专利名称：：一种室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种替曲朵辛(河豚毒素)药品室温稳定的制造方法及其用途
背景技术：
：用替曲朵辛作为主要活性成分生产的注射用替曲朵辛制剂系从天然产物中开发出的一种新药。替曲朵辛(tetrodotoxin)，在化学结构上属于氨基氢化喹唑啉类化合物，化学名为八氢-12-(羟甲基)-2-亚氨基-5,9:7,10a-二甲撑基-10a氢-[l,3]-二氧桥-[6,5-d]-嘧啶-4,7,10,ll,12-五醇。其化学结构式为替曲朵辛(TTX)替曲朵辛(TTX)最早是从河飩鱼(FuguSpp)分离提取出。目前已知河飩目(Fugu)河飩科(Tetrodontidae),刺飩科(Triodntiadae)，翻车鱼科(Molidae),三刺河飩科(Triodntiade)，几乎所有近百种河飩鱼中都含有替曲朵辛，除河飩目种的河飩鱼外，也有报道虾虎鱼、蝾螈、箭毒蛙、章鱼地、贝类、螺类、蟹类、鳖类、藻类和菌类等均有替曲朵辛(TTX)。从天然水生生物提取替曲朵辛国内最早由中国人民解放军药物化学研究所完成，其提取工艺1982年获得国家发明二等奖[1]。目前已知替曲朵辛是自然界中存在不多的一种非蛋白质神经毒素之一，几十年来它一直在神经药理学和肌肉生理学等研究领域中被广泛使用，实验结果证明，替曲朵辛是一种高度选择的神精细胞膜钠离子通道阻断剂。替曲朵辛的生物活性极强，平均体重50Kg的成人，肌肉注射300pg-500ng即可使人至死。也许正是因为替曲朵辛极其强的毒性，才使它从发现到药用经过了100多年的历程。从1993年起，发明人及所在的公司，就发现了替曲朵辛的戒毒[2]、镇痛、排除人体内抗生素残留物[3]等药用效果，现在己证实替曲朵辛是一种治疗效果显著，用药安全的药品。但是在研制替曲朵辛的制剂中，因为替曲朵辛注射液对温度非常敏感，容易随温度升高而发生差向异构体或降解反应。所以目前研制的替曲朵辛注射用制剂，都不能保存在室温下，而需要放在低温4-6'C条件下保存，这给药厂的生产、贮存、运输、装卸、批发、零售和医院、诊所临床上使用，增加了许多不方便。为了能更好的使用替曲朵辛药品为人类的健康做出贡献，必须要研制出一种安全稳定，室温下能长期贮藏的药品制剂。本发明就是研制出了一种可以使替曲朵辛药品在室温下长期保存的制剂。实验结果证明，使用本发明组合物生产的药品制剂可以在室温(40°C)以下长期保存，不需要保存在冰箱中冷藏。为药品的生产，贮存，运输和临床、诊所医生用药提供了极为方便使用的制剂。
发明内容药用替曲朵辛制剂，因为其生物活性高，用量在0.l-10(^g，所以均采用是注射剂型，这种注射剂，因为替曲朵辛本身的物理特性，都必须使用有机酸及其盐或者是缓冲液做助溶剂。在酸性或碱性条件下，替曲朵辛会随温度的升高而发生降解。从表l结果可以看出，替曲朵辛的枸橼酸盐溶液在40'C放置一个月后，替曲朵辛的含量开始下降，有关物质超过3.5%，到三个月后，其制剂中替曲朵辛标示含量下降到90.3%，有关物质超过9.0%。六个月后，其制剂中替曲朵辛标示含量下降到88.1%，有关物质超过11.7%。从表2结果可以看出，替曲朵辛的枸橼酸盐溶液在4'C放置三个月其制剂中替曲朵辛含量几乎没有变化，对比结果说明替曲朵辛制剂的水溶液与温度的变化有相关性。表l替曲朵辛枸橼酸盐溶液在4(TC稳定性试验(061110)试验条件贮藏时间外观检'3(%)有关物质(%)备注恒温箱40'C0天一个月三个月六个月无色澄明液体无色澄明液体无色澄明液体无色澄明液体99.895.590.388.10.13.59.511.7HPLC测定外标法<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>医药用替曲朵辛(tetrodotoxin河豚毒素)纯度在85%-105%(标示量)，其化学结构研究见本发明人专利CN2007101439995，是一种白色粉未或无定型结晶，熔点在220'C以上变黑，易溶于有机酸，如醋酸，枸橼酸，酒石酸等，极微溶于水，不溶于有机溶剂，其毒性小鼠LDs。为7.0-10.0Pg/kg，在强酸和强碱溶液中其化学结构容易发生降解反应，生成2-氨基-6-羟甲基-8-羟基喹唑啉或2-氨基-6-甲基喹唑啉。