齐多夫定脂质衍生物在治疗与病毒有关疾病药品中的应用的制作方法

专利名称：：齐多夫定脂质衍生物在治疗与病毒有关疾病药品中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及生物医药领域，特别涉及齐多夫定脂质衍生物在治疗与病毒有关疾病药品中的应用，其中齐多夫定脂质衍生物包括胆固醇基膦酰齐多夫定和胆固醇基磷酰齐多夫定。
背景技术：
：病毒是危害人类健康的一种重要病原体，具有高度传染性，是许多其他疾病(如肿瘤)的病因。大力开发研制安全有效的抗病毒药物是一个十分艰巨的任务。抗病毒药物的重要标准是对病毒有抑制作用，而对细胞的正常代谢无影响。由于病毒结构和生活过程简单，不易与宿主细胞区别，因而大多数抗病毒药在作用过程中，对人体毒性较大或抗病毒作用较低。这是抗病毒药研究迟缓的原因之一。目前发现的大多数抗病毒药物主要通过影响病毒复制周期的某个环节而实现。病毒性肝炎是由肝炎病毒(HepatitisVirus)引起的疾病，其传染性极强，对人体造成极大的危害和痛苦。引起肝炎的病毒有七种类型，分为甲型肝炎病毒(HepatitisAvirus,HAV)、乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)、丙型肝炎病毒(H印atitisCvirus,HCV)、丁型肝炎病毒(HepatitisDvirus,HDV)、戊型肝炎病毒(HepatitisEvirus,HEV)、庚型肝炎病毒(H印atitisGvirus,HGV)以及TTA(即输血传播病毒性肝炎)，分别能够引起甲型、乙型、丙型、丁型、戊型、庚型和TTA肝炎症状。甲型肝炎主要是经粪-口传播而传染，是由甲型肝炎病毒污染了水源、水产品、蔬菜而成流行，是全球性传染性很强的疾病。1988年上海甲肝流行，正是由于人们吃了被甲型肝炎病毒污染的毛蚶，31余万人感染，死亡47人。乙肝是世界性传染病，慢性化程度高，危害性大。我国是乙型肝炎高发区，堪称"肝炎大国"。根据卫生部2002年统计资料显示，我国乙肝的现患病率为277/万，是美国的40多倍，年发病率为95/万。在法定传染病中，其发病率仅次于感染性腹泻与流行性感冒而居第三位。流行病学调查表明，我国至少有8亿人感染过乙型肝炎，而我国人群中的乙肝表面抗原的携带率高达10.34%，也就是说，约有1.3亿人为乙肝病毒携带者，几乎占全世界总数的一半，他们中的四分之一最终将发展成慢性肝炎、肝硬变或原发性肝癌。此外，全国还有1200多万慢性肝炎病人，每年死于肝病者达30万之多，其中约半数为肝癌。更为严重的是，有40%携带乙肝表面抗原的母亲，将通过母婴垂直传播，使80%90%的新生儿(每年约80万90万人)成为慢性乙肝病毒携带者。乙肝不仅严重影响人体健康，而且给家庭、社会造成沉重的经济负担，我国每年用于肝炎和肝病的医疗、保健费用高达1000多亿元。丙型肝炎主要通过血液和血液制品传播，国外发现90%因输血而感染的肝炎都是丙型肝炎。急性丙型肝炎临床经过较轻，多感染成人，无季节性，零散发生。病情虽轻，但发展成慢性肝炎、肝硬化及肝癌的比例比乙型肝炎要高，后果严重，治疗费用高。丁型肝炎的传播很广泛，呈全球性分布。病毒存在于急性及慢性丁型肝炎病人的血液中，但是丁型肝炎病毒是不完整的，有缺陷的病毒，不能单独存在，只有在感染了乙肝的机体内才可复制。戊型肝炎与甲型肝炎一样，传播途径都是粪-口传染，因为水源被污染而引起大型爆发及流行。1986年至1988年在我国新疆南部、辽宁就曾因水源被污染而造成戊型肝炎的流行。庚型肝炎病毒是1995年发现的一种肝炎病原病毒，同丙型肝炎病毒同属于黄病毒科，主要在肝内复制，主要通过血源性、静脉注射毒品、性接触及母婴垂直传播，同丙型肝炎相似，是胃肠道外传播。艾滋病(AIDS)是一种由艾滋病毒，即人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus,简称HIV)侵入人体后破坏人体免疫功能，使人体发生多种不可治愈的感染和肿瘤，最后导致被感染者死亡的一种严重传染病。自80年代初发现首例以来，它惊人的传染速度和死亡率，被称为"当代瘟疫"和"超级癌症"。艾滋病己引起世界卫生组织(WHO)及各国政府的高度重视，无论是人员和经费的投入均放在首位，我国已将其列入乙类法定传染病，并为国境卫生监测传染病之一。然而，到目前为止，尚无可以治愈该病的有效药物。使得切实有效的艾滋病防治药物的研究引起了各国医药学界和政府部门的高度重视。单核细胞和巨噬细胞是人体免疫系统的重要组成，人体感染病毒后，单核巨噬细胞会吞噬和杀灭病毒，但有时病毒不能很快被杀死，潜伏在单核巨噬细胞内，后者成为病毒的宿主，并携带病毒转移到其他正常组织，引起新的感染。巨噬细胞(Macrophages)是fflV体内主要寄生处，是AIDS发病机制中的病毒源，是病毒扩散的携带者。目前大部分抗HIV药物体内半衰期较短、细胞膜渗透性较差，所以临床上往往给药剂量较大，给药次数频繁。