一种用于脑内递送的连接有抗坏血酸的纳米系统的制作方法

专利名称：：一种用于脑内递送的连接有抗坏血酸的纳米系统的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药领域，更具体的说，本发明涉及用于药物筛选和治疗的治疗和诊断脂质体及胶束。
背景技术：
：过去几十年里，大量的研究都致力于靶向中枢神经系统以用于治疗和诊断目的。由于生物学屏障即血脑屏障(BBB)和血-脑脊液(CSF)屏障的生理学结构的渗透性很弱，仅允许选定分子通过，该目标似乎极具挑战性。该屏障限制了向脑室的渗透，保护神经系统免受毒性化合物、代谢物、病毒和细菌的伤害。由于这些生理学屏障，向脑部递送药物的大多数靶向策略效率都非常有限。因此，需要一种可将化合物特异性靶向并递送到脑部的系统。发明概述本发明基于，至少部分基于，一种将脂质体或胶束靶向至脑细胞的方法的发现。利用该发现形成了本发明，一方面，其特征在于一种将脂质组合物递送到脑细胞的方法，包括使脂质组合物与脑细胞接触，该脂质组合物的外表面包含抗坏血酸(ascorbate)或抗坏血酸衍生物，所述抗坏血酸或抗坏血酸衍生物接触脑细胞上的钠依赖性维生素C转运体(SVCT)从而将脂质组合物递送到脑细胞。在某些实施方案中，脂质组合物是脂质体或胶束。在特定实施方案中，与脂质体或胶束连接的抗坏血酸不与葡萄糖转运体(GLUT)结合，或相对于游离抗坏血酸，其与GLUT的结合力降低。在某些实施方案中，脂质体或胶束包括与抗坏血酸或抗坏血酸衍生物C6位连接的磷脂。在某些实施方案中，磷脂是磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PQ。在特定实施方案中，磷脂是二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、神经节苷脂、磷酸二鲸蜡脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、胆酸钠、联十六烷基磷脂酰乙醇胺-聚合甘油8G、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二油酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或二油酰磷脂酰乙醇胺。在某些实施方案中，磷脂包含衍生化的磷脂。在特定实施方案中，衍生化的磷脂包含聚乙二醇(PEG)。在某些实施方案中，抗坏血酸或抗坏血酸衍生物通过PEG与衍生化的磷脂连接。在其他实施方案中，衍生化的磷脂是PEG-1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含6-抗坏血酸-PEG-I，2-二硬脂酰-sn-甘4油-3-磷酸乙醇胺。在某些实施方案中，脂质体或胶束约50%至约100%的外表面积包含抗坏血酸。在其他实施方案中，脂质体或胶束约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%或约100%的外表面积包含抗坏血酸。在某些实施方案中，抗坏血酸占脂质体或胶束重量的约20%至约60%。在特定实施方案中，抗坏血酸占脂质体或胶束重量的约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%或约90%。在某些实施方案中，脑细胞是脉络丛的上皮细胞或血脑屏障的室管膜细胞。在某些实施方案中，脑细胞将脂质体或胶束递送到脑部的脑脊液(CSF)中。在其他实施方案中，进入CSF后，脂质体或胶束与第二脑细胞接触。在特定实施方案中，第二脑细胞是神经细胞、神经胶质细胞或星形胶质细胞。在某些实施方案中，第二脑细胞是脑肿瘤细胞。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含靶向试剂。在某些实施方案中，靶向试剂是抗体、信号肽或核苷酸。在某些实施方案中，脂质体或胶束进一步包含治疗剂。在某些实施方案中，化合物是本申请所述的癌症治疗剂。在某些实施方案中，化合物是紫杉醇、他莫昔芬、喜树碱、拓扑替康、伊立替康、KRN5500(KRN)、内消旋四苯基卟吩、地塞米松、苯并二氮卓类、别嘌呤醇、乙酰苯磺酰环己脲、苯托品、氯丙嗪、甲氨二氮卓、氟哌啶醇、茚甲新、劳拉西泮、甲氧沙林、甲基强的松、硝苯地平、奥沙西泮、羟基保泰松、强的松、强的松龙、乙胺嘧啶、苯茚二酮、磺胺异恶唑、磺胺嘧啶、羟基安定、磺胺甲基嘧啶、玫瑰树碱或三甲沙林。在某些实施方案中，脂质体或胶束进一步包含检测试剂。在某些实施方案中，检测试剂是核磁共振成像(MRI)造影剂、计算机断层扫描(CT扫描)成像剂、光学成像剂或放射性同位素。另一方面，本发明的特征在于一种将治疗剂或检测试剂递送到脑细胞的方法，包括使脂质组合物与脑细胞接触，该脂质组合物包含(i)治疗剂或检测试剂；(ii)位于脂质组合物外表面的抗坏血酸或抗坏血酸衍生物，该抗坏血酸或抗坏血酸衍生物接触脑细胞上的钠依赖性维生素C转运体(SVCT)从而将治疗剂或检测试剂递送到脑细胞。在某些实施方案中，脂质组合物是脂质体或胶束。在特定实施方案中，与脂质体或胶束连接的抗坏血酸不与葡萄糖转运体(GLUT)结合，或相对于游离抗坏血酸，其与GLUT的结合力降低。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含与抗坏血酸或抗坏血酸衍生物C6位连接的磷脂。在某些实施方案中，磷脂是磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、或磷脂酰丝氨酸(PQ。在特定实施方案中，磷脂是二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、神经节苷脂、磷酸二鲸蜡脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、胆酸钠、二十六烷基磷脂酰乙醇胺-聚合甘油8G、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二油酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或二油酰磷脂酰乙醇胺。在某些实施方案中，磷脂包含衍生化的磷脂。在特定实施方案中，衍生化的磷脂包含聚乙二醇(PEG)。在特定实施方案中，衍生化的磷脂包含聚乙二醇(PEG)。在某些实施方案中，抗坏血酸或抗坏血酸衍生物通过PEG与衍生化的磷脂连接。在其他实施方案中，衍生化的磷脂是PEG-1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含6-抗坏血酸-PEG-I，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。在某些实施方案中，脂质体或胶束约50%至约100%的外表面积包含抗坏血酸。在其他实施方案中，脂质体或胶束约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%或约100%的外表面积包含抗坏血酸。在某些实施方案中，抗坏血酸占脂质体或胶束重量的约20%至约60%。在特定实施方案中，抗坏血酸占脂质体或胶束重量的约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%或约90%。在某些实施方案中，脑细胞是脉络丛的上皮细胞或血脑屏障的室管膜细胞。在某些实施方案中，脑细胞将脂质体或胶束递送到脑部的脑脊液(CSF)中。在其他实施方案中，进入脑脊液后，脂质体或胶束接触第二脑细胞。在特定实施方案中，该第二脑细胞是神经细胞、神经胶质细胞或星形胶质细胞。在某些实施方案中，该第二脑细胞是脑肿瘤细胞。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含靶向试剂。在某些实施方案中，靶向试剂是抗体、信号肽或核苷酸。在某些实施方案中，治疗剂是本申请所述的治疗剂，例如紫杉醇、他莫昔芬、喜树碱、拓扑替康、伊立替康、KRN5500(KRN)、内消旋四苯基卟吩、地塞米松、苯并二氮卓类、别嘌呤醇、乙酰苯磺酰环己脲、苯托品、氯丙嗪、甲氨二氮卓、氟哌啶醇、茚甲新、劳拉西泮、甲氧沙林、甲基强的松、硝苯地平、奥沙西泮、羟基保泰松、强的松、强的松龙、乙胺嘧啶、苯茚二酮、磺胺异恶唑、磺胺嘧啶、羟基安定、磺胺甲基嘧啶、玫瑰树碱或三甲沙林。在某些实施方案中，检测试剂是核磁共振成像(MRI)造影剂、计算机断层扫描(CT扫描)成像剂、光学成像剂或放射性同位素。另一方面，本发明的特征在于一种本申请所述的脑疾病或脑紊乱的治疗方法，包括向需要的主体施用脂质组合物，所述脂质组合物包含(i)治疗剂；和(ii)位于脂质组合物外表面的抗坏血酸或抗坏血酸衍生物，该抗坏血酸或抗坏血酸衍生物接触脑肿瘤上的钠依赖性维生素C转运体，从而将治疗剂递送到脑细胞并且治疗该脑疾病或脑紊乱。在某些实施方案中，脂质组合物是脂质体或胶束。在特定实施方案中，与脂质体或胶束连接的抗坏血酸不与葡萄糖转运体(GLUT)结合，或相对于游离抗坏血酸，其与GLUT的结合力降低。在某些实施方案中，脂质体或胶束包括与抗坏血酸或抗坏血酸衍生物C6位连接的磷脂。在某些实施方案中，磷脂是磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PQ。在特定实施方案中，磷脂是二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、神经节苷脂、磷酸二鲸蜡脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、胆酸钠、联十六烷基磷脂酰乙醇胺-聚合甘油8G、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二油酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或二油酰磷脂酰乙醇胺。在某些实施方案中，磷脂包含衍生化的磷脂。