专利名称：：一种仙芪眩宁中药制剂的药物质量检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药制剂的质量检测方法，具体讲是涉及仙芪眩宁中药制剂的质量检测方法。
背景技术：
：美尼尔氏病是以膜迷路积水的一种内耳疾病，以突发性眩晕、耳鸣、耳聋或眼球震颤为主要临床表现，眩晕有明显的发作期和间歇期。病人多数为中年人，患者性别无明显差异，首次发作在50岁以前的病人约占65%,大多数病人单耳患病。美尼尔综合症为一突然发作的非炎性迷路病变，具有眩晕、耳聋、耳鸣及有时有患侧耳内闷胀感等症状的疾病。多为单耳发病，其发病原因不明，男女发病率无明显差异，病人多为青壮年，60岁以上老人发病罕见，近年亦有儿童病例报告，病程多为数天或周余。关于病因、学说甚多，尚无定论，如变态反应、内分泌障碍、维生素缺乏及精祌神经因素等引起自主祌经功能紊乱，因之使血管神经功能失调，毛细血管渗透性增加，导致膜迷路积水，蜗管及球囊膨大，刺激耳蜗及前庭感受器时，引起耳鸣、耳聋、眩晕等一系列临床症状。此病不经过治疗，症状可缓解，虽可反复发作，发作时间间隔不定，但也有发作一次不再发作者。由于对其病因论点不一，所以在临床上治疗方法也多。美尼尔氏综合症可用西药或手术治疗，但效果都不很理想。中药制剂在治疗眩晕症和美尼尔综合征中可以起到重要的作用。同时，为了促进中药的现代化，进一步研究中药制剂的质量检测方法也是很必要的。
发明内容本发明要解决的技术问题在于提供一种仙芪眩宁中药制剂的质量检测方法。为了实现本发明的发明目的，采用的技术方案为-本发明涉及一种仙芪眩宁中药制剂的质量检测方法，所述方法包括以下步骤(l)对照品溶液的制备称取仙鹤草药材2g，加水4060ml，煮沸2040分钟，过滤，取滤液加815ml乙醚提取23次，取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇lml溶解，制成对照品溶液；供试品溶液的制备称取仙芪眩宁中药制剂3g，研细，加水2040ml，溶解，取滤液加815ml乙醚提取2次，取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇lml溶解，制成供试品溶液；测定方法照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5^1，分别点于G型薄层层析硅胶板上，以体积比为30:1:1:1的醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂展开，取出，晾干，于254nm的紫外光灯下检视；在供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显示相同颜色的主斑点；(2)对照品溶液的制备称取黄芪甲苷，加浓度大于或等于99.5%的甲醇，制成lmg/ml的黄芪甲苷的甲醇溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备称取仙芪眩宁中药制剂15g，置索氏提取器中，加甲醇100-200ml，加热回流35小时，将提取液蒸干，残渣加水4050ml溶解，过滤，滤液加质量百分比为2528%的浓氨水lml，通过大孔吸附树脂柱，流速每分钟5ml，分别用体积比为100:1的水质量百分比为2528%浓氨水混合溶液、体积比为100:1的体积百分比为30%乙醇质量百分比为2528%浓氨水混合溶液、体积比为100:1的体积百分比为40%乙醇质量百分比为2528%浓氨水混合溶液洗脱，弃去洗脱液；用体积百分比为70%乙醇150ml洗脱，收集洗脱液并蒸干，残渣加10ml水溶解，用水饱和的正丁醇提取35次，每次10ml，合并正丁醇提取液，滤过，蒸干，残渣加浓度大于或等于99.5%的甲醇定容与lml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液；测定方法照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液6pl、对照品溶液2^与4^，分别点于G型薄层层析硅胶板上，010'C放置816小时，以体积比为13:6:2的氯仿-甲醇-水混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为10%的硫酸乙醇溶液，在105"C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同的棕褐色斑点或在365nm紫外光灯下显相同的橙黄色荧光斑点；(3)供试品溶液的制备同步骤(2);测定方法照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液6pl、对照品溶液2pl与4nl，分别点于G型薄层层析硅胶板上，01(TC以下放置816小时，以体积比为13:6:2氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，照薄层色谱法进行扫描，波长为5tS=530nm，XR=700mn，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。