替曲朵辛在固态时是以(I)存在，可以室温长期保存，4(TC以下对其影响不大。但是将替曲朵辛溶解于酸性水溶液时，替曲朵辛的化学结构发生互变异构体，(II)是替曲朵辛的内酯，(III)是替曲朵辛的4-表河豚毒素，(IV)是替曲朵辛的脱水产物，(V)是替曲朵辛的降解产物河豚酸，这些变化都是因为替曲朵辛溶液对热不稳定衍变的。在制备替曲朵辛注射液或冻干粉制剂时，需要将替曲朵辛溶解成液体，这个过程中易发生替曲朵辛降解反应。从替曲朵辛的化学结构分析在室温条件下不稳定是因为其化学结构中有容易发生差向异构化的官能团，如替曲朵辛结构中4-位碳和6-位碳上的羟基容易发生差向异构化使替曲朵辛转变为4-表(III)和6-表河豚毒素或者在酸性水溶液条件下，4-表河豚毒素容易进一步转化成4，9-脱水河豚毒素(IV)和河豚酸等衍生物(V)。0(IV)替曲朵辛在酸性溶液中的相互转化(I)替曲朵辛，(II)河豚毒素内酯，(III)4-表河豚毒素，(IV)4，9-脱水替曲朵辛，(V)河豚酸根据相似相溶的原理及立体结构化学的构象关系，同时考虑到医药上允许使用的药用辅料原则，经过实验研究，本发明发现使用糖类成分，如葡萄糖、果糖、乳糖、双糖、多糖或氨基酸类成分，如天冬氨酸、谷氨酸等药用辅料和有机酸及其盐的缓冲剂，如枸橼酸与枸橼酸钠，枸橼酸盐，醋酸与醋酸钠，醋酸盐，硼酸与碳酸钠，酒石酸与酒石酸钠，磷酸盐缓冲剂和医药用甘露醇共同组合制备替曲朵辛制剂，有显著的稳定替曲多辛的作用。表3，是使用乳糖、枸橼酸及枸橼酸钠缓冲液和甘露醇作稳定剂制成的注射用替曲朵辛冷冻干燥粉制剂，表4，是使用天冬氨酸((L-Aspartieacid)、枸橼酸及枸橼酸钠缓冲液和甘露醇作稳定剂制成的注射用替曲朵辛冷冻干燥粉制剂。从长期稳定性考査试验结果，可以得出的结论，使用本发明的组合物制成的替曲朵辛注射液可以在室温条件下长期保存。5表3乳糖甘露醇(1:1)和枸橼酸及枸橼酸钠缓冲液制备注射用替曲朵辛制剂_长期稳定性实验研究(061201)_试验条件lt藏时间外观检查有关物质备注(%)(%)表4天冬氨酸、甘露醇(4%)和枸橼酸及枸橼酸钠缓冲液制备注射用替曲朵辛制剂_H期稳定性实验研究(061202)_试验条件E:藏时间外观检査有关物质备注(%)(%)表5，是使用乳糖、枸橼酸及枸橼酸钠缓冲液和甘露醇作稳定剂制成的替曲朵辛注射液制剂，表6，是使用谷氨酸、枸橼酸及枸橼酸钠缓冲液和甘露醇作稳定剂制成的替曲朵辛注射液制剂。从长期考査实验结果证明，使用本发明组合物制成的注射用替曲朵辛制剂可以在室温条件下长期保存。表5乳糖甘露醇(1:1)和枸橼酸及枸橼酸钠缓冲液制备替曲朵辛注射液制剂_长期稳定性实验研究(061203)_试验条件ie藏时间外观检査Wl有关物质备注(%)(%)白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末105.40.5103.20.7101.61,099.91,599.11.998.52.197.82.397.52.496.82.5恒温(湿度65土5)o天白色块状或粉末106.50.2平均温度25±2°Cl个月白色块状或粉末105.40.5平均温度25土2'C2个月白色块状或粉末103.81.0平均温度25±2°C3个月白色块状或粉末102.71.2平均温度25±2°C4个月白色块状或粉末100.91.5平均温度25±2°C5个月白色块状或粉末99.71.8平均温度25±2'C6个月白色块状或粉末99.11.9平均温度25±2'C9个月白色块状或粉末98.42.1平均温度25±2°C12个月白色块状或粉末98.02,3白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末A色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末103,10.1102.40.4100.80.8100.11.299.81.599.51.998.12.297.42.497.02.6恒温(湿度65士5)平均温度25±2°C平均温度25±2°C平均温度25±2°C平均温度25土2'C平均温度25±2°C平均温度25±2'C平均温度25±2'C平均温度25±2'C恒温(湿度65士5)平均温度25±2°C平均温度25土2'C平均温度25±2'C平均温度25土2'C平均温度25士2'C平均温度25士2'C.