在特定实施方案中，衍生化的磷脂包含聚乙二醇(PEG)。在特定实施方案中，衍生化的磷脂包含聚乙二醇(PEG)。在某些实施方案中，抗坏血酸或抗坏血酸衍生物通过PEG与衍生化的磷脂连接。在其他实施方案中，衍生化的磷脂是PEG-1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含6-抗坏血酸-PEG-I，2_二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。在某些实施方案中，脂质体或胶束约50%至约100%的外表面积包含抗坏血酸。在其他实施方案中，脂质体或胶束约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%或约100%的外表面积包含抗坏血酸。在某些实施方案中，抗坏血酸占脂质体或胶束重量的约20%至约60%。在特定实施方案中，抗坏血酸占脂质体或胶束重量的约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%或约90%。在某些实施方案中，脑细胞是脉络丛的上皮细胞或血脑屏障的室管膜细胞。在某些实施方案中，脑细胞将脂质体或胶束转运到脑部的脑脊液(CSF)中。在其他实施方案中，进入脑脊液后，脂质体或胶束接触第二脑细胞。在特定实施方案中，该第二脑细胞是神经细胞、神经胶质细胞或星形胶质细胞。在某些实施方案中，第二脑细胞是脑肿瘤细胞。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含靶向试剂。在某些实施方案中，靶向试剂是抗体、信号肽或核苷酸。在某些实施方案中，脑疾病或脑紊乱是脑肿瘤、偏头痛、抽搐、感染、精神分裂症、抑郁症、缺氧、脑缺血、脑性麻痹、退行性脑病、脑血管病、呼吸困难或脑病。在某些实施方案中，治疗剂是本申请所述的治疗剂，例如紫杉醇、他莫昔芬、喜树碱、拓扑替康、伊立替康、KRN5500(KRN)、内消旋四苯基卟吩、地塞米松、苯并二氮卓类、别嘌呤醇、乙酰苯磺酰环己脲、苯托品、氯丙嗪、甲氨二氮卓、氟哌啶醇、茚甲新、劳拉西泮、甲氧沙林、甲基强的松、硝苯地平、奥沙西泮、羟基保泰松、强的松、强的松龙、乙胺嘧啶、苯茚二酮、磺胺异恶唑、磺胺嘧啶、羟基安定、磺胺甲基嘧啶、玫瑰树碱或三甲沙林。在某些实施方案中，主体是脊椎动物。在某些实施方案中，主体是哺乳动物。在特定实施方案中，主体是人。在某些实施方案中，脂质体或胶束与脑疾病或脑紊乱的第二治疗剂合并施用。在某些实施方案中，脂质体或胶束进一步包含本申请所述的检测试剂。另一方面，本发明的特征在于一种脑细胞成像的方法，包含向需要的主体施用脂质组合物，该脂质组合物包含(i)检测试剂；和(ii)位于脂质组合物外表面的抗坏血酸或抗坏血酸衍生物，抗坏血酸或抗坏血酸衍生物接触脑肿瘤上的钠依赖性维生素C转运体；并且检测该检测试剂从而使脑肿瘤成像。在某些实施方案中，脂质组合物是脂质体或胶束。在特定实施方案中，与脂质体或胶束连接的抗坏血酸不与葡萄糖转运体(GLUT)结合，或相对于游离坏血酸，其与GLUT的结合力降低。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含与抗坏血酸或抗坏血酸衍生物C6位连接的磷脂。在某些实施方案中，磷脂是磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PQ。在特定实施方案中，磷脂是二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、神经节苷脂、磷酸二鲸蜡脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、胆酸钠、联十六烷基磷脂酰乙醇胺-聚合甘油8G、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二油酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷酸乙醇胺或二油酰磷脂酰乙醇胺。在某些实施方案中，磷脂包含衍生化的磷脂。在特定实施方案中，衍生化的磷脂包含聚乙二醇(PEG)。在特定实施方案中，衍生化的磷脂包含聚乙二醇(PEG)。在某些实施方案中，抗坏血酸或抗坏血酸衍生物通过PEG与衍生化的磷脂连接。在其他实施方案中，衍生化的磷脂是PEG-1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含6-抗坏血酸-PEG-I，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。在某些实施方案中，脂质体或胶束约50%至约100%的外表面积包含抗坏血酸。在其他实施方案中，脂质体或胶束约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%或约100%的外表面积包含抗坏血酸。在某些实施方案中，抗坏血酸占脂质体或胶束重量的约20%至约60%。在特定实施方案中，抗坏血酸占脂质体或胶束重量的约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%或约90%。在某些实施方案中，脑细胞是脉络丛的上皮细胞或血脑屏障的室管膜细胞。在某些实施方案中，脑细胞将脂质体或胶束递送到脑部的脑脊液(CSF)中。在其他实施方案中，进入脑脊液后，脂质体或胶束接触第二脑细胞。在特定实施方案中，该第二脑细胞是神经细胞、神经胶质细胞或星形胶质细胞。在某些实施方案中，该第二脑细胞是脑肿瘤细胞。在某些实施方案中，脂质体或胶束包含靶向试剂。在某些实施方案中，靶向试剂是抗体、信号肽或核苷酸。在某些实施方案中，检测试剂是核磁共振成像(MRI)造影剂、计算机断层扫描(CT扫描)成像剂、光学成像剂或放射性同位素。另一方面，本发明的特征在于本申请所述的脂质体或胶束。在特定实施方案中，月旨质体或胶束包含6-抗坏血酸-PEG-1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。另一方面，本发明的特征在于本申请所述的脂质体或胶束用于治疗、检测、诊断本申请所述的脑疾病或脑紊乱的用途。以下附图仅用于说明目的，并非意图限制本发明。图IA为对照抗体处理的大鼠C6细胞的荧光激活细胞分类(FACS)分析示意图。图IB为对照抗体处理的大鼠F98细胞的FACS分析示意图。图IC为对照抗体处理的小鼠NIH/3T3细胞的FACS分析示意图。图ID为山羊多克隆抗SVCT2抗体处理的大鼠C6细胞的FACS分析示意图。图IE为山羊多克隆抗SVCT2抗体处理的大鼠F98细胞的FACS分析示意图。图IF为山羊多克隆抗SVCT2抗体处理的小鼠NIH/3T3细胞的FACS分析示意图。图2A为未处理的大鼠C6细胞的FACS分析示意图。图2B为罗丹明标记的PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞的FACS分析示意图。图2C为用抗坏血酸-PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞的FACS分析的示意图。图2D为未处理的大鼠C6细胞的FACS分析示意图。图2E为mPE(i2kDa-PE胶束处理的大鼠C6细胞的FACS分析示意图。图2F为抗坏血酸-PEG-PE胶束处理的大鼠C6细胞的FACS分析示意图。图3A为未处理的大鼠F98细胞的FACS分析示意图。图;3B为罗丹明标记的PEG-脂质体处理的大鼠F98细胞的FACS分析示意图。图3C为用抗坏血酸-PEG-脂质体处理的大鼠F98细胞的FACS分析示意图。图3D为未处理的大鼠F98细胞的FACS分析示意图。图3E为用mPE(i2kDa-PE胶束处理的大鼠F98细胞的FACS分析示意图。图3F为用抗坏血酸-PEG-PE胶束处理的大鼠F98细胞的FACS分析示意图。图4A为荧光标记的PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞内的Hoechst33342核染料的落射荧光显微镜图像的示意图。图4B为荧光标记的PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞内的Iih-PE-标记的脂质体的落射荧光显微镜图像的示意图。图4C为图4A和图4B叠加的落射荧光显微镜图像的示意图。图4D为抗坏血酸-PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞内的Hoechst33342核染料的落射荧光显微镜图像的示意图。图4E为用抗坏血酸-PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞内的Iih-PE-标记的脂质体的落射荧光显微镜图像的示意图。图4F为图4D和图4E叠加的落射荧光显微镜图像的示意图。图5A为荧光标记的PEG-PE胶束处理的大鼠C6细胞内的Hoechst33342核染料的落射荧光显微镜图像的示意图。图5B为荧光标记的PEG-PE胶束处理的大鼠C6细胞内的罗丹明-标记的胶束的落射荧光显微镜图像的示意图。图5C为图5A和图5B叠加的落射荧光显微镜图像的示意图。图5D为抗坏血酸-PEG-PE胶束处理的大鼠C6细胞内的Hoechst33342核染料的落射荧光显微镜图像的示意图。图5E为抗坏血酸-PEG-PE胶束处理的大鼠C6细胞内的罗丹明-标记的胶束的落射荧光显微镜图像的示意图。图5F为图5D和图5E叠加的落射荧光显微镜图像的示意图。图6A为未用抗坏血酸预培养的，用荧光标记的抗坏血酸-PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞的落射荧光显微镜图像的示意图。图6B为用抗坏血酸预培养的，用荧光标记的抗坏血酸-PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞的落射荧光显微镜图像的示意图。