且它们并不能趋向地分布于巨噬细胞来发挥抗病毒作用。因此亟需找到靶向兼控释的抗HIV药物传递系统。传统的靶向传递系统也能够靶向单核巨噬细胞系统(MPS),比如有人将抗HIV药物包裹于脂质体(DesormeauxA,BergeronMGLiposomesasdrugdeliverysystem:astrategicapproachforthetreatmentofHIVinfection.JDrugTarget,1998，6:1-15;DipaliSR,etal.Pharmacokineticsandtissuedistributionofalongcirculatingliposomalformulationof29,39-dideoxyinosine.IntJPharm,1997,152:89-97)，或纳米粒(BenderAR，etal.Efficiencyofnanoparticlesasacarriersystemforantiviralagentsinhumanimmunodeficiencyvirus-infectedhumanmonocytes/macrophagesinvitro.AntimicrobAgentChemother,1996,40:1467-1471)。虽然可以耙向巨噬细胞，但这些微粒传递系统存在着药物包裹率低、稳定性差、载药量有限等问题。目前广泛使用的治疗病毒感染的药物包括核苷类似物。核苷类似物抗病毒药的作用机制是通过与合成病毒DNA必需的核苷酸竞争DNA聚合酶上的结合部位而抑制病毒DNA聚合酶或逆转录酶的活性，掺入病毒DNA链中使其合成终止，从而发挥抗病毒作用。核苷类抗病毒药物必须活化成磷酸酯后才能抑制病毒复制。目前所用的很多核苷类抗病毒药物脂溶性差，很难渗透进细胞内，其进入细胞内部需借助膜上载体的作用，故存在着竞争和抑制现象，从而影响到生物利用度和药效的发挥，导致许多抗病毒药物用药剂量很大，疗效不够理想(FauldsD，BrogdenRN.Didanosine:areviewofitsantiviralactivity,pharmacokineticpropertiesandtherapeuticpotentialinhumanimmunodeficiencyvirusinfection.Drugs,1992，44:94-116)。特别是在巨噬细胞内难以获得足够浓度，不能有效杀灭细胞内病毒。虽然核苷类药物可以通过亲脂结构改造，使其具备合适的油/水分配系数，从而容易透过生物膜。目前已有很多关于此类药物的脂肪酸、甘油酯、磷脂衍生物的报道(KonstantineKM,etal.Lymphatictargetingofanti-fflVnucleosides:distributionof2'，3'画dideoxyinosineafterintravenousandoraladministrationofdipalmitoylphosphatidylprodruginmice.AntiviralRe,1997，34:91-99;DavidCB,etal.Synthesisandevaluationof5'alkylesterprodrugsofzidovudinefordirectedlymphaticdelivery.IntJPharn^1996，144:61-70;ClaptionSD,etal.Effectofmono-anddi-acylationontheoculardispositionofganciclovir:Physicochemicalproperties,ocularbioreversion,andantiviralactivityofshortchainesterprodrugs.JPharmSci，2002,91:660-668)，但脂质前药难溶于水，给药困难；并且前药分子在进入细胞内之前，会遭受各种酯酶和蛋白等的作用，导致前药降解和蛋白结合，从而失去了前药制备的意义。金义光等提出并发展的自组装药物传递系统技术(Self-assembleddrugdeliverysystems,SADDS)(JinY.Nanotechnologyinpharmaceuticalmanufacturing,in:(ShayneCoxGad,ed.)PharmaceuticalManufacturingHandbook:ProductionandProcesses.JohnWileyandSons,Inc，2008:1249-1288;YiguangJin，etal.Self-assembleddrugdeliverysystems.1.Propertiesandinvitro/invivobehaviorofacyclovirself-assemblednanoparticles(SAN).InternationalJournalofPharmaceutics,2006,309(1-2):199-207)较好地解决了脂质前药给药的问题。