平均温度25士2'C平均温度25±2°C定態法法法法法法法法BI夕夕夕夕夕夕夕夕定l法法法法法法法法L一16一不l不l不l不一不一A一不夕夕夕夕夕夕夕夕皿法法法法法法法法p夕夕夕夕夕夕夕外天月月月月月月月月5月月月月月月月月^个个个个个个个<123456921替曲朵辛注射液在室温条件下不稳定，在专利CN1568999A中对河豚毒素溶液的不稳定性也有论述，该专利申请保护的是一种替曲朵辛与助溶剂有机酸和稳定剂二糖的冷冻干燥粉制剂，该专利认为加入单糖不稳定，只有加入双糖和聚糖可以提高替曲朵辛的稳定性并研究了用河豚毒素药品制成的冷冻干燥粉制剂。观察了其在4(TC和12个月的长期稳定性，证明河豚毒素制成冷冻千粉后可以在室温条件下长期保存。在我们的研究中发现使用有机酸溶解替曲朵辛加入乳糖或蔗糖无论是制备成冻干粉还是注射液制剂，在室温条件下保存替曲朵辛制剂，效果不理想。其原因是单独使用有机酸溶解替曲朵辛，在1^=3.0时加入乳糖后，有机酸容易与乳糖或甘露醇继续发生化学反应，从而导致药品中的有关物质增加，结果在一定时间内药品变为不合格产品，这是因为有机酸如果不用缓冲液调节其酸性，其酸性容易使乳糖和甘露醇继续发生降解，从而影响到替曲朵辛制剂的稳定，对比实验见表7。在表ll列出的实验结果中配方1与配方4的对比研究中，也可以观察出如果制剂仅仅加入有机酸和乳糖其稳定性不如有机酸缓冲液。我们的研究发现要使替曲朵辛制剂在室温下稳定必须使用有机酸的缓冲剂再加入糖类或氨基酸类的药用辅料和甘露醇共同按特定比例组合，才能达到在室温条件下稳定替曲朵辛的效果。用本发明的组合配方制备的制剂，无论是液体还是冻干粉在室温条件下稳定，室温长期保存仍然符合药用要求，见表8-9。表7替曲朵辛有机酸与替曲朵辛有机酸缓冲液冻干粉制剂40'C高温下稳定性对比研究(061210)替曲朵辛20.cmg替曲朵辛10.OPg乳糖20mg乳糖20呢配方1枸橼酸10.O^g配方2甘露醇20mg(湿度65士5'C)(裙度65±5'C)枸橼酸21.OMg枸橼酸钠29.OUg检査项目标示量90-110《3%检査项目标示量90-110《3%考査考杳考査考查时间条件含量有关物质时间条件含量有关物质恒温(%)(%)恒温(%)(%)(天)天040。C108.40.30邻'c106.50.4540°C97.63.5540。C101.21.51040°C93.25.41040'C99.8.9本发明研究发现注射用替曲朵辛制剂在室温稳定性的药物组合配方的关键技术特征是使用有机酸缓冲液溶解替曲朵辛后再加入糖和甘露醇按(1:1)最佳比例，才能制备成一种室温稳定的注射用替曲朵辛制剂或者使用有机酸缓冲液溶解替曲朵辛后再加入氨基酸和甘露醇(4-5%)也可以制备成一种室温稳定的注射用替曲朵辛制剂，这种制剂可以是替曲朵辛注表6谷氨酸、tJ露醇(5%)和枸橼酸及枸橼酸钠缓沖液制备替曲朵辛注射液制剂_长期稳定性实验研究(061204)_试验条"Slt藏时间外观检査有关物质备注(%)(%)白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色St状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末白色块状或粉末108.30.3107.40.5105.81.0104.71.2103.91.4102.01.6101.11.9100.42.1跳02.5恒温(湿度65士5)(平均温度25士2'C1平均温度25士2'C2平均温度25士2'C3平均温度25士2'C4平均温度25土2X:5平均温度25士2。C6平均温度25士2'C9平均温度25土2'C12^法法法法法法法法g呢瑜術^浙JJ,L夕夕夕夕夕夕夕外F孑天月月月月月月月月射液或注射用替曲朵辛冻干粉制剂，见表10-11。