MC-1R、MC-2R、和/或μ阿片样物质受体刺激作用的制作方法

专利名称：：MC-1R、MC-2R、和/或μ阿片样物质受体刺激作用的制作方法MC-1R、MC-2R、和/或u阿片样物质受体刺激作用本发明涉及调节由POMC(阿黑皮素原)基因编码的神经介导受体的表达，并可能地调节相应神经介质的表达的活性组分。本发明还涉及组合物的用途，该组合物包含至少一种对POMC基因编码的神经介导受体在皮肤水平的表达有活性的物质，以及一种筛选此类活性组分的方法。，餘制月领白勺i人i只:皮肤具有感觉功能，因此是个体的信息最初来源。外周神经负责皮肤的神经支配，它们具有轴突，其细胞体沿着脊髓分布。皮肤神经支配包括，特别是包括，感觉神经和自主交感神经纤维。表皮游离神经末梢是唯一深入表皮内部的感觉纤维。皮肤细胞和皮肤神经间存在一种重要的交换。皮肤细胞合成大量作用于皮肤神经元的神经介质(旁分泌途径)。皮肤细胞还拥有与神经细胞和皮肤细胞自身释放的某些神经介质相对应的受体；因此皮肤细胞可以接受这些神经介质并对它们作出反应。皮肤老化与皮肤细胞代谢失调有关，其特征为角质形成细胞增殖减少、角质形成细胞分化失调、死细胞堆积和皮肤神经支配减少。a-MSH或a-促黑激素(a_MSH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、P促脂解素(P-LPH)和13内啡肽是阿黑皮素原(POMC)单基因产生的神经激素。它们主要在脑垂体中合成，但在许多外周组织如皮肤中也有发现(WintzenM，YaarM，BurbachJP，GilchrestBA.JInvestDermatol(皮肤学研究杂志).1996年4月;106(4):673-8)。POMC基因禾口蛋白质ci-MSH、ACTH、P-Lra及P内啡肽由真皮细胞、成纤维细胞、朗格汉斯细胞、和表皮细胞、黑色素细胞和角质形成细胞表达。与这些蛋白质对应的受体也由皮肤细胞表达。黑皮质素受体1(MC-1R或MCR-1)是a-MSH和ACTH的受体，黑皮质素受体2(MC-2R或MCR-2)是ACTH的受体，y阿片样物质受体(P阿片样物质R)是P内啡肽的受体。在皮肤中，a-MSH、ACTH和P内啡肽抑制炎性细胞因子IL-l、TNFa和IL-10的合成，因此它们具有消炎特性。而且，这些细胞因子剌激神经激素的合成(MoustafaM，SzaboM，GhanemGE，MorandiniR，KempEH，MacNeilS，HaycockJW，《皮肤学研究杂志》(.JInvestDermatol).2002年12月;119(6):1244-53)。因此，皮肤内存在皮肤神经炎症的负反向控制。已知a-MSH和ACTH可通过作用于其在黑色素细胞中的相应受体调节黑色素生成。a-MSH和ACTH是黑色素细胞增殖的诱导物。此外，已知P内啡肽具有促进黑色素细胞有丝分裂的作用，并能增加黑色素细胞的树突形成(KauserS，SchallreuterKU，ThodyAJ，GummerC，TobinDJ，《皮肤学研究杂志》(JInvestDermatol)2003年6月;120(6):1073-80)。已知a-MSH和ACTH也由角质形成细胞合成。这两种蛋白质诱导皮肤角质形成细胞的增殖禾口分化(ChakrabortyAK，FunasakaY，SlominskiA，ErmakG，HwangJ，PawelekJM，IchihashiM.，《生物化学与生物物理学学报》(BiochimBiophysActa).1996年8月28日；1313(2):130-8)。6皮肤的不同细胞(角质形成细胞、黑色素细胞和成纤维细胞)能够合成其他神经介质，例如神经生长因子(NGF)等神经营养因子。角质形成细胞和成纤维细胞产生NGF、TrkA和p75NTR的受体。通过与TrkA结合，NGF诱导这些细胞的增殖，以防角质形成细胞凋亡。众所周知，NGF可诱导神经元分化并使其存活；因此NGF在保持神经元密度方面起重要作用。此外，在小鼠中，背根神经节神经元内显示出P0MCmRNA的存在，这表明黑皮质素系统，特别是a-MSH参与了外周神经修复。因此，a-MSH在神经营养机能中起一定作用(GispenWH，AdanRA.，《纽约科学院院报》(AnnNYAcadSci.)1999年10月20日；885:342_9，vanderKraanM，TatroJB，EntwistleML，BrakkeeJH，BurbachJP，AdanPA，GispenWH.《大脑研究与分子脑研究》(BrainResMolBrainRes.)1999年1月8日；63(2):276-86)。此外，已知13内啡肽和其衍生物通过与神经细胞的阿片样物质受体结合，可使人产生康乐感。迄今为止，专业人员曾试图调节a-MSH或13内啡肽等神经介质的释放或模拟它们的功能，以影响皮肤的内环境稳定和/或改善皮肤的神经支配。此外，专业人员一直试图通过不完全相当的不同代谢途径解决皮肤老化问题。但现在仍存在一些新途径亟待探索。先前的一项专利申请W02007/039058公开了将阿片样物质受体拮抗剂用于下调黑色素细胞中阿片样物质受体表达的总体用途。先前的另一项专利申请US2004/0214851公开了一种提高阿片样物质受体表达以用于诊断和/或治疗(仅用于受损组织)的方法。这些公开的内容未提供解决上下文中所述的皮肤老化的方法。发明目的本发明人已经找到创造性方法，用于恢复皮肤神经支配或维持或促进皮肤细胞的内环境稳定，特别是一般的老化和色斑问题。本发明还意图提供用于一种评估标准，用于评估皮肤美容学中的活性组分对皮肤的神经支配、皮肤内环境稳定和黑色素生成的影响。本发明的主要目的是提供至少一种活性物质，特别是在皮肤水平，以-促进细胞内环境稳定，特别是促进角质形成细胞增殖，以允许上皮再形成，-直接或间接恢复或维持皮肤的神经支配，以允许维持表皮的神经网络并获得康乐感，-直接或间接恢复或维持血管生成，以维持令人满意的血液滋养，-调节黑色素生成。所有这些目的都是为了预防或抵抗皮肤老化和/或抵抗皮肤老化过程中观察到的应激诱导的变化的影响，例如光诱导的老化或时间生物学老化。因此，本发明的一个目的是预防和/或抵抗皮肤属性的丧失，特别是表皮，以及预防和/或抵抗自然肤色的改变，特别是形成色斑，例如白斑或褐色斑。本发明还意图提供一种物质，该物质允许对其他介质(参与皮肤的神经支配、血管形成和上皮形成)的合成的级联诱导。本发明还意图提供一种物质，该物质可预防和/或抵抗皮肤水平的营养机能丧失。本发明还意图提供上文所述的化妆品学和/或药学，特别是皮肤学领域中的一些活性物质。本发明的一个特别目的是提供可局部地和/或营养保健地(neutraceutically)应用的活性物质，特别是至少一种植物提取物，其可能通过生物技术转化而来，或者至少一种已表征的分子。对于生物技术，本发明指此过程包含至少一个在微生物的存在下进行的步骤。发明概述在本发明人研究的用于缓和上述技术问题并实现本发明目的创新途径中，本发明人发现，非常有意思的是，可调节、且更优选地提高P0MC基因编码的至少一种介质的至少一种受体在皮肤水平的表达。鉴定活性组分的方法以诱导激素aMSH或P内啡肽的表达为基础，或以添加可模拟这些神经激素的作用的物质为基础，但这些物质不会以任何方式导致这些激素的受体的表达。本发明人发现，在时间生物学的老化过程中，受体MC-1R、MC-2R和y阿片样物质R的基因水平的表达减少了约4倍，角质形成细胞中P0MC基因的表达增加了约5倍。此外，由于MC-1R和ii阿片样物质受体是由黑色素细胞表达的，因此可使用本发明的活性物质预防和/或抵抗皮肤老化和/或修饰皮肤的色素沉着。本发明涉及调节MC-1R、MC-2R和y阿片样物质R这三种受体中至少一种的表达的物质，特别是在皮肤水平的表达，以改善神经介质的影响，从而允许对参与皮肤神经支配、血管形成和上皮形成的其他介质的合成的级联诱导。本发明涉及至少一种调节MC-1R、MC-2R和y阿片样物质R这三种受体的基因中至少一种基因的表达的物质，特别是在皮肤水平的表达，以维持或促进皮肤水平的细胞内环境稳定，恢复皮肤的神经支配或血液滋养，并调节黑色素生成。对于调节MC-1R、MC-2R或ii阿片样物质受体中的至少一种受体的表达，本发明人指调节(剌激或抑制，可能是部分剌激或抑制)分别编码蛋白质MC-1R、MC-2R或ii阿片样物质R的基因中的至少一种，并调节(剌激或抑制，可能是部分剌激或抑制)相应信使RNA对蛋白质MC-1R、MC-2R或ii阿片样物质受体中至少一种的合成，以及调节(剌激或抑制，可能是部分剌激或抑制)蛋白质MC-1R、MC-2R或ii阿片样物质R的活性。