图6C为未用抗坏血酸预培养的，用荧光标记的抗坏血酸-PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞的光学显微镜图像的示意图。图6D为抗坏血酸预培养的，荧光标记的抗坏血酸-PEG-脂质体处理的大鼠C6细胞的光学显微镜图像的示意图。图7为用或不用游离抗坏血酸预培养的，罗丹明标记的PEG-脂质体处理后的大鼠C6细胞相对荧光强度的示意图。发明详述本申请涉及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献(包括GenBank数据库序列)均整体参考并入。一旦发生冲突，以本说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实施例仅仅是说明性的，并非意图限制本发明。除非另外定义，在此使用的所有技术和科学术语与本申请所述本领域技术人员的通常理解具有相同的含义。虽然相似于或等同于本申请所述的那些方法和材料可用于本发明的实践或试验中，但是适宜的方法和材料如下所述。从下列详述及权利要求中可以显而易见的看出本发明的其他特点和优点。定义在此使用的“主体”是哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、母牛、猪、或非人灵长类动物如猴子、黑猩猩、狒狒或猕猴。在此使用的术语“生物可降解的”是指可分解的(例如化学性或酶性)或可在组分分子内部通过自然生物过程(例如，在脊椎动物如人类)分解的物质。在此使用的术语“生物可相容的”是指对目标生物体的生物学功能没有未预期毒性或有害作用的物质。在此使用的术语“约”是指在引用数值的士10%范围附近的数值。在此使用的“治疗”是指以一定的剂量、方式(如给药时间表)和/或方法(如给药途径)，能有效改善紊乱(如本申请所述的紊乱)或其症状，或阻止或减慢紊乱(如本申请所述的紊乱)或症状的进展的给药治疗。其可由如与紊乱或症状相关参数的改善(如达到统计上显著的程度或本领域的技术人员可检测的程度)证明。有效的剂量、方式或方法可以根据主体而变化，也可以根据主体而定做。通过阻止或减慢紊乱或其症状的进展，治疗可以阻止或减慢受影响的或确诊主体内的紊乱或其症状引发的恶化。在此使用的术语“聚合物”是指由重复子单元组成的分子。该分子包括但不限于多肽、多核苷酸、多糖和聚亚烷基二醇。聚合物也可以生物降解和/或是生物相容的。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在此可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物。这些术语适用于天然产生的氨基酸聚合物以及一个或更多氨基酸残基是非天然氨基酸的氨基酸聚合物。此外，此类多肽、肽和蛋白质包括任意长度的氨基酸链，包括全长蛋白质，其中氨基酸残基通过共价肽链连接。术语“治疗剂”和“药物”在此可互换使用，是指用于预防、诊断、缓解、治疗或治愈疾病或状态的任意物质。在此使用的术语“脂质组合物”是指能够形成脂质体、囊泡、胶束、乳剂及其在施用时基本上无毒的两性化合物。脂质组合物可包括但不限于鸡蛋卵磷脂(EPC)、鸡蛋磷脂酰甘油(EPG)、大豆卵磷脂(SPC)、氢化大豆卵磷脂(HSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DMPG)、胆固醇(Choi)、硫酸胆固醇及其盐(CS)、胆固醇半琥珀酸酯及其盐(Chems)、磷酸胆固醇及其盐(CP)、胆固醇二乙氧膦酰硫胆碱和其他羟基胆固醇或氨基胆固醇衍生物。在此使用的术语“脂质体”是指在水性条件下包封水相，且包括一个或多个中心排10列的脂质双分子层的囊泡。在此使用的术语“胶束”是指包封水相，且包括脂质单层的囊泡。术语“聚乙二醇(PEG)”包括较低级的环氧烷的聚合物，尤其是环氧乙烷(聚乙二醇)的聚合物，该聚合物分子至少一端具有可酯化的羟基以及该聚合物具有可酯化的羧基的衍生物。聚乙二醇的平均分子量为约200至20000。在此使用的术语“脑细胞”指在中枢神经系统和脑中发现的、附近的或相关的细胞，无论是正常或异常的，包括下、中和上皮层、免疫细胞以及相关的支持细胞。脑细胞包括所有种类神经元，例如传入神经元、传出神经元和中间神经元，不管是假单极的、双极的或多极的及类似的。脑细胞也包括神经胶质细胞、星形胶质细胞、施旺细胞、浦肯野细胞、脉络丛上皮细胞、血脑屏障的室管膜细胞及类似细胞。脑细胞也包括脑内的肿瘤细胞。本申请公开内容提供了(部分地)用于将试剂(例如治疗剂或检测试剂)递送到脑细胞的脂质组合物。脂质组合物包括与抗坏血酸或抗坏血酸衍生物连接或相连的脂质体和胶束。脂质体脂质体是在水性条件下包封水相，且包括一个或多个同心排列的脂质双分子层的囊泡。该囊泡在“成囊脂质”存在下形成，在此将其定义为可以形成或掺入到双层结构的两性脂质。该术语包括自身能够形成双层的脂质或与另一个或另一些脂质组合形成双层的脂质。两性脂质通过疏水基团与双层膜内部疏水区域接触，且极性端部分指向该膜的外部极性表面来掺入脂质双层。亲水性由官能团例如羟基、磷酸基、羧基、硫酸基、胺基或巯基的存在而产生。疏水性由长链脂肪烃基团的存在而产生。脂质体包括多层囊泡、多泡脂质体、单室囊泡和巨脂质体。多层脂质体(也被称为多层囊泡(“MLV”))的每个脂质体颗粒中包含多个同心双层，类似洋葱层。多泡脂质体由包绕多个非同心水室的脂质膜构成。单室脂质体包绕一个内部水室。单双层(或实质上单双层)脂质体包括小型单层囊泡(“SUV”)和大型单层囊泡(“LUV”)。LUV和SUV的大小范围分别为约50nm至约500nm和约20nm至约50nm。巨脂质体的大小范围为约5000nm至约50000nm(Needham等，ColloidsandSurfacesB=Biointerfaces18183-195(2000))任何适宜的成囊脂质(例如天然形成的脂质和合成的脂质)都可用于本申请所述的脂质体和胶束。适宜的脂质包括但不限于磷脂如磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PQ和磷脂酸乙醇胺；固醇例如胆固醇；醣脂类；鞘脂类例如鞘氨醇，神经酰胺，鞘磷脂和鞘糖脂(例如脑苷脂和神经节苷脂)。在特定实施方案中，脂包括二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、神经节苷脂、磷酸二鲸蜡脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、胆酸钠、联十六烷基磷脂酰乙醇胺-聚合甘油8G、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二油酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二油酰磷脂酸、半乳糖苷神经酰胺、糖基神经酰胺、乳糖神经酰胺、磷脂、红细胞糖苷酯、GMl(GalβU3GalNAcβ1,4(NeuAa2,3)Gali31、4Glcβ1、1'Cer)、神经节苷脂⑶la、神经节苷脂⑶lb、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰-甘油-磷脂酰乙醇胺和1，2_油酰-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺。适宜的磷脂可以包括一个或两个酰基链，该酰基链具有任意数量如约6个至约M个碳原子、彼此独立地选择且具有不同程度的饱和度。因而，可以使用不同种类和链长的磷脂不同比例的组合。根据本领域技术人员判断，也可以使用适宜比例的脂质混合物。脂质体可通过多种现有技术制得。这些技术包括但不限于乙醚注射(Deamer等，Acad.Sci.308:250(1978))；表面活性剂(Brunner等，Biochim.Biophys.Acta455322(1976))；Ca2+融合(Paphadjopoulos等，Biochim.Biophys.Acta394:483(1975))；冻融(Pick等，Arach.Biochim.Biophys.212:186(1981))；反向蒸发法(Szoka等，Biochim.Biophys.Acta601:559(1980))；超声波处理(Huang等，Biochemistry8:344(1969))；乙醇注射(Kremer等，Biochemistry16:3932(1977))；挤压(Hope等，Biochim.Biophys.Acta812:55(1985))；法氏压力法(Barenholz等，FEBSLett.99:210(1979))；薄膜水合(Bangham等，J.MolBiol.13:238-252(1965))；和本申请所述的或者现有技术已知的任何其他方法。脂质体也可通过商品化的试剂盒制得(例如，购自勃林格-曼海姆，普洛麦格和生命技术公司(Gibco))。根据想得到的脂质体类型，可以使用不同技术。例如，小型单层囊泡(SUVs)可通过超声波处理法、乙醇注射法或法氏压力法制备，而多层囊泡(MLVs)可通过反向蒸发法或仅仅将水加入到脂质薄膜中后进行机械搅拌分散制得(Bangham等，J.MolBiol13238-252(1965))。LUV可通过乙醚注射法、表面活性剂法、Ca2+融合法、冻融法、反向蒸发法、法氏压力法或挤压法制得。脂质体的平均大小可通过已知技术如准弹性光散射、光子相关光谱学、动态光散射或多种电子显微镜技术(如负染色透射电子显微镜法、冰冻断裂电子显微镜法、低温透射电子显微镜法)测定。在一些实例中，为了除去未被包封的本申请所述的治疗剂或检测试剂，可以将合成的脂质体通过适当缓冲液平衡的kphadexG50柱或相似大小的体积排阻色谱柱。脂质体的大小范围可以是，如直径从约50nm到约1μm。例如，本申请所述的脂质体直径可小于约200nm、小于约160nm或小于约140nm。在某些实施方案中，本申请所述的脂质体大小是基本一致的，例如10%至100%，或更常见的至少为10%、20%、30%、40%、50、55%或60%，或至少为65%、75%、80%、85%、90%或95%，或差不多96%、97%、98%、99%或100%的脂质体具有相同大小。