从替曲朵辛(tetrodotoxin)的化学结构中可以看出替曲朵辛有二个羟基是最不稳定的官能团，4-位碳和6-位碳上羟基，在酸性水溶液中，替曲朵辛(I)与(II)为互变差向异构体；(II)与(III)为互变差向异构体，如果随温度的升高，4-表河豚毒素(III)，会降解成4,9-脱水河豚毒素(IV)，4，9-脱水河豚毒素(IV)隨时间和温度的变化会进一步转化成河豚酸(V)。因此在制备替曲朵辛溶液制剂中，首先是要控制住4-位碳和6-位碳上的羟基不使其发生差向异构化。我们对替曲朵辛立体结构的分析后，发现糖中的醛羰基氧原子(R—^一R1)或双糖中醚甙氧原子(gaf"0"9lu)和氨基酸上的羰基(Rf^—&)有稳定4-位碳和6-位碳上的羟基不使其发生差向异构化的作用，其原理是糖中醛羰基中的裸氧原子，有两个负电子，氧原子上提供的两个负电子与4-位碳上、6-位碳上的羟基和相邻位上碳原子上的氢原子在溶液状态下正好形成一个稳定构形式的6园环氢健，进一步的观察还可以看到在溶液状态下，能与辅料形成6园环氢键的还有胍基上的氢原子。按本发明配方制备的制剂的稳定性实验研究，证明本发明中使用糖的醛羰基和氨基酸的羰基是稳定替曲朵辛的最佳选择物，见替曲朵辛与辅料形成6园环氢键的相互作用。替曲朵辛与辅料形成6园环氢键的相互作用本发明辅料与替曲朵辛组合制备的溶液制剂是以氢健形成的液体制剂，所用辅料能防止替曲朵辛结构发生各种差向异构化和降解反应。同时它又不影响活性成分和辅料自身的活性作用，使用本发明的组合物无论是制备成注射用替曲朵冻干粉还是制备成替曲朵辛注射液，都能达到室温稳定替曲朵辛和药品长期保存的效果。本发明所述的一种室温稳定的替曲朵辛注射用制剂，即可以是注射液，也可以是注射用冷冻干燥粉，按照上述组合的方式制造成医药用替曲朵辛制剂，就是一种可以在室温下长期贮藏的药品。本发明所述替曲朵辛为医药用其含量在85-105%(标示量)，替曲朵辛也可以是替曲朵辛的衍生物，如4,9-脱水河豚毒素，河豚毒素内酯，4-表河豚毒素，6-表河豚毒素，4,9-脱羟基河豚毒素，6-表-4,9-脱羟基河豚毒素，ll-脱氧河豚毒素，4-表-ll-脱羟基河豚毒素，8-0-半琥珀酸盐河豚毒素，11-甘氨酸河豚毒素，11-去甲-6-表河豚毒素，河豚酸，氨基河豚毒素，甲基河豚毒素等。这类活性成可以从生物中提取，如河飩目(Fugu)河飩科(Tetrodontidae),刺飩科(Triodntiadae)，翻车鱼科(Molidae)，三刺河飩科(Triodntiade)，虾虎鱼、蝾螈、箭毒蛙、章鱼地、贝类、螺类、蟹类、鳖类和藻类等，也可以是人工合成物[5]或者是生物发酵提取物[61。本发明使用替曲朵辛或其衍生物及其盐为活性成分，其余为药用辅料的组合物有糖、甘露醇和枸橼酸及其枸橼酸钠缓冲液或者是氨基酸、甘露醇和枸橼酸及其枸橼酸钠的缓冲剂。其中糖可以选则，果糖，乳糖，双糖和多糖等药用辅料糖类；氨基酸可以选则，L-或D-或DL-天冬氨酸，谷氨酸等药用辅料氨基酸类；缓冲液可以选则，有机酸缓冲剂，如枸橼酸与枸櫞酸钠，枸橼酸盐，醋酸与醋酸钠，醋酸盐，硼酸与碳酸钠，酒石酸与酒石酸钠，磷酸盐缓冲剂和医药用甘露醇共同组合制备替曲朵辛制剂。本发明中药用活性成份替曲朵辛每单位剂量为1-50化；糖类的药用辅料单位每剂量为10-50mg;有机酸和其盐的缓冲剂每单位剂量为5-250化；医药用甘露醇每单位剂量为10-50mg或者药用活性成份替曲朵辛每单位剂量为l-50Pg;氨基酸类的药用辅料每单位剂量为10-5004g;有机酸和其盐组合的缓冲剂每单位剂量为5-250Pg;医药用甘露醇每单位剂量为40-60mg。实验研究发现在这种条件下，加入助溶剂后替曲朵辛水溶液的PH值正好是4.0-6.0之间，也是人体注射使用的最佳PH值。以上所述的室温稳定的注射用替曲朵辛制剂，除用于治疗人类疾病，如戒除成瘾类药物依赖症[2]，镇痛，镇静，麻醉，排除人体体内抗生素药物残留物[3]等外，还可用于清除养殖生物、动物体内抗生素类药物的残留物[6]及其毒素[7]。与现有技术相比，(1)替曲朵辛注射液必须在冷藏(4-6°C)条件下贮存，否则将会影响到替曲朵辛制剂的质量，使产品达不到药用质量标准要求。这种条件下的制剂给生产，药品运输，医生用药都带来了极大不方便。(2)使用有机酸和辅料乳糖组合配制的冻干粉制剂，因为没有控制酸性的有机酸仍然会破坏活性成分和辅料并不能不能保证替曲朵辛制剂质量的稳定性和药品安全性。