专利名称：尼泊尔酸模提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种尼泊尔酸模提取物，还涉及一种该尼泊尔酸模提取物的 提取方法，以及其在制备降血糖药物方面的应用；尤其涉及一种尼泊尔酸模 提取物在制备a-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。
背景技术：
尼泊尔酸模(7 wwex恥戶/m^Spreng.)为蓼科酸模属植物，分布于河南、 陕西、甘肃、青海、湖北、四川、云南和西藏等省。全草入药，有清热解毒、 凉血止血之效，是一种常见的民间草药。现代研究表明，尼泊尔酸模根含活 性蛋白-凝集素，能使3%兔红血球发生凝集反应。此外，有文献报道尼泊尔 酸模根甲醇提取物具有泻下和镇静作用。但未见对尼泊尔酸模化学成分和其 他药理作用的研究报道。
糖尿病是一种以高血糖为特征，代谢紊乱为表现，与胰岛素分泌密切相 关的全身性疾病，作为最普通的内分泌疾病之一，糖尿病是一种由于遗传和 环境因素相互作用而引起的临床综合症，临床上表现为三多(多食、多饮、 多尿)、 一少(体重下降)、高血糖症状。根据世界卫生组织的报道，1995 年全球已确诊的糖尿病患者约1.35亿，而近期IDF 2006年报道全球糖尿病患 者己达2， 46亿，预测到2025年糖尿病患者将达到3.88亿。2003年中国已 经成为糖尿病第二大国，仅次于印度。2004年，我国糖尿病患者已达4000万， 专家估计，至2010年我国发病人数将达到6000万，已成为威胁人类的第3 位"健康杀手"，因此，预防和治疗糖尿病已成为我国乃至全球性的保健问 题。多年来糖尿病的治疗主要以控制空腹血糖为目标，治疗药物长期以来主 要集中于磺脲类与双胍类药物。近年来研究发现，糖尿病病发过程中往往先 出现餐后高血糖，而后发展成糖尿病，即前者是后者的先期征兆。对于糖尿 病患者，特别是II型病人，餐后高血糖对机体的危害远远超过空腹高血糖，
3餐后高血糖不仅极易诱发各种并发症，还会极大地提高糖尿病的死亡率，所 以降低餐后血糖是预防糖尿病，减少并发症和降低死亡率的重要措施之一， 也就是说控制餐后血糖是控制高血糖、防治糖尿病的重要举措。现有治疗的 糖尿病药物中，磺脲类药物是通过刺激胰岛素的分泌而降低血糖；双胍类药 物则是通过增加外周组织对葡萄糖的利用而降低血糖，两者对降低II型糖尿 病病人空腹血糖均有较好疗效，但对降低餐后血糖的作用却非常有限。
cc-葡萄糖苷酶抑制剂是七十年代后期研究开发出的一类新型口服降血糖 药物，其作用机理在于通过竞争性抑制a-葡萄糖苷酶的活性，阻滞双糖水
解成单糖，延缓糖的吸收，使血糖平稳并缓慢地维持在一定水平。有效的控 制了餐后血糖的升高，并可预防糖尿病的发生，减少了并发症和降低了死亡
率。a-葡萄糖苷酶抑制剂不仅对糖尿病有确切的疗效，而且对于肥胖症、慢性 乙肝、艾滋病及肿瘤都有一定的治疗作用。
目前用于临床的此类药物有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。天然产 物中的a -葡萄糖苷酶抑制剂是近年来研究的热点，研究发现主要的a -葡萄糖 苷酶抑制剂结构类型为黄酮类、生物碱类和皂苷类，此外还有茶多酚类。黄 酮类化合物主要是通过多羟基结构发挥抑制作用，并且羟基组的糖化作用会 减弱化合物对a -葡萄糖苷酶的抑制作用。生物碱类也是多羟基生物碱具有抑 制作用。 一些中草药的提取物也具有很好的抑制a-葡萄糖苷酶的作用，如绿
茶提取物和大黄、山茱萸、赤芍、五倍子水煮醇沉提取物，以及广西血竭全 粉和分步提取物、五味子和虎杖的水提取物等。现有的此类药物成本较高， 生产厂家很少，同时伴随有肠道副作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种尼泊尔酸模提取物。 本发明的目的还在于提供一种该尼泊尔酸模提取物的提取方法。 进一步地，本发明的目的在于提供一种尼泊尔酸模及其提取物在降血糖 方面的应用。
更进一步地，本发明的目的还在于提供一种尼泊尔酸模提取物在制备降
4血糖药物方面的应用，尤其是制备a-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。
为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种尼泊尔酸模提取物， 包括尼泊尔酸模根及尼泊尔酸模根菜的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物或甲 醇提取物。
尼泊尔酸模提取物由以下方法制备而获得，取干燥的尼泊尔酸模根或尼