在一些实例中，利用具有指定直径的空隙或通道的过滤器(如聚碳酸酯滤器)的挤压，获得特定大小的脂质体。在一些实例中，脂质体可包括亲水部分。将亲水部分连接到脂质体表面可在空间上稳定脂质体并可增加脂质体的循环寿命。这可以提高血液稳定性和增加循环时间、降低健康组织对其摄入，并增加其向疾病部位如实体瘤的递送(参见，例如美国专利5，013，556和5，593，622及Pateletah,Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.9:39(1992))。亲水部分可与脂质体的脂质部分连接，形成亲水聚合物-脂质连接物。在此使用的术语“亲水聚合物-脂质连接物”指极性端与亲水聚合物连接的脂质(例如成囊脂质)，并可通过聚合物与脂质极性端活性基团连接制得。该共价连接是可以释放的，以致于聚合物与脂质分离(例如在生理PH下或经过多种时间长度后(参见例如Adlaldia-Hutcheon等，Nat.Biotechnol.17:775-779(1999)))。非限制性的适宜活性官能团包括例如氨基、羟基、羧基或甲酰基。脂质可以是现有文献所述的用于该种连接物的任何脂质。例如，脂质可以是具有一个或两个酰基链(包括具有不同不饱和度的长度在约6个至约M个碳原子)的磷脂。在一些情况下，连接物中的脂质可以是磷脂酰乙醇胺，如二硬脂酰形式。聚合物可以是生物相容的聚合物。在一些实例中，聚合物具有水溶性，其允许聚合物链具有足够柔性来从脂质体表面向外延伸，这使脂质体表面均勻覆盖。这样的聚合物可以是聚醚，包括PEG、聚亚甲基乙二醇、多羟基丙二醇、聚丙二醇、聚乳酸、聚乙醇酸、聚丙烯酸及其共聚物，以及那些在美国专利5，013，556和5，395，619中所披露的。该聚合物的平均分子量可以为约350道尔顿至约10000道尔顿。在一些实例中，磷脂可以是衍生化的磷脂，例如经PEG修饰的磷脂。PEG的平均分子量可以为约200道尔顿至约20000道尔顿。本申请所述的脂质体也可以由不同种类和不同链长的PEG磷脂以不同比例的组合组成。磷脂和PEG磷脂的组合也可用于形成本申请所述的脂质体。可以制备衍生化的磷脂以包括可释放的脂质-聚合物键，例如肽键、酯键或二硫键。胶束胶束是包括包封水相的单个脂单层的囊泡。胶束可以是球形的或管状的，并在临界胶束浓度(“CMC”)附近自发形成。总体来说，在一系列给定的物理条件(如温度、离子环境，浓度等)下，胶束与单体处于平衡。胶束在“胶束形成化合物”存在下形成，该胶束形成化合物包括两性脂质(例如本申请所述的或现有技术已知的成囊脂质)、脂蛋白、去污剂、非脂质聚合物或能够形成或插入到单层囊泡结构的任何其他化合物。因而，胶束形成化合物包括可以自身形成单层或与另一化合物组合形成单层的化合物，其可以是聚合物胶束、嵌段共聚物胶束、聚合物-脂质的混合胶束或脂质胶束。在水性环境中，胶束形成化合物具有的疏水部分通常与囊泡内部接触，且极性端朝外指至水性环境中。亲水性一般由官能团例如羟基、磷酸基、羧基、硫酸基、氨基或巯基的存在而产生。疏水性由长链脂肪烃基团的存在而产生。胶束可通过例如脂蛋白或人工脂蛋白包括低密度脂蛋白、乳糜微粒或高密度脂蛋白制备。胶束可通过多种现有技术制得，包括但不限于，混合水性介质或含水乙醇介质或包含表面活性剂或离子物质介质的简单分散法；超声法；溶剂分散法；或本申请所述的或者现有的任何其他方法。依据想获得胶束的类型和胶束形成组分的物理化学性质(如在离子或含表面活性剂溶液中的溶解度、疏水性或性能)，可以使用不同的技术。胶束的大小范围可以是，如直径从约5nm到约50nm。在一些实例中，胶束的直径可小于约50nm、小于约30nm或小于约20nm。在一些情况下，本申请所述的胶束可包括本申请所述的或现有技术已知的亲水聚合物-脂质连接物。抗坏血酸与脂质体或胶束连接用于脑递送抗坏血酸被钠依赖性维生素C转运体(SVCT2)吸收，并且SVCT2的表达限于脉络丛上皮细胞、一些神经元、脑室膜细胞、星形胶质细胞、和蛛网膜(参见，例如Tsukaguchietah,Nature399:70-75(19卯))。因此，为了将本申请所述的脂质体或胶束靶向脑细胞，将脂质体或胶束与抗坏血酸连接。抗坏血酸连接于脂质体或胶束，并暴露在脂质体或胶束的外表面，在外表面其可以接触SVCT2转运体。在特定实施方案中，本申请所述的与脂质体或胶束上连接的抗坏血酸不结合于葡萄糖转运体(GLUT)，或相对于游离的抗坏血酸，其与GLUT的结合力降低。抗坏血酸的形式不被限制并且可以使用任何已知抗坏血酸或抗坏血酸衍生物。例如，可以使用抗坏血酸盐、抗坏血酸或它们的任何药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物。可以使用现有技术已知的方法在抗坏血酸6位上连接本申请所述的磷脂或本申请所述的亲水聚合物-脂质连接物。例如，抗坏血酸可以使用已知技术通过共价键(如硫原子、氧原子、氮原子或烃连接基团)连接到磷脂上。在特定实例中，脂质体或胶束约50%至约100%的磷脂与抗坏血酸连接。例如，约20%至约95%、约30%至约90%、约40%至约80%、约50%至约95%、约60%至约90%、约70%至约100%、或约80%至约95%的磷脂与抗坏血酸连接。抗坏血酸可用于将本申请所述的脂质体或胶束递送到脑部。例如，在一些实例中，位于本申请所述的脂质体或胶束外表面内的抗坏血酸可以接触位于脉络丛脑细胞上的SVCT2，脂质体或胶束可以在脉络丛脑细胞膜内释放治疗剂或诊断试剂。该治疗剂或诊断试剂随后被脑细胞转运至位于脑室内的脑脊液(CSF)。在其他实例中，位于本申请所述的脂质体或胶束外表面内的抗坏血酸可以接触位于脉络丛脑细胞上的SVCT2，其可以将脂质体或胶束递送到脑细胞。然后脂质体或胶束可以在释放脉络丛脑细胞内释放治疗剂或诊断试齐U，并且随后该治疗剂或诊断试剂从脑细胞转运或扩散到脑CSF。在其他实例中，本申请所述的连接有抗坏血酸的脂质体或胶束可以接触位于脉络丛脑细胞内的受体例如SVCT2并且被转运到脑细胞。随后该脂质体或胶束从脑细胞转运或扩散到脑室内的脑脊液(CSF)，在脑室内的脑脊液中，脂质体或胶束可以释放治疗剂或诊断试剂到CSF或随后使用本申请所述的靶向剂靶向至脑细胞。靶向剂本申请公开的脂质体或胶束的外表面除了包括抗坏血酸或抗坏血酸衍生物外，还可包括靶向剂。正如本申请所述的，脂质体或胶束上的抗坏血酸可介导转运到脑内，例如CSF0一旦脂质体或胶束进入脑，例如脑CSF，靶向剂可以将脂质体或胶束定向到脑内的特定靶点。脑靶点的非限制性示例包括肿瘤细胞、细菌、病毒、细胞表面蛋白、细胞表面受体、细胞表面多糖、细胞外基质蛋白、细胞内蛋白和细胞内核酸。例如，靶向剂可以是例如多种特异性配体如抗体、单克隆抗体及其片断、叶酸盐、甘露糖、半乳糖和其他单糖、二糖和低聚糖、及其RGD肽。本申请所述的脂质体和胶束不限于任何特定的靶向剂，并且许多种靶向剂都可使用。靶向剂示例包括但不限于核酸(例如，RNA和DNA)、多肽(例如，受体配体、信号肽、抗生物素蛋白、蛋白A和抗原结合蛋白)、多糖、生物素、疏水基团、亲水基团、药物和任何与受体结合的有机分子。在一些实例中，本申请所述的脂质体或胶束可连接于一种、两种或更多的多种靶向剂。例如，当使用两种或更多靶向剂时，这些靶向剂可以是相似或不相似的。在一个特定的脂质体或胶束上使用多个靶向剂可以对多个生物学靶点进行靶向或增加对一个特定目标的亲和力。靶向剂可通过多种方式与脂质体或胶束连接。例如，靶向剂可以通过短键(例如，直接偶联)、中键(例如，使用小分子双功能接头如SPDP(PierceBiotechnology,Inc.,Rockford,IL))或长键(例如，PEG双功能接头(NektarTherapeutics,Inc.，SanCarlos,CA))连接(例如，共价键或非共价键)到脂质体或胶束的磷脂。此外，脂质体或胶束也可以掺入反应基团(例如，氨基基团如多聚赖氨酸、葡聚糖胺、硫酸鱼精蛋白和/或壳聚糖)。反应基团可以进一步连接各种特异性配体或报告基团(例如，1251、1311、I、Br、可装载指示性重金属(如111^K99mTbGd、Mn)的各种螯合基团(如DTPA)、荧光基团(如FITC)、罗丹明、Alexa和量子点/或其他基团(例如，配体、抗体和/或其片段)。作为靶向剂的抗体在一些实例中，靶向剂是抗原结合蛋白或抗体或其结合片段。可以将抗体制备成特异性靶向多种生物靶(例如，病原体、肿瘤细胞、正常组织)的抗原或免疫原(例如，肿瘤、组织或病原体特异性抗原)。这样的抗体包括但不限于多克隆抗体；单克隆抗体或其抗原结合片段；修饰抗体(如嵌合抗体、重构抗体、人源化抗体、或其片段(例如，Fv,Fab'，Fab,F(ab')2))；或生物合成抗体(例如，单链抗体、单结构域抗体(DAB)、Fvs或单链FVs(scFv))。制备和使用多克隆和单克隆抗体的方法在现有技术中是已知的，例如Harlow等，UsingAntibodies:ALaboratoryManual:PortableProtocolI.ColdSpringHarborLaboratory(December1，1998)。制备修饰抗体和抗体片段(例如，嵌合抗体、重构抗体、人源化抗体、或其片段，例如Fv、Fab'、Fab、F(ab')2片断)或生物合成抗体(例如，单链抗体、单结构域抗体(DAB)、Fv或单链FV(scFv)等)的方法在现有技术中是已知的，其可以在例如Zola，MonoclonalAntibodies!PreparationandUseofMonoclonalAntibodiesandEngineeredAntibodyDerivatives,SpringerVerlag(December15,2000；第1片反)中找到。可通过标准的共价结合游离氨基基团的方式进行抗体连接(参见，例如，Torchilin等(1987)Hybridoma,6:229-240；Torchilin等，(2001)Biochim.Biophys.Acta,1511:397-411；Masuko，等，(2005),Biomacromol.