本发明所取得的技术实质性的进步是1、科学合理的筛选出最佳组合物及其配比，使用有机酸缓冲液即解决了替曲多辛不溶解水的困难，又缓冲了酸对辅料或活性成分的破坏，加入糖或氨基酸类药用辅料又保证了替曲朵辛制剂质量的稳定性。用本发明组合物配比生产的注射用制剂，可以在室温条件下长期贮藏，为工厂的生产，医药运输、批发，节约了成本。2、科学合理的组合物及配比，制备出室温稳定的注射液，其剂型可以是注射液或者是注射用冻干粉，为医院、诊所医生用药提供了可选择的产品。3、用本发明组合物生产注射用替曲朵辛制剂，质量稳定，重现性好，生产工艺简单，检测分析快速灵敏，有工业化大规模生产的价值，可满足社会的需求。实施方案一、注射用替曲朵辛制备工艺将替曲朵辛及其衍生物用枸橼酸和枸橼酸钠缓冲液溶解后，加入乳糖或天门冬氨酸(80°C)和甘露醇后再加入注射用水到标定量，用无菌过滤法灭菌，用缓冲液调PH值为4.0-6.5，HPLC法测替曲朵辛含量，当其质量符合制剂标准后，定量灌装于西林瓶中，半加塞，冻干，升华，再干燥，压塞、封口。即可得到室温稳定的注射用替曲朵辛冻干燥粉制剂。1、注射用替曲朵辛冻干粉组合物配方替曲朵辛5.OMgB、替曲朵辛10.o化枸橼酸10.5Mg枸橼酸21.OMg枸橼酸钠14.5Pg枸橼酸钠29.0化蔗糖20rag乳糖20mg甘露醇20rag甘露醇20rag注射用水1.0-2.Oml注射用水1.0-2.00ml替曲朵辛10.04gD、替曲朵辛10.OPg枸橼酸21.(mg枸橼酸21.(￥g枸橼酸钠29.cmg枸橼酸钠29.OHg果糖甘露醇注射用水20mg20mg1.0-2.0mlL-天冬氨酸甘露醇注射用水lOOPg40mg1.0-2.00mlE、替曲朵辛10.O^g2i.cmg29.OKglOO^g40mgF、替曲朵辛10.O^g21.Ol^g29.O^g50mg枸橼酸枸橼酸钠D-天冬氨酸甘露醇注射用水1.0-2.Oml枸橼酸枸橼酸钠谷氨酸甘露醇注射用水1.0—2.00ml2、实施例2.1、取枸椽酸10.5mg和其钠盐14.5mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛5mg搅拌10min,加入蔗糖20g，甘露醇20g，继续搅拌15min，测PH值=6.0，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，105.5%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，4(TC预冻，从-40'C冻干24hr曲线升华，10hr再干燥，压塞，轧盖，按替曲朵辛药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考査，称A配方。2.2、取枸橼酸21mg和其钠盐29mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10min,加入乳糖20g,甘露醇20g，继续搅拌15min，测1^值=5.9，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，108.P/。，灌入2ml西林瓶，每瓶lml，半加塞，-40°(:预冻，从-4(TC冻干24hr曲线升华，10hr再干燥，压塞，轧盖，按替曲朵辛药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考查，称B配方。2.3、取枸橼酸210mg和其钠盐290mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10min,加入果糖200mg，甘露醇200mg，继续搅拌15min，测PH值=6.1，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，106.5%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，-40'C预冻，从-4(TC冻干24hr曲线升华，10hr再干燥，压塞，轧盖，按替曲朵辛药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考查，称C配方。