对于剌激MC-1R、MC-2R或ii阿片样物质受体中的至少一种受体的表达，本发明人指剌激，可能是部分剌激，分别编码蛋白质MC-1R、MC-2R或ii阿片样物质R的基因中的至少一种，并剌激，可能是部分剌激，相应自信使RNA对蛋白质MC-1R、MC-2R或y阿片样物质受体中至少一种的合成，以及剌激，可能是部分剌激，蛋白质MC-1R、MC-2R或ii阿片样物质R的活性。对于抗衰老，优选剌激受体基因的表达约4倍。对于抗衰老，优选剌激使蛋白质MC-1R、MC-2R或y阿片样物质R的表达约5倍。对于"恢复"一词，本发明人是针对某参数而言，是指此参数从低于或高于良好生理功能所需的水平恢复到更适合相关受试者的生理水平。对于"产生康乐感"一词，本发明人指通过释放容易与P_阿片样物质受体结合的13内啡肽产生的康乐感。本发明特别涉及调节、且更优选地是剌激MC-1R基因和/或MC-2R基因和/或y阿片样物质R基因的表达，和/或分别由这些基因编码的蛋白质的表达，特别是在人类中。本发明还特别涉及调节P0MC基因产物，以及MC-1R和/或MC_2R受体，和/或y阿片样物质R，以提高受体_配体复合物的效用；因此也调节POMC基因表达的活性组分也是优选的。对于抵抗老化，可能使对POMC基因表达的抑制为约5倍来实现，但是根据本发明，优选维持或提高POMC基因表达，以增强神经介质的作用。对于黑色素生成，优选剌激或维持POMC基因的表达。调节作用优选地足以实现对表达这些受体中的至少一种受体的目标皮肤细胞增殖和/或分化的剌激，和/或恢复，至少部分恢复皮肤的神经支配。与对照模型(不接触活性组分)中MC-1R、MC-2R和/或y阿片样物质受体的表达水平相比，能够使模型中这些受体基因的表达提高至少约1.2倍，优选至少约2倍，这种模型包含至少一种细胞类型，这种细胞类型与活性组分接触时会表达这些受体，这样的活性组分被认为能有效剌激或激活上述受体基因。与对照模型(不接触活性组分)中MC-1R、MC-2R和/或y阿片样物质受体的表达水平相比，能够使模型中这些蛋白质的表达提高至少约1.l倍，优选至少约1.2倍，这种模型包含至少一种细胞类型，这种细胞类型与活性组分接触时会表达这些受体，这样的活性组分被认为能有效剌激或激活上述受体的表达。与对照模型(不接触活性组分)中MC-1R、MC-2R和/或y阿片样物质R的表达水平相比，模型中这些基因的表达水平约低于或等于其0.95倍，优选0.8倍，这种模型包含至少一种细胞类型，这种细胞类型与活性组分接触时会表达这些受体，这样的活性组分被认为能有效抑制或降低上述受体的表达。与对照模型(不接触活性组分)中MC-1R、MC-2R和/或y阿片样物质R的表达水平相比，模型中这些基因的表达水平约低于或等于其0.95倍，优选0.8倍，这种模型包含至少一种细胞类型，这种细胞类型与活性组分接触时会表达这些受体，这样的活性组分被认为能有效抑制或降低上述受体的表达。根据一种具体实施方法，优选激活或剌激MC-1R、MC-2R，和/或y阿片样物质受体基因，和/或MC-lR、MC-2R和/或阿片样物质受体蛋白质的表达，并可能维持或剌激POMC基因和/或角质形成细胞中由POMC基因编码的神经介质。根据另一种实施方法，这些被表达的受体中的至少一种在角质形成细胞中的表达增加，以减少炎症反应，特别是与这些皮肤细胞的过度增殖有关的一部分病理。根据另一种具体实施方法，额外地对黑色素细胞中MC-1R和/或阿片样物质受体基因的表达，和/或MC-lR和/或阿片样物质受体蛋白质的表达，以及可能的POMC基因的表达和/或POMC基因编码的神经介质的表达进行了调节。本发明的一方面涉及鉴定活性物质的方法，该物质能够调节至少一种活细胞的增殖和分化，这种细胞能够表达MC-1R、MC-2R和/或已表征的y阿片样物质受体，其特征在于其包括-使至少一种能够表达MC-1R、MC-2R和/或y阿片样物质受体，和可能表达POMC基因的活细胞接触这种活性物质；-分析MC-lR、MC-2R和/或y阿片样物质受体的表达，其特别目的是鉴定可调节、优选是剌激MC-1R、MC-2R和/或阿片样物质受体表达的活性物质。优选通过对编码MC-1R、MC-2R和/或y阿片样物质受体的核苷酸序列的表达进行定性和/或定量分析，来分析受体MC-1R、MC-2R和/或y阿片样物质受体的基因表达。RT-PCR优选包括用与SEQIDNo.1、2、3、4的序列互补的DNA核苷酸序列中的至少一部分杂交的引物扩增编码MC-lR、MC-2R和/或ii阿片样物质受体和可能编码POMC基因的核苷酸序列的至少一部分。SEQIDN°l:MC-1RNM_002386SEQIDN°2:MC-2RNM_000529SEQIDN。3:ii阿片样物质受体NM_000914SEQIDN°4:P0MCNM_000939所用的活细胞优选包括角质形成细胞和/或黑色素细胞，特别是提取自成年人类受试者特定部位(腹部、胸部等)的皮肤。优选使用所谓的"正常"细胞，即，例如非转化细胞(非转化的肿瘤细胞或非转化的转基因细胞)，具有显著代表性，可用于被研究对象组的细胞类型试验。优选根据年龄进行分类，以建立年龄/基因关系和年龄/蛋白质合成关系。年轻受试者的年龄介于17至40岁之间；中年受试者的年龄介于40至50岁之间，超过50岁的为老年受试者。鉴定方法优选包括一个分析蛋白质MC-1R(34.7kDa)、MC_2R(33.9kDa)和/或y阿片样物质受体(44.8kDa)表达的步骤，该步骤通过这种方法进行，S卩，将凝胶中的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上(蛋白质印迹法)，此方法特别用于检测当活性物质与上述活细胞接触时，对相应蛋白质表达的调节。根据第一个优选的实施方法，可表达MC-1R、MC-2R和/或y阿片样物质受体的活细胞类型为角质形成细胞。在这种情况中，所述活性细胞被发现可剌激或提高MC-1R、MC-2R和/或P阿片样物质受体的表达，和可能降低POMC基因的表达。根据第二个的实施方法，可表达MC-1R和/或y阿片样物质受体的活细胞类型为黑色素细胞。在这种情况中，所述活性细胞被发现可调节MC-lR和/或阿片样物质受体的表达，和可能调节POMC基因的表达。作用于角质形成细胞时，所述活性物质优选包括对NGF和VEGF合成的一种级联增加，并因此分别剌激神经支配(神经元密度和树突形成)和新血管生成。本发明的第二个方面涉及上述活性物质的用途；S卩，该物质可根据上述筛选方法被确认为具有活性，可作为活性物质用于化妆用组合物或营养保健用组合物，或用于生产药物组合物，优选地是皮肤药组合物，特别用来调节，优选是剌激蛋白质MC-1R、MC-2R和/或P阿片样物质受体的合成，特别地以用来诱导角质形成细胞增殖和/或分化和/或成熟。本发明的第三方面涉及上述活性物质的用途，作为活性物质用于化妆用组合物或营养保健用组合物，或用于生产药物组合物，优选地是皮肤药组合物，特别用来预防和/或抵抗时间生物性皮肤老化或由日光导致的老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮内环境稳定减弱，或促进上皮形成，或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善皮肤血管形成，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤期间的血管生成，或预防和/或抵抗皮肤神经支配减弱，或改善皮肤神经支配，或产生一种康乐感，或改善肤色和/或色泽和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时。本发明的第四方面涉及化妆用组合物或营养保健用组合物，用来预防和/或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮内环境稳定减弱，或促进上皮形成，或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善皮肤血管形成，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤期间的血管生成，或预防和/或抵抗皮肤神经支配减弱，或改善皮肤神经支配，或产生一种康乐感，或改善肤色和/或色泽和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时；上述组合物包含作为活性成分的活性物质，如之前描述的，可能与之前描述的物质组合使用。