专利名称：：荔枝草总黄酮提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及物质提取
技术领域：
，更具体地，涉及荔枝草总黄酮提取
技术领域：
，特别是指荔枝草总黄酮提取物及其制备方法和用途，其具有显著的保肝作用。
背景技术：
：我国是肝病高发区，肝炎病人占人口总数10%以上。目前临床常用的抗肝炎药大体可分为抗病毒药、免疫调节药和保肝药三类。篇枝草(Sa/W。；7/e&/"R.Br.)系唇形科鼠尾草属植物地上部分，又名蛤蟆草、雪见草、过冬青等。一年生或二年生直立草本植物，全国分布于除西北以外的其它地区，主产于江苏，浙江，安徽等省。全草味苦，辛，性凉。有清热，解毒，凉血，利尿的功能。用于咽喉肿痛，支气管炎，肾炎水肝，外治乳腺炎等。现代药理表明荔枝草具有平喘、止咳、抗病毒、抗菌、抗氧化等作用。植物化学成分研究表明，荔技草的化学成分为黄酮类、碎类和咖啡酸等，黄酮类是其主要成分。黄酮类化合物广泛存在于自然界中，属于植物在长期自然选择过程中产生的一些次级代谢产物。黄酮类化合物具有抗氧化、清除氧自由基；调节心血管系统；抗癌、防癌作用；抗炎免疫及抗衰老作用；对内分泌系统作用；生物类黄酮还具有吸收紫外辐射、止咳、祛痰、泻下、解痉、提高记忆力、抗过敏、活血化瘀、利胆及肝脏保护作用等。荔枝草中黄酮类成分主要为高车前苷、高车前素、假荆芥属苷、泽兰黄酮和木樨草香等。高车前苷和高车前素具有保肝作用；高车前素能抑制肝癌细胞和人KB细胞的生长；木樨草苷具有杀菌作用；泽兰黄酮有显著的抗炎效果。传统黄酮类成分的纯化方法有萃取法和聚酰胺柱层析法等，但操作麻烦，且溶剂有不同程度的毒性。因此，需要提供一种高效的具有保肝作用的荔枝草总黄酮的制备方法，其操作简单、安全、易于工业化生产，从而荔枝草的进一步开发利用提供基础
发明内容本发明的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种荔枝草总黄酮提取物，该荔枝草总黄酮提取物中总黄酮含量高，具有显著的保肝作用，其制备高效、操作简单、安全、设备投资少、生产周期短、易于工业化生产。为了实现上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种荔枝草总黄酮提取物制备方法，其特点是，包括步骤1)菡枝草地上部分粉碎后，用含水的醇液加热回流提取，浓缩获得荡枝草浓缩液，同时回收所述醇'液；2)将所述甚枝草浓缩液通过预处理的非极性或弱极性的大孔吸附树脂柱；3)水洗所述大孔吸附树脂柱，然后用洗脱液洗脱，收集部分洗脱后溶液，浓缩至干，得到所述荔枝草总黄酮提取物。其中，水洗是去除树脂中残留的溶液及其他杂质。上述的荔枝草地上部分在粉碎之前可以先进行千燥，也可以不进行千燥，直接粉碎。较佳地，在步骤l)中所述提取的次数为3次，所述醇液是曱醇溶液或乙醇溶液。当然提取的次数并不局限于3次，可以是2次，也可以4次，一般来说，次数越多，能提取出来的总黄酮越多，但是后面几次单次提取到的总黄嗣会越来越少，而多次提取易造成提取液的体积太大，一般3次较合适。所述的荔枝草总黄酮提取物的提取采用正交试验，最优方法为荔枝草地上部分干燥、粉碎后，与50%乙醇溶液按重量体积比1:20(g/ml)置于提取器中，在7(TC回流提取3次，每次1小时。较佳地，在步骤l)中，在所述浓缩之前或获得所述荔枝草浓縮液之后进行离心或过滤。其中的离心或过滤是为了去除其中的明显杂质。较佳地，在所述步骤2)中，所述大孔吸附树脂柱是聚苯乙烯型或交联丙烯腈非极性或弱极性树脂柱。优选HZ820和AB8，最优选HZ820。当然也可以是其它合适非极性或弱极性树脂柱，比如类交联丙烯腈非极性或弱极性树脂柱。较佳地，在所述步骤2)中，所述荔枝草浓缩液的流速是0.55BV/h。优选1.5~4.5BV/h,更优选2.5BV/h。较佳地，在所述步骤3)中，所述洗脱液是醇液或酮液，所述洗脱液的浓度是10-95%。较佳地，在所述步骤3)中，所述水洗的流速是58BV/h，所述洗脱液的流速是28BV/h。所述洗脱液的流速优选4BV/h。较佳地，在所述步骤3)中，所述部分洗脱后溶液为0.53BV/h之间的洗脱后溶液。所述洗脱液的浓度优选50-70%。在本发明的第二方面，提供了一种荔枝草总黄酮提取物，其特点是，采用上述的制备方法制成。在本发明的第三方面，提供了上述的荔枝草总黄酮提取物在用于制备治疗肝脏疾病的药物或保健品中的用途。其中肝脏疾病可以是肝损伤、肝炎、脂肪肝或肝硬化。本发明的有益效果具体如下1.