，6:800-884)。作为靶向剂的信号肽在一些实例中，靶向剂包括信号肽。这些多肽可使用已知技术化学合成或克隆、表达和纯化。信号肽可以用于将本申请所述的脂质体或胶束靶向至脑细胞内的特定区域。作为靶向剂的核酸在其他实例中，靶向剂是核酸(例如，RNA或DNA)。在某些实施方案中，核酸靶向剂被设计用于通过碱基配对方式杂交产生特殊核酸(例如，染色体DNA、mRNA、或核糖体RNA)。在其他情况下，核酸连接配体或生物学靶点。例如，核酸可以连接逆转录酶、HIV的Rev或Tat蛋白(Tuerk等，Gene，137(1):33-9(1993))；人神经生长因子(Binkley等，Nuc.AcidsRes.,23(16):3198-205(1995))；或血管内皮生长因子(Jellinek等，Biochem.，83(34):10450-6(1994))。连接配体的核酸可通过已知方法鉴定，例如SELEX步骤(参见，例如U.S.5，475，096；5，270，163和5，475，096；以及WO97/38134；WO98/33941；和WO99/07724)。靶向剂也可以是连接于特殊序列的适体。其他靶向剂靶向剂可识别预选生物学靶点上的多种抗原决定簇(例如，病原体、肿瘤细胞或正常细胞)。例如，在一些实例中，靶向剂可以是HIV(Wies等，Nature,333:426(1988)),流感病毒(White等，Cell,56:725(1989))、衣原体(Infect.Immunol,57:2378(1989))、脑膜炎双球菌、猪链球菌、沙门氏菌、腮腺炎、新城疫、呼吸道肠道病毒、仙台病毒、粘液病毒靶向的唾液酸；冠状病毒、脑脊髓炎病毒和轮状病毒靶向的9-0AC唾液酸；细胞巨化病毒(Virology,176:337(1990))和麻疹病毒(Virology,172:386(1989))靶向的非唾液酸糖蛋白；靶向HIV的CD4(Khatzman等，Nature，312:763(1985))、肠道血管活性肽(Sacerdote等，J.ofNeuroscienceResearch，18102(1987))和肽T(Ruff等，FEBSLetters,21117(1987))；痘苗病毒靶向的表皮生长因子(Epstein等，Nature，318:663(1985))；狂犬病靶向的乙酰胆碱受体(Lentz等，Science215:182(1982))；EB病毒靶向的Cd3补体受体(Carel等，J.Biol.Chem.，265:12293(1990))；呼吸道肠道病毒靶向的β肾上腺素受体(Co等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,821494(1985))；鼻病毒靶向的ICAM-I(MarIin等，Nature,344:70(1990))、N-CAM和髓鞘相关糖蛋白MAb(Sh印hey等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85:7743(1988))；脊髓灰质炎病毒靶向的脊髓灰质炎病毒受体(Mendelsohn等，Cell,56:855(1989))；疱疹病毒靶向的成纤维细胞生长因子受体(Kaner等，Science，2481410(1990))；大肠埃希杆菌靶向的寡甘露糖；以及脑膜炎双球菌靶向的神经节苷脂Gmi。在其他实例中，将靶向剂纳米粒靶向至癌基因表达的因子。其可以包括但不限于酪氨酸激酶(膜相关形式和细胞质形式)，如Src家族成员；丝氨酸/苏氨酸激酶，如Mos生长因子和受体，如血小板衍生的生长因子(PDDG)，小鸟苷三磷酸酶(G蛋白)，包括ras家族，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cdk)，myc家族成员(包括C-myC、N-myC和L-myc)以及bcl-2家族成员。治疗剂和检测试剂本申请所述的脂质体或胶束可以包括治疗剂或检测试剂。这种包含治疗剂或检测试剂的脂质体或胶束可通过常规的主动或被动装载法制备。例如，治疗剂可与成囊脂质混合并插入到脂膜中，例如当制备脂质体时，治疗剂被插入或包封到脂质体中。因此，如果治疗剂实质上是疏水的，其将被包封在脂质体的脂质双层中。可选地，如果治疗剂实质上是亲水的，其将被包封在脂质体的水性内层中。治疗剂可溶于水性缓冲液，或者辅助使用去污剂或乙醇。随后脂质体可被纯化，例如，通过柱色谱或透析以除去所有未插入的治疗剂。包埋在脂质体或胶束中有益治疗剂的非限制性示例包括，例如激素、止痛剂、局部麻醉剂、抗生素、化学治疗剂、免疫抑制剂、抗炎药、抗增殖剂、抗有丝分裂剂、血管生成剂、抗精神病药物、中枢神经系统(CNS)制剂、抗凝剂、纤维蛋白溶解剂、生长因子、抗体、眼用药及其代谢产物、类似物、衍生物、片段以及利用纯化、分离、重组及其化学合成得到的上述物质及其组合。典型的有益治疗剂包括但不限于他莫昔芬，紫杉醇，低水溶性抗癌药物，喜树碱及其衍生物，如拓扑替康和伊立替康，KRN5500(KRN)，内消旋四苯基卟吩，地塞米松，苯二氮类，别嘌呤醇，对乙酰苯磺酰环己脲，甲氯噻嗪，氯丙嗪，利眠宁，氟哌啶醇，茚甲新，劳拉西泮，甲氧沙林，甲基强的松，硝苯地平，奥沙西泮，羟基保泰松，强的松，强的松龙，乙胺嘧啶，苯茚二酮，磺胺异恶唑，磺胺嘧啶，羟基安定，磺胺甲基嘧啶，玫瑰树碱，用于光动力疗法的卟啉衍生物，和/或三甲呋苯吡喃酮，以及所有主流的抗生素，包括青霉素组，氟喹诺酮类，和第一、第二、第三和第四代头孢菌素。这些试剂已商品化，例如Merck&Co.，Barr16Laboratories,AvalonPharma禾口SunPharma，及其他。在一些实例中，本申请所述的脂质体或胶束可用于检测细胞或细胞成像，例如使用含有检测试剂的脂质体或胶束。检测试剂可以用于定性或定量分析位于特殊部位的脂质体或胶束的位置和/或数量。检测试剂也可以用于通过标准方法将脂质体、胶束和/或脂质体或胶束的细胞或组织靶点成像。本申请所述的脂质体或胶束(如磷脂)可以用检测试剂修饰或衍生化(或标记)。检测试剂的示例包括但不限于核磁共振成像(MRI)造影剂、计算机断层扫描(CT扫描)成像齐U、光学成像剂和放射性同位素。检测试剂的非限制示例包括荧光化合物、各种酶、辅基、发光材料、生物发光材料、荧光发射金属原子(例如，铕(Eu))、放射性同位素、量子点、高电子密度反应物和半抗原。检测试剂可以通过多种方式检测包括但不限于光谱，光化学，放射化学，生物化学，免疫化学，或化学方法。非限制性的检测试剂示例包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5-二甲氨基-1-萘磺酰氯、藻红蛋白及类似物。检测试剂也可以是可检测的酶，例如碱性磷酸酯酶、辣根过氧化物酶、半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶及类似物。当本发明公开的脂质体或胶束用可检测的酶衍生化时，其可以通过加入其他试剂检测，其中酶利用该试剂反应生成可检测的反应产物。例如当检测试剂是辣根过氧化物酶时，加入过氧化氢和二氨基联苯生成可检测的有色反应产物。脂质体或胶束也可以用辅基(例如抗生物素蛋白链菌素/生物素和抗生物素蛋白/生物素)衍生化。例如，脂质体或胶束可以用生物素衍生化并且通过间接测定抗生物素蛋白或抗生物素蛋白链菌素的结合进行检测。可以用作检测试剂的荧光化合物的非限制性示例包括伞形花内酯、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基氨基荧光素、丹磺酰氯和藻红蛋白。发光材料包括如鲁米诺和生物发光材料包括如荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白。可用于修饰脂质体或胶束的检测试剂也可以是放射性同位素，例如但不限于α_、或Y-发射体；或和Y-发射体。放射性同位素可以用于诊断或治疗中。这样的放射性同位素包括但不限于碘(131I或125I)、钇(90Y)、镥(177Lu)、锕(225Ac)、镨(142Pr或143Pr)、砹(211At)、铼(186Re或187Re)、铋(212Bi或213Bi)、铟(111In)Jf(99mTc)、磷(32P)M(188Rh)、硫(35S)、碳(14C)、氚(3H)、铬(51Cr)、氯(36Cl)、钴(57&)或乂0)、铁(59Fe)、硒(75Se)和镓(67Ga)。脂质体或胶束可通过现有技术进行放射标记。在一些情况下，本申请所述的脂质体或胶束与螯合剂例如1,4,7,10-四吖环十二烷-N，N'，N"，N〃‘-四乙酸(DOTA)接触从而生成连接的脂质体或胶束。该连接的脂质体或胶束随后用放射性同位素例如m^、9°Y、mLU、186Re、187Re或99mTc进行放射标记从而生成标记的脂质体或胶束。在其他方法中，脂质体或胶束可以在还原剂如钠连二亚硫酸盐(参见，例如Khaw等，J.Nucl.Med.231011-1019(1982))或SnCl2还原后(参见，例如Khaw等，J.Nucl.Med.47:868-876(2006))通过弱的反式螯合物如柠檬酸盐(参见，例如Khaw等，Science209:295-297(1980))或99mTc进行111M和9°Y标记。其他方法参见例如Lindegren等，Bioconjug.Chem.13502-509(2002)；Boyd等，Mol.Pharm.3:614-627(2006)和delRosario等，J.Nucl.Med.341147-1151(1993)。脑疾病和脑紊乱本申请所述的脂质体或胶束可以用于靶向和/或处理(例如，介导治疗剂转位进17入)脑细胞或脑组织(如患病的脑细胞或组织)。就此而言，多种疾病和紊乱适于使用本申请所述的脂质体和胶束及其方法进行治疗。在某些实例中，本发明公开的脂质体或胶束可用于治疗以异常脑组织为特征的疾病或紊乱。异常的脑区可以包括，例如，以异常的细胞增殖(例如恶性脑肿瘤)为特征的脑组织区域以及由物理或生化损伤如退化性脑疾病(例如阿尔茨海默氏症、帕金森病)、中风、脑缺血、感染或外伤所致受到生理影响的脑组织区域。