本发明的第五方面涉及药物组合物，特别用来预防和/或抵抗皮肤老化或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮内环境稳定减弱，或促进上皮形成，或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，或预防和/或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤期间的血管生成，或预防或抵抗皮肤神经支配减弱，或改善皮肤神经支配，或产生一种康乐感，或改善肤色和/或色泽和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时；上述组合物包含作为活性成分的活性物质，如之前描述的，可能与之前描述的物质组合使用。本发明的第六方面涉及一种化妆性护理方法，其特征在于，将上述化妆用组合物或上述活性物质用于皮肤以获得改善的美化效果。由专业人员通过简单的常规做法确定所述活性物质的有效量。本发明还涉及预防性处理或治疗性处理的方法，作为上述全部目的和应用的一部分。发明详细说明本发明人已首次表明了在时间生物性皮肤老化过程中受体MC-1R、MC-2R和y阿片样物质R的表达会降低，特别是当这些受体由人类皮肤的角质形成细胞表达时。本发明人还首次确定了在时间生物性皮肤老化过程中POMC基因表达的提高，特别是在人类皮肤角质形成细胞中。因此本发明人制定了角质形成细胞中的筛选方法，用以寻找活性物质，特别是植物提取物或已表征的化学分子或通过生物技术转化而来的分子中的活性物质，这些活性物质可剌激，特别是编码受体MC-1R、MC-2R和ii阿片样物质R的mRNA的表达，和可能维持、剌激或抑制编码神经介质(由POMC基因编码)的mRNA的表达。然后试验所选活性物质对mRNA的相应蛋白质表达的作用。本发明还表征了角质形成细胞中MC-1R、MC-2R和y阿片样物质受体表达的特性。之前，仅确认过角质形成细胞中MC-2R的mRNA(MoustafaM，SzaboM，GhanemGE，MorandiniR，KempEH，MacNellS，HaycockJW.，InvestDermatol.2002年12月;119(6):1244-53)，因此本发明人最先确认了角质形成细胞中的蛋白质MC-2R，并指出ACTH不仅通过与角质形成细胞中的MC-1R结合发挥活性，还与MC-2R结合以发挥活性。因此，本发明描述了物质的用途，所述物质剌激编码神经介质(由POMC基因编码)受体的基因中的至少一种基因的表达，该受体优选选自至少一种皮肤细胞类型中的MC-1R、11MC-2R和阿片样物质R，这种皮肤细胞可表达这些受体中的至少一种。本发明描述了物质作为活性物质的用途，用于组合物的制备，以剌激选自a-MSH、ACTH和P-内啡肽中的一种神经介质与其相应受体间的至少一种相互作用。已经将所选活性物质用于化妆用组合物、营养保健用组合物和药物组合物中，优选是皮肤药组合物，特别用于预防和/或抵抗表皮变薄，特别是时间生物性或光诱导的皮肤老化过程中的表皮变薄。上述物质优选能够提高或剌激编码神经介质(由P0MC基因编码)的受体的基因的表达，以抵抗或预防角质形成细胞中配体和受体间平衡的失调。上述物质优选能够降低POMC基因的表达，以抵抗或预防在角质形成细胞中分别观察到的配体和受体平衡表达的失调，特别是在老化过程中。上述物质优选能组合使用，以抑制P0MC基因的表达和剌激受体基因的表达。上述物质优选能提高或维持P0MC基因的表达以提高a-MSH、ACTH和P-内啡肽的上述作用。幸运的是，上述物质提高了角质形成细胞中由POMC基因编码的神经介质的至少一种受体的表达，可以预防和/或抵抗皮肤老化或应激作用引起的各种变化，如皮肤老化过程中所观察到的变化。因此，本发明涉及调节这些受体，优选是剌激这些受体，特别是以减轻失调，尤其是减少a-MSH、和/或ACTH、和/或P_内啡肽与其相应受体的相互作用，其中所述相互作用与细胞老化有关，并影响角质形成细胞。上述物质优选能增加NGF的合成，从而可能增加外周神经在皮肤水平的生长。因此本发明涉及下述物质的用途，该物质允许皮肤神经支配的增加，其中所述的皮肤神经支配被观察到在老化过程中或应激作用引起的变化中减少，正如在皮肤老化过程中所观察到的。上述物质优选能增加VEGF的合成，从而可能增加皮肤水平的血管形成。因此本发明涉及下述物质的用途，该物质可使皮肤得到更好的滋养，其中所述的皮肤滋养被观察到在老化过程中或应激作用引起的变化中减少，正如在皮肤老化过程中所观察到的。能剌激角质形成细胞中MC-1R和/或MC-2R和/或y阿片样物质受体表达的物质优选选自4种已表征的分子-苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3&，4，5，7，9&，913-八氢-奧并[4，5_b]呋喃_4-基，-Z-十氢-6，8a_二羟基_1_异丙基_3a，6_二甲基奧_5_基_2_甲基丁_2_烯酸酯-2，6二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)5_6(1-异丙基_1_羟基环戊烷))1，2环氧环庚烷(CAS号352220-52-1)及其酯，-特别是7-乙酸酯-2，6二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)5_6(1-异丙基_1_羟基环戊烷))1，2环氧环庚烷，已知其CAS号为86992-41-8，其通用名为lapiferrin;以及含有此类已表征的分子的植物提取物。6种植物提取物淡黄鼬瓣花(Galeopsisochroleuca)(野生大麻)、普通欧蓍草(Achilleamillefolium)、野生芋头(Colocasiaesculenta)、欧洲酸樱杉K(Primuscerasus)、黑剌李(P進usspinosa)、长春布宁提取物(夹竹t兆科(Apocynacea)AmsoniaAbrenaemontan);4种生物技术水解产物，通过用现有微生物发酵植物提取物获得用乳酸细菌特别是乳杆菌，例如胚芽乳杆菌(lactobacillusplantarum)，转化芒果、海枣或番木瓜的提取物，或用乳酸细菌特别是乳杆菌，例如副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)，转化的香蕉提取物；和它们的混合物。在这些已表征的分子中，lapiferin，特别是多石阿魏(Ferulal即idosa)提取物中的，或来自多石阿魏提取物的，以及苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氢-奧并[4，5-b]呋喃_4-基是本发明的优选物质。在植物提取物中，普通欧蓍草(Achilleamillefolium)和黑剌李(Pru皿sspinosa)是本发明的优选物质。根据一个优选实施方式，所述植物提取物优选通过将植物(优选是根、根状茎、茎、皮、花、果实、种子、胚芽或叶)浸泡于1-10%(p/p)(通常为1-5%)的一种溶剂中或溶剂混合物中获得，通常为水和醇、二醇或多元醇(例如乙醇、甘油、丁二醇和其他二醇、木糖醇等)的混合物，其比例为100/0至0/100，优选浸泡于水中。最后将获得的提取物过滤或蒸馏，以回收可溶部分，将此部分过滤，优选用0.45ym的滤膜。用于发酵植物提取物以获得生物技术水解产物的微生物通常来自乳酸细菌属，特别是胚芽乳杆菌或副干酪乳杆菌，和双歧杆菌属(bifidobacterium)，特别是长双歧杆菌(bifidobacteriumlongum)，或酵母属(Saccharomyces)。优选对这些水解产物进行进一步过滤，优选用0.45ym的滤膜，以获得活性组分。通过溶解于溶剂中制备所述已表征的分子(包括l即iferin和苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b_八氢-奧并[4，5_b]呋喃+基)，这种溶剂通常为DMS0、乙醇、二醇，特别是溶解于浓度为0.1%的匿S0中。上述活性物质用于化妆用组合物时，对于植物提取物和生物技术水解产物，其含量优选介于0.01%至5%(v/v)，对于已表征的分子，其含量介于1.10—7%至1%(v/v)，优选介于1.10—5%至1.10—"%。