本发明采用含水的醇液对粉碎的荔枝草地上部分进行多次回流提取，过滤浓缩后，树脂柱吸附，再用洗脱液洗脱，收集洗脱后溶液，干燥得到慕枝草总黄酮提取物，经测定，其中的总黄酮含量不低于60%,设备投资少，生产周期短，制备高效、操作筒单、安全、成本低、易于工业化生产；2.本发明得到的荔枝草总黄酮提取物，药理学试验证明其具有显著的保肝、护肝、治疗肝脏疾病的功效，为茶枝草的进一步开发利用提供基础。图I是本发明的荔枝草总黄酮提取物对CCU诱导的小鼠急性肝损伤病理改变的影响图(HEx400)，(其中A:正常组；B:模型组；C:阳性对照组；D:高剂量组；E:中剂量组；F:低剂量组)。具体实施例方式本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数按重量计。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所迷的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例1称取250g荔枝草地上部分，干燥、粉碎后，加入5000ml的50。/。乙醇溶液，70。C下回流提取3次，每次1小时。合并提取液，静置过夜后，4000rpm/min下离心10分钟，减压浓缩获得650ml荔枝草浓缩液。5取一定量预处理好的HZ-820大孔树脂，装入内径为2.6cm的玻璃柱中，使其床体积为160ml，以2.5BV/h的流速使650ml篇枝草浓缩液緩慢通过树脂床。然后用1000ml的水洗去柱中残留的溶液，再用浓度为70%的乙醇溶液以4BV/h的流速流过树脂柱，收集0.5~3BV间的洗脱后溶液，减压浓缩至干，减压干燥后得到7.75g的棕褐色粉末，收率为3.1%(生药计)篇枝草总黄酮提取物，其总黄酮含量为63.5%。实施例2称取250g蒸枝草地上部分，干燥、粉碎后，加入5000ml的50Q/。乙醇溶液，7(TC下回流提取3次，每次1小时。合并提取液，减压浓缩至干，得篇枝草浸提物62g。称取50g荔枝草浸提物，加入1000ml水，超声处理20分钟，充分溶解后，得到荔枝草浓缩液，4000rpm/min下离心10分4中。取一定量预处理好的AB-8大孔树脂，装入内为3.4cm的玻璃柱中，使其床体积为350ml，以2.5BV/h的流速使1000ml篇枝草浓缩液緩慢通过树脂床。然后用2000ml的水洗去柱中残留的溶液，再用浓度为70%的乙醇溶液以4BV/h的流速流过树脂柱，收集0.5-3BV间的洗脱液，减压浓缩至干，减压干燥后得到5.85g的棕褐色粉末，收率为2.9%(生药计)荔枝草总黄酮提取物，其总黄酮含量为61.2%。上述实施例中所得到的荔枝草总黄酮提取物，其中含有的总黄酮的含量测定是采用NaN02-Al(N03)3-NaOH络合比色法进行测定的，以芦丁为外标，发现其中总黄酮的含量不j氐于60%。实施例31材料与试剂实施例l获得的荔枝草总黄酮提取物；羧曱基纤维素钠(CMC-Na);CCU(分析纯)；联笨双酯；ALT、AST试剂盒(南京建成生物技术公司)；昆明种小鼠60只，雌雄兼用(上海九亭实验动物中心)。2实验方法取60只昆明种小鼠分成6组，每组雌雄各半，同性别的小鼠随机取。即正常对照組、模型组、阳性对照組(联笨双酯組)和荔枝草总黄酮提取物高、中、低三个剂量组。药品均用0.8%的羧甲基纤维素钠制成混悬液，每天灌胃一次，连续7天，正常組和模型组给予相应体积的溶媒，末次给药2小时后正常組腹腔注射花生油0.1ml/10g,其余5组注射0.1%CC140.1ml/10g。禁食16小时后，摘眼球取血，测定血清谷丙转氨酶(Alanineamiotransferase,ALT)禾口谷草4令氨酶(Aspartateaminotransferase,AST)';舌'h生，并耳又肝脏左叶同一部位，固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察形态学变化。3实验结果表l荔枝草总黄酮提取物对CCU诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用(i±s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与正常組比4交:"表示P0.01,"-表示PO.001;与才莫型组比较"表示PO.Ol,承"表示P0.001。表l结果表明，小鼠腹腔注射CCU后，其血清ALT和AST活性显著升高，而小鼠预先给予蒸枝草总黄酮提取物后，血清ALT和AST值与模型组相比，不同剂量均有所降低，高剂量組降低明显。