泊尔酸模地上部分，并将其粉碎，石油醚浸泡10—15h后，连续回流提取2 —4次，每次0.5—1.5h，得尼泊尔酸模根或尼泊尔酸模地上部分的石油醚提 取物；挥干石油醚溶剂后，按用乙酸乙酯浸泡10—15h后，连续回流提取2 一4次，每次0.5—1.5h，得尼泊尔酸模根或尼泊尔酸模地上部分的乙酸乙酯 提取物；挥干乙酸乙酯溶剂后，用甲醇浸泡10—15h后，连续回流提取2—4 次，每次0.5—1.5h，提取，得尼泊尔酸模根或尼泊尔酸模地上部分的甲醇提 取物。
本发明的技术方案还在于采用了一种尼泊尔酸模提取物的制备方法，包 括以下步骤取干燥的尼泊尔酸模根或尼泊尔酸模地上部分，并将其粉碎， 石油醚浸泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊尔酸 模根或尼泊尔酸模地上部分的石油醚提取物；挥干石油醚溶剂后，按用乙酸 乙酯浸泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊尔酸模 根或尼泊尔酸模地上部分的乙酸乙酯提取物；挥干乙酸乙酯溶剂(后，用甲 醇浸泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，提取得尼泊尔酸 模根或尼泊尔酸模地上部分的甲醇提取物。
进一步，本发明的技术方案采用了一种尼泊尔酸模在降血糖方面的应用。 同时，本发明的技术方案还采用了一种尼泊尔酸模提取物在降血糖方面 的应用。
更进一步地讲，本发明的技术方案采用了一种尼泊尔酸模提取物在制备 降血糖药物方面的应用，尤其是制备a-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。 本发明的尼泊尔酸模提取物来至于尼泊尔酸模根的石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物和尼泊尔酸模地上部分的石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物。本发 明所采用的尼泊尔酸模提取物来源于蓼科酸模属植物，分布广泛，资源丰富， 具有价格低廉，方便易得的优点。经体外实验以阿卡波糖为阳性对照，观察
尼泊尔酸模根的石油醚提取物(RNRP)、乙酸乙酯提取物(RNRE)和甲醇提 取物(RNRM)和尼泊尔酸模地上部分的石油醚提取物(RNAP)、乙酸乙酯提取 物(RNAE)和甲醇提取物(RNAM)等六种提取物对ct-葡萄糖苷酶的抑制作用， 实验结果表明尼泊尔酸模各提取物对ot-葡萄糖苷酶均有明显的抑制作用，而 且在一定浓度下呈量效关系，其中在相同浓度(1.5 mg/ml)时，各提取物的 抑制率均达到100%，大于阳性对照药(68.43%);而各提取物的半数抑制浓 度IC5o值均小于100吗/mL，远小于阳性对照药(1081.27 pg/mL)。
图1为抑制剂浓度对cc-葡萄糖苷酶抑制效果的影响曲线图； 图2为尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物抑制剂的Lineweave-Burk双倒
数曲线；
图3为尼泊尔酸模地上部分甲醇提取物抑制剂的Lineweave-Burk双倒数曲线。
具体实施例方式
实施例1
本实施例的尼泊尔酸模提取物，由以下方法制备而得取干燥的尼泊尔
酸模根，并将其粉碎，用石油醚浸泡12h后，在索氏提取器中连续回流提取3 次，每次lh，得尼泊尔酸模根的石油醚提取物(RNRP);挥干石油醚溶剂后， 按用乙酸乙酯浸泡12h后，在索氏提取器中连续回流提取3次，每次lh，得 尼泊尔酸模根的乙酸乙酯提取物(RNRE);挥干乙酸乙酯溶剂后，用甲醇浸 泡12h后，在索氏提取器中连续回流提取3次，每次lh，提取得尼泊尔酸模 根甲醇提取物(RNRM)。 实施例2本实施例的尼泊尔酸模提取物，由以下方法制备而得取干燥的尼泊尔 酸模地上部分，经粉碎，用石油醚浸泡12h后，于索氏提取器中连续回流提 取3次，每次lh，得尼泊尔酸模地上部分的石油醚提取物(RNAP);挥干溶
剂后，用乙酸乙酯浸泡12h后，在索氏提取器中连续回流提取3次，每次lh， 得尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物(RNAE);挥干溶剂后，用甲醇浸泡 12h后，在索氏提取器中连续回流提取3次，每次lh，得尼泊尔酸模地上部 分甲醇提取物(RNAM)。
尼泊尔酸模不同溶剂提取物的得率见表1。
实施例3
本实施例为尼泊尔酸模提取物的抑制《-糖苷酶活性试验
方法微孔板法