2.4、取枸橼酸21mg和其钠盐29mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10min,加入L-天冬氨酸100mg,甘露醇40g，继续搅拌15min，测PH值=5.8，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，104.8%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，-40"预冻，从-40'C冻干24hr曲线升华，10hr再干燥，压塞，轧盖，按替曲朵辛药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考査，称D配方。2.5、取枸橼酸21mg和其钠盐29mg用注射用水lOOOml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10min，加入D-天冬氨酸100mg,甘露醇40g，继续搅拌15min，测PH值=5.9,用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，101.5%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，-4(TC预冻，从-40。C冻干24hr曲线升华，10hr再干燥，压塞，轧盖，按替曲朵辛药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考查，称E配方。2.6、取枸橼酸21mg和其钠盐29mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10min,加入谷氨酸100mg,甘露醇50g，继续搅拌15min，测ffl值=5.8，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，103.2%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，-40°(:预冻，从-40'C冻干24hr曲线升华，10hr再干燥，压塞，轧盖，按替曲朵辛药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考査，称F配方。A、B、C、D、E、F制剂稳定性研究见表8c<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>替曲朵辛注射液制备工艺将替曲朵辛及其衍生物用枸櫞酸和枸橼酸钠缓冲液溶解后，加入糖或氨基酸(80°C)和甘露醇，再加入注射用水到标定量，用无菌过滤法灭菌，用缓冲液调PH值为4.0-6.5,HPLC法测替曲朵辛含量，当制剂符合其质量标准后，定量灌装于安瓿瓶中，封口。即可得到室温稳定的替曲朵辛注射液制剂。替曲朵辛注射液组合物配方a、替曲朵辛枸橡酸枸橼酸钠蔗糖甘露醇注射用水5.0化10.5Pg14.5Pg20mg20mg1.0-2.0mlb、替曲朵辛枸橼酸枸橼酸钠乳糖甘露醇注射用水10.Opg21.OPg29.OPg20mg20mg1.0—2.O(Mc、替曲朵辛枸橼酸枸橼酸钠果糖甘露醇注射用水10.OPg21.OPg29.OPg20mg20mg1.0—2.Omld、替曲朵辛枸橼酸枸橼酸钠L-天冬氨酸甘露醇注射用水10.0化21.OPg29.OPg100Pg40mg1.0-2.OOmle、替曲朵辛枸橼酸枸橼酸钠D-天冬氨酸甘露醇注射用水10.OPg21.O^g29.OP10(￥g50mg1.0—2.Oml4、实施例4.1、取枸橼酸10.5mg和其钠盐14.5mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛5mg搅拌10min，加入蔗糖20g，甘露醇20g，继续搅拌15min，测PH值=6.1，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，109.5%，灌入lml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考査，称a配方。