专利名称：快速简单采集大鼠脑脊液的方法
技术领域：
本发明涉及一种大鼠脑脊液采集的专业方法，适用于采集大鼠脑脊液，属于动 物药理学实验领域。
背景技术：
1.什么是脑脊液。脑脊液cere bral spinal fluid(CSF)是充满于脑室系统、脊髓
中央管和蛛网膜下腔隙内的无色透明液体，内含无机离子、葡萄糖和少量蛋白，细胞很 少，主要为单核细胞和淋巴细胞，其功能相当于外周组织中的淋巴，对中枢神经系统起 缓冲、保护、营养、运输代谢产物以及维持正常颅内压作用。脑脊液由侧脑室脉络丛产生，经室间孔流至第三脑室，与第三脑室脉络丛产生 的脑脊液一道，经中脑水管流入第四脑室，再汇合第四脑室脉络丛产生的脑脊液经第四 脑室正中孔和外侧孔流入蛛网膜下隙，使脑、脊髓和脑神经、脊神经根均被脑脊液浸 泡。然后，脑脊液再沿蛛网膜下隙流向大脑背面，经蛛网膜颗粒渗透到硬脑膜窦(主要 是上矢状窦)内，回流入血液中。脑脊液总量在成人约150ml，成年大鼠总量约200ul。 脑脊液是出于不断地产生、循环和回流的平衡状态。近年研究表明存在着接触脑脊液的神经元系统(CSF-contacting neuronalsystem),这些神经细胞的胞体位于脑室腔内、室管膜内或脑实质中，借胞体、 树突或轴突直接与脑脊液接触，并能接受脑脊液的化学和物理因素的刺激和释放神经活 性物质(如肽类、胺类和氨基酸类物质)至脑脊液中，执行感受、分泌和调整的功能。 因此，在脑脊液与脑组织之间存在着交流信息的神经一体液回路。自从脑脊液被视为脑 内传输媒体后，被广泛用于临床研究。脑脊液既可以作为一种诊断工具，也能作为药物 传递的一个窗口。，由于脑脊液中真正含有通透血脑屏障的成分，因此在对中枢神经系 统药效学的研究中采用脑脊液药理学的实验方法就比血清药理学更具说服力，通过对脑 脊液组分的分析，可增加实验结果的可信度。通过对脑脊液中药物浓度的分析，可为下 一步药物实验提供理论依据。2.常规方法(Review of current available methdolog)及其局限性a.大动物脑脊液的常规采集主要为脊髓穿刺法。b.大鼠脑脊液的采集包括1)对经皮穿刺小脑延髓池抽取实验动物脑脊液。该 种方法需要定位仪实现对脑脊液深度的精确定位，及需要足够的仪器设备，因此需要耗 费较大的人力和物力成本。2)不需要定位仪直接经皮穿刺小脑延髓池抽取实验动物脑脊 液。此种方法文献报道大多可操作性不强，获到澄清脑脊液的成功率较低。由于大鼠脑脊液的采集需要对脑脊液深度的精确定位，采集时需要实验室具有 特定的仪器设备，且耗费较大的人力和物力，因此一种简捷，快速采集高质量大鼠脑脊 液的实验方法的建立十分必要。
发明内容
为解决上述问题，本专利目的在于提供一种特别适用于大鼠脑脊液采集的实验 方法。本专利解决的关键问题所采用的技术原理是建立一种快速简单的大鼠脑脊液 采集方法，降低对仪器设备等特殊要求，采用肉限精确定位，对进针深度进行准确的估 算，从而达到大鼠脑脊液的准确采集。本专利中涉及的实验材料主要包括手术刀、1毫升注射器、 27G*l/2wingedinfusionset、带胶管的止血钳、剪刀、胰岛素针。该专利利用手术刀准确 找到寰枕膜，采用WingedinfoSi0nSet27G*l/2—端接1毫升注射器，另一端插入寰枕膜， 此种操作可以控制进针深度以及采集脑脊液的量。插入深度为没过针尖即可，此时另一 人缓慢抽动1毫升注射器。缓慢抽吸的目的是防止脑内压慢慢减小，保证采集的脑脊液 为澄清。本实验方法要求实验技术人员准确判断进针位置和进针深度，对实验人员要求 相对较高。
本专利的主要目的是提供一种简捷、快速、有效的大鼠脑脊液采集方法，在对 大鼠进行脑脊液采集时可按下述步骤进行将手术器械置于75%酒精中浸泡30分钟； 成年大鼠用异氟烷或戊巴比妥钠(50mg/kg，ip)麻醉；将大鼠头部固定为低头成45度； 用宠物推将大鼠头颈部备皮，用碘棉消毒头颈部皮肤，然后用酒精棉进行消毒；在两耳 连线剪一横切口(1.5cm左右)，在其中点向尾侧沿皮下剪开2cm，将皮分离两侧，充分 暴露头枕部，然后发现在枕骨大孔上面附着有纵形肌肉，沿头盖骨下缘用手术刀逐层横 向切开各肌层，暴露寰枕膜(寰枕膜为覆盖枕骨与寰椎之间的一层白色筋膜)；winged infusion set 27G*l/2 —段接1毫升注射器(BD company)，另一端插入寰枕膜(插入深度 为没过针尖即可)，由一人固定针头端，另一人缓慢抽动1毫升注射器即可。