SADDS是指两亲性药物或前药在水溶液中自组装成胶束、泡囊、六角相、立方相、纳米粒等高度分散的有序聚集体。前药到达靶部位后通过水解等作用释放出药物或药物中间体而发挥作用。自组装药物传递系统的两亲性使其对生物膜有很好的亲和性和渗透性，纳米微粒分散特性使其在体内有靶向性和粘附性。因此自组装药物传递系统可以高效地将药物传递到靶器官、组织和细胞中。它和传统TDDS的根本区别是其全部或大部分组装成分为两亲性药物或前药分子，载药量和稳定性大大增加，不存在药物包裹率和渗漏的问题。齐多夫定(Zidovudine,AZT)，是脱氧胸腺嘧啶核苷类似物，是逆转录酶抑制剂，是被美国FDA批准上市的第一个抗HIV药物，目前作为治疗晚期HIV感染的一线药物之一。其半衰期短(0.81.2h)，靶向性差(脑中分布很少)，因此需加大剂量和频繁给药以维持治疗剂量。长期使用会造成剂量依赖性，增加剂量又会导致骨髓毒性。核苷类似物药物必须在人体内转化成磷酸酯，才能掺入病毒或肿瘤细胞等的核酸(DNA或RNA)合成过程中，干扰其代谢过程，从而发挥药理活性(陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学.第15版.北京:人民卫生出版社，2004年)。但许多核苷类似物药物经过一段治疗后，往往会在体内产生抗药性或耐药性，原因是病毒或肿瘤细胞的核苷激酶不再对核苷类似物产生磷酸化(KimberlinDW,etal.Molecularmechanismsofantiviralresistance.AntiviralRes，1995,26:369-401)。有些研究尝试将核苷类似物药物先与膦酰或磷酰基连接，从而克服了耐药性(KriseJP，StellaVJ.Prodrugsofphosphates,phosphonates,andphosphinates.AdvDrugDelRev,1996,19:287-310;DeClercqE.Acyclicnucleosidephosphonates:Past,presentandfliturebridgingchemistrytoHIV,HBV,HCV,HPV,adeno國,herpes-,andpoxvirusinfections:Thephosphonatebridge.BiochemPharmacol,2007，73:911-922)。在我们前面的发明中，已经获得了两种齐多夫定脂质衍生物，包括胆固醇基磷酰齐多夫定(CN100462103)和胆固醇基膦酰齐多夫定(CN101244036)化合物和它们的高度分散剂型，包括自组装药物传递系统。
发明内容本发明人出乎意料地发现，胆固醇基磷酰齐多夫定和胆固醇基膦酰齐多夫定的高度分散剂型，特别是自组装药传递系统，相当于原药齐多夫定，有很强的抗HIV作用。因此本发明人设计了本发明。本发明的胆固醇基磷酰齐多夫定和胆固醇基膦酰齐多夫定可以作为新的抗病毒药物特别是抗艾滋病药物进行开发，为治疗病毒性疾病特别是艾滋病提供了一种新的途径和手段。本发明公开了胆固醇基膦酰齐多夫定和胆固醇基磷酰齐多夫定在制备用于治疗与病毒有关疾病药品中的应用。胆固醇基膦酰齐多夫定的分子式如下:胆固醇基磷酰齐多夫定的分子式如下:本发明所述的含有胆固醇基膦酰齐多夫定或胆固醇基磷酰齐多夫定的用于治疗与病毒有关疾病药品的剂型可以是可能应用的各种剂型，具体选自片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂和高度分散剂型，优选的是高度分散剂型。高度分散剂型又选自脂质体、非离子表面活性剂泡囊、微粒、纳米粒、乳剂、胶束、纳米凝胶、树枝状聚合物或自组装传递系统，优选的是自组装传递系统。它们的制备方式可参考相关专业书籍和前述发明(CN100462103，CN101244036)。本发明中的胆固醇基膦酰齐多夫定或胆固醇基膦酰齐多夫定还可与其他抗病毒的药物制成复方制剂。本发明中的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。本发明中注射给药给药方式包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴为了将胆固醇基膦酰齐多夫定或胆固醇基磷酰齐多夫定的给药剂型制成片剂，可以广泛使用药物制剂领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、交联聚维酮、氧化钙、预凝胶淀粉、硅酸铝钙、氯化转、氯化铝、碳酸钙等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、西黄芪胶、卡波姆、黄原胶、聚乙烯吡咯垸酮、羟丙基甲基纤维素等；崩解剂，例如羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、微晶纤维素、十二烷基硫酸钠、甲基纤维素、海藻酸钠、聚山梨醇酯-80、碳酸氢钠与枸橼酸等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠、环糊精、乙二胺四乙酸二钠等；润滑剂及助流剂，例如滑石粉、硬脂酸盐、微粉硅胶、玉米淀粉、聚乙二醇、液体石蜡、二甲硅油、甘油、硅酸盐等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将胆固醇基膦酰齐多夫定或胆固醇基磷酰齐多夫定制备成胶囊剂，可将有效成分与上述的各种载体混合，直接或经过制粒或经过挤出-滚圆制备微丸后，置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。