原理oe-D-葡萄糖苷酶催化水解4-硝基苯-c(-D-吡喃葡萄糖苷(PNP-G)， 产生硝基苯酚(PNP，黄色物质，在400 m左右有最大吸收)，ct-糖苷酶抑制 剂可抑制ct-葡萄糖苷酶与底物结合从而降低PNP的释放量。以一定时间内反 应体系中PNP的含量变化来计算提取物的酶抑制活性。
仪器Multiskan MK3酶标仪(Thermo Electron) ; LRH-150恒温培养箱
(上海一恒科技有限公司)；DELTA 320型PH计(Mettler-Toledo);电子天平
(Mettler-Toledo);旋转蒸发仪(Heidolph)。
试剂:ct-葡萄糖苷酶(Sigma公司，EC 3.2.1.20， from baker's yeast，批号 105K1313),对-硝基苯基-a-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG， Sigma公司，批号 026K1516),磷酸盐缓冲液(PH 6.8)，阿卡波糖(拜糖平，Sigma公司，批 号16869)，其他试剂均为分析纯。 检测方法
112L磷酸钾缓冲液(pH6.8)，加入20iiL (浓度为0.2U/mL ) ot-葡萄糖 苷酶，8 iiL样品溶液，37。C恒温15min，加入20 (iL 2.5 mmol/L PNPG， 37°C 恒温反应15 min。再加入80 )iL(浓度为0.2 mol/L)的终止剂Na2C03溶液，于405nm波长下测OD值。实验共设4个组，每组三孔，分别为a.阴性对照组；b. 空白组；c.样品测定组；d.样品对照组。按下面方法计算抑制率，并用Origin软 件求出相应ICso值。
抑制率计算/% = 1_(0/>样品组—0/)样品对照组)><100%
(^D阴性对照组一OZ)空白组)
分别利用上述测定方法测定了尼泊尔酸模各提取物和阳性对照阿卡波糖
的ic50。
实验结果如表l所示。
表l 尼泊尔酸模的ct-葡萄糖苷酶抑制活性 Table 1 The ct-glucosidase inhibitory activity of i 訓ex "印a/em7X Spreng.
提取物提取率初筛终浓度抑制率ic50抑制类型
(%)(mg/mL)(1%)(|xg/mL)
RNRP0.771.5102.2136.01NT
RNRE2.181.597.503.83NT
RNRM28.381.5100.8422.50NT
RNAP2.451.5102.6456.59NT
RNAE1.431.5101.152.13非竞争型
RNAM9.411.5100.462.13混合型
Acarboss一1.568.431081.27NT
注NT表示未测定。
(1)从表l可以看出，尼泊尔酸模根和尼泊尔酸模地上部分的各提取物 的ICso值均远小于阳性对照药阿卡波糖；显示尼泊尔酸模的各提取物均有很 好的a-葡萄糖苷酶抑制作用。其中，尼泊尔酸模的乙酸乙酯提取物的ICso值 最小，显示其抑制效果最好，其次为甲醇提取物，石油醚提取物的ICso值最 大；不同药用部位比较，尼泊尔酸模地上部分的乙酸乙酯提取物抑制活性 (IC5Q=2.13吗/mL)和甲醇提取物抑制活性(1<:5()=2.13 pg/mL)较尼泊尔酸模根 的同溶剂提取物抑制活性(1(:5。=23.83 pg/mL和22.50吗/mL)高，其石油醚提取 物抑制活性(1<:5()=56.59吗/mL)较尼泊尔酸模根(ICf36.01吗/mL)的弱。(2) 图1显示，尼泊尔酸模不同部位不同溶剂的提取物对《-葡萄糖苷酶的
抑制活性均呈剂量依赖性，其中地上部分石油醚提取物在终浓度小于0.2 mg/mL时达到最大抑制率100M，此后再增加提取物浓度抑制率不再变化，其 他提取物在终浓度小于O.l mg/mL时，其抑制率就达到了最大值100%，此后， 再增加提取物浓度抑制率也不再变化。说明小剂量的尼泊尔酸模各提取物均 能很好的抑制cc-葡萄糖苷酶活性。
(3) 不同浓度的尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物和甲醇提取物分别 加入不同浓度的底物(分别为1Ommol/L， 5 mmol/L， 2.5 mmol/L， 1.25mmol/L 和0.625 mmol/L)，按照上述方法测定不同底物浓度下的反应速度。按 Lineweave-Burk作图以1/[S]为横坐标1/V为纵坐标，分别绘制不同提取物的 抑制作用动力学曲线，确定抑制类型。由图2可知尼泊尔酸模地上部分的乙 酸乙酯提取物的抑制类型为非竞争性抑制类型，反应速度^^随着抑制剂浓 度的增大而变小，米氏常数Km保持不变。抑制剂浓度越大，Ki值越小，抑制 愈强。而图3显示的尼泊尔酸模地上部分的甲醇提取物部分则属于混合型抑