本发明特别涉及一种用于化妆护理或预防性处理或治疗性处理的组合物，用于改善皮肤结疤期间的通透性过高，改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，从而改善皮肤上皮形成，促进维持皮肤神经支配。上述物质还表现出对神经细胞中的MC-1R和/或MC-2R和/或y阿片样物质受体表达的剌激作用，特别是在皮肤神经网络中。上述活性物质有利地与下列其他活性物质组合使用-剌激皮肤神经营养机能和/或活化敏感皮肤神经的活性组分，例如专利申请FR2825273所引用的组分，红椒(C即sicuma皿皿m)的提取物、红色素(红辣椒)、或胡椒(Pipernigrum)、或谷氨酰胺基乙基喷哚(Exsymol);-具有模拟13内啡肽效果的活性组分，以改善皮肤的屏障功能，例如专利申请US2006069032所引用的组分，可可豆壳提取物；-剌激|3内啡肽合成的活性组分，可使人获得康乐感，例如T印hroline，来自植物灰毛豆(t印hrosiapurpurea)(Soliance);-剌激细胞增殖和/或细胞分化的活性组分，具有抗老化活性，例如下列分子NGF、a-MSH、P内啡肽、或衍生物，例如专利申请FR2857874中所述的物质，P3-内啡肽。-保护成纤维细胞生长因子(特别是FGF2)不被降解的活性组分，例如申请人提交并公布的GB244036专利申请中所述的植物提取物，特别是黄葵(HibiscusAbelmoscus)提取物；-剌激成纤维细胞活动和/或增殖的活性组分，例如发酵大豆多肽，这是申请人以Phytokine这一商品名销售的产品，可与黄葵提取物组合使用；_剌激透明质酸酶合酶(Hyaluronasesynthase)，特别是透明质酸酶合酶2的活性组分，如专利FR2893252所述；-剌激赖氨酰氧化酶(例如L0XL)活性和/或合成的活性组分，例如专利FR2855968所述的组分，特别是用于剌激弹性纤维生成的莳萝提取物。-具有消炎特性(例如抑制PLA2)的活性组分，特别是专利FR2847267中所述的组分，特别是野葛根提取物(Inhipase⑧)；-可改变肤色的活性物质，例如用于亮化和/或美白皮肤的活性组分；-具有消除浮肿特性的活性物质，例如橙皮素月桂酸酯(713￥381"11111)，或五羟黄酮辛酸酉旨(Flavenger⑧)。此外，上述活性物质剌激MC-lR和/或MC-2R和/或ii阿片样物质受体的表达，优选地在角质形成细胞中，可与另一种活性物质组合使用，该物质调节，优选地提高或降低下列至少一种受体的表达，即黑色素细胞表达的MC-1R和ii阿片样物质受体，和/或调节由黑色素细胞表达的P0MC基因的表达。此实施方式的目标在于改善肤色和/或色泽和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时，以预防和/或抵抗与老化有关或无关的特定色素点的色素沉着或色素脱失，如下文所述。本发明人还研究出了一种用于黑色素细胞的筛选方法，用以寻找活性物质，特别是植物提取物或已表征的化学分子或通过生物技术转化而来的分子等活性物质，特别用来调节编码MC-1R和ii阿片样物质R的mRNA的表达，和可能调节编码神经介质(由P0MC基因编码)的mRNA的表达。然后试验依此选出的活性物质对mRNA的相应蛋白质表达的作用。已经将所选活性物质用于化妆用组合物、营养保健用组合物和药物组合物中，优选是皮肤药制剂，特别用于预防和/或抵抗色素沉着或色素脱失。上述物质优选可调节黑色素细胞中由POMC基因编码的一种神经介质的至少一种受体的表达，以预防或抵抗色素沉着或色素脱失。上述物质优选可调节P0MC基因的表达，以预防或抵抗色素沉着或色素脱失；特别是，保留可同时剌激黑色素细胞中的POMC和受体的物质以增加色素沉着并保留可同时减少或抑制黑色素细胞中的P0MC和受体的物质以减少色素沉着。这些物质可组合使用以剌激P0MC表达和/或受体表达并增加色素沉着或抑制P0MC和受体并减少色素沉着。根据一个实施方式，可剌激黑色素细胞中MC-lR和/或ii阿片样物质受体中至少一种的表达和/或剌激P0MC表达的物质可为下列物质-—种已表征的分子1-甲基-P-咔啉-3-羧酸；-下列植物提取物大豆粉、(红色)菝葜(sals即arilla)(丽花菝葜(Smilax14ornata))、普通欧蓍草(Achilleamillefolium)、Cecropiaobtusa、月见草(Oenotherabiennis)、胡萝卜提取物、绵马、欧洲酸樱桃、或它们的任何混合物，以及；-通过用现有微生物发酵植物提取物获得的生物技术水解产物，选自发酵的酵母或羽扇豆，特别是用乳酸细菌发酵的，例如胚芽乳杆菌；用乳酸细菌转化的番木瓜、海枣或大豆的提取物，特别是用乳杆菌转化的，例如胚芽乳杆菌；用双歧杆菌例如长双歧杆菌发酵的柠檬提取物；和它们的任何混合物。根据本发明，上述可剌激MC-1R和/或MC-2R和/或y阿片样物质受体表达的活性物质与上述可剌激黑色素细胞表达的MC-1R和/或y阿片样物质受体和/或P0MC物质的组合使用可增加皮肤色素沉着，具有增黑作用，以预防和/或抵抗与老化有关或无关的色素脱失斑点。根据第二实施方式，降低黑色素细胞中POMC基因表达的物质可为淡黄鼬瓣花(Galeopsisochroleuca)(野生大麻)以及欧剌柏(Juniperuscommunis)(杜松子)的水提取物或水醇提取物，并且/或者可降低黑色素细胞中MC-1R和/或y阿片样物质受体中至少一种的表达的物质为欧剌柏(杜松子)的水提取物或水醇提取物。根据本发明，上述可剌激MC-1R和/或MC-2R和/或y阿片样物质受体的活性物质与上述可减少黑色素细胞表达的MC-lR和/或ii阿片样物质受体和/或减少黑色素细胞中的POMC基因的物质的组合使用可减少皮肤色素沉着，具有亮白作用，以提高肤色亮度，预防和/或抵抗与老化有关或无关的色素沉着点。本发明特别涉及一种用于化妆品或皮肤化妆护理或预防性处理或治疗性处理的组合物，用来改变皮肤亮度以及色素沉着，特别是与老化有关或无关的色素点。本发明的化合物被制成局部用组合物的形式，特别是化妆用组合物或药物组合物，优选是可用于皮肤的皮肤用组合物。因此，对于这些组合物，赋形剂包括例如下列至少一种，包括防腐剂、软化剂、乳化剂、表面活性剂、保湿剂、增稠剂、调节剂、消光处理剂、稳定剂、抗氧化剂、调质剂、闪光剂、成膜剂、增溶剂、色素、染料、香料和遮光剂。这些赋形剂优选氨基酸和其衍生物、聚甘油类、酯类、聚合物和纤维素衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂类、乳铁蛋白、乳过氧化物酶、基于蔗糖的稳定剂、维生素E和其衍生物、天然和合成蜡、植物油、甘油三酯、不可皂化物、植物固醇类、植物酯类、硅氧烷和其衍生物、蛋白水解产物、荷荷芭油和其衍生物、脂溶性/水溶性酯、甜菜碱类、胺化物、蔗糖酯植物提取物、二氧化钛、甘氨酸、对羟苯甲酸酯，更优选丁二醇、硬脂醇聚醚_2、硬脂醇聚醚-21、乙二醇-15硬脂基醚、十六/十八醇、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、丁二醇、天然生育酚、甘油、二羟基十六烷基磷酸钠、羟基十六烷基异丙醚、硬脂酸乙二醇酯、三异壬酸甘油酯、椰油酸辛酯、聚丙烯酰胺、异链烷烃、月桂基聚氧乙烯(7)醚、卡波姆、丙二醇、甘油、没药醇、聚二甲基硅氧烷、氢氧化钠、PEG30-二聚羟基硬脂酸、癸酸/辛酸甘油三酯、十六/十八醇辛酸酯、己二酸二丁酯、葡萄籽油、荷荷芭油、硫酸镁、EDTA、环状聚二甲基硅氧烷、黄原酸胶、柠檬酸、十二烷基硫酸钠、矿物蜡和矿物油、异硬脂醇异硬脂酸酯、丙二醇二壬酸、丙二醇异硬脂酸酯、PEG8、蜂蜡、氢化棕榈仁油甘油酯、羊毛脂油、芝麻油、鲸蜡醇乳酸酯、羊毛脂醇、二氧化钛、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯和等渗盐水。上述化合物理想地制成下列剂型，包括水溶液或基于油的溶液、基于水的乳膏或凝胶或油性凝胶，特别是瓶装或管装，特别是沐浴液、香波、乳液、乳剂、微乳剂或纳米乳剂，特别是水包油或油包水或各种基于硅氧烷的；润肤液，特别是玻璃瓶装或塑料瓶装或喷雾装、吸塑装、液体皂、皮肤用皂、香膏剂、泡沫剂、一种无水产品，优选液体、乳膏剂或固体，例如棒状的，特别是唇膏。本文使用的"局部应用"一词指将本发明的组合物用于或喷在皮肤表面。本文使用的"可用于皮肤"一词表示所用化合物适合与人的皮肤接触，不会产生不必要的毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应或其等同状况。