将本发明化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自注射用水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料都是药物制剂领域常用的。此外，如需要，也可以向药物剂型中添加着色剂、防腐剂、矫味剂、甜味剂或其他药物制剂辅料。为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物可以使用任何公知的药物制剂辅料，也可用任何公知的给药方法给药。高度分散剂型在体内会表现出促吸收、增强生物利用度、靶向、缓释或控释等作用。本发明涉及的病毒并不受到限制，优选自人类肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒。人类肝炎病毒选自人类甲型肝炎病毒、人类乙型肝炎病毒、人类丙型肝炎病毒、人类丁型肝炎病毒、人类戊型肝炎病毒、人类庚型肝炎病毒。以下通过实验例说明胆固醇基膦酰齐多夫定和胆固醇基磷酰齐多夫定的抗病毒作用。实验例l:胆固醇基膦酰齐多夫定体外抗HIV活性胆固醇基膦酰齐多夫定在体外对HIV-1IIIB病毒有较强的抑制活性，并且细胞毒性较低。材料与方法采用细胞和mv病毒实验常规仪器设备试剂，在P3实验室中进行。齐多夫定原料药从药厂购进。胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统的制备参考前述专利(CN101244036),平均粒径107纳米，稳定。fflV-lIIIB病毒引自美国；MT4细胞株引自日本。高效液相色谱法测得齐多夫定水溶液、自制的胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统的浓度分别为3.74mol'L"、3.03mol'U1，将二者均用超纯水稀释至约50nmol.L;1，在96孔细胞培养板中，三种药物进行10倍梯度稀释，分别得到浓度为50xl03、5xl03、500、50、5、0.5nmol丄'1的齐多夫定水溶液、胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统药液。将MT4细胞2xl(^mL"接种于96孔板中，每孔为60pL，加入40pL不同浓度梯度的三种药物，每个浓度梯度设三个重复孔，再加入稀释1000倍的fflV-lIIIB病毒100pL。此时药物的终浓度梯度依次为10xl03、lxl03、100、10、1、O.lnmol丄"。每块96孔板同时设对照组三个复孔(超纯水40pL+MT4细胞60pL+病毒100^L)。将96孔板置于37。C、5%C02培养箱内培养，72h后在倒置显微镜下观察细胞病变(CPE)。CPE判定标准无合胞体形成"一"，无合胞体形成但细胞不规则"±"，有合胞体形成"+"。EC5Q(抑制合胞体形成50%时的化合物浓度，halfofeffectiveconcentration)的判定(1)只1孔为"+"，另两孔为"一"或"一"与"±"，此药物浓度可视为EC5。。(2)3孔分别为"+，，、"一"与"±"，此药物浓度可视为EC50。(3)3孔均为"±"，此药物浓度可视为EC50。(4)3孔均为"+"，下一个浓度作用下的3孔均为"一"，两个浓度的中间值可视为EC50。以上实验重复两次，第一次实验同时加入细胞、药物和病毒；第二次实验先加入细胞和药物室温放置1小时后再加入病毒。自制的胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统对MT4细胞毒性采用MTT法测定。在96孔细胞养板中，对自制的胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统药液用培养液进行梯度稀释，然后每孔加入2X105MT4细胞悬液，每个梯度设三个重复孔，同时设不含药物的阴性对照孔和含AZT的药物对照孔。每4天换同浓度药液，8天观察结果。倾去培养液，每孔加入MTT培养液(400吗'ml/1)，每孔lOOpL,37°C，5%<:02孵育4小时，可见黄黑色甲瓒颗粒，弃去上清，加DMSO100pL溶解，待甲瓒颗粒完全溶解后，用酶标仪570nm波长测定OD值。