在一些情况下，异常脑区以异常细胞增殖(如与肿瘤性疾病或恶性肿瘤(如癌或肿瘤)相关的异常细胞增殖)为特征。在一些情况下，异常脑区是恶性脑肿瘤。在恶性脑肿瘤中，本发明方法行之有效的有神经胶质瘤，其包括任意恶性神经胶质瘤(即来源于转化神经胶质细胞的肿瘤)。所有原发性脑肿瘤中有大约一半是神经胶质瘤。神经胶质细胞具有一个或多个与神经胶质细胞类型相关的神经胶质特异性特征(包括神经胶质细胞(如星形胶质细胞或少突神经胶质细胞)特异的形态学、生理学和/或免疫学特征)，例如星形胶质细胞标记物胶原纤维酸性蛋白(GFAP)或少突神经胶质细胞标记物04的表达。可使用本发明组合物联合或交替应用抗增殖剂治疗的肿瘤性疾病或恶性肿瘤的非限制性示例包括神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤(GBM；即星形细胞瘤IV级)、少突神经胶质瘤、原发性神经外胚层瘤、低级、中级和高级星形细胞瘤(即星形细胞瘤II级、多形性成胶质细胞瘤III级、带少突胶质细胞成分的星形细胞瘤)、室管膜瘤(如粘液乳头状室管膜瘤、亚室管膜瘤、恶性室管膜瘤)、少突神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤(即非典型性脑膜瘤，恶性脑膜瘤)、垂体瘤(即垂体腺瘤)、神经母细胞瘤和颅咽管瘤。可以用本申请所述的脂质体和胶束治疗的脑肿瘤的其他非限制性示例包括听神经瘤(如神经鞘瘤，施旺细胞瘤，神经细胞瘤)、脊索瘤、脊索瘤、CNS淋巴瘤、囊肿、皮样囊肿、神经节细胞瘤、神经节神经胶质瘤和成血管细胞瘤。在某些实例中，异常脑组织是继发性或转移性脑瘤(即从身体的另一部分播散到脑的肿瘤)。转移性脑瘤的非限制性示例包括来源于乳腺、肺、肾、结肠、前列腺和皮肤(恶性黑色素瘤)的癌。脑疾病或脑紊乱的其他非限制性示例包括偏头痛、抽搐、感染、精神疾病(例如精神分裂症、抑郁)、缺氧、脑缺血、脑性麻痹、退行性脑病、脑血管疾病、呼吸困难或脑病。脑疾病或脑紊乱也可以是物理或生化创伤(如外伤)的结果。偏头痛包括，例如先兆性偏头痛、无先兆性偏头痛、基底动脉型偏头痛、颈动脉痛、无头痛型偏头痛、眼肌麻痹型偏头痛和体位型偏头痛。本申请所述的脂质体或胶束也可以用于治疗抽搐疾病或紊乱。术语抽搐(即癫痫发作)是指由于脑内的过度电活动而产生的行为上的突然改变。病因包括例如癫痫、头部损伤、感染或中风。癫痫的类型包括例如一般癫痫、广义隐源性或症状性癫痫、广义非特异性病因的症状性癫痫、局部或部分性癫痫、颞叶癫痫和额叶癫痫。脑血管疾病也可以用本申请所述的脂质体或胶束治疗。脑血管疾病包括因血管紊乱或疾病(例如先天异常和动脉粥样硬化)而引起神经症状和体征的疾病。非限制性示例包括缺血综合征和出血综合征。缺血综合征是由脑循环不充分引起的紊乱，并且包括例如暂时性脑缺血发作(TIAs)和缺血性发作。出血综合征涉及脑组织出血，包括硬膜外、硬膜下或蛛网膜下腔或这些部位的组合。脑内出血可能发生在脑的几乎任何位置，包括例如基底神经节、内囊、丘脑、小脑或脑干的附近。头部创伤是蛛网膜下出血的最常见原因。在本发明的特定实施方案中，异常脑区是指撞击所致的生理功能受到影响的脑组织区域。其他的脑疾病或脑紊乱包括神经退行性疾病，其以进行性神经系统功能障碍(特定脑区或结构中的神经元随着时间退化或死亡)为特征。非限制性退行性脑病包括例如阿尔茨海默氏症、小脑萎缩、三联体重复病(如亨延顿病)、帕金森病、C型尼曼-皮克病(NP-C)、事先障碍(例如克罗伊茨费尔特-雅各布病)、橄榄体脑桥小脑退化、运动神经元病、小脑退化、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(即卢伽雷氏病)、痴呆(例如路易体痴呆)以及涉及神经系统自身免疫性病(如多发性硬化症)的疾病。有关其他退行性脑病的描述参见Williams,BMJ324:1465-1466(2002)。其他脑疾病或脑紊乱还包括脑感染。脑感染可由例如细菌、病毒或病毒样物质引起。感染可包括急性或慢性。非限制性细菌感染包括例如肺炎链球菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠杆菌、丙酸杆菌、铜绿假单胞菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌和单核细胞增生性李斯特菌。与病毒感染有关的急性神经学症状的非限制性示例包括急性病毒性脑炎、弛缓性麻痹、无菌性脑膜炎和感染后脑脊髓炎。急性病毒性脑炎可由例如单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、水痘病毒、狂犬病毒或虫媒病毒引起。由病毒感染所致的慢性神经学疾病包括但不限于以瘫痪、消瘦和运动失调为特点的亚急性硬化性全脑炎(由持续麻疹病毒感染引起)、进行性多灶性白质脑病(由乳多泡病毒家族引起)、海绵状脑病(朊病毒病)(如克罗伊茨费尔特-雅各布病(CJD),Gerstmann-Streussler综合征)以及逆转录病毒性疾病(如HIV-I和HIV-2)。其他脑疾病和紊乱包括例如老年性痴呆、自主神经功能紊乱如高血压和睡眠障碍(例如，失眠、嗜睡、深眠和睡眠呼吸暂停)、神经精神疾病(例如，精神分裂症、情感分裂性精神障碍、注意力缺陷障碍、情绪恶劣性障碍、严重的抑郁性障碍、躁狂症和强迫症)、应用精神作用物质所致精神障碍、焦虑、恐慌症、双相情感性疾病(例如，严重的双相情感性疾病和带有轻度躁狂和严重抑郁的双相情感性疾病)、发育、认知和自主神经以及神经学进程(如疼痛、食欲、长期记忆和短期记忆)相关的障碍、局灶性脑障碍(包括失语症、失用症、失认症和健忘症(例如，外伤性健忘症、暂时性完全健忘症和心因性健忘症))、整体弥漫性脑障碍(如昏迷、麻痹、迟钝)和网状结构紊乱。脑疾病和紊乱也包括代谢性疾病，包括但不限于血β-脂蛋白缺乏症、中心性脑桥髓鞘破坏、半乳糖血症、戈谢氏症、高胱氨酸尿症、核黄疽、利氏病、莱-萘二氏综合征、门克斯氏综合征、C型尼曼-皮克病、雷耶氏综合征、柯萨科夫氏病和Tay-Mch氏病。其他脑疾病和紊乱包括例如贝敦氏症、卡纳万病、Charcot-Marie-Tooth病(CMT)、张力障碍、神经纤维瘤(NF)、结节性硬化复合症(TSC)、艾卡迪综合征、无动性缄默、弱视、巴-比二氏综合征、脑脓肿、脑水肿、皮质基底节变性、家族性地中海热、II型糖原累积病、哈-斯二氏综合征、颅内压增高、颅内低血压、Joubert综合征、克-布二氏综合征、劳-穆二氏综合征、洛氏综合征、Machado-Jos印h病、米勒费舍尔综合征、烟雾病、橄榄体脑桥小脑萎缩、苯丙酮尿症、脑裂、暂时性完全遗忘症和泽韦格综合征。治疗给药本申请所述的脂质体或胶束的给药途径和/或方式可依据不同的预期结果而变化。本领域技术人员(即医师)可以对给药方案进行调整以获得预期的应答反应(例如，治疗应答)。给药方法包括但不限于皮内注射，肌肉注射，腹腔注射，静脉注射，皮下注射，滴鼻，硬膜外给药，口服，舌下含服，脑内给药，阴道给药，透皮给药，直肠给药，通过吸入或外用到特别是耳朵、鼻子、眼睛或皮肤。使用方法由医师决定。在一些实例中，本申请所述的脂质体或胶束(例如脂质体或胶束的药物剂型)可以有效地穿过血脑屏障并到达脑细胞。在其他实例中，脂质体或胶束可使用旨在容许或提高该成分穿过血脑屏障能力的技术进行递送。这样的技术在现有技术(例如WO89/10134；Cloughesy等，J.Neurooncol.26125-132(1995)禾口Begley，J.Pharm.Pharmacol.48136-146(1996))中是已知的。制剂成分可以用现有技术已知的方法进行改进以促进其进入CNS。例如，在一些实例中，将本申请所述的脂质体或胶束局部施用。这通过例如手术时的局部输注、局部应用(例如，在乳剂或洗剂里)、注射、导管方式、栓剂或灌肠剂方式、或植入方式完成，所述植入物是多孔的、非多孔的或凝胶状的材料，包括膜如硅橡胶膜或纤维。在一些情况下，本申请所述的脂质体或胶束通过任何适宜途径包括心室内给药、鞘内注射、脊柱旁注射、硬膜外注射、灌肠和毗连外周神经的注射而被引入到中枢神经系统、循环系统或胃肠道。经肺给药也可以通过使用吸入器或喷雾器和带有雾化剂的制剂，或采用碳氟化合物或合成肺表面活性剂灌注。本申请所述的脂质体或胶束可以制成含有适量生理学上可接受的赋形剂的药物组合物(参见，例如Remington'sPharmaceuticalSciences第1447-1676页(AlfonsoR.Gennaro,ed.,19thed.1995))。所述生理学上可接受的赋形剂可以是，例如，液体，如水和油，包括石油，动物，植物或合成来源的，如花生油，大豆油，矿物油，芝麻油及类似物。生理学上可接受的赋形剂可以是生理盐水、微粉硅胶、明胶、淀粉糊、滑石粉、角蛋白、胶体二氧化硅、尿素及类似物。另外，也可用助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在某种情况下，当对动物给药时，生理学上可接受的赋形剂是无菌的。生理学上可接受的赋形剂在生产和储存时应是稳定的并且保存时要防止微生物的污染。当本发明所述的脂质体或胶束由静脉内给药时，水是特别有用的赋形剂。生理盐水溶液和葡萄糖及甘油水溶液可以作为液体辅料，尤其适用于注射用溶液。适宜的生理学上可接受的赋形剂还可以包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇及类似物。适宜的生理学上可接受的赋形剂的其他不例参见Remington'sPharmaceuticalSciences第1447-1676页(AlfonsoR.Gennaro,ed.，第19版.1995)。如果有需要，药物组合物可以包含少量润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。液体载体可用于制备溶液、混悬液、乳剂、糖浆剂和酏剂。本申请所述的脂质体或胶束可以悬浮在药学上可接受的液体载体中如水、有机溶剂、二者的混合物或药学上可接受的油或脂肪。