4.2、取枸橼酸21rag和其钠盐29mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10min，加入乳糖20g,甘露醇20g，继续搅拌15min，测1^值=5.8，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，105.W，灌入lml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考査，称b配方。4.3、取枸橼酸21mg和其钠盐29mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10min,加入果糖20g,甘露醇20g，继续搅拌15min，测PH值二6.3，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，102.7%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考查，称c配方。4.4、取枸橼酸21mg和其钠盐29mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10rain,加入L-天冬氨酸100mg，甘露醇40g，继续搅拌15min，测TO值=5.5，用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，101.8%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考査，称d配方。4.5、取枸橼酸21mg和其钠盐29mg用注射用水1000ml将其溶解，加入替曲朵辛10mg搅拌10min,加入D-天冬氨酸100mg，甘露醇50g,继续搅拌15min，测PH值5.6,用0.22的滤膜过滤，再过分子量为5000的超滤膜除菌，用HPLC测替曲朵辛含量，外标法计算，106.9%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液药品质量标准全检，产品合格后，印字，包装。稳定性考査，称e配方。a、b、c、d、e制剂稳定性研究见表9。表9替曲朵辛有机酸缓冲液注射剂制剂长期稳定性研究(070102)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>按本发明实施的结果，证实用本发明配方生产的注射用替曲朵辛制剂，在室温条件下贮存12个月后，其替曲朵辛的含量和有关物质都符合质量标准，用本发明配方生产的制剂是一种室温条件下可以长期贮存的制剂。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>参考文献河北渔业1982年(Z1)期，P49ZL95190556.2，DE69529156T2,EP0750909B1,RU2168331C2,US55846975A1CN200610168171Toxicon1985,23,271-276Y.Kishietc,J.Amer.Chem.Soc.，94，9217(1972).CN1552884ACN200610138719.7CN200610150511.权利要求1.一种室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂，其特征在于它含有药用活性成分河豚毒素(tetrodotoxin，中国药典称为替曲朵辛)和医药用辅料糖或氨基酸、甘露醇、枸橼酸和枸橼酸钠缓冲液组成。所述的替曲朵辛为医药用含量在85-105％(标示量)。2.根据权利要求1所述的室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂，其特征在于所述的替曲朵辛包括天然或者是人工合成的衍生物或修饰物河豚毒素内酯，4-表或6-表河豚毒素，如4,9-脱水河豚毒素，6-表-4，9-脱水河豚毒素，河豚酸，氨基河豚毒素，甲氧基或乙氧基河豚毒素及其药用盐等。