制类型，反应速度^ax随着抑制剂浓度的增大而变小，米氏常数Km也随抑制
剂浓度的增大而降低。
实验结果表明，尼泊尔酸模各提取物对cc-葡萄糖苷酶均有很强的抑制作
用，其中，以尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物和甲醇提取物效果更明显。
说明尼泊尔酸模是很好的a-葡萄糖苷酶抑制剂，可以用于制备降血糖药物。 实施例4
尼泊尔酸模降糖片的制备，其制备方法
称取尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物250重量份，加入淀粉200重 量份、乳糖50重量份，聚维酮15重量份后加入适量70%的乙醇作润湿剂混匀制成软材，以14目筛制粒，于6(TC温度下干燥后过12目筛整粒，加入硬 脂酸镁5重量份，交联聚维酮8重量份，压片，制成1000片。
最后所应说明的是以上实施例仅用以说明，而非限制本发明的技术方
案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员
应当理解依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精
神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
权利要求
1、一种尼泊尔酸模提取物，其特征在于包括尼泊尔酸模根及尼泊尔酸模地上部分的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物或甲醇提取物。
2、 根据权利要求1所述的尼泊尔酸模提取物，其特征在于由以下方法 提取获得，取干燥的尼泊尔酸模根或尼泊尔酸模地上部分，并将其粉碎，石油醚浸泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊尔酸模 根或尼泊尔酸模地上部分的石油醚提取物；挥干石油醚溶剂后，按用乙酸乙 酯浸泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊尔酸模根 或尼泊尔酸模地上部分的乙酸乙酯提取物；挥干乙酸乙酯溶剂后，用甲醇浸 泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，提取，得尼泊尔酸模 根或尼泊尔酸模地上部分的甲醇提取物。
3、 一种如权利要求1所述尼泊尔酸模提取物的制备方法，其特征在于 包括以下步骤取干燥的尼泊尔酸模根或尼泊尔酸模地上部分，并将其粉碎， 石油醚浸泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊尔酸 模根或尼泊尔酸模地上部分的石油醚提取物；挥干石油醚溶剂后，按用乙酸 乙酯浸泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊尔酸模 根或尼泊尔酸模地上部分的乙酸乙酯提取物；挥干乙酸乙酯溶剂后，用甲醇 浸泡10—15h后，连续回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，提取得尼泊尔酸模 根或尼泊尔酸模地上部分的甲醇提取物。
4、 一种尼泊尔酸模在降血糖方面的应用。
5、 一种尼泊尔酸模提取物在降血糖方面的应用。
6、 一种尼泊尔酸模提取物在制备降血糖药物方面的应用。
7、 一种尼泊尔酸模提取物制备cc-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。
全文摘要
本发明公开了一种尼泊尔酸模提取物及其提取方法和应用，该提取物包括尼泊尔酸模根及尼泊尔酸模地上部分的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物或甲醇提取物。实验结果表明尼泊尔酸模各提取物对α-葡萄糖苷酶均有明显的抑制作用，而且在一定浓度下呈量效关系，其中在相同浓度(1.5mg/ml)时，各提取物的抑制率均达到100％，大于阳性对照药(68.43％)；而各提取物的半数抑制浓度IC<sub>50</sub>值均小于100μg/mL，远小于阳性对照药(1081.27μg/mL)。
文档编号A61K36/70GK101461845SQ20091006405
公开日2009年6月24日 申请日期2009年1月12日 优先权日2009年1月12日
发明者刘瑜新, 宋艳丽, 康文艺 申请人:河南大学