待采集到足 量的脑脊液时采集，停止抽吸，用带胶管的止血钳钳住针头末端。(保证所采集脑脊液的 澄消)将采集到的脑脊液用胰岛素针抽吸放入EP管(0.5ml)中。将采集的脑脊液-20°C 或-80°C保存待测。本方法相对于现有技术具有如下优点1.简捷快速本方法可以通过外科手术的方法，肉眼即可对穿刺部位进行精确定 位，准确进针，采集足量大鼠脑脊液，历时3分钟。2.成本低廉本专利设计的实验工具为手术刀一把、1毫升注射器、 27Gn/2winged inftision set,且价格便宜，有效降低实验成本。3实用可行蝴蝶针针头易于穿刺，采用一人固定针头，另一人抽吸注射器的方 法，操作稳定，不易抖动，能够采集足量脑脊液。4.取样量化大鼠脑脊液容量有限，本专利可有效控制取样量，采用对 27G*l/2Wingedinfusion set进行标记，控制采样量；另其管径固定，可以根据预先计算的 标记长度计算取样量的多少。5.成功率高进行直接穿刺后，发现有少量血液出现时，立即用带胶管的止血钳 钳住红色液体上方澄清脑脊液处。保证所取脑脊液样本的澄清。该方法能够采集澄清脑 脊液的成功率可达95%以上。
图1 :切开头颈部皮肤图2 逐层切开肌层图3:暴露寰枕膜图 4 将 wi nged infusion set 插入寰枕膜图5 采集脑脊液图6 采集足量脑脊液后，用止血钳钳住winged infusion set的尾端图7 剪去导管前端血性脑脊液部分图8 收集清亮脑脊液图9 将清亮脑脊液收集到干净的EP管中。
具体实施例方式(具体实验操作方法)
将手术器械置于75%酒精中浸泡30分钟；成年大鼠用异氟烷或戊巴比妥钠 (50mg/kg, ip)麻醉；将大鼠头部固定为低头成45度；用宠物推将大鼠头颈部备皮，用 碘棉消毒头颈部皮肤，然后用酒精棉进行消毒；在两耳连线剪一横切口(1.5cm左右)， 在其中点向尾侧沿皮下剪开2cm，将皮分离两侧，充分暴露头枕部(图1)，然后发现在 枕骨大孔上面附着有纵形肌肉，沿头盖骨下缘用手术刀逐层横向切开各肌层(图2)，暴 露寰枕膜(寰枕膜为覆盖枕骨与寰椎之间的一层白色筋膜)(图3) ； winged infusion set 27G*l/2—段接1毫升注射器(BDcompany)，另一端插入寰枕膜(插入深度为没过针尖即 可)(图4)，由一人固定针头端，另一人缓慢抽动1毫升注射器即可(图5)。待采集到 足量的脑脊液时，停止抽吸，用带胶管的止血钳钳住针头末端(图6、7)。(包证所采集 脑脊液的澄清)将采集到的脑脊液用胰岛素针抽吸放入EP管(0.5ml)中(图8、9)。将 采集的脑脊液-20°C或-80°C保存待测。
权利要求
1.一种简单快速采集脑脊液的方法，所用实验材料包括Winged infosion set 27G*l/2、50U胰岛素针、手术刀、带胶管的止血钳。
2.该种采集脑脊液的实验方法采用肉眼准确定位寰枕膜。
3.该种采集脑脊液的实验方法，在保证采集澄清脑脊液方面，采用肉眼观察，待看 到血性脑脊液时，迅速利用止血钳夹闭导管，保证脑脊液的澄清。
4.该种采集脑脊液的实验方法，在最后收集所采集脑脊液方面采用胰岛素针抽吸管 中的脑脊液然后转移到EP管中。将脑脊液的损耗降到最低。
全文摘要
本发明涉及一种简单快速的大鼠脑脊液采集方法，适用于神经、心脑血管、肿瘤及相关领域的生理及药理学研究，属于实验动物方法学的范畴。本发明在对大鼠脑脊液采集方法上，采用winged infusion set 27G1/2连接1ml注射器的连接装置，降低了对实验仪器设备等的特殊要求。采用肉眼精确定位，对进针深度进行准确估算。利用标记的winged infusion set可控制脑脊液的采集量。该操作简单易行，能够准确把握进针位置、进针深度同时能保证高质量脑脊液的采集。
文档编号A61B17/00GK102008329SQ20091026034
公开日2011年4月13日 申请日期2009年12月16日 优先权日2009年12月16日
发明者梁晓娟, 王叶红, 邵奇鸣 申请人:中美冠科生物技术(北京)有限公司