3.根据权利要求1所述的室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂，其特征在于组合物中使用的药用辅料是含有糖类成分，如葡萄糖、果糖、乳糖、双糖、多糖和有机酸及其盐的缓冲剂，如枸橼酸与枸橼酸钠，枸橼酸盐，醋酸与醋酸钠，醋酸盐，硼酸与碳酸钠酒石酸与酒石酸钠，磷酸盐缓冲剂和医药用甘露醇共同组合而成。4.根据权利要求1所述的室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂，其特征在于组合物中使用的药用辅料是氨基酸类成分，如D-或L-或DL-天冬氨酸(D-或L-或DL-Aspartieacid)、谷氨酸和有机酸及其盐的缓冲剂，如枸橼酸与枸橼酸钠，枸橼酸盐，醋酸与醋酸钠，醋酸盐，硼酸与碳酸钠，酒石酸与酒石酸钠，磷酸盐缓冲剂和医药用甘露醇共同组合而成。5.根据权利要求1，3，所述室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂，其特征在于药用活性成份替曲朵辛每单位剂量1-5(Hxg;糖类的药用辅料每单位剂量10-50mg;有机酸和其盐的缓冲剂每单位剂量5-250Pg;医药用甘露醇每单位剂量10-50mg。6.根据权利要求l，4所述室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂，其特征在于药用活性成份替曲朵辛每单位剂量l-50Pg:氨基酸类的药用辅料每单位剂量10-500jig;有机酸和其盐组合的缓冲剂每单位剂量5-250Pg;医药用甘露醇每单位剂量40-60mg。7.根据权利要求1,3，4所述的室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂，其特征在于这种组合物溶液的PH值为4.0-6.0。8.根据权利要求1-7所述的室温稳定的注射用替曲朵辛组合物制剂，其特征在于所述的替曲朵辛药物制剂，可以制备成替曲朵辛注射用冷冻干燥粉末或注射液，制剂可以用于肌肉内、皮下或者静脉注射、滴注、透皮或者口服给药等。9.一种如权利要求1-8所述的室温稳定的注射用替曲朵辛制剂的制备方法，其特征在于(1)将替曲朵辛及其衍生物用枸橼酸和枸橼酸钠缓冲液溶解后，加入糖或氨基酸(8(TC)和甘露醇，再加入注射用水到标定量，用无菌过滤法灭菌，用缓冲液调？11值为4.0-6.0,测替曲朵辛含量，当其质量符合制剂标准后，定量灌装于安瓿瓶中，封口。即可得到室温稳定的替曲朵辛注射液制剂。(2)将替曲朵辛及其衍生物用枸橼酸和枸橼酸钠缓冲液溶解后，加入乳糖或天门冬氨酸(80'C)和甘露醇后再加入注射用水到标定量，用无菌过滤法灭菌，用缓冲液调PH值为4.0-6.5，测替曲朵辛含量，当其质量符合制剂标准后，定量灌装于西林瓶中，半加塞，冻干，升华，再干燥，压塞、封口。即可得到室温稳定的注射用替曲朵辛冻干燥粉制剂。10.根据权利9要求所述的一种室温稳定的注射用替曲朵辛组合物，其特征在于所述的药用活性成分替曲朵辛制剂含有糖或氨基酸的药用辅料、有机酸及其盐组合的缓冲剂和医药用甘露醇共同组合成的药物制剂，是用于治疗人类多种疾病，如戒除成瘾类药物依赖症，镇痛，镇静，安眠，麻醉，排除人体体内抗生素药物残留物或与其它类药物共同使用而增加其它药物的疗效等，还可用于清除养殖生物、动物体内抗生素类药物的残留物及生物毒素。全文摘要本发明涉及替曲朵辛(河豚毒素Tetrodotoxin)及其衍生物药品生产。特别是涉及替曲朵辛药品制剂中稳定性的组合物。本发明提供了一种使替曲朵辛类成分在制剂产品中稳定的制备方法，其制备方法是将替曲朵辛与有机酸缓冲液和药典允许使用的辅料共同组合，按特定的比例制造出注射用替曲朵辛制剂。用本发明组合物的制造方法生产的注射用替曲朵辛制剂，可以在室温条件下长期贮存，解决了替曲朵辛制剂在室温条件下不稳定的问题。文档编号A61P25/36GK101554368SQ20081008891公开日2009年10月14日申请日期2008年4月7日优先权日2008年4月7日发明者邱芳龙申请人:深圳市宏锦天生物科技有限公司