本发明的质量检测方法优选为(l)对照品溶液的制备取仙鹤草药材2g，加水50ml，煮沸30分钟，过滤，取滤液加10ml乙醚提取2次，取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇lml溶解，制成对照药材溶液；供试品溶液的制备取仙芪眩宁中药制剂3g，研细，加水30ml，溶解，取滤液加10ml乙醚提取2次，取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇lml溶解，制成供试品溶液；测定方法照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5pl，分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的G型薄层层析硅胶板上，以体积比为30:1:1:1的醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，于254nm的紫外光灯下检视；在供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显示相同颜色的主斑点；(2)对照品溶液的制备称取黄芪甲苷，加浓度大于或等于99.5%的甲醇，制成lmg/ml的黄芪甲苷的甲醇溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备称取仙芪眩宁中药颗粒剂15g，置索氏提取器中，加甲醇100-200ml，加热回流4小时，将提取液蒸干，残渣加50ml水溶解，过滤，滤液加质量百分比浓度为28%浓氨水lml，通过内径为1.5cm、长20cm的D朋型大孔吸附树脂柱，流速5ml/分钟，分别以体积比为100:1的水:质量百分比浓度28%浓氨水溶液200ml、体积比为100:1的体积百分比30%乙醇:质量百分比浓度28%浓氨水溶液200ml、体积比为100:1的体积百分比为40%的乙醇:质量百分比浓度28%的浓氨水溶液150ml洗脱，弃去洗脱液；再用体积比为70%的乙醉150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加10ml水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次10ml，合并正丁醇提取液，滤过，蒸干，残渣加浓度大于或等于99.5%的甲醇定容于lml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液；测定方法照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6pl、对照品溶液2pl与4jil，分别点于以羧甲基纤维素钠为粘合剂的G型薄层层析硅胶板上，01(TC放置1014小时，以体积比为13:6:2的氯仿-甲醇-水为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点；365nm紫外光灯下显示相同的橙黄色荧光斑点；(3)供试品和对照品溶液的制备同步骤(2);测定方法照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液6h1、对照品溶液2^1与4nl，分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的G型薄层层析硅胶板上，01(TC放置1014小时，以体积比13:6:2氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，照薄层色谱法进行扫描，波长Xs=530nm，k=700nm，测量供试品的吸收度积分值与对照品的吸收度积分值，计算。其中，每克仙芪眩宁中药制剂中含有黄芪甲苷CuH68Ch40.0050.02mg。本发明的仙芪眩宁中药制剂用于治疗眩晕症，特别是美尼尔综合征，其组成成分为，以重量份计的仙鹤草80120，黄芪1030，白术515，泽泻515，生姜0.82.0;其制备方法包括以下步骤(1)按重量比称取仙鹤草、黄芪、白术、泽泻和生姜加水煎煮2次，第一次添加药物的重量815倍的水煎煮13小时，过滤后再添加药物重量610倍的水煎煮12小时，合并煎液，过滤，将滤液浓縮至相对密度70。C温度条件下1.121.18克/毫升；(2)将浓縮后的滤液冷却至室温，加入滤液体积13倍的体积比为70%100%的乙醇，混匀，静置1236小时，过滤，将滤液浓縮至相对密度5(TC温度条件下1.321.38克/毫升的浸膏；(3)将浸膏加入辅料，制成片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、软膏剂、喷雾剂、油膏剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。本发明的中药组合物是根据传统的中医理论和经验研制而成，具有健脾渗湿、升清降浊、利水除痰之功效，用于痰浊中阻所致的眩晕、美尼尔氏病。经临床应用后证明其对于美尼尔综合征具有显著的治疗效果，总有效率为95.0%。治疗后患者眩晕、头重、胸闷、身困、食少、恶心呕吐、耳鸣耳聋等症均有明显好转。本发明的质量检测方法使本发明的复方中药制剂质量可控，疗效确切。本方法操作简便，准确先进，重现性、精密度和稳定性均较好，能够更有效的控制产品的质量。具体实施例方式下面的实施例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。实施例11.称取仙鹤草1100克，黄芪200克，白术100克，泽泻100克，生姜14克，加水煎煮2次，第一次添加药物的重量8倍的水煎煮1小时，过滤后再添加药物重量6倍的水煎煮1小时，合并煎液，过滤，将滤液浓縮至相对密度70'C温度条件下1.12克/毫升；2.将浓缩后的滤液冷却至室温，加入滤液体积1倍的体积比为80%的乙醇，混匀，静置12小时，过滤，将滤液浓縮至相对密度5(TC温度条件下1.32克/毫升的浸膏；3.将浸膏加入辅料，按照常规方法制成丸剂。实施例21.称取仙鹤草1050克，黄芪200克，白术100克，泽泻100克，生姜14克加水煎煮2次，第一次添加药物的重量15倍的水煎煮3小时，过滤后再添加药物重量10倍的水煎煮2小时，合并煎液，过滤，将滤液浓縮至相对密度70'C温度条件下1.18克/毫升；2.