(图8)。如图8所示，如果用全长或截短的Exonl8-MUM蛋白进行包被，那差异。这些数据表明，当用完整的Exonl8-MUM蛋白包被时，在截短的Exonl8-MUM中暴露的所有表位仍然是可利用的。E.抗MUM单克隆抗体的产生根据标准方法用截短的NCAMExonl8-MUM蛋白对小鼠进行免疫/加强。用NSO骨髓瘤细胞融合脾细胞。根据标准的方法将融合的细胞接种于HAT选择培养基。选择活克隆，随后按照标准的免疫细胞化学方法在表达NCAMExonl8-MUM的细胞上筛选分泌的抗体。获得的单克隆抗体在NCAMExonl8_MUM阳性H69和H82细胞上进行篩选。最后，选择一个克隆，该杂交瘤克隆产生单克隆抗体，其在免疫细胞化学染色中在表达NCAMExonl8-MUM的细胞系H69和H82上展示特异的类似NCAM的染色。我们使用Alexafluor标记的抗小鼠IgG的山羊抗体作为二抗，通过荧光显微术进行可视化(图9)。克隆(MUMI21B2)的进一步选择基于缺乏在NCAMExonl8_MUM阴性HCT-116细胞上的染色。此外，MUMI21B2染色展示合适的定位，在细胞-细胞接触区域，如共聚焦成像所显示(图10)。对于这些实验，我们使用通过在MiniPerm生物反应器中产生而被富集的抗体。总之，抗MUM单克隆抗体(MUMI21B2)在表达NCAMExonl8-MUM的细胞上，而非在NCAMExonl8-MUM阴性HCT-116细胞上展示类似NCAM的染色。婆發进行动物实验，其中1)我们评价了表达NCAM-180蛋白或Exonl8-MUM蛋白的细胞(作为全细胞疫苗用于治疗表达NCAM-180的肿瘤)的免疫原性潜能。用200Gy照射的、表达全长NCAM-180或Exonl8-MUM的RVIK(H-2k非MHC匹配的)细胞作为全细胞疫苗给小鼠进行疫苗接种。通过注射稳定转染的、表达抗原的Renca(H-2bMHC匹配的)细胞在小鼠中诱导表达NCAM-180的肺瘤。基于肿瘤体积和小鼠存活率评价作为全细胞疫苗的、表达NCAM-180和Exonl8-MUM的细胞的保护和免疫效率。分别在脾细胞(在第9周分离)和血样(在研究开始时和在第3，5和7周后取样)中确定CTL和抗体反应。2)我们评价了编码Exonl8-MUM的DNA构建体(作为DNA疫苗用于治疗表达NCAM-180的肺瘤)的免疫原性潜能。用作为DNA疫苗的、编码Exonl8-MUM的DNA构建体对小鼠进行疫苗接种。通过使用稳定转染的、表达抗原的Renca(H-2bMHC匹配的)细胞在小鼠中诱导表达NCAM-18Q的肿瘤。基于肺瘤体积和小鼠存活率评价编码Exonl8-MUM的DNA疫苗构建体的保护/免疫效率。分别在脾细胞(在第9周分离)和血样(在研究开始时和在第3，5和7周后取样)中测定CTL和抗体反应。3)我们评价了Exonl8-MUM蛋白(作为蛋白疫苗用于治疗表达NCAM-180的肺瘤)的免疫原性潜能。用作为蛋白疫苗的Exonl8-MUM蛋白对小鼠进行疫苗接种。通过注射稳定转染的、表达抗原的Renca(H-2bMHC匹配的)细胞在小鼠中诱导表达NCAM-180的肿瘤。基于肿瘤体积和小鼠存活率评价Exonl8-MUM蛋白的保护/免疫效率。分别在脾细胞(在第9周分离)和血样(在研究开始时和在第3，5和7周后取样)中测定CTL和抗体反应。凝迷建萝以##:*表达NCAM180和Exonl8-MUM的细胞作为全细胞疫苗的体内效应。參Exonl8-MUMDNA作为DNA疫苗的体内效应參Exonl8—MUM蛋白作为蛋白疫苗的体内效应Balb/c(H-2d)用...进行疫苗接种用…诱导肺瘤预期提供关于…的信息组-a(N=10)盐水Henca+NCAM-180肿瘤生长，没有保护。oy。存活—用NCAM-180的Re織肺瘤的可诱导性(空白疫苗)组-b(N=10)化6ncB+NCAM-180Henca+NCAM-180100%保护=100%存活无肺瘤生长-用全细胞疫苗免疫-没有关于NCAM相关性的信息(阳性疫苗对照)组-C(N=10)RVIK+NCAM-180H6nca+NCAM-180保护？减少肺瘤生长？-用NCAM-180或Exonl8一MUM单独作为免疫原的全细胞疫苗减少表达NCAM-180的肿瘤的肿瘤生长。-细胞或体液免疫反应。組-d(N=10)RVIK+l画MHsncei+NCAM-180保护？与NCAM-180+pi的免疫原性潜能比较。组-e(N=10)RVIKHsricei+NCAM-180没有保护-亲本RVIK细胞的保护活性组-g(N=10)蛋白18MUM尺6nc3+NCAM-180保护？用Exonl8-MUM蛋白免疫后减小肺瘤体积。-基于Exonl8_MUM的疫苗针对表达NCAM-180的肿瘤生长起保护作用。-该模型强调了，NCAM180蛋白或Exonl8_MUM蛋白是用于疫苗开发的潜在的抗原。此外，用该体内模型比较了作为全细胞疫苗，DNA疫苗或基于蛋白的疫苗的Exonl8—MUM的免疫原性潜能。