计算出CC5o值(halfofcytotoxicconcentration),即对50%的细胞产生毒性时的化合物浓度。13结果与讨论表i.两种方式加入齐多夫定、胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统对fflv导致的细胞病变的抑制作用加入方式药物EC50(nmol.L-1)同时加入细胞、齐多夫定药物和病毒胆固醇基藤i酰齐多夫定自组装传递系统1加入细胞和药齐多夫定物放置l小时后再加入病毒胆固醇基照争酰齐多夫定自组装传递系统1齐多夫定的EC5o为5nmol丄'1，与文献报道的10nmol*L—1相似。两种加入方式胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统的ECso相同，并且比原药齐多夫定的抗fflV效果强5倍。胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统及阳性对照药齐多夫定的细胞毒性较小，CC5o值均为5000nmoH/1(见表2)。但抗HIV活性胆固醇基膦酰齐多夫定>齐多夫定，因此选择指数(SI)胆固醇基膦酰齐多夫定〉〉齐多夫定，说明胆固醇基膦酰齐多夫定抗HIV作用比阳性对照药AZT的作用强，并且毒性小。表2.胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统及对照药齐多夫定在HIV-1/MT4培养系对HIV-1诱导细胞病变作用评价药物EC50(nmol.L")CC50(nmol丄.1)SI齐多夫定50001000胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传150005000递系统实验例2:胆固醇基磷酰齐多夫定体外抗HIV活性胆固醇基磷酰齐多夫定在体外对Hiv-iniB病毒有较强的抑制活性，并且细胞毒性较低。材料与方法与实验例i相近，胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统的制备参考前述专利(CN100462103),平均粒径123纳米，稳定。高效液相色谱法测得齐多夫定水溶液、胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统的浓度分别为3.74mol'L"、2.22mol'L",将二者均用超纯水稀释至约50KimoH/1，在96孔细胞培养板中，三种药物进行10倍梯度稀释，分别得到浓度为50xl03、5xl03、500、50、5、0.5nmoH/1的齐多夫定水溶液、胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统药液。抗病毒药效和细胞毒性测定方法同实验例1。结果与讨论<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>齐多夫定的￡(:5()为51111101丄-1，与文献报道的10nmol丄—i相似。胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统两种加入方式的结果不同，但都显示出非常强的抗病毒效果，比原药齐多夫定药效强10倍和50倍。同时加入病毒得到的EC5Q比先将药物和细胞孵育1小时后再加病毒得到的ECs。大5倍。先加入细胞和药物放置1小时后再加入病毒可以使胆固醇基磷酰齐多夫定有较充分的时间进入细胞内并解离出磷酰齐多夫定，从而发挥更强的抗病毒药效。胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统及阳性对照药齐多夫定的细胞毒性较小，CQo值均为5000nmol丄—1(见表2)。但抗HIV活性胆固醇基磷酰齐多夫定〉〉齐多夫定，因此选择指数(SI)胆固醇基磷酰齐多夫定〉〉齐多夫定，说明胆固醇基磷酰齐多夫定抗HIV作用比阳性对照药AZT的作用强，并且毒性小。表2.胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统及对照药齐多夫定在HIV-1/MT4培养系对HIV-1诱导细胞病变作用评价药物EC5。(歸ol.L")CC5。(nmol丄")SI齐多夫定50001000胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传0.55000画OO递系统实验例3:胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统静脉注射后的药代动力学和组织分布胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统经静脉注射给大鼠后，可快速从血液循环中清除，靶向分布至肝肺脾等单核巨噬细胞系统中，有很强的巨噬细胞靶向性，为高效清除单核细胞和巨噬细胞内的病毒提供了基础。