将浓缩后的滤液冷却至室温，加入滤液体积3倍的体积比为70%的乙醇，混匀，静置36小时，过滤，将滤液浓縮至相对密度50'C温度条件下1.38克/毫升的浸膏；3.将浸膏加入辅料，按照常规方法制成胶囊剂。实施例31.称取仙鹤草1100g、黄芪220g、白术120g、泽泻120g和生姜15g加水煎煮2次，第一次添加药物的重量12倍的水煎煮1.5小时，过滤后再添加药物重量8倍的水煎煮1.5小时，合并煎液，过滤，将滤液浓縮至相对密度70'C温度条件下1.14克/毫升；2.将浓縮后的滤液冷却至室温，加入滤液体积1.5倍的体积比为100%的乙醇，混匀，静置18小时，过滤，将滤液浓縮至相对密度5(TC温度条件下1.33克/亳升的浸膏；3.将浸膏加入辅料，按照常规方法制成片剂。实施例41.称取仙鹤草1067克，黄芪200克，白术100克，泽泻100克，生姜14克，加水煎煮2次，第一次添加药物的重量10倍的水煎煮2小时，过滤后再添加药物重量10倍的水煎煮1.5小时，合并煎液，过滤，将滤液浓縮至相对密度7(TC温度条件下1.15克/毫升；2.将浓縮后的滤液冷却至室温，加入滤液体积2倍的体积比为95%的乙醇，混匀，静置24小时，过滤，将滤液浓縮至相对密度50"C温度条件下1.35克/毫升的浸膏；3.将浸膏加入糖粉710g、糊精200g、70。/。乙醇15ml，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。实施例51.按重量称取<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2.制备方法同实施例4。试验例1实施例4制备的颗粒剂的检测参照中国药典2005年版一部附录IC，对本发明的实施例4的颗粒剂进行检测:1.粒度检测方法参照《中国药典》2005版一部附录IC中的"颗粒剂粒度"项检查。检测结果不能通过一号筛和能通过五号筛的总和不超过15.0%。2.水分检测方法参照《中国药典》2005版一部附录IXH"水分测定法"项测定，检测结果水分重量百分比不超过6.0%。3.溶化性参照《中国药典》2005版一部附录IC"颗粒剂溶化性"项检査判定标准颗粒全部溶化，允许有轻微浑浊，但不得有焦屑等物，检测结果符合规定。4.装量差异判定标准参照《中国药典》2005版一部附录IC"颗粒剂装量差异"项检査。检测结果每袋装量在14.25~15.75g之间(标示装量为15g，±5.0%)，有超出此范围的不多于2袋。5.微生物限度判定标准参照《中国药典》2005版一部附录XIIIC"微生物限度检查法"项下检査。检测结果细菌本品每克不超过1000个；霉菌本品每克不超过100个；大肠埃希菌未检出；活螨未检出。试验例2药物质量的检验(1)对照品溶液的制备取仙鹤草药材2g，加水50ml，煮沸30分钟，过滤，取滤液加10ml乙醚提取2次，取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇lml溶解，制成对照药材溶液；供试品溶液的制备称取实施例4的仙芪眩宁中药颗粒剂3g，研细，加水30ml，溶解，取滤液加10ml乙醚提取2次，取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇lml溶解，制成供试品溶液；测定方法照薄层色谱法试验(中国药典2005年版一部附录VIB)，吸取上述两种溶液各5pl，分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的G型薄层层析硅胶板上，以体积比为30:1:1:1的醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，于254nm的紫外光灯下检视；在供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显示相同颜色的主斑点；(2)对照品溶液的制备称取黄芪甲苷加甲醇，制成lmg/ml的黄芪甲苷的甲醇溶液，作为对照品溶液，其中甲醇购买的是分析醇，浓度大于99.5%;供试品溶液的制备称取实施例4的仙芪眩宁中药颗粒剂15g，置索氏提取器中，提取器的容积为500ml，加甲醇200ml，加热回流4小时，将提取液蒸干，残渣加50ml水溶解，过滤，滤液加质量百分比浓度为28%浓氨水lml，通过内径为1.5cm、长20cm的D1()1型大孔吸附树脂柱，流速5ml/分钟，分别以体积比为100:1的水:质量百分比浓度28%浓氨水溶液200ml、体积比为100:1的体积百分比30%乙醇:质量百分比浓度28%浓氨水溶液200ml、体积比为100:1的体积百分比为40%的乙醇:质量百分比浓度28%的浓氨水溶液1501111洗脱，弃去洗脱液；再用体积比为70%的乙醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加10ml水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次10ml，合并正丁醇提取液，滤过，蒸干，残渣加99.5%的甲醇定容于lml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液；测定方法:照薄层色谱法试验(中国药典2005年版一部附录VIB)，吸取供试品溶液6^1、对照品溶液2^1与4^1，分别点于以羧甲基纤维素钠为粘合剂的G型薄层层析硅胶板上，8°C放置12小时，以体积比为13:6:2的氯仿-甲醇-水为展开剂展开，取出，晾干，喷以体积比为10%硫酸乙醇溶液，在105'C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点；365nm紫外光灯下显相同的橙黄色荧光斑点；(3)供试品和对照品溶液的制备同步骤(2);测定方法照薄层色谱法试验(中国药典2005年版一部附录VIB)，精密吸取供试品溶液6pl、对照品溶液2pl与4W，分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的G型薄层层析硅胶板上，8'C放置12小时，以体积比13:6:2氯仿-甲醇-水为展开剂，展幵，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，照薄层色谱法进行扫描，波长Xs=530nm，XR=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，经计算，每克仙芪眩宁中药制剂中含有黄芪甲苷C41H68O140.02mg。