对于各个组-用lOOjul(1()6个细胞(RVIK);200Gy照射的或50pg的DNA)或溶于30ul的100jug蛋白进行免疫。以一周的间隔时间进行3次疫苗接种。-用表达NCAM-180的lOOjn1(105细胞(Renca))诱导肿瘤。在最后一次疫苗接种后进行该免疫，并且只进行一次。-在水平和垂直方向上测定肿瘤生长。权利要求1、分离的多肽，其选自a)包含SEQIDNO2，SEQIDNO6或SEQIDNO2或SEQIDNO6的片段的多肽，其中所述片段能够在哺乳动物中诱导体液或细胞免疫反应，且包含选自PAASNLSSSVLAN(SEQIDNO2的AA101-113)，VLSPSAPAGVG(SEQIDNO2的AA117-127)，LAAAAAPATEAPQ(SEQIDNO2的AA153-165)，KGPDPEPTQPGA(SEQIDNO2的AA174-185)和DFKMDEGNFK(SEQIDNO2的AA216-225)的表位；b)由SEQIDNO2或SEQIDNO6组成的多肽；和c)具有与SEQIDNO2或SEQIDNO6至少60％序列同一性的多肽。2、由选自下列的核酸分子编码的分离的多肽a)包含在高严格条件下与SEQIDNO:1或其互补序列可杂交的序列的核酸分子；b)包含在高严格条件下与SEQIDNO:5或其互补序列可杂交的序列的核酸分子；c)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:1或其互补序列至少90%同源的核酸分子；或d)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:5或其互补序列至少90%同源的核酸分子；e)与SEQIDNO:1或SEQIDNO:5至少90%相同的核酸分子；和f)由SEQIDNO:1或SEQIDNO:5组成的核酸分子。3、分离的核酸分子，其编码权利要求1-2中任一项所述的分离的蛋白。4、根据权利要求3的分离的核酸分子，其选自a)包含在高严格条件下与SEQIDNO:1或其互补序列可杂交的序列的核酸分子；b)包含在高严格条件下与SEQIDNO:5或其互补序列可杂交的序列的核酸分子；c)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:1或其互补序列至少90%同源的核酸分子；或d)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:5或其互补序列至少90%同源的核酸分子；e)与SEQIDNO:1或SEQIDNO:5至少90°/。相同的核酸分子；和f)由SEQIDNO:1或SEQIDNO:5组成的核酸分子。5、包含根据权利要求3或4中任一项的核酸分子的载体。6、包含编码权利要求1或2的多肽的核酸的宿主细胞。7、包含根据权利要求3或4中任一项的核酸分子或权利要求5中所述的载体的宿主细胞。8、特异针对权利要求1或2中任一项的多肽的抗体。9、包含权利要求1-2中任一项所述的蛋白或权利要求3-4中任一项所述的核酸分子的疫苗。10、根据权利要求9的疫苗，其用作药物。11、根据权利要求9的疫苗的用途，用于治疗或预防癌症。12、根据权利要求9的疫苗的用途，用于治疗或预防肺癌，包括SCLC和NSCLC。13、根据权利要求9的疫苗的用途，用于制造用于治疗癌症的药物。14、根据权利要求9的疫苗的用途，用于制造药物，所述药物用于治疗肺癌，包括SCLC和NSCLC。15、在受试者中诊断癌症的方法，其包含在来自所述受试者的样本中检测或测量NCAM-180基因产物，其中所述NCAM-180基因产物是(a)相应于SEQIDN0:1的RM，或来源于其的核酸；(b)相应于SEQIDN0:3的RNA，或来源于其的核酸；(c)包含SEQIDNO:2或4的蛋白；(d)包含在高严格条件下与SEQIDNO:1或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白；(e)包含在高严格条件下与SEQIDNO:3或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白；(f)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:1或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；或(g)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:3或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；其中，与非癌症样本或为非癌症样本预先确定的标准值相比，NCAM-180基因产物的提高的水平表明受试者中存在癌症。