液体载体可以包含其他适宜的药物添加剂包括增溶剂、乳化剂、缓冲液、防腐剂、甜味剂、矫味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂。用于口服或肠胃外给药的液体载体的适宜示例包括水(尤其包含本申请所述的添加剂，例如纤维素衍生物(包括羧甲基纤维素钠溶液))、醇(包括一元醇和多元醇例如乙二醇)及其衍生物、以及油(例如分馏椰子油和花生油)。用于肠胃外给药的载体也可以是油酯如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。液体载体可以是用于给药的无菌液体形式。用于增压组合物的液体载体可以是卤化烃或其他药学上可接受的推进剂。在其他实例中，本申请所述的脂质体或胶束按静脉注射给药制剂制备。用于静脉注射给药的组合物可以包含无菌的等渗水性缓冲液。组合物也可以包括增溶剂。用于静脉注射给药的组合物可以选择性包括局部麻醉剂(如利多卡因)以减轻注射部位的疼痛。可提供这些成分的单独的或混合的单位剂型，例如，置于可显示活性剂量的密封容器如安瓿或囊袋中的干燥冻干粉或无水浓缩剂。本申请所述的脂质体或胶束通过输注给药，例如，可使用含有无菌药用级水或生理盐水的输液瓶配药。本申请所述的脂质体或胶束通过注射给药时，可以提供一安瓿的无菌注射用水或生理盐水以便在给药前将成分混合。本发明所述的脂质体或胶束可以通过传统的栓剂形式经直肠或用道给药。可以通过本领域技术人员已知的方法由传统原材料(包括可可脂、额外加入或不加入的用于改变栓剂熔点的蜡类、和甘油)制备栓剂。也可使用水溶性栓剂基质如不同分子量的聚乙二醇。本发明所述的脂质体或胶束对紊乱或疾病的有效治疗的量可以使用本领域技术人员已知的标准临床技术确定。另外，可以选择性的采用体外或体内试验确定理想剂量范围。采用的精确的给药剂量还与给药途径、状态、治疗状态的严重程度以及与治疗个体有关的各种身体因素有关，并且可以根据医师的判断确定。例如，本发明所述的脂质体或胶束的剂量范围可以分别从每天约0.OOlmg/kg至约250mg/kg体重、每天约lmg/kg至约250mg/kg体重、每天lmg/kg至约50mg/kg体重或每天lmg/kg至约20mg/kg体重。相同的剂量可以在不同时间段施用，包括但不限于约每2小时、约每6小时、约每8小时、约每12小时、约每M小时、约每36小时、约每48小时、约每72小时、约每周、约每两周、约每三周、约每月和约每两月。完整疗程的给药剂量和频率可以根据医师的判断确定。在一些实例中，本申请所述的药物组合物采用单位剂型的形式，如片剂、胶囊、散齐U、溶液、混悬液、乳剂、颗粒或栓剂。在这种形式中，药物组合物可以再分成本申请所述的含适量纳米粒的单位剂量。单位剂型可以是置于包装中的药物组合物，例如包装的粉末、药瓶、安瓿、预充式注射器或含液囊剂。单位剂型可以是，例如胶囊或片剂本身，或者可以是包装中的适量的任意该组合物。所述的单位剂型可以包含从约lmg/kg至约250mg/kg，并且可以分为单次剂量或两次或更多次剂量给药。试剂盒本申请所述的脂质体或胶束可以以试剂盒的形式提供。在一些实例中，试剂盒包括(a)包含脂质体或胶束的容器和，任选地(b)信息材料。信息材料可以是涉及本申请所述方法和/或脂质体或胶束的用途(例如治疗效益)的描述性的、指导性的、销售性的或其他材料。试剂盒的信息材料形式不受限制。在一些实例中，信息材料可以包括脂质体或胶束的产品信息、脂质体或胶束的分子量、浓度、有效期、批次或产地信息等等。在其他情况下，信息材料涉及脂质体或胶束的施用方法例如适宜的量、方式、给药方法(例如本申请所述的剂量、剂型或施用方法)。该方法可以是治疗紊乱主体的方法。在一些实例中，信息材料如说明书以印刷品如印刷文本、图画和/或照片如标签或印刷表格的形式提供。信息材料也可以其他格式如布莱叶凸点字、计算机可读材料、视频记录或音频记录的形式提供。在其他实例中，试剂盒的信息材料是联系信息例如物理地址、21电子邮件地址、网站或电话号码，其中试剂盒使用者可以获得关于本申请的纳米粒和/或其在本发明所述方法中应用的实质信息。信息材料也可以上述格式的任意组合形式提供。除了脂质体或胶束外，试剂盒可以包括其他成分如溶剂或缓冲液、稳定剂或防腐齐U。试剂盒也可以包括其他试剂如第二个或第三个试剂(例如，其他的治疗剂)。这些组分可以以任何形式如液体、干燥或低压冻干形式提供。这些组分可以是基本纯净的(尽管其可以联合或彼此单独递送)和/或无菌的。当这些组分以液体溶液形式提供时，液体溶液可以是水溶液如无菌水溶液。当这些组分以干燥形式提供时，通常通过加入适宜的溶剂复溶。溶剂如无菌水或缓冲液可以任选地在试剂盒中提供。试剂盒可以包括用于脂质体或胶束或其他试剂的一个或更多容器。在一些实例中，试剂盒包含用于脂质体或胶束或信息材料的单独的容器、分隔器或隔室。例如，脂质体或胶束可包含在瓶、药瓶或注射器中并且信息材料可包含在塑料套或包中。在其他情况下，试剂盒的这些单独元件可包含在一单独的、未分隔的容器中。例如，脂质体或胶束可包含在附有标签形式宣传材料的瓶、药瓶或注射器中。在一些实例中，试剂盒包括多个(例如一包)单独容器，每个容器包含脂质体或胶束的一个或多个单位剂型(例如本申请所述的一个剂型)。容器可以包括一个单位剂量例如包括脂质体或胶束的一个单位。例如，试剂盒可以包括多个注射器、安瓿、铝箔包装、泡罩包装或医疗装置，例如每个包含一个单位剂量。试剂盒的容器可以是气体密闭的、防水的(例如，对潮湿或挥发的改变均不可通透)和/或避光的。试剂盒可任选地包括适于脂质体或胶束施用的装置，例如注射器或其他适宜的递送装置。该装置可以预装入脂质体或胶束(例如以单位剂量)，或是空的但适于装入脂质体或胶束。本发明通过下列实施例进行进一步说明。提供这些实施例仅仅用于说明目的。他们不应理解为以任何方式限制本发明的范围或内容。实施例实施例1连接有抗坏血酸的脂质体和胶束的制备和鉴定目前尚无利用SVCT2转运体的特性例如分子选择性和生理处置实现脑靶向的大分子系统。为了建立新的体外分子模型以进行脑转运研究，鉴定了一组永生化细胞系的免疫特征从而评估其中哪些细胞系表达SVCT2转运体。将经1，2-二硬脂酰-sn-甘油_3_磷酸乙醇胺-PEG2klla-NH2修饰的抗坏血酸与纳米载体相连接后，研究了通过SVCT转运体转运的潜在药用纳米载体(例如，脂质体和脂质核心聚合物胶束)对这些细胞的靶向性。A、方法1、材料细胞系、小鼠成纤维细胞NIH/3T3、黑色素瘤B16-F10、人成胶质细胞瘤LN-18、成神经细胞瘤SK-N-AS、大鼠神经胶质瘤C6和F98购自美国模式培养物保藏中心(Manassas，VA)。所有细胞培养基、RPMI、热灭活的胎牛血清(FBQ和青霉素/链霉素储备液购自Cellgro(Herndon，VA)。LAB-TEK4-孔细胞培养小室购自Nunc(Rochester，NY)。山羊多克隆抗体抗SVCT2转运体(G-19)和驴抗山羊IgG-FITC购自SantaCruzBiotechnology,Inc.(SantaCruzBiotechnology,CA)。山羊抗小鼠IgG抗体购自ICNBiomedical(Aurora,0H)。鸡蛋卵磷脂(PC)、胆固醇、1，2_二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(多聚(乙烯乙二醇)-2000](mPEG2kDa-PE)、l，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[氨基(多聚(乙烯乙二醇)-2000](PE-PEG2klla-胺)和1，2-二硬脂酰-sn-甘油_3_磷酸乙醇胺-N-(丽丝胺罗丹明B磺酰)(Rh-PE)购自AvantiPolarLipids,Inc.(Alabaster,AL)。牛血清白蛋白和所有其他化学试剂及缓冲液组分购自Sigma(St.Louis，MO)并且为分析级。葡聚糖凝胶G25超细培养基购自GEHealthcareBio-SciencesCorp.(Piscataway，NJ，USA)。2、6-溴脱氧-抗坏血酸的合成根据现有步骤并稍作修改(Kiss等，Helv.Chim.Acta63:1728-1739(1980))制备抗坏血酸的6-溴衍生物。2g抗坏血酸(11.35mmol)加入到2.7mL的33%w/v氢溴酸/冰醋酸(17.ISmmol)中。混悬液在室温下持续搅拌。然后通过氮流和旋转蒸发除去氢溴酸和醋酸。将5mL去离子水加入到糖浆中，混合物在60°C下搅拌30分钟。通过旋转蒸发减少体积后，残渣用5mL乙酸乙酯提取6次，通过硫酸钠除去剩余的微量水份。减压除去有机溶齐U，生成的固体产物升温至70°C溶于3mL乙腈。溶液冷却至4°C以产生结晶。白色结晶依据相同步骤进行复溶和重结晶。过滤获得终产物并且真空干燥。将6-溴脱氧-抗坏血酸溶于DMSO-Cl6中，利用Varian500MHz光谱仪进行IHNMR和13C匪R分析。IHNMRδ3.36(dd,1H，J=10.06，δ7.14Hz,BrCCHH)，δ3.60(dd,1H，J=10.06，6.56Hz，BrCCHH)，δ3·96(t，1H，J=6.67Hz，BrCH2CHOH)，δ4.83(宽s，1H，0CH)，δ5.63(宽s，5.63，1Η,BrCH2CHOH)，δ8.42(s,1H,0C0C0HC0H)，δ11.66(s,1H,0C0C0HC0H)；13C匪Rδ34.6(BrC)，68.2(BrCC)，75.2(OCH),152.3(0CC0H)，Η8.1(0CC0H=C0H),170.3(0C=0)。用2，5-二羟苯甲酸作为基质，采用MALDI-T0F进行质谱分析。负离子具有237.05m/z。3、6-抗坏血酸-PEG-PE的合成向25mL圆底烧瓶中加入2.8mL的25mg/mLPE-PEG2klla-胺的氯仿溶液(25μmol，70mg)。旋转蒸发除去溶剂，固体残渣溶于2mLDMF。然后，加入60mg6-溴脱氧抗坏血酸(250μmol)和35μL三乙胺ΟδΟμπιοΙ)。溶液在黑暗条件下、通入氩气持续搅拌。搅拌下滴加冷乙醚以沉淀该混合物。粗制的沉淀物用乙醚洗涤几次，将固体真空干燥。