专业人员将许多活性化妆品成分用于改善皮肤健康和/或外观。这些专业人员知道怎样配制这些化妆品或皮肤组合物以获得最佳效果。此外，本发明所述的化合物与其他物质组合使用时具有协同作用。这些组合使用也在本发明范围内。《CFTA化妆品成分手册第二版》(CFTACosmeticlngredientHandbookSecondEdition)(1992)描述了化妆品和药品行业目前常用的特别适合局部应用的各种化妆品和药品成分。这类成分的一些实例包括但不限于下列化合物研磨剂、吸收剂化合物、具有美化目的化合物例如香水、色素、染料、精油、收敛剂等(例如，丁香油、薄荷脑、樟脑、桉树油、丁香酚、乳酸甲酯、金缕梅精馏液)，祛痘剂、抗絮凝剂、消沫剂、抗菌剂(例如碘代丙烷基丁基氨基甲酸酯)、抗氧化剂、粘合剂、生物添加剂、吸湿剂、膨胀剂、螯合剂、添加剂、杀菌剂、变性剂、外部止痛剂、成膜材料、聚合物、乳浊剂、pH调节剂、还原剂、褪色或澄清剂(例如，对苯二酚、曲酸、抗坏血酸、磷酸抗坏血酸酯镁盐、抗坏血酸葡萄糖胺)、调节剂(例如保湿剂)、皮肤舒缓及和/或抗疤痕剂(例如泛醇和其衍生物，例如乙基泛醇)、芦荟、泛酸和其衍生物、尿囊素、没药醇和甘草酸二钾盐、增稠剂、维生素和其衍生物或等同物。附图简述在图中图1显示了老化过程中人体活组织切片中角质形成细胞中的受体MC-1R、MC-2R和/或P阿片样物质受体基因表达的显著降低。图2显示了通过对人体正常皮肤的活组织切片部分进行免疫荧光检查观察到的微管蛋白eill和200神经丝蛋白表达的显著降低。图3和4分别显示了年龄介于15至75岁的受试者的微管蛋白PIII和200神经丝蛋白相对表达率。图5和6分别显示了与图3和4中的研究相对应的统计分析。当阅读解释性描述时，这些描述涉及仅用于说明目的且不以任何方式限制本发明领域的实施例，本发明的其他目的、特性和益处对本领域技术人员而言是显而易见的。这些实施例是本发明不可或缺的一部分，对于本文所述的与任何先前技术相比的任何新特性，其整体包括实施例，均为构成本发明功能及一般方面完整性的一部分。因此，每个实施例都具有一般范围。实施例实施例1:通过免疫组织学阐示人体活组织切片上的蛋白质MC-1R、MC-2R和y阿片样物质受体的表达水平在老化过程中的降低发明人已经证明了取自年轻女性(年龄低于40岁)和老年女性(年龄超过50岁)的活组织切片中MC-1R、MC-2R和ii阿片样物质受体的蛋白质水平的表达在时间生物性老16化过程中的变化。(见图1:取自30或60岁人类患者的人体活组织切片中的受体表达-免疫组织化学结果)此研究用免疫组织学方法进行。由于使用了以下抗体抗-MC-lR(1/500)、抗-MC-2R(1/200)和抗-y阿片样物质受体(1/1000)，从而得以明确证明。将重建的皮肤模型(Mimeskin⑧，Coletica，里昂，法国)和活组织切片制成冷冻横切片，或者然后用石蜡密封，用于免疫标记。所用抗体为抗-MC-IR、抗-MC-2R和抗_P阿片样物质受体(Chemiconlnternational公司)。用合适的经缀合的二次抗体进行检测。结果见图1，结果证明了老化过程中角质形成细胞中的受体MC-1R、MC-2R和y阿片样物质R的基因水平的表达降低。实施例2:通过实时RT-PCR方法阐示在老化过程中成年人角质形成细胞中MC-1R、MC-2R和ii阿片样物质受体基因表达水平的降低和POMC基因表达水平的提高本发明还涉及人类活组织切片中的角质形成细胞的受体MC-1R、MC-2R和y阿片样物质R基因表达和POMC基因表达水平在时间生物性老化过程中的变化。用实时RT-PCR(逆转录酶聚合酶定量链式反应)分析这四种目标基因及肌动蛋白基因的表达。此技术通过将一种基因与肌动蛋白基因的表达(视为常数)进行对比，对这种基因表达进行精确定量。从而对此基因表达水平的调节进行定量。将总RNA用"SV96总RNA分离系统"试剂盒(Promega，Charbonnieres，法国)提纯总RNA。将纯化的RNA在100iil无RNA酶的水(Promega，Charbonnieres,法国)中制成悬液，测定后分到两个板中(96孔微量滴定板，10ii1总RNA(5ng/y1每PCR))。此项目中选用的引物如表l所示表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>在0PTIC0N温度循环器中用"QuantiTectSYBRGreenRT-PCR"试剂盒(Qiagen，法国)对含mRNA的板实施实时RT-PCR技术，进行扩增循环。在5(TC逆转录(RT)30分钟，然后在95t:保持15分钟，以抑制逆转录酶，激活聚合酶，变性获得的互补DNA(cDNA)。进行50个循环的序列聚合反应(PCR)(95°C15秒，6(TC30秒，72。C30秒)。每个循环结束时，读取荧光值，该值与片段数成比例。用每个基因的表达水平与肌动蛋白表达水平之比定义表达水平。发明人表明年龄超过52岁的女性中MC-1R基因的表达比年轻女性的低4倍，该值具有统计显著性。发明人表明年龄超过5岁的女性中MC-2R基因的表达比年轻女性的低8倍，该值具有统计显著性。发明人表明年龄超过55岁的女性中ii阿片样物质受体基因的表达比年轻女性的低6.5倍，该值具有统计显著性。发明人表明年龄超过50岁的女性中POMC基因的表达比年轻女性的高5倍，该值具有统计显著性。总之，本发明允许人体角质形成细胞中的受体及其配体表达间的平衡出现扰动，以支持配体增多和所有受体减少。实施例3:分析受体MC-1R、MC-2R和y阿片样物质R的信使RNA和POMC的mRNAs的表达，例如在使角质形成细胞与活性组分接触或不与其接触的条件下通过定量RT-PCR进行分析本发明特别涉及一种筛选新分子的方法，此分子可诱导3种受体MC-1R、MC-2R和/或P阿片样物质受体的合成，以恢复重建皮肤，恢复人体皮肤活组织切片中的老化角质形成细胞中相关受体的生理表达，这种生理表达可在年轻皮肤中的角质形成细胞中观察到。所述活性组分具有不同来源(例如植物或合成分子)。特别是，所述植物提取物通过将植物(优选根、根状茎、茎、皮、花、果实、种子、胚芽或叶)浸泡于1-10%(p/p)(通常为1-5%)的一种溶剂中或溶剂混合物中获得，通常为水和醇、二醇或多元醇(例如乙醇、甘油、丁二醇和其他二醇、木糖醇等)的混合物，其比例为100/0至0/100，优选浸泡于水中。然后将获得的提取物过滤或蒸馏，以回收可溶部分，将此部分过滤，优选0.45ym的滤膜。在微生物存在下通过发酵植物提取物获得生物技术水解产物，其中所述微生物通常来自乳酸细菌属，特别是胚芽乳杆菌或副干酪乳杆菌，和双歧杆菌属，特别是长双歧杆菌；或酵母菌。然后对这些水解产物进行进一步过滤，优选0.45iim的滤膜，以获得活性组分。通过溶解于溶剂中制备所述已表征的分子，所述溶剂通常为DMSO、乙醇、二醇，特别是溶解于浓度为0.1%的匿SO中。将活性组分溶于培养环境中，然后对角质形成细胞进行试验对于植物提取物和生物技术水解产物，其含量通常介于O.1%至2%(v/v)，特别是介于0.5%至1%，对于已表征的分子，通常介于0.001%至0.01%(v/v)。在本实施例的培养环境中，对于植物提取物和生物技术水解产物，采用的是1%的含量，对于已表征的分子，采用的是0.01%的含量。通过酶消化从正常成年人的整形手术中获取角质形成细胞，在用于角质形成细胞的特定环境中使该角质形成细胞增殖，然后接种(例如每平方厘米50000个)到24孔板中，然后在严格无血清环境中在单层板中进行培养。汇合后，将细胞与用培养基稀释的活性物质接触，通常接触24小时。用未处理的对照样品(仅培养基)和3个阳性对照样品(lng/mlTGF-e，50pg/mlIL-la和100ng/mlTNF-a)进行平行试验，例如在同一个培养板上。先前已试验lng/mlTGF-P，100ng/mlTNF-a和50pg/mlIL_la这三个样，通过分析mRNA(例如通过定量RT-PCR，对于这3种诱导剂用x2或x.08)，已经验证这三种浓度的细胞因子对3种受体的mRNA合成的剌激作用.将细胞与活性物质接触后，例如接触24小时后，移去培养环境，保存细胞，例如先用pH7.4的磷酸盐溶液漂洗，然后在-S(TC冷冻干燥。提取总RNA，例如用二氧化硅柱96-孔提取试剂盒，然后分到96-孔分光光度计上，在260nm处进行测定(纯度指标280nm处蛋白质的量)。将RNA稀释，例如稀释到5ng/iU。