肝脏病理组织学;f全查结果见图1:正常对照组小鼠肝细胞结构正常，排列整齐，大小均匀，分界清楚，未见病理变化；模型组小鼠肝脏体积增大，肝细胞有灶状坏死和较多的点状坏死，肝小叶结构破坏，排列紊乱，肝细胞界线不清楚，胞浆透亮呈气球样变，间质可见大量炎细胞浸润；荔枝草总黄酮提取物各剂量组的肝细胞坏死程度均有不同程度的减轻。实施例4实施例2获得的荔枝草总黄酮提取物代替实施例3中的实施例1获得的荔枝草总黄酮提取物，其它条件同实施例3，得到了相似结果，即小鼠腹腔注射CCU后，其血清ALT和AST活性显著升高，而小鼠预先给予荔枝草总黄酮提取物后，血清ALT和AST值与模型组相比，不同剂量均有所降低，高剂量组降低明显；肝脏病理组织学检查结果同样表明蒸枝草总黄酮提取物各剂量组的肝细胞坏死程度均有不同程度的减轻。因此，本发明采用含水的醇液对粉碎的荔技草地上部分进行多次回流提取，过滤浓缩后，树脂柱吸附，再用洗脱液洗脱，收集洗脱后溶液，干燥得到荔枝草总黄酮提取物，经测定，其中的总黄酮含量不低于60%,同时，上述药理学实验证明，本发明提耳又的荔枝草总黄酮提取物对CCU诱导的小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。综上所迷，本发明的荔枝草总黄酮提取物中总黄酮含量高，具有显著的保肝作用，其制备高效、操作简单、安全、成本低、易于工业化生产。需要说明的是，在本发明中提及的所有文献在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，以上所述的是本发明的具体实施例及所运用的技术原理，在阅读了本发明的上迷内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改而不背离本发明的精神与范围，这些等价形式同样落在本发明的范围内。权利要求1.一种荔枝草总黄酮提取物制备方法，其特征在于，包括步骤1)荔枝草地上部分粉碎后，用含水的醇液加热回流提取，浓缩获得荔枝草浓缩液，同时回收所述醇液；2)将所述荔枝草浓缩液通过预处理的非极性或弱极性的大孔吸附树脂柱；3)水洗所述大孔吸附树脂柱，然后用洗脱液洗脱，收集部分洗脱后溶液，浓缩至干，得到所述荔枝草总黄酮提取物。2.根据权利要求l所述的荔枝草总黄酮提取物制备方法，其特征在于，在步骤l)中，所迷提取的次数为3次，所述醇液是甲醇溶液或乙醇溶液。3.根据权利要求l所述的茶枝草总黄酮提取物制备方法，其特征在于，在步骤l)中，在所述浓缩之前或获得所述荔枝草浓缩液之后进行离心或过滤。4.根据权利要求l所述的荔枝草总黄酮提取物制备方法，其特征在于，在所述步骤2)中，所迷大孔吸附树脂柱是聚苯乙烯型或交联丙烯腈非极性或弱极性树脂柱。5.根据权利要求l所迷的甚枝草总黄酮提取物制备方法，其特征在于，在所述步骤2)中，所述荔枝草浓缩液的流速是0.5~5BV/h,6.根据权利要求l所述的荔枝草总黄酮提取物制备方法，其特征在于，在所述步骤3)中，所述洗脱液是醇液或酮液，所述洗脱液的浓度是IO~95%。7.根据权利要求l所述的荔枝草总黄酮提取物制备方法，其特征在于，在所迷步骤3)中，所述水洗的流速是5~8BV/h,所述洗脱液的流速是2~8BV/h。8.根据权利要求l所述的荔枝草总黄酮提取物制备方法，其特征在于，在所述步骤3)中，所述部分洗脱后溶液为0.5~3BV/h之间的洗脱后溶液。9.一种荔枝草总黄酮提取物，其特征在于，采用权利要求卜8任一所述的制备方法制成。10.权利要求9所述的荔枝草总黄酮提取物在用于制备治疗肝脏疾病的药物或保健品中的用途。全文摘要本发明提供了一种荔枝草总黄酮提取物制备方法，包括步骤荔枝草地上部分粉碎后，用含水的醇液加热回流提取，浓缩获得荔枝草浓缩液，同时回收所述醇液；将所述荔枝草浓缩液通过预处理的非极性或弱极性的大孔吸附树脂柱；水洗所述大孔吸附树脂柱，然后用洗脱液洗脱，收集部分洗脱后溶液，浓缩至干，得到所述荔枝草总黄酮提取物，本发明还提供了采用上述的制备方法制成的荔枝草总黄酮提取物及其在用于制备治疗肝脏疾病的药物或保健品中的用途，本发明的荔枝草总黄酮提取物中总黄酮含量高，具有显著的保肝作用，其制备高效、操作简单、安全、设备投资少、生产周期短、易于工业化生产。文档编号A61K36/185GK101474251SQ200810207330公开日2009年7月8日申请日期2008年12月19日优先权日2008年12月19日发明者卢艳花,晋晓峰申请人:华东理工大学