干燥粉末溶于2mL去离子水，衍生物采用体积排阻色谱法、使用预装葡聚糖G25超细基质的色谱柱进行纯化，利用milli-Q水洗脱。将UV分析和碘试均呈阳性的组分混合在一起进行冻干。产量为40mg(57%)0为了确定连接物中PEG/抗坏血酸的摩尔比例，称取一定量的纯化衍生物，进行针对PEG的碘试(Sims等，Anal.Biochem.107:60-63(1980))、针对抗坏血酸的UV分光光度分析(Karlsen等，J.Chromatogr.B824:132-138(2005))以及针对残余PEG中未连接氨基基团的斯奈德比色检测(Snyder等，Anal.Biochem.64=284-288(1975))0用溶于氯仿的6-抗坏血酸-PEG-PE进行1HNMR分光光度分析。1HNMRδ3.73(d，1H，抗坏血酸的0CHCH0HCH2)，δ3.642(s,180H，PEG的-[OCH2CHjn-)，δ2.308(m,4H,磷脂硬脂酸盐的OCOCH2)，1.249(m，56H，硬脂酸磷脂的_[CH2]n_)。4、脂质体和胶束的制备和鉴定利用薄膜水合技术制备罗丹明标记的靶向脂质体。从6-抗坏血酸-PEG-PE、鸡蛋卵磷脂、胆固醇和Μι_ΡΕ(以3/60/30/0.25的摩尔比例)的氯仿溶液中除去有机溶剂获得脂质膜。将脂质膜悬浮在RPMI中，RPMI的pH值为7.4，其包含300μM三甲酰乙基)23膦(TCEP)，脂质总浓度为0.435mg/mL，在超声波仪中超声10分钟，然后通过具有200nm孔径的聚碳酸酯滤器(AvantiPolarLipids)的小型挤压机的11个通道。非靶向脂质体利用mPEG2kDa-PE代替6-抗坏血酸-PEG-PE，通过相同步骤制备。通过将6-抗坏血酸-PEG-PE溶于氯仿中制备罗丹明标记的靶向胶束。加Imol^的Iih-PE到溶液中。通过旋转蒸发除去有机溶剂，在含300μΜTCEP的RPMI中，薄膜以lmg/mL的最终浓度再水合。非靶向胶束利用HiPEG2klla-PE通过相同步骤制备。^lJMZetaPlusft^l(BrookhavenInstrumentCorporation,Holtsville,NY)M过动态光散射法(DLQ测定胶束和脂质体的粒径及其粒径分布。适当稀释以满足动态光散射的要求后，对样本悬浮液进行分析。对于每个样本，每批次大小分布的测量均重复六次。利用超灵敏Zeta电位分析仪(BrookhavenInstruments,Holtsville,NY)通过kta相位分析光散射法(PALQ测量胶束和脂质体制剂的zeta电位。用IM氯化钾溶液适当稀释胶束和脂质体的混悬液。所有zeta电位的测量均重复进行三次。5、通过流式细胞术评估SVCT2表达细胞系为了选择在细胞膜上表达SVCT2转运体的永生化细胞系，在IOcm细胞培养板中用含10%FBS的RPMI培养细胞(NIH/3T3,B16-F10，LN-18，SK-N-AS,C6和F98)72小时。移去培养基，用RPMI洗涤细胞，通过预冷孵育15分钟和吹打使细胞脱壁。通过在1500rpm下离心回收细胞，将IO6个细胞重悬在50μL含3%FBS的PBS中。将3μL的200μg/mL山羊多克隆抗SVCT2转运体(G-19)或山羊抗小鼠IgG抗体加入每个样本中，并在黑暗条件及冰浴下孵育30分钟。然后用ImL含3%FBS的PBS清涤细胞一次，离心回收，重悬在50μL同样的培养基中，在黑暗条件下及冰浴中，用3μL的200μg/mL驴抗山羊IgG-FITC处理30分钟。经含3%FBS的PBS清涤后，用含2%多聚甲醛的PBS固定样本，用BDFACSCalibur、流式细胞仪和BDCellQuestPro软件(BecktonDickinsonBiosciences,SanJose,CA)进行FACS分析(平均计数IO4个细胞)。在取得细胞前，使用前向和侧向散射进行存活筛选从而排除破碎细胞和死细胞。6、药用纳米载体的抗坏血酸介导的靶向作用为了确定抗坏血酸连接的(ascortate-conjugated)纳米载体的细胞靶向能力，对与脂质体或胶束制剂共同孵育的SVCT2表达细胞进行FACS分析。SVCT2的表达细胞(C6，F98)在IOcm细胞培养板中培养48小时。用无血清培养基清涤细胞，通过预冷孵育和反复吹打使细胞脱壁，离心回收，将IO6个细胞重悬在无血清培养基中，该培养基含有荧光标记的采用上述方法制备的靶向或非靶向纳米载体。将样本在黑暗条件下、37°C、温和摇动下孵育90分钟。然后，将细胞样本通过离心回收，用PBS洗涤两次、使用前向相对于侧向散射进行筛选从而排除破碎细胞和死细胞，并且用BDFACSCalibur流式细胞仪和BDCellQuestPro软件进行分析(平均计数IO4个细胞)。在与荧光标记的靶向脂质体和胶束或作为参考的非靶向纳米载体培养后，通过荧光显微镜检查C6和F98细胞。在组织培养瓶中经原代培养后，将细胞置于带有独立LAB-TEK小室的四孔组织培养板中培养，在含有10%FBS的RPMI的孔中细胞浓度为每孔5XIO5个细胞。M小时后，用RPMI洗涤培养小室两次，然后如上所述在RPMI中用0.5mL脂质体或胶束制剂在37°C下培养。培养1小时后，移除培养基，用培养基洗板三次。在37°C下用含有0.5μg/mLHoechst33342的完全培养基进一步培养样本10分钟，用完全培养基清涤两次。每个载玻片用盖玻片覆盖。用载有适宜的检测强光，罗丹明和Hoechst滤光片的NikonEclipseE400荧光显微镜即时观察细胞，该设备配有NikonN60照相机。为了抗坏血酸的竞争性研究，用RPMI洗涤生长在LAB-TEK小室中的细胞两次，在37°C下用0.5mL200μΜ抗坏血酸(RPMI中)培养30分钟，然后用含有6-抗坏血酸-PEG-PE的脂质体(总脂质为0.464mg/mL)再培养1小时。随后用PBS洗涤样本3次，用含荧光封固剂的培养基封固样本。立即用上述荧光显微镜观察细胞，并且通过图像分析软件(ImageJ)对细胞相关的荧光强度进行定量。B、结果1、6_抗坏血酸-PEG-PE和抗坏血酸连接的纳米载体的合成和鉴定通过两步法制备6-抗坏血酸-PEG-PEJ1)用溴活化抗坏血酸；(2)通过用PE-PEG2klla-胺与多余的6-溴-抗坏血酸反应合成6-抗坏血酸-PEG-PE。采用合成6-溴脱氧抗坏血酸的合成步骤在结晶后的收率为40.5%。1HNMR光谱分析显示抗坏血酸的2、3和5位羟基基团未被修饰，这与相应的信号58.42、11.66和5.63确认的一致。6-溴抗坏血酸的质谱分析显示了一个由单去质子化离子[6-溴抗坏血酸-Η+Γ1所致的、位于237.05m/ζ的信号。商品化的PE-PEG2klla-胺与20倍摩尔数过量的6_溴-抗坏血酸(参见路线1)反应12小时生成6-抗坏血酸-PEG-PE，该反应通过茚三酮测定PEG—级氨基基团的消失来确定。该连接反应在无水条件下进行，以减少水导致的6-溴抗坏血酸失活。权利要求1.一种向脑细胞递送脂质体或胶束的方法，包括将所述脂质体或所述胶束与所述脑细胞接触，所述脂质体或所述胶束的外表面包括抗坏血酸或抗坏血酸衍生物，所述抗坏血酸或所述抗坏血酸衍生物与所述脑细胞上的钠依赖性维生素C转运体(SVCT)接触从而将所述脂质体或所述胶束递送到所述脑细胞。2.如权利要求1所述的方法，其中所述脂质体或所述胶束包括磷脂，所述磷脂与所述抗坏血酸或所述抗坏血酸衍生物的C6位连接。3.如权利要求2所述的方法，其中所述磷脂包括衍生化的磷脂。4.如权利要求3所述的方法，其中所述衍生化的磷脂包括聚乙二醇(PEG)。5.如权利要求4所述的方法，其中所述抗坏血酸或所述抗坏血酸衍生物通过PEG与所述衍生化的磷脂连接。6.如权利要求5所述的方法，其中所述衍生化的磷脂是PEG-1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。7.如权利要求1所述的方法，其中所述脂质体或所述胶束包括6-抗坏血酸-PEG-1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺。8.如权利要求1所述的方法，其中所述脂质体或所述胶束约50%至约100%的外表面积包括抗坏血酸。9.如权利要求1所述的方法，其中所述抗坏血酸为脂质体或胶束重量的约20%至约60%。10.如权利要求1所述的方法，其中所述脑细胞是脉络丛细胞。11.如权利要求10所述的方法，其中所述脂质体或所述胶束穿过血脑屏障到达所述脑细胞。12.如权利要求1所述的方法，其中所述脂质体或所述胶束进一步包括治疗剂或检测试齐LU13.如权利要求12所述的方法，其中所述脂质体或所述胶束将治疗剂或检测试剂递送到所述脑细胞。14.一种将治疗剂或检测试剂递送到脑细胞的方法，包括使脂质体或胶束与脑细胞接触，所述脂质体或所述胶束包括(i)治疗剂或检测试剂；和()位于所述脂质体或所述胶束外表面的抗坏血酸或抗坏血酸衍生物，所述抗坏血酸或所述抗坏血酸衍生物接触所述脑细胞上的钠依赖性维生素C转运体(SVCT)从而将所述治疗剂或所述检测试剂递送到所述脑细胞。15.一种脑肿瘤的治疗方法，包括向需要的主体施用脂质体或胶束，所述脂质体或所述胶束包括(i)治疗剂；和()位于所述脂质体或所述胶束外表面的抗坏血酸或抗坏血酸衍生物，所述抗坏血酸或所述抗坏血酸衍生物接触所述脑肿瘤上的钠依赖性维生素C转运体(SVCT)从而将所述治疗剂递送到所述脑肿瘤并且治疗所述脑肿瘤。16.一种脑肿瘤成像的方法，包括向需要的主体施用脂质体或胶束，所述脂质体或所述胶束包括(i)检测试剂；和()位于所述脂质体或所述胶束外表面的抗坏血酸或抗坏血酸衍生物，所述抗坏血酸或所述抗坏血酸衍生物接触所述脑肿瘤上的钠依赖性生素C转运体；并且检测所述检测试剂从而对脑肿瘤成像。全文摘要本申请描述了一种与抗坏血酸连接的脂质体和胶束，该脂质体和胶束的制备方法，以及该脂质体和胶束的使用方法，如用于向脑内递送治疗和检测试剂。文档编号A61K9/127GK102458365SQ201080022926公开日2012年5月16日申请日期2010年3月26日优先权日2009年3月26日发明者S·萨尔马索,T·穆萨基奥,V·托尔钦林申请人:东北大学,帕多瓦大学