16、权利要求15的方法，其中所述受试者是人。17、权利要求15或16的方法，其中所述癌症是肺癌或任一NCAM-180阳性癌症。18、权利要求15或16的方法，其中所述样本是组织样本。19、权利要求15或16的方法，其中所述样本是多数细胞。20、权利要求15或16的方法，其中所述样本是体液。21、权利要求15的方法，其中所述NCAM-180基因产物是权利要求1-2中任一项所述的蛋白。22、权利要求15的方法，其中所述NCAM-180基因产物是具有SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的蛋白。23、权利要求15的方法，其中使用特异针对NCAM-180基因产物的抗体以检测或测量NCAM-180基因产物。24、权利要求23的方法，其中所述抗体与SEQIDNO:2，SEQIDNO:4，SEQIDNO:6或SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的片段免疫学上特异性结合，其中所述片段包含SEQIDNO:2,4或6中任一个的5至30个氨基酸，更特别地9至15个氨基酸。25、权利要求15的方法，其中使用特异针对NCAM-180基因产物的寡聚核苷酸以检测或测量NCAM-180基因产物。26、权利要求25的方法，其中所述寡聚核苷酸是DNA寡聚核苷酸。27、权利要求25的方法，其中所述寡聚核苷酸是本质上由权利要求3和4所述的核酸分子中的任一个的15至50个互补的核苷酸组成的探针。28、给受试者接种疫苗以抵抗癌症的方法，其包括给所述受试者施用疫苗，所述疫苗包含引发对NCAM-180基因产物的免疫反应的分子，其中所述NCAM-180基因产物是(a)相应于SEQIDNO:1的RNA，或来源于其的核酸；(b)相应于SEQIDN0:3的RM，或来源于其的核酸；(c)包含SEQIDNO:2或6或SEQIDNO:2或6的片段的蛋白，其中所述片段能够在哺乳动物中诱导体液或细胞免疫反应，并且包含选自PAASNLSSSVLAN(SEQIDNO:2的AA101-113)，VLSPSAPAGVG(SEQIDNO:2的AA117-127)，LAAAAAPATEAPQ(SEQIDNO:2的AA153-165)，KGPDPEPTQPGA(SEQIDNO:2的AA174-185)和DFKMDEGNFK(SEQIDNO:2的AA216-225)的表位；(d)包含在高严格条件下与SEQIDNO:1或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白；(e)包含在高严格条件下与SEQIDN0:3或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白；(f)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:1或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；(g)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:3或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；(h)包含SEQIDNO:1的DM分子；或(i)包含SEQIDNO:3的DNA分子。29、权利要求28的方法，其中所述受试者是人。30、权利要求28的方法，其中所述分子是包含SEQIDNO:1的分离的DNA分子；包含SEQIDNO:3的分离的DNA分子；包含SEQIDNO:5的分离的DNA分子；包含SEQIDN0:2，4或6的分离的蛋白；或包含SEQIDNO:2，4或6中任一个的片段的分离的蛋白，其中所述片段能够诱导对NCAM-180基因产物的免疫反应。31、权利要求28的方法，其中所述癌症是肺癌或任一NCAM-180阳性癌症。32、权利要求28的方法，其中所述免疫反应包含细胞免疫反应，体液免疫反应，或细胞和体液免疫反应。33、药物组合物，其包含(a)引发免疫反应有效量的纯化的NCAM-180基因产物，其中所述基因产物是(i)相应于SEQIDNO:1的RNA，或来源于其的核酸；(ii)相应于SEQIDNO:3的RNA，或来源于其的核酸；(iii)包含SEQIDNO:2，SEQIDNO:6或SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的片段的蛋白，其中所述片段能够在哺乳动物中诱导体液或细胞免疫反应，并且包含选自PAASNLSSSVLAN(SEQIDNO:2的AA101-113),VLSPSAPAGVG(SEQIDNO:2的AA117-127)，LAAAAAPATEAPQ(SEQIDNO:2的AA153-165)，