进行第1步中的定量RT-PCR，例如在96-孔板上对50ng初始RNA进行，对肌动蛋白、MC-1R、MC_2R、y阿片样物质R和POMC基因进行。使用每种基因的特定引物，例如0.5iiM，见上表l中的明确说明。扩增的各项参数如下在OPTICON温度循环器中用"QuantiTectSYBRGreenRT-PCR"试剂盒(Qiagen，法国)对含mRNA的板实施实时RT-PCR技术，进行扩增循环。在5(TC逆转录(RT)30分钟，然后在95t:保持15分钟，以抑制逆转录酶，激活聚合酶，变性获得的互补DNA(cDNA)。顺序进行50个循环的聚合(PCR)(95°C15秒，60°C30秒，72°C30秒)。每个循环结束时，读取荧光值，该值与扩增的片段数成比例。用每个基因的表达水平与肌动蛋白基因表达水平之比定义表达水平。基因MC-1R、MC-2R、y阿片样物质受体和POMC的表达水平用与阴性对照(未处理)进行比较得出的变化百分数表示。作为受试物的这些活性物质如下表II所示表II名称(拉丁名)植物部位MC-1R对照X:MC-2R对照X:P阿片样物质R对照X:POMC对照X:普通欧蓍草(Achilleamillefolium)植物2.733.023.03.38淡黄鼬瓣花(Galeopsisochroleuca)植物2.91.01.01野生芋头(Colocasiaesculenta)块茎2.01.024.0119<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>"对照X"指"对照乘以"结论960种中的13种活性物质在所考虑的条件下可显著提高角质形成细胞中编码MC-1R、MC-2R或ii阿片样物质R的基因的mRNA的表达率。此外，4种活性物质特别抑制了POMC基因的表达。实施例4:分析受体MC-1R和ii阿片样物质R的信使RNA的表达，例如在使黑色素细胞与活性组分接触或不与其接触的条件下通过定量RT-PCR进行除了细胞培养以外，此实验的其他实验条件与上一个实施例相同。通过酶消化从正常成人的整形手术中获取黑色素细胞，在黑色素细胞特定的环境中使黑色素细胞增殖，然后接种(例如每平方厘米50000个)到24孔板中，然后在黑色素细胞特定的环境中培养。汇合后，将细胞与用培养基稀释的活性物质接触，通常接触24小时。表III<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>"对照X"指"对照乘以"结论10种活性物质提高了黑色素细胞中MC-1R基因的表达；9种活性物质提高了POMC基因的表达，并且2种活性物质降低了黑色素细胞中POMC基因的表达。实施例5:检测活性组分作用后角质形成细胞中的MC-1R、MC-2R和y阿片样物质受体蛋白分别用下列商业化的多克隆抗体通过电泳确定蛋白质MC-1R、MC-2R和y阿片样物质受体的特性0PA1-15013(Affinity生物试剂)、AB5128(ChemiconInternational)和AB5511(ChemiconInternational)。在K-SFM环境中在含5XC02的大气中在37t:培养细胞，K-SFM(Invitrogen)中含BPE(25mg)、EGF(2.5iig)禾口normocin。用PBS溶液洗细胞，在4t:在蛋白酶抑制剂的存在下用裂解液(Tris50mM，NaCl250rnM，pH7.5，1%triton)提取30分钟，提取出蛋白质。将裂解产物离心分离(15分钟，13，000g)。在13-巯基乙醇存在下用Laemmli溶液稀释漂浮物，然后电泳。将蛋白质在4_12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，用于免疫检测。将所得蛋白质转移到硝酸纤维素膜(Biorad)上。然后在室温下将膜浸于含3XBSA的TBS溶液中，浸一小时。在4t:将一抗培养过夜，然后在室温下用偶联了Alexa488(invitrogen)的二抗对上述蛋白质进行免疫检测，时间为1小时。上述抗体以如下稀释度使用5iig/mL抗-MC-lR、5iig/mL抗-MC-2R和1/1000抗-ii阿片样物质R。通过图像分析进行半定量化。作为受试物的这些活性物质如下表IV所示表IV名称植物部位MC-2R对照X:P阿片样物质R对照X:普通欧蓍草植物18.22.81淡黄鼬瓣花植物1.02.54野生芋头块茎1.01.52欧洲酸樱桃茎1.01.44月见草种子1.01.46黑剌李果实8.262.02(Z)-十氢-6，8a-二羟基-1-异丙基_3a，6_二甲基奧-5-基-2-甲基丁-2-烯酸酯1.991.37苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氢奧并[4，5_b]呋喃-4-基1.961.66"对照X"指"对照乘以"结论通过蛋白质水平的提高证实了在基因水平所观察到的由活性物质诱导的提高。淡黄鼬瓣花、月见草和两种已表征的分子虽然未提高P阿片样物质R基因的表达，但是诱导了其蛋白质表达的提高。实施例6:人体活组织切片中13III微管蛋白和神经丝蛋白200的免疫检测发明人已通过免疫荧光法表明在时间生物性老化过程中，微管蛋白eill和神经23丝蛋白200在神经生物性老化过程中会减少(图2)。发明人选择了这两种标记物用于检测皮肤中轴突延长的存在。标记物微管蛋白eill可用于对细胞核数量和神经网络密度进行定量化，标记物神经丝蛋白200更适于指示成熟的神经网络。通过对80位年龄介于17岁至75岁的女性的乳房造影法活组织切片进行的免疫荧光学检查，发明人已证实超过38岁的女性的微管蛋白eill的表达要低3.7倍，神经丝蛋白200的表达则低3.5倍。上述抗体使用下列稀释度i:500(抗-微管蛋白eni)和i:500(抗-神经丝蛋白200)。用结合了ALEXA594的抗小鼠IgG(山羊)，稀释到1:100来检测免疫复合物。图2显示了通过免疫荧光法对人体正常皮肤中的微管蛋白eill和神经丝蛋白200进行的检测。所谓的年轻受试者(26岁)中微管蛋白Pill的免疫检测见图A，所谓老年受试者(56岁)中微管蛋白13III的免疫检测见图B。所谓的年轻受试者(26岁)中神经丝蛋白200的免疫检测见图C，所谓的老年受试者(56岁)中神经丝蛋白200的免疫检测见图D。用白线表示真皮-表皮的交界处。每个图左上方的方块表示使用对照同型抗体的阴性对照。图3和4分别显示了年龄介于15至75岁的受试者的微管蛋白PIII和神经丝蛋白200的相对表达率。红色箭头表示曲线转折点。图5和6分别显示了与图3和4中的研究相对应的统计分析。结果显示，年轻受试者中13III微管蛋白和神经丝蛋白200的表达比38岁受试者中的分别高3.7和3.5倍。所得结果代表了平均士SD，t检验的p值=0.05。实施例7:角质形成细胞培养中的漂浮物分泌的NGF和VEGF的量将老年受试者的角质形成细胞进行培养，将细胞与活性物质接触一段时间，例如24小时，然后恢复环境，用ELISA技术检测角质形成细胞分泌的NGF或VEGF。所用方法与研发系统提供者(DY256)用于NGF的方法和Clinisciences(KHG0112)用于VEGF的方案一致。在受试活性物质中，下列受试活性物质表现出了最强的调节作用，特别是对NGF的调节作用，如表V所示。表V<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>实施例8:在存活的人体活组织切片中13III微管蛋白和神经丝蛋白200的免疫检测在DMEM培养基中，在存在或不存在NGF或活性组分的条件下，从成人整形手术中获得的活组织切片，维持存活4天。然后将活组织切片冷冻，进行免疫荧光学研究，以鉴定神经元标记物，特别是实施例6中所述的物质。实施例9:重建的皮肤模型中的分化和增殖标记物的免疫检测此模型结合了重建真皮的培养和在此基础上进行的重建表皮的补充培养。采用下列方案创建重建的真皮模型-将0.5至1.106人体正常皮肤成纤维细胞接种到胶原蛋白基基底基质上，通常为糖胺聚糖壳聚糖，然后在营养性培养基中培养，例如DMEM-Glutamax，其中补充了10%小牛血清、抗坏血酸最终浓度优选lmM、EGF(表皮生长因子)最终浓度优选10ng/mL、和Normocin最终浓度优选100yg/mL，培养21天。