材料与方法胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统，浓縮至约20mg/ml，经0.22pm无菌滤膜过滤灭菌后给药。给药前样品均用HPLC法准确测定药物含量。其16余为常规动物实验操作试剂和设备。健康雄性Sprague-Dawley成年大鼠。尾静脉注射单次给药(胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统)，给药剂量为40mg/kg。给药前取空白血样，给药后分别于l、3、5、8、10、20、30、40、50、60、90、120、240、480、960、1440min尾静脉断尾取血约0.30ml于1%肝素钠溶液抗凝的离心管中，立即3000rpm离心5min分离血浆，取血浆50nl加乙腈100nl，涡旋混合3min，5000xg离心10min，取上清依设计好的HPLC体内分析方法分别测定胆固醇基膦酰齐多夫定和齐多夫定的含量，进样20^1。另取大鼠，尾静脉注射胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统，分别于设计的5个时间点0.5、2、5、10、24h取出动物，通过乙醚麻醉后颈椎脱臼法处死大鼠，立刻进行解剖。取出心、肝、脾、肺、肾、脑和睾丸，其中心、肝、脾、肺、肾、脑在生理盐水中洗涮，然后称量记录组织湿重。取部分组织称重后加入等量蒸馏水进行组织匀浆。剩余组织放-2(TC冰箱中保存。取组织匀浆液50pl加乙腈100nl，涡旋混合3min，5000xg离心10min，取上清依设计好的HPLC体内分析方法分别测定胆固醇基膦酰齐多夫定和齐多夫定的含量，进样20W。结果与讨论胆固醇基膦酰齐多夫定从血液循环中迅速清除，其分布相半衰期(0-8min)为4.2min，组织分布证明胆固醇基膦酰齐多夫定集中分布于肝肺脾中，在其他器官分布非常少，体现出很强的单核巨噬细胞系统靶向性。具体请参见附图1、图2。实验例4:胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统静脉注射后的药代动力学和组织分布胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统经静脉注射给小鼠后，可快速从血液循环中清除，靶向分布至肝肺脾等单核巨噬细胞系统中，有很强的巨噬细胞靶向性，为高效清除单核细胞和巨噬细胞内的病毒提供了基础。材料与方法胆固醇基磷酰齐多夫定自组装传递系统，浓縮至约20mg/ml，同实验例3处理。其余操作同实验例3。结果与讨论胆固醇基磷酰齐多夫定从血液循环中迅速清除，组织分布证明胆固醇基膦酰齐多夫定集中分布于肝肺脾中，在其他器官分布很少，体现出很强的单核巨噬细胞系统靶向性。图1胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统大鼠静脉注射药时曲线，图2胆固醇基膦酰齐多夫定自组装传递系统大鼠静脉注射组织分布。权利要求1.胆固醇基膦酰齐多夫定在制备用于治疗与病毒有关疾病药品中的应用。该化合物的分子式如下2.胆固醇基磷酰齐多夫定在制备用于治疗与病毒有关疾病药品中的应用。该化合物的分子式如下-3.如权利要求1所述的胆固醇基膦酰齐多夫定和权利要求2所述的胆固醇基磷酰齐多夫定，它们应用的剂型是高度分散剂型。4.如权利要求3所述的胆固醇基膦酰齐多夫定和胆固醇基磷酰齐多夫定，它们应用的剂型是自组装传递系统。5.如权利要求1和2中所述的病毒，选自人类肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒。6.如权利要求1和2中所述的病毒，是人类肝炎病毒，并且选自人类甲型肝炎病毒、人类乙型肝炎病毒、人类丙型肝炎病毒、人类丁型肝炎病毒、人类戊型肝炎病毒、人类庚型肝炎病毒。7.如权利要求1和2中所述的病毒，是人类免疫缺陷病毒。8.根据权利要求1所述的胆固醇基膦酰齐多夫定和权利要求2所述的胆固醇基磷酰齐多夫定在制备用于治疗与病毒有关疾病药品中的应用，其特征在于胆固醇基膦酰齐多夫定或胆固醇基膦酰齐多夫定与其他抗病毒药物制成复方制剂。全文摘要本发明公开了齐多夫定脂质衍生物在治疗与病毒有关疾病药品中的应用。齐多夫定脂质衍生物包括胆固醇基膦酰齐多夫定和胆固醇基磷酰齐多夫定，是齐多夫定的两亲性脂质衍生物，能在水中形成纳米级分散的自组装传递系统，体外有很强的抗艾滋病毒作用，比齐多夫定药效强5到50倍，体内给药后主要分布于单核巨噬细胞系统，对治疗巨噬细胞内病毒感染非常有用。文档编号A61P31/14GK101590073SQ200910087699公开日2009年12月2日申请日期2009年7月3日优先权日2009年7月3日发明者淼李,瑛田,董俊兴,磊邢,金义光申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所