专利名称：从云南山枇花中提取的活性成分及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从云南山枇花植物中提取的活性成分及其应用，属生物医药技术领域。
背景技术：
淡紫拟青霉[Paecilomyces lilaci皿s (Thom.) Samson]属半知菌纲丝孢菌目、丝 孢菌科真菌。它广泛腐生于土壤、植物根际等，是一类典型的土壤腐生真菌。研究表明，部 分拟青霉属(Paecilomyces)的真菌是人体的病原菌，而淡紫拟青霉(P. lilaci皿s)能引起 人的全窦炎。这种由广泛存在的真菌引起的人的疾病受到关注。抗生素主要来源于植物和 微生物，其中许多已广泛用于治疗各种微生物感染性疾病，由于病原菌不断产生的耐药性， 原有的医用抗菌素在减退，因此迫切需要不断开发新的抗生素。 云南山枇花(Gordonia chrysandra)为山茶科(Theaceae)植物，生长于海拔 1100-2400米的阔叶林下或常绿灌丛中，在云南大部分地区及缅甸有分布。文献检索未见有 关云南山枇花具有抗淡紫拟青霉活性的公开报道。
发明内容
本发明的目的是从植物产生的代谢产物中，筛选出对人体病原真菌淡紫拟青霉 (P. lilaci皿s)具有强抑制作用的活性成分，作为制备医用抗生素的应用。
本发明是这样实现的
1、活性成分的制备 本发明所用的植物是云南山枇花(G. chrysandra)，采自中国科学院昆明植物研究 所植物园内。 本发明的活性成分经如下步骤得到 a.将云南山枇花的枝或叶用水洗干净后，在烘箱中5(TC温度下烘干； b.将烘干后的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用甲醇浸泡，第一次浸泡提取的时间为
4小时，第二次和第三次的时间分别为24和48小时； c.将三次浸提的提取液合并后，浓縮至溶剂蒸发后得浸膏； d.将浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为5mg/ml的活性成分。 2 、制备试验用的病原真菌 淡紫拟青霉(P. lilaci皿s):将淡紫拟青霉接种于马铃薯培养基(马铃薯200 克，蔗糖20克，琼脂18克，自来水1000ml，pH自然)上，于28。C下培养10天。用无菌蒸馏 水将孢子洗下后，加入到PDA培养基中，调整孢子浓度为104，将含有淡紫拟青霉孢子的PDA 培养基倒入9cm的平板中，待培养基凝固后，冻于4t:冰箱中备用。
3、试验方法 纸片扩散法在无菌操作台上用微量注射器将样品注入纸片(做两个剂量， 0. 5mg/disc， 0. lmg/disc)，用电吹风将纸片吹干待溶剂挥发后，置于含有淡紫拟青霉孢子
3的PDA平板上，2『C下培养48小时后，观察抑菌结果，测量抑菌圈的大小(含纸片的直径 0. 6cm)。同时在纸片上加入提取过程中使用过的溶剂甲醇作为对照，同时还做空白纸片对 照。整个实验重复3次。 本发明的从云南山枇花植物中提取的活性成分，对人体病原真菌淡紫拟青霉 (P. lilaci皿s)有强抑制作用，可作为制备医用抗生素应用。 本发明的从云南山枇花植物的枝和叶中提取的活性成分，具有成本低，制备方法 简便，对人体病原真菌淡紫拟青霉(P. lilaci皿s)有强抑制作用的优点，能用于医用抗生 素的制备。
具体实施例方式实施例一 云南山枇花的叶用水洗干净后，在烘箱中5(TC烘干。将烘干后的叶切碎，放入三
角瓶内，用甲醇浸泡，第一次浸泡提取的时间为4小时，第二次和第三次的时间分别为24和
48小时。将三次浸提的提取液合并后浓縮至溶剂蒸发得浸膏。该浸膏用甲醇溶解，制备成
浓度为5mg/ml，用于做活性测定。同时做对照，结果见表1。 表1云南山枇花的叶提取物对淡紫拟青霉(P. lilaci皿s)的抑菌作用
剂量 0.5mg/disc剂量 0.lmg/disc对照 甲醇空白对照
抑菌圈直径(cm)1. 2cm1. 0cm —没有抑菌圈出现 结果表明本发明提取的活性成分对人体病原真菌淡紫拟青霉(P. lilaci皿s) 有明显抑菌活性，提取物在0. 5mg时，抑菌圈的大小为1. 2cm，0. lmg时，抑菌圈的大小为 1. Ocm。 实施例二 基本同实施例一，不同之处是所用的材料为云南山枇花的枝。枝的提取物用甲醇 溶解，制备成浓度为5mg/ml，用于做活性测定。同时做对照，结果见表2。
表2云南山枇花的枝提取物对淡紫拟青霉(P. lilaci皿s)的抑菌作用
剂量 0.5mg/disc剂量 0.lmg/disc对照 甲醇空白对照
抑菌圈直径(cm)1. Ocm0. 8cm-没有抑菌圈出现 结果表明本发明提取的活性成分对人体病原真菌淡紫拟青霉(P. lilaci皿s)有 较强抑菌作用，提取物在0. 5mg时，抑菌圈的大小为1. Ocm，O. lmg时也出现抑菌活性，但活 性较弱，抑菌圈的大小为0. 8cm。 本发明对人体病原菌有抑菌作用，能作为制备抑制人体病原真菌淡紫拟青霉(P. lilaci皿s)制剂的应用，开发为新的医用抗生素。
权利要求
一种从云南山枇花植物中提取的活性成分，其特征在于本发明的活性成分经如下步骤得到a.将云南山枇花的枝或叶用水洗干净后，在烘箱中50℃温度下烘干；b.将烘干后的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用甲醇浸泡，第一次浸泡提取的时间为4小时，第二次和第三次的时间分别为24和48小时；c.将三次浸提的提取液合并后，浓缩至溶剂蒸发后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为5mg/ml的活性成分。
2. 权利书l所述的从云南山枇花植物中提取的活性成分，其特征在于该活性成分对人 体病原真菌淡紫拟青霉(P. lilaci皿s)有强抑制作用，可作为制备医用抗生素的应用。
全文摘要
本发明涉及一种从云南山枇花植物中提取的活性成分及其应用，属生物医药技术领域。本发明的活性成分经如下步骤得到a.将云南山枇花的枝或叶用水洗干净后，在烘箱中50℃温度下烘干；b.将烘干后的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用甲醇浸泡，第一次浸泡提取的时间为4小时，第二次和第三次的时间分别为24和48小时；c.将三次浸提的提取液合并后，浓缩至溶剂蒸发后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为5mg/ml的活性成分。本发明的从云南山枇花植物的枝和叶中提取的活性成分，具有成本低，制备方法简便，对人体病原真菌淡紫拟青霉(P.lilacinus)有强抑制作用的优点，能用于医用抗生素的制备。
文档编号A61K127/00GK101703629SQ20091021831
公开日2010年5月12日 申请日期2009年12月9日 优先权日2009年12月9日
发明者刘芳芳, 张克勤, 李国红 申请人:云南大学