采用下列方案创建重建的皮肤模型-将O.5至1.106人体正常角质形成细胞接种到真皮替代物上，然后在营养性培养基中培养，例如DMEM-Glutamax/HamF_12(比例3/lv/v)，其中补充了小牛血清、抗坏血酸最终浓度优选1慮、EGF(表皮生长因子)最终浓度优选10ng/mL、氢化可的松最终浓度优选0.4iig/mL、umuline最终浓度优选0.12UI/mL、异丙肾上腺素最终浓度优选0.4yg/mL、三碘甲状腺原氨酸最终浓度优选2.10—9M、腺嘌呤最终浓度优选24.3iig/mL、和Normocin最终浓度优选100yg/mL。在浸泡条件下培养7天。将培养物置于气-液界面处再培养14天，所用培养基与浸泡培养时的培养环境相同，除了小牛血清、氢化可的松、异丙肾上腺素、三碘甲状腺原氨酸和咖uline之外。然后在Boulin固定液(L0X、L0XL、弹力蛋白)或10%甲醛溶液(用于弹力蛋白)中制备重建皮肤(Mimeskin⑧，Coletica，里昂，法国)，然后用石蜡密封，用于免疫组织化学研究，或直接用液氮冷冻，用于免疫荧光分析。从石蜡中取出6i！m厚的切片，在甘氨酸-HCl(100mmo1/1)中漂白。在第45天对重建皮肤进行Ki67(增殖标记物)、角蛋白14(所有细胞层的标记物)、角蛋白10(上基部的角质形成细胞层标记物)、内披蛋白、转谷氨酰胺酶、巢蛋白免疫检测。实施例10:组合使用本发明产品和现有的专利分子可以将本发明产品与特别是可剌激对敏感皮肤神经起作用的皮肤神经营养机能的提取物组合使用，例如红椒提取物(甜椒)和/或红色素(红辣椒)和/或胡椒(L'OREALFR2825273)，和/或谷氨酰胺基乙基吲哚(Exsymol)。可将本发明产品与模拟13内啡肽作用以改善皮肤屏障功能的提取物组合使用，例如可可豆壳提取物(L'OREALUS2006069032)。还可将本发明产品与活化13内啡肽以产生康乐感的提取物组合使用，例如T印hrosiapurpurea(灰毛豆)提取物。还可将本发明产品与其他分子或其衍生物组合使用，对于其他分子，例如a-MSH、P内啡肽，对于其衍生物，例如P3内啡肽和精油，以剌激角质形成细胞分化，以获得NGF的抗老化作用(CODIFFR2857874)，从而影响神经营养机能。实施例11:将本发明产品用于水包油乳剂型化妆品或药物制剂的配方配方lla:25AB水丁二醇甘油二羟基十六烷基磷酸钠羟基十六烷基异丙醚自乳化型硬脂酸乙二醇酉;三异壬酸甘油酯椰油酸辛酯匕补足至100232146C丁二醇，对幾基苯曱酸甲酯，对羟基苯曱酸乙酯，对羟基苯曱酸丙酯pH调至5.52D本发明产品配方libA水丁二醇甘油聚丙烯酰胺，异链烷经:月桂基聚氧乙烯(7)醚0.01-10%补足至100232.8B丁二醇，对羟基苯甲酸甲酯，226<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>F本发明产品实施例12:駄制,口口口肝鹏,飼配方0.01-10%PEG30-二聚羟基硬脂酸癸酸甘油三酯十六/十八醇辛酸酯己二酸二丁酯葡萄軒油荷荷芭油苯氧乙醇对羟基苯曱酸曱酯，对羟基苯甲酸丙酯，对羟基苯甲酸丁酯,对幾基苯曱酸乙酯33431.1.0.甘油丁二醇硫酸镁EDTA水330.50.05补足至100环状聚二曱基硅氧烷聚二甲基硅氧烷11香料0.3本发明产品实施例13:駄制月f口口口fflf裕皮微懇,配方0.01-10%28ABC黄原酸胶水丁二醇，对羟基苯甲酸曱酯对羟基苯甲酸乙酯苯氧乙醇，对羟基苯曱酸甲酯对羟基苯甲酸丙酯对羟基苯甲酸乙酯柠檬酸对羟基苯曱酸丙酯对羟基苯曱酸丁酯,0.8补足至1000.50」0.8D月桂基聚氧乙烯醚^l酸钠40.0E本发明产品0.01-10%实施例14:将本发明产品用于唇膏型或其他无水产品的配方A矿物蜡异硬脂醇异硬脂酸酯丙二醇二壬酸酯丙二醇异硬脂酸酯PEG8蜂蜡氢化棕榈仁油甘油酯,氢化棕榈油甘油酯羊毛脂油17.031.52.61.73.03.43.429<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>实施例16:駄制月f口口口fflfH魏,配方初级乳Wl/0<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>异十六坑硬脂基聚氧丙烯(15)醚157.5B水65.3AC苯氧乙醇，对幾基苯曱酸甲酯对羟基苯曱酸丙酯对羟基苯曱酸乙酯二级乳W1/0/W2iTtZ>jt泣l，7;j9t寸u0.7对羟基苯甲酸丁酯uu泊洛沙姆407苯氧乙醇，对羟基苯曱酸曱酯，对羟基苯曱酸丙酯，2-溴-2硝基丙烷-l，3-二醇水20.3补足至100c卡波姆15D三乙醇胺实施例17:含有本发明产品的药物剂型的制备配方17a:丸剂的制备PH6.0-6.5A赋形剂乳糖g/丸035931<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>1列如，按照实施例3中描述的提取过程，然后干燥，即可获得本发明产f配方17b:香膏剂的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>B本发明产品*0.001-0.11列如，按照实施例3中描述的提取过程，然后干燥，即可获得本发明产f配方17c:可沣射制剂的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>"列如，按照实施例3中描述的提取过程，然后干燥，即可获得本发明产,权利要求刺激由POMC基因编码的神经介质的受体在至少一种类型的皮肤细胞中表达的至少一种物质的用途，用作化妆用组合物中的活性成分，或者作为活性成分用于制备营养保健用组合物，其中所述受体选自MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R，所述至少一种类型的皮肤细胞表达至少一种这些受体和POMC基因产物。2.根据权利要求1所述的至少一种物质的用途，其中所述物质也调节、优选地提高或维持P0MC表达。3.根据权利要求1或2所述的用途，用来剌激所述受体的表达以增加a-MSH和/或ACTH和/或13内啡肽的美容效果。4.剌激选自MC-1R和MC-2R的受体在角质形成细胞中表达的至少一种物质的用途，用于制备药物组合物，特别是皮肤药组合物。5.在角质形成细胞中剌激选自MC-1R、MC-2R和y阿片样物质R的受体的表达和调节、优选地提高或维持POMC表达的至少一种物质的用途，用于制备药物组合物，特别是皮肤药组合物。6.根据前述权利要求中任一项所述的用途，用于抵抗或预防a-MSH和/或ACTH和/或P内啡肽效果的失调。7.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中皮肤细胞为角质形成细胞。8.根据前述权利要求中任一项所述的用途，用于预防或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，和/或预防和/或抵抗表皮内环境稳定减弱，和/或促进上皮形成，和/或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，和/或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，和/或改善皮肤血管形成，和/或改善血管的通透性过高，和/或改善皮肤结疤期间的血管生成，和/或预防和/或抵抗皮肤神经支配减弱，或改善皮肤神经支配，或产生康乐感，和/或改善肤色和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时。9.根据权利要求1至8中任一项所述的用途，其特征在于，所述物质选自-普通欧蓍草植物(Achilleamillefolium)的提取物；-黑剌李(Pru皿sspinosa)的提取物;_欧洲酸樱桃(Primuscerasus)的提取物；_野生芋头(Colocasiaesculenta)的提取物；-野生大麻(淡黄鼬瓣花(Galeopsisochroleuca))的提取物；-长春布宁提取物(夹竹杉,(Apocynacea)AmsoniaAbrenaemontan);_(Z)-十氢-6，8a-二羟基-1-异丙基-3a，6_二甲基奧_5_基-2-甲基丁2-烯酸酯；-苯乙酸-3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3&，4，5，7，9&，913-八氢奧并[4，5_b]呋喃_4-基；-CAS号352220-52-1下的2，6-二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)-5-6-(1-异丙基+羟基环戊烷))-1，2-环氧环庚烷和/或其酯-已知在CAS号86992-41-8下的7-乙酸酯_2，6_二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)-5-6-(1-异丙基-1-羟基环戊烷))-1，2-环氧环庚烷-用乳杆菌(lactobacillus)转化的芒果提取物_用乳杆菌转化的海枣提取物_用乳酸细菌转化的番木瓜提取物_用乳酸细菌转化的香蕉提取物-和它们的任何混合物。