权利要求1.一种仙芪眩宁中药制剂的药物质量检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤(1)对照品溶液的制备称取仙鹤草药材2g，加水40～60ml，煮沸20～40分钟，过滤，取滤液加8～15ml乙醚提取2～3次，取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，制成对照品溶液；供试品溶液的制备称取仙芪眩宁中药制剂3g，研细，加水20～40ml，溶解，取滤液加8～15ml乙醚提取2次，取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，制成供试品溶液；测定方法照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于G型薄层层析硅胶板上，以体积比为30∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂展开，取出，晾干，于254nm的紫外光灯下检视；在供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显示相同颜色的主斑点；(2)对照品溶液的制备称取黄芪甲苷，加浓度大于或等于99.5％的甲醇，制成1mg/ml的黄芪甲苷的甲醇溶液，作为对照品溶液，；供试品溶液的制备称取仙芪眩宁中药制剂15g，置索氏提取器中，加甲醇100-200ml，加热回流3～5小时，将提取液蒸干，残渣加水40～50ml溶解，过滤，滤液加质量百分比为25～28％的浓氨水1ml，通过大孔吸附树脂柱，流速每分钟5ml，分别用体积比为100∶1的水∶质量百分比为25～28％浓氨水混合溶液、体积比为100∶1的体积百分比为30％乙醇∶质量百分比为25～28％浓氨水混合溶液、体积比为100∶1的体积百分比为40％乙醇∶质量百分比为25～28％浓氨水混合溶液洗脱，弃去洗脱液；用体积百分比为70％乙醇150ml洗脱，收集洗脱液并蒸干，残渣加10ml水溶解，用水饱和的正丁醇提取3～5次，每次10ml，合并正丁醇提取液，滤过，蒸干，残渣加浓度大于或等于99.5％的甲醇定容与1ml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液；测定方法照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl与4μl，分别点于G型薄层层析硅胶板上，0～10℃放置8～16小时，以体积比为13∶6∶2的氯仿-甲醇-水混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同的棕褐色斑点或在365nm紫外光灯下显相同的橙黄色荧光斑点；(3)供试品溶液的制备同步骤(2)；测定方法照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl与4μl，分别点于G型薄层层析硅胶板上，0～10℃以下放置8～16小时，以体积比为13∶6∶2氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，照薄层色谱法进行扫描，波长为λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。2.测定方法:照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6pl、对照品溶液2pl与4^1，分别点于以羧甲基纤维素钠为粘合剂的G型薄层层析硅胶板上，01(TC放置1014小时，以体积比为13:6:2的氯仿-甲醇-水为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点；(3)供试品和对照品溶液的制备同步骤(2);测定方法照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液6pl、对照品溶液2iAl与4pl，分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的G型薄层层析硅胶板上，01(TC放置1014小时，以体积比13:6:2氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，照薄层色谱法进行扫描，波长Xs=530nm，XR=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。3.如权利要求1所述的仙芪眩宁中药制剂的药物质量检测方法，其特征在于，每克仙芪眩宁中药制剂中含有黄芪甲苷C41H68O140.0050.02mg。全文摘要本发明涉及一种中药制剂的质量检测方法，具体讲是涉及仙芪眩宁中药制剂的质量检测方法，该方法包括含量的测定和/或鉴别，具体指对仙鹤草的进行薄层色谱定性鉴定，对黄芪进行薄层色谱定性鉴定及薄层色谱扫描定量鉴定。文档编号A61K36/88GK101612382SQ200910089509公开日2009年12月30日申请日期2009年7月22日优先权日2009年7月22日发明者红黎申请人:广西神通药业有限公司