KGPDPEPTQPGA(SEQIDNO:2的AA174-185)和DFKMDEGNFK(SEQIDNO:2的AA216-225)的表位；(iv)包含在高严格条件下与SEQIDNO:1或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白；(v)包含在高严格条件下与SEQIDNO:3或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白；(vi)通过^f吏用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:1或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；或(vii)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:3或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；和(b)药学可接受的赋形剂。34、药物组合物，其包含(a)免疫学上特异性针对根据权利要求1或2中任一项所述的蛋白的抗体；和(b)药学上可接受的载体。35、权利要求33或34的药物组合物，其中所述组合物被配制以作为气雾剂递送，经肠胃外递送，或口服递送。36、用于在受试者中治疗癌症的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的、根据权利要求33至34中任一项所述的药物组合物。37、用于在受试者中治疗癌症的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的化合物，所述化合物调节NCAM-180基因产物的表达水平或NCAM-180基因产物的活性，其中所述NCAM-180基因产物是(a)相应于SEQIDN0:1的RNA,或来源于其的核酸；(b)相应于SEQIDN0:3的RNA，或来源于其的核酸；(c)包含SEQIDNO:2的蛋白；(d)包含在高严格条件下与SEQIDN0:1或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白；(e)包含在高严格条件下与SEQIDNO:3或其互补序列可杂交的序列的核酸，或包含由所述可杂交的序列编码的序列的蛋白；(f)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:1或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白；或(g)通过使用NBLAST算法确定的，与SEQIDNO:1或其互补序列至少90%同源的核酸，或由其编码的蛋白。38、权利要求37的方法，其中所述化合物降低NCAM-18O基因产物的表达，且所述NCAM-180基因产物是具有SEQIDN0:2的蛋白。39、权利要求37的方法，其中所述化合物降低NCAM-18O基因产物的表达，且所述NCAM-180基因产物是具有SEQIDN0:4的蛋白。40、权利要求37的方法，其中所述化合物降低NCAM-180基因产物的表达，且所述NCAM-180基因产物是相应于SEQIDNO:1的RNA。41、权利要求37的方法，其中所述化合物降低NCAM-18O基因产物的表达，且所述NCAM-180基因产物是相应于SEQIDNO:3的RNA。42、权利要求37的方法，其中所述癌症是肺癌或任一NCAM-180阳性癌症。43、权利要求37的方法，其中所述化合物是与所述RNA结合且抑制所述RNA翻译的反义寡聚核苷酸分子或免疫学上特异性针对NCAM-180基因产物的抗体。44、权利要求37的方法，其中所述抗体免疫学上特异性针对包含SEQIDNO:6或2的氨基酸序列的蛋白。45、权利要求37的方法，其中所述抗体免疫学上特异性针对SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的片段，其中所述片段包含SEQIDNO:2或6中任一个的5至30个氨基酸，更特别地9至15个氨基酸。全文摘要本发明主要涉及癌症诊断，预后，治疗和预防的领域。更具体地，本发明涉及诊断，治疗和预防肺癌的方法。特别地，本发明的方面关注于诊断，治疗和预防小细胞肺癌的方法。本发明还提供了使用在肿瘤细胞中差异表达的核酸和/或蛋白，以及针对该蛋白的免疫特异性抗体以治疗，诊断和/或预防所述癌症的方法。文档编号A61K39/00GK101437537SQ200780016299公开日2009年5月20日申请日期2007年3月12日优先权日2006年3月13日发明者A·梵德博尔吉特,C·黑内尔,F·C·S·拉马克斯,F·W·法尔肯贝格,J·L·V·布勒斯,M·I·J·乌德兰,S·M·梵登艾杰德申请人:穆比奥产品有限公司