10.选自以下的物质的用途-普通欧蓍草植物(Achilleamillefolium)的提取物；-黑剌李(Primusspinosa)的提取物;_欧洲酸樱桃(Primuscerasus)的提取物；_野生芋头(Colocasiaesculenta)的提取物；-野生大麻(淡黄鼬瓣花(Galeopsisochroleuca))的提取物；-长春布宁提取物(夹竹杉,(Apocynacea)AmsoniaAbrenaemontan);_(Z)-十氢-6，8a-二羟基-1-异丙基-3a，6_二甲基奧_5_基-2-甲基丁-2-烯酸酯；-苯乙酸-3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氢奧并[4，5_b]呋喃_4-基；-CAS号352220-52-1下的2，6-二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)-5-6-(1-异丙基+羟基环戊烷))-1，2-环氧环庚烷和/或其酯-已知在CAS号86992-41-8下的7-乙酸酯_2，6_二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)-5-6-(1-异丙基-1-羟基环戊烷))-1，2-环氧环庚烷-用乳杆菌转化的芒果提取物_用乳杆菌转化的海枣提取物_用乳酸细菌转化的番木瓜提取物_用乳酸细菌转化的香蕉提取物-和它们的任何混合物，用于预防或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，和/或预防和/或抵抗表皮内环境稳定减弱，和/或促进上皮形成，和/或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，和/或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，和/或改善皮肤血管形成，和/或改善血管的通透性过高，和/或改善皮肤结疤期间的血管生成，和/或预防和/或抵抗皮肤神经支配减弱，或改善皮肤神经支配，或产生康乐感，和/或改善肤色和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时。11.根据权利要求i至io中任一项所述的用途，用于与另外的物质一起使用，其中所述另外的物质提高或降低由黑色素细胞表达的、选自MC-1R和阿片样物质受体的至少一种受体的表达，并可能调节POMC基因的表达，以改善肤色和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时。12.根据权利要求ll的用途，其中所述另外的物质选自-1-甲基-P-咔啉-3-羧酸；_乳酸细菌发酵的酵母，-双歧杆菌(bifidobacterium)发酵的柠檬提取物，_乳酸细菌发酵的番木瓜提取物，_乳酸细菌发酵的羽扇豆提取物，_乳酸细菌发酵的大豆提取物，_乳酸细菌发酵的海枣提取物，-大豆粉提取物，-菝葜(丽花菝葜(Smilaxornata))的提取物，-Cecropiaobtusa提取物，-普通欧蓍草(Achilleamillefolium)的提取物，-月见草(Oenotherabiennis)的提取物，-胡萝卜提取物，-绵马提取物，_欧洲酸樱桃(Primuscerasus)的提取物，-欧剌柏(Juniperuscommunis)(杜松子)的水提取物或水醇提取物，-淡黄鼬瓣花(Galeopsisochroleuca)的提取物-月见草(Oenotherabiennis)的提取物-和它们的任何混合物。13.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于，所述物质用于与选自以下的另外的活性组分组合使用_剌激角质形成细胞增殖和/或分化的活性物质，旨在具有抗老化作用；-模拟P内啡肽的作用以改善皮肤屏障功能的活性物质；-剌激皮肤神经营养机能的活性物质；-诱导康乐感的活性物质；_允许改变肤色的活性物质，_剌激成纤维细胞活性和/或增殖的活性物质_具有消炎特性的活性物质，特别是抑制磷脂酶A2的酶活性，_保护成纤维细胞生长因子特别是FGF2不被降解的活性物质，_剌激透明质酸酶合酶，特别是透明质酸酶合酶2的活性物质，_剌激赖氨酰氧化酶例如LOXL的活性和/或合成的活性物质，_具有消除浮肿特性的活性物质，-和它们的任何组合。14.化妆用组合物或皮肤化妆用组合物或营养保健用组合物，用来预防和/或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮内环境稳定减弱，或促进上皮形成，或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善皮肤血管形成，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤期间的血管生成，或预防和/或抵抗皮肤神经支配减弱，或改善皮肤神经支配，或产生康乐感，或改善肤色和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时；所述组合物包含作为活性成分的活性物质，如权利要求9或10中定义的活性物质，可能地与如权利要求11至13中任一项所述的物质组合。15.药物组合物，优选地用于预防和/或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮内环境稳定减弱，或促进上皮形成，或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善皮肤血管形成，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤期间的血管生成，或预防和/或抵抗皮肤神经支配减弱，或改善皮肤神经支配，或产生康乐感，或改善肤色和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时；所述组合物包含作为活性成分的活性物质，如权利要求9或10中定义的活性物质，可能地与如权利要求11至13中任一项所述的物质组合。16.美容护理方法，包括将权利要求9或10中定义的物质应用于皮肤上，用于改善的美容效果，可能地与权利要求11至13中任一项所述的物质组合。17.核苷酸序列，其具有下列序列中的一种序列GGGCTCTGAGAACGACTTTT(MC-1R有义-SEQIDN07);CCGGGCTCCTGTCTGGTTGG(MC-1R反义-SEQIDN°8);TCACGTCGCTGTTCCCGCTGAT(MC-2R有义-SEQIDN°9);AAGAGAGACATGTAGCAGGCGCAGTA(MC-2R反义-SEQIDN°10);CTCAGCCAGGACTGGTTTCTGTAAGA(ii阿片样物质受体有义-SEQIDN°ll);TCGGACAGGTTGCCATCTAAGTG(ii阿片样物质受体反义-SEQIDN°12);CGCCCAGTGAAGGTGTACCC(POMC有义-SEQIDN°13);禾口GGCGTCTGGCTCTTCTCGGAGGTC(POMC反义-SEQIDN°14)。全文摘要本发明涉及在皮肤细胞中调节POMC基因产物的受体(MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体)的表达、并可能地调节POMC的表达的活性物质，特别地涉及调节表皮细胞的增殖和分化，以再形成上皮、维持神经支配、滋养皮肤或抵抗衰老、或者独立地调节色素形成或皮肤不老化。本发明也涉及筛选此类活性物质的方法。文档编号A61K8/97GK101711152SQ200880019188公开日2010年5月19日申请日期2008年6月6日优先权日2007年6月6日发明者C·德聚特,C·雷梅尔米耶,E·佩里尔,